×
20.08.2015
216.013.71d5

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ МЕЛАНОЦИТАРНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ КОЖИ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики меланоцитарных новообразований кожи. Способ включает получение биоптата исследуемого новообразования кожи, затем с исследуемым образцом проводят ПЦР в реальном времени для количественного определения относительного уровня экспрессии микроРНК по нормализующей микро-РНК - snRNA-U6, при этом маркером дифференциальной диагностики является ген hsa-miR-205. При относительном уровне экспрессии от 0,29926 до 13,202 исследуемое меланоцитарное образование кожи является меланомой, а при относительном уровне экспрессии от 25,70993 до 1583,114 - невусом; при промежуточном интервале значений от 13,202 до 25,70993 необходимо проведение иммуногистохимического исследования биоптата с применением первичных антител к специфичным маркерам: S 100, НМВ 45, MART 1, MELAN A, CD-63, MITF. Использование изобретения позволяет оптимизировать и ускорить дифференциальную диагностику меланоцитарных новообразований кожи. 1 табл., 3 пр.
Основные результаты: Способ дифференциальной диагностики меланоцитарных новообразований кожи, включающий получение биоптата исследуемого новообразования кожи, отличающийся тем, что с исследуемым образцом проводят ПЦР в реальном времени для количественного определения относительного уровня экспрессии микроРНК по нормализующей микроРНК - snRNA - U6, при этом маркером дифференциальной диагностики является ген hsa-miR-205: при относительном уровне экспрессии от 0,29926 до 13,202 исследуемое меланоцитарное образование кожи является меланомой, а при относительном уровне экспрессии от 25,70993 до 1583,114 - невусом; при промежуточном интервале значений от 13,202 до 25,70993 необходимо проведение иммуногистохимического исследования биоптата с применением первичных антител к специфичным маркерам: S 100, НМВ 45, MART 1, MELAN A, CD-63, MITF.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматологии, онкологии, патологической анатомии, и может применяться для диагностики меланомы кожи в лабораторных центрах.

Существуют различные методы диагностики меланоцитарных новообразований. К прижизненным неинвазивным методам относится традиционная дерматоскопия, заключающаяся в том, что исследование пигментного новообразования кожи проводят с увеличением до х10, используя эффект эпилюминисценции при создании масляной среды между объектом исследования и дерматоскопом. Однако при использовании дерматоскопии в настоящее время остаются нерешенными проблемы дифференциальной диагностики диспластических невусов и меланомы in situ, выявления беспигментной меланомы, динамического наблюдения за группой высокого риска развития меланомы кожи, что требует продолжения научных исследований в данной области [Соколов Д.В. Дерматоскопия (эпилюминесцентная поверхностная микроскопия): in vivo диагностика меланомы кожи (обзор литературы) / Соколов Д.В., Махсон А.Н., Демидов Л.В. [и др.] // Сибирский онкологический журнал.- 2008. - №29. - С. 63-67].

Также используется гистологическое исследование, которое на настоящий момент является золотым стандартом для диагностической классификации меланоцитарных новообразований. Данный способ представляет собой исследование тканей, взятых во время диагностической процедуры или операции с последующим приготовлением гистологического препарата для изучения с помощью светового или электронного микроскопа состава исследуемой ткани, наличия или отсутствия патологических клеток. Однако, несмотря на то что гистологические критерии позволяют отнести большинство меланоцитарных опухолей либо к невусу, либо к меланоме, существуют так называемые неясные случаи [Sparrow, L.E. Differential expression of epidermal growth factor receptor in melanocyte tumours demonstrated by immunohistochemistry and mRNA in situ hybridization / L.E. Sparrow, P.J. Heenan // Australas J Dermatol. - 1999. - Vol. 40, №1. - P. 19-24]. Результаты гистологического исследования зависят от квалификации врача и возможностей диагностического центра, поэтому необходимы поиски альтернативных и более точных способов диагностики.

Другой современный способ для первичной и дифференциальной диагностики меланоцитарных поражений кожи на молекулярно-генетическом уровне проводят с помощью реакции флуоресцентной in situ гибридизации (FISH). [Hikita, Т. Immunohistochemical and fluorescence in situ hybridization studies on noninvasive and invasive extramammary paget′s disease / T. Hikita, Y.Ohtsuki, T. Maeda [et al.] // International Journal of Surgical Pathology - 2012. - Vol. 20, №5. - P. 441-448.] Способ FISH-цитогенетический способ, который применяют для детекции и определения положения специфической последовательности ДНК на метафазных хромосомах или интерфазных ядрах in situ. Данный способ является дорогостоящим и применяется для неясных случаев. Недостатки его - высокая трудоемкость для клинической лаборатории патологоанатомического профиля, субъективность оценки результатов без четких количественных критериев.

На данный момент актуальным является разъяснение молекулярных механизмов развития меланомы кожи. Идентифицированными регуляторами экспрессии генов на посттранскрипционном уровне являются так называемые микро-рибонуклеиновые кислоты (микроРНК) - малые некодирующие РНК длиной около 22 пар нуклеотидов, которые комплиментарно связываются с мРНК, вызывая ингибирование трансляции или разрушение мРНК. Каждый отдельный вид микроРНК может связываться с различными мРНК-мишенями, а также мРНК может находиться под регуляторным контролем сразу нескольких разновидностей микроРНК. [Segura M.F. MicroRNA and cutaneous melanoma: from discovery to prognosis and therapy. Carcinogenesis / M.F. Segura, H.S. Greenwald, D. Hanniford [et al.] // Oxford Journals - 2012. - Vol. 33, №10. - P. 1823-1832.] Одной из таких микроРНК является miR-205, которая работает как супрессор опухолевого роста. Известно, что в случае некоторых видов опухолей miR-205 индуцирует апоптоз и тормозит рост опухоли. Также miR-205 имеет значение в регуляции эпителиально-мезенхимальной трансформации и опухолевой инвазии [Cai J. MiR-205 targets PTEN and PHLPP2 to augment АКТ signaling and drive malignant phenotypes in non-small cell lung cancer/ J. Cai J, L. Fang, Y. Huang [et al.] // Cancer Res. - 2013. - Vol. 73, №17. P. 5402-5415].

Наиболее близким к предлагаемому является способ, в основу которого положено определение уровня экспрессии значимых микроРНК для диагностирования диспластического невуса и меланомы, включающий анализ образцов от пациентов с целью определения уровней экспрессии микроРНК (US patent 2013/0196869 A1, 01.08.2013). Однако данный способ является многоемким и дорогостоющим, так как необходимо определять большое число микроРНК.

Задача предлагаемого способа - оптимизация дифференциальной диагностики меланоцитарных новообразований кожи.

Поставленную задачу решают за счет того, что с исследуемым образцом проводят ПЦР в реальном времени по нормализующей микроРНК-SNRNA-U6, маркером дифференциальной диагностики является ген hsa-miR-205: при относительном уровне экспрессии от 0,29926 до 13,202 исследуемое меланоцитарное образование кожи является меланомой, а при относительном уровне экспрессии от 25,70993 до 1583,114 - невусом; при промежуточном интервале значений от 13,202 до 25,70993 необходимо проведение иммуногистохимического исследования биоптата с применением первичных антител к специфичным маркерам: S 100, НМВ 45, MART 1, MELAN A, CD-63, MITF.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Проводят забор исследуемой ткани (биоптата) у обследуемых лиц. Полученный биоптат подвергают стандартной фиксации в парафине для получения гистологических срезов, далее проводят нарезку срезов на микротоме.

Осуществляют выделение РНК по стандартному протоколу с помощью системы «Рибозоль-В» (AmpliSens, ФГУН ЦНИИЭ Ростпотребнадзора). Затем переходят к постановке реакции обратной транскрипции с праймером к микроРНК - hsa-miR-205 и нормализующей микро-РНК - snRNA-U6 (Applied Biosystems) для получения кДНК, чтобы исследовать относительный уровнь экспрессии микроРНК методом ПНР в реальном времени.

Амплификацию проводят на амплификаторе Applied Biosystems StepOne в 48-луночных планшетах в объеме по 20 мкл в каждой лунке, содержащем ПЦР буфер: 7.67 мкл безРНКазная вода, 1 мкл TagMan Small RNA Assay (20X), 10 мкл TagMan Master Mix, 1.33 мкл праймера hsa-miR-205 и snRNA-U6 в соответствующие лунки. Условия ПЦР следующие: 50°C - 2 мин, 95°C - 10 мин и 40 циклов: 95°C - 15 с, 60°C - 1 мин.

Содержание микроРНК в исследуемом образце вычисляем как относительный уровень экспрессии по формуле: 2-ΔСТ, где ΔСТ=(CT miR-205 - CT U6RNA). [Chan, SH. MiR-21 MicroRNA Expression in Human Gastric Carcinomas and its Clinical Association/ SH. Chan, CW. Wu, AF. Li //Anticancer Research - 2008. - №28. - P. 907-912.]

Статистическую обработку проводили между двумя группами при помощи непараметрического U-критерия Манна-Уитни (программа Statistics 7). Для исследуемой микроРНК (miR-205) выявлены достоверно значимые различия для этих групп (меланома и невус): значительное снижение уровня экспрессии miR-205 в меланоме по сравнению с невусом.

При относительном уровне экспрессии miR-205 от 0,29926 до 13,202 исследуемое меланоцитарное образование кожи является меланомой, а при относительном уровне экспрессии miR-205 от 25,70993 до 1583,114 является невусом (см. табл. 1). В таблице представлены группы исследуемых образцов, их количество и числовые значения для относительных уровней экспрессии микроРНК в меланомах и невусах.

Таблица
Относительный уровень экспрессии miR-205 в невусе и меланоме
Группа исследуемого биоптатного образца Количество образцов Относительный уровень экспрессии miR-205
невус 16 (25,709-1583,114)
меланома 57 (0,29926-13,202)

Предлагаемый способ диагностики является более быстрым и менее затратным.

Пример 1. Пациент А., 50 лет, обратился в Красноярский краевой онкологический диспансер с предварительным диагнозом меланома кожи голени. Произведено хирургическое иссечение, полученный биоптат исследуемой ткани подвергли стандартному способу фиксации для получения гистологических срезов.

Гистологическое заключение онкологического диспансера: пигментная узловая меланома, III стадия по Кларку, по Бреслоу 4 мм.

Одномоментно с полученным биоптатом проведено исследование методом ПЦР в реальном времени.

Заключение ПЦР в реальном времени: уровень экспрессии miR-205=8,123, данное значение относительного уровня экспрессии свидетельствует о том, что исследуемое образование является меланомой кожи.

Пример 2. Пациент П., 38 лет, поступил в Красноярский краевой онкологический диспансер с предварительным диагнозом пигментный невус кожи спины. Произведено хирургическое иссечение, полученный биоптат исследуемой ткани подвергся стандартной методике фиксации для получения гистологических срезов.

Гистологическое заключение: картина сложного пигментного невуса с папилломатозом, гиперкератозом плоского эпителия.

Одномоментно с полученным биоптатом проведено исследование методом ПЦР в реальном времени.

Заключение ПЦР в реальном времени: уровень экспрессии miR-205=124,809, данное значение относительного уровня экспрессии свидетельствует о том, что исследуемое образование является невусом.

Пример 3. Пациент О., 27 лет, поступил в Красноярский краевой онкологический диспансер с предварительным диагнозом пигментный невус кожи правой молочной железы. Произведено хирургическое иссечение, полученный биоптат исследуемой ткани подвергся стандартной методике фиксации для получения гистологических срезов.

Гистологическое заключение: участки кожи с наличием в дерме гнезд тяжей невусных клеток с гранулами пигмента в цитоплазме. Строение внутридермального невуса.

Одномоментно с полученным биоптатом была выполнена амплификация методом ПЦР в реальном времени.

Заключение ПЦР в реальном времени: уровень экспрессии miR-205=22,809, данное значение относительного уровня экспрессии попадает в промежуточный интервал значений, поэтому в этом случае дополнительно проведено иммуногистохимическое исследование, которое показало отсутствие положительной иммуногистохимической реакции на специфические маркеры: S 100, НМВ 45, MART 1, MELAN A, CD-63, MITF, следовательно, данное образование является невусом.

На примере пациента А. и пациента П. видно, что проведенные исследования подтверждают гистологические заключения, что говорит о достоверности поставленного нами диагноза. Пример пациента О., свидетельствует о том, что, если относительный уровень экспрессии miR-205 попадает в промежуточный интервал значений, то для постановки диагноза необходимо дополнительное проведение иммуногистохимического исследования биоптата по стандартной методике с применением первичных антител к специфичным маркерам: S 100, НМВ 45, MART 1, MELAN A, CD-63, MITF.

Предлагаемый способ позволяет в кратчайшие сроки и с наименьшими затратами устанавливать диагноз при меланоцитарных новообразований кожи.

Способ дифференциальной диагностики меланоцитарных новообразований кожи, включающий получение биоптата исследуемого новообразования кожи, отличающийся тем, что с исследуемым образцом проводят ПЦР в реальном времени для количественного определения относительного уровня экспрессии микроРНК по нормализующей микроРНК - snRNA - U6, при этом маркером дифференциальной диагностики является ген hsa-miR-205: при относительном уровне экспрессии от 0,29926 до 13,202 исследуемое меланоцитарное образование кожи является меланомой, а при относительном уровне экспрессии от 25,70993 до 1583,114 - невусом; при промежуточном интервале значений от 13,202 до 25,70993 необходимо проведение иммуногистохимического исследования биоптата с применением первичных антител к специфичным маркерам: S 100, НМВ 45, MART 1, MELAN A, CD-63, MITF.
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 11-20 из 28.
10.04.2015
№216.013.3ce6

Способ диагностики хронической сердечной недостаточности у сердечно-сосудистых больных с одышкой

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии. Пациенту проводят диагностический тест с 6-минутной ходьбой. Дополнительно после теста пациенту дают внутрь 5 мг торасемида. Затем тест повторяют через сутки и при увеличении дистанции 6-минутной ходьбы не менее чем на 15 метров...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547078
Дата охранного документа: 10.04.2015
20.05.2015
№216.013.4bdf

Способ установки двупросветного катетера для проведения гемодиализа

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и эфферентной терапии, и может быть использовано при проведении процедуры гемодиализа. Для этого под ультразвуковым контролем осуществляют пункцию яремной вены. Дополнительно осуществляют постоянный ультразвуковой контроль положения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002550937
Дата охранного документа: 20.05.2015
27.06.2015
№216.013.5af0

Способ оценки степени локальной холодовой травмы в раннем реактивном периоде

Изобретение относится к области медицины. Изобретение представляет способ оценки степени локальной холодовой травмы в раннем реактивном периоде, включающий выделение лимфоцитов периферической крови, оценку выраженности повреждения плазматической мембраны лимфоцитов в состоянии блеббинга с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002554821
Дата охранного документа: 27.06.2015
27.07.2015
№216.013.662f

Способ оценки качества результатов эндодонтического лечения осложненных форм кариеса зубов

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и предназначено для оценки качественных результатов эндодонтического лечения осложненных форм кариеса зубов. Фиксируют параметры клинического состояния зуба после эндодонтического лечения (параметр Кл), выраженные в количественном...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002557712
Дата охранного документа: 27.07.2015
20.09.2015
№216.013.7c1f

Способ повышения эффективности остеопластической торакопластики

Изобретение относится к хирургии и может быть применимо для повышения эффективности остеопластической торакопластики. Производят из единого паравертебрального доступа поднадкостничную резекцию паравертебральных отрезков четырех или пяти ребер, исключая 1 ребро. Рассекают межреберные мышцы от...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002563372
Дата охранного документа: 20.09.2015
20.10.2015
№216.013.8410

Способ профилактики образования капсулярной контрактуры

Изобретение относится к медицине, а именно к пластической и реконструктивной хирургии, и может быть использовано для профилактики образования капсулярной контрактуры при аугментационной маммопластике. Для этого интраоперационно после создания ложа для протезов с двух сторон, под m. pectoralis...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002565411
Дата охранного документа: 20.10.2015
10.02.2016
№216.014.c440

Способ диагностики риска острого повреждения почек при остром панкреатите у пациентов с отсутствием в анамнезе заболеваний почек и сахарного диабета

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в хирургии и нефрологии для диагностики риска острого повреждения почек (ОПП). В режиме цветного допплеровского картирования проводят исследование сосудов почек. Определяют максимальную скорость кровотока в междолевых венах почек и при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002574716
Дата охранного документа: 10.02.2016
27.03.2016
№216.014.c87a

Способ экспресс-диагностики резистентности и чувствительности к ацетилсалициловой кислоте

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для экспресс-диагностики резистентности и чувствительности к ацетилсалициловой кислоте (АСК). Для этого проводят забор крови у пациента до начала антитромбоцитарной терапии. В качестве антикоагулянта применяют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002578428
Дата охранного документа: 27.03.2016
20.06.2016
№217.015.0315

Способ изготовления теплопроводной керамики на основе нитрида алюминия

Керамические изделия, изготовленные предлагаемым способом, могут найти применение в различных приборах электронной техники и в радиоэлектронике, а также в качестве теплоотводов в мощных осветительных устройствах, подложек для электронагревательных элементов и термостойких электроизоляторов. При...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002587669
Дата охранного документа: 20.06.2016
27.04.2016
№216.015.38ba

Способ моделирования регулируемой механической желтухи в эксперименте

Изобретение относится к медицине, экспериментальной хирургии. Моделируют механическую желтуху в эксперименте. Пересекают общий желчный проток. В пересеченный проток устанавливают Т-образный дренаж Кера. Конец дренажа выводят на холку животного, подшивают и закрывают на 3 дня. В последующем...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002582765
Дата охранного документа: 27.04.2016
Показаны записи 11-20 из 28.
10.04.2015
№216.013.3ce6

Способ диагностики хронической сердечной недостаточности у сердечно-сосудистых больных с одышкой

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии. Пациенту проводят диагностический тест с 6-минутной ходьбой. Дополнительно после теста пациенту дают внутрь 5 мг торасемида. Затем тест повторяют через сутки и при увеличении дистанции 6-минутной ходьбы не менее чем на 15 метров...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547078
Дата охранного документа: 10.04.2015
20.05.2015
№216.013.4bdf

Способ установки двупросветного катетера для проведения гемодиализа

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и эфферентной терапии, и может быть использовано при проведении процедуры гемодиализа. Для этого под ультразвуковым контролем осуществляют пункцию яремной вены. Дополнительно осуществляют постоянный ультразвуковой контроль положения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002550937
Дата охранного документа: 20.05.2015
27.06.2015
№216.013.5af0

Способ оценки степени локальной холодовой травмы в раннем реактивном периоде

Изобретение относится к области медицины. Изобретение представляет способ оценки степени локальной холодовой травмы в раннем реактивном периоде, включающий выделение лимфоцитов периферической крови, оценку выраженности повреждения плазматической мембраны лимфоцитов в состоянии блеббинга с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002554821
Дата охранного документа: 27.06.2015
27.07.2015
№216.013.662f

Способ оценки качества результатов эндодонтического лечения осложненных форм кариеса зубов

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и предназначено для оценки качественных результатов эндодонтического лечения осложненных форм кариеса зубов. Фиксируют параметры клинического состояния зуба после эндодонтического лечения (параметр Кл), выраженные в количественном...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002557712
Дата охранного документа: 27.07.2015
20.09.2015
№216.013.7c1f

Способ повышения эффективности остеопластической торакопластики

Изобретение относится к хирургии и может быть применимо для повышения эффективности остеопластической торакопластики. Производят из единого паравертебрального доступа поднадкостничную резекцию паравертебральных отрезков четырех или пяти ребер, исключая 1 ребро. Рассекают межреберные мышцы от...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002563372
Дата охранного документа: 20.09.2015
20.10.2015
№216.013.8410

Способ профилактики образования капсулярной контрактуры

Изобретение относится к медицине, а именно к пластической и реконструктивной хирургии, и может быть использовано для профилактики образования капсулярной контрактуры при аугментационной маммопластике. Для этого интраоперационно после создания ложа для протезов с двух сторон, под m. pectoralis...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002565411
Дата охранного документа: 20.10.2015
10.02.2016
№216.014.c440

Способ диагностики риска острого повреждения почек при остром панкреатите у пациентов с отсутствием в анамнезе заболеваний почек и сахарного диабета

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в хирургии и нефрологии для диагностики риска острого повреждения почек (ОПП). В режиме цветного допплеровского картирования проводят исследование сосудов почек. Определяют максимальную скорость кровотока в междолевых венах почек и при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002574716
Дата охранного документа: 10.02.2016
27.03.2016
№216.014.c87a

Способ экспресс-диагностики резистентности и чувствительности к ацетилсалициловой кислоте

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для экспресс-диагностики резистентности и чувствительности к ацетилсалициловой кислоте (АСК). Для этого проводят забор крови у пациента до начала антитромбоцитарной терапии. В качестве антикоагулянта применяют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002578428
Дата охранного документа: 27.03.2016
20.06.2016
№217.015.0315

Способ изготовления теплопроводной керамики на основе нитрида алюминия

Керамические изделия, изготовленные предлагаемым способом, могут найти применение в различных приборах электронной техники и в радиоэлектронике, а также в качестве теплоотводов в мощных осветительных устройствах, подложек для электронагревательных элементов и термостойких электроизоляторов. При...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002587669
Дата охранного документа: 20.06.2016
27.04.2016
№216.015.38ba

Способ моделирования регулируемой механической желтухи в эксперименте

Изобретение относится к медицине, экспериментальной хирургии. Моделируют механическую желтуху в эксперименте. Пересекают общий желчный проток. В пересеченный проток устанавливают Т-образный дренаж Кера. Конец дренажа выводят на холку животного, подшивают и закрывают на 3 дня. В последующем...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002582765
Дата охранного документа: 27.04.2016
+ добавить свой РИД