Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ЛИМФОМЫ СЛЕПОЙ КИШКИ

Изобретение относится к медицине, к экспериментальной онкологии и может быть использовано для изучения в экспериментальных условиях механизмов лимфатического канцерогенеза и разработки новых методов лечения рака лимфатических органов, в частности лимфомы слепой кишки.

Известен способ моделирования злокачественных опухолей желудочно-кишечного тракта, в котором подопытным животным внутрижелудочно вводили по 1,0-2,0 мл водного раствора ММНГ (5 мг/мл) в течение 2-3 дней. Введения повторяли каждые 4-10 дней в зависимости от состояния животного на протяжении 25 недель. Способ позволяет получить злокачественные опухоли желудочно-кишечного тракта у 100% подопытных животных через 25 недель от начала введения препарата [1. Ким До Бин, Шеренешева Н.И. Влияние способа и режима введения на канцерогенный эффект N-ментол-N-нитро-N-нитрозогуанидина у крыс. Бюл. экспер. биол. мед. 1990; 6:175-176). Данный способ принят за аналог.

Известен способ моделирования опухоли слепой кишки введением в субсерозную оболочку слепой кишки мыши препарата EL4, экспрессирующего опухолевый антиген ИЛ-17А (2. Oshiro К., Kohama Н., Umemura М. et al. Interleukin-17A is involved in enhancement of tumor progression in murine intestine. Immunobiology. 2012 Jan; 217(l):54-60). Данный способ принят за прототип.

Однако провоспалительное влияние интерлейкина ИЛ-17 не является окончательно доказанным, в связи с чем были проведены исследования по созданию новой модели лимфомы.

Целью изобретения является устранение указанных недостатков и обеспечение возможности моделирования лимфомы.

Технический результат достигается тем, что 2,4,6,-тринитробензолсульфоновую кислоту в дозе 0,1-0,15 мл, разведенной в 0,1-0,15 мл 50% раствора этанола, вводят в подслизистый слой купола слепой кишки 2-3-кратно еженедельно в течение 2-3 недель.

Способ реализуется следующим образом.

Крысам линии Вистар весом 250-300 г осуществляют нижнюю срединную лапаротомию, в лапаратомную рану выводят слепую кишку и в области купола слепой кишки проводят подслизистое введение 0,1-0,15 мл 2,4,6,-тринитробензолсульфоновой кислоты, разведенной в 0,1-0,15 мл 50% раствора этанола. Слепую кишку помещают в брюшную полость, лапаратомную рану ушивают, спустя неделю расшивают лапаратомную рану и осуществляют 1-2-кратное дополнительное введение в подслизистый слой купола слепой кишки 0,1-0,15 мл 2,4,6,-тринитробензолсульфоновой кислоты, разведенной в 0,1-0,15 мл 50% раствора этанола, в течение 1-2 недель. Возвращают слепую кишку в брюшную полость. Рану послойно ушивают. Животное выкармливают на протяжении 6-8 мес. На передней брюшной стенке появляется небольшое опухолевидное образование, выступающее за пределы органа. В течение данного периода подвижность животного постепенно снижается, шерсть теряет блеск, животное худеет.

У 5 животных через 6 мес после создания модели обнаружено утолщение и уплотнение стенки купола слепой кишки. Из ткани опухоли готовили гистологические срезы и окрашивали их. При микроскопическом исследовании выявляются мелкие клетки с расщепленными ядрами, изредка встречаются крупные клетки. По контуру лимфатического узла обнаруживают резко дилатированные лимфатические сосуды. По совокупности морфологических изменений поставлен диагноз - лимфома слепой кишки.

Способ далее поясняют примеры его реализации.

Пример 1

Крысе линии Вистар весом 250 г проводят нижнюю срединную лапаротомию, в лапаратомную рану выводят слепую кишку и в области купола слепой кишки проводят подслизистое введение 0,1 мл 2,4,6,-тринитробензолсульфоновой кислоты, разведенной в 0,1 мл 50% раствора этанола. Слепую кишку помещают в брюшную полость, лапаратомную рану ушивают, спустя неделю расшивают лапаратомную рану и осуществляют повторное введение в подслизистый слой купола слепой кишки 0,1 мл 2,4,6,-тринитробензолсульфоновой кислоты, разведенной в 0,1 мл 50% раствора этанола. Возвращают слепую кишку в брюшную полость. Рану послойно ушивают. Животное выкармливают на протяжении 6 мес. На передней брюшной стенке появляется небольшое опухолевидное образование, выступающее за пределы органа. В течение данного периода подвижность животного постепенно снижается, шерсть теряет блеск, животное худеет.

Через 6 мес после создания модели обнаружено утолщение и уплотнение передней брюшной стенки в области купола слепой кишки. Удаляли опухоль. Из ткани опухоли готовили гистологические срезы и окрашивали их. При микроскопическом исследовании выявляются мелкие клетки с расщепленными ядрами, изредка встречаются крупные клетки. По контуру лимфатического узла обнаруживают резко дилатированные лимфатические сосуды. По совокупности морфологических изменений поставлен диагноз - лимфома.

Пример 2

Крысе линии Вистар весом 300 г осуществляют нижнюю срединную лапаротомию, в лапаратомную рану выводят слепую кишку и в области купола слепой кишки проводят подслизистое введение 0,15 мл 2,4,6,-тринитробензолсульфоновой кислоты, разведенной в 0,15 мл 50% раствора этанола. Слепую кишку помещают в брюшную полость, лапаратомную рану ушивают, спустя неделю расшивают лапараторную рану и в течение 3 недель дважды дополнительно вводят в подслизистый слой купола слепой кишки 0,15 мл 2,4,6,-тринитробензолсульфоновой кислоты, разведенной в 0,15 мл 50% раствора этанола. Возвращают слепую кишку в брюшную полость. Рану послойно ушивают. Животное выкармливают на протяжении 8 мес. На передней брюшной стенке появляется небольшое опухолевидное образование, выступающее за пределы органа. В течение данного периода подвижность животного постепенно снижается, шерсть теряет блеск, животное худеет.

Через 8 мес после создания модели обнаружено утолщение и уплотнение стенки купола слепой кишки. Проводят нижнюю срединную лапаротомию и удаляют опухоль.

Из ткани опухоли готовили гистологические срезы и окрашивали их. При микроскопическом исследовании выявляются мелкие клетки с расщепленными ядрами, изредка встречаются крупные клетки. По контуру лимфатического узла обнаруживают резко дилатированные лимфатические сосуды. По совокупности морфологических изменений поставлен диагноз - лимфома.

Моделирование осуществлено на 20 животных. Модель лимфомы получена у 19 животных, что подтверждает достижение поставленной цели.

Источники информации

1. Ким До Бин, Шеренешева Н.И. Влияние способа и режима введения на канцерогенный эффект N-метил-N-нитро-N-нитрозогуанидина у крыс. Бюл. экспер. биол. мед. 1990; 6:175-176.

2. Патент РФ №2401463, МКИ 6 G09B 23/28, 2009.