Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МИОПИИ У ДЕТЕЙ ДОШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА

Изобретение относится к медицине, а именно к детской офтальмологии и биохимии, и может быть использовано для диагностики миопии у детей дошкольного возраста.

Наиболее адаптированным способом проверки остроты зрения у детей является проверка остроты зрения по таблице Орловой (Учебник «Глазные болезни» под ред. Брошевского Т.Н., Бочкаревой А.А., 1983, с.85). В таблице Орловой на листе бумаги изображены оптотипы (рисунки) разного размера в виде различных фигур (самолет, слон, елка, звезда, гриб, машина, круг, курица, лошадь, мотоцикл). Оптотипы в рядах сверху вниз постепенно уменьшаются в размере. Против каждого ряда отмечена острота зрения. Способ заключается в следующем: ребенка усаживают в затемненной комнате на расстоянии 5 метров от проверочной таблицы Орлова, закрепленной в аппарате для ее освещения (аппарат Рота), и проверяют остроту зрения сначала правого глаза, закрывая заслонкой левый глаз, затем аналогично левого глаза, закрыв заслонкой правый глаз.

Недостатком данного способа является низкая точность проверки остроты зрения у детей дошкольного возраста, а также ограниченные функциональные возможности способа, связанные со следующими причинами:

- затруднен контакт с детьми в силу возраста (особенно в возрасте до 3-х лет) и эмоциональной неустойчивости пациентов;

- невозможность длительной концентрации внимания, особенно при патологических изменениях рефракции глаза;

- неудобство для маленьких пациентов пользоваться заслонками для глаз;

- зависимость степени узнаваемости оптотипов от уровня развития ребенка, например некоторые оптотипы (петух и лошадь, самолет и звезда) визуально похожи друг на друга и часто называются детьми неправильно;

- изображения оптотипов не всем детям одинаково знакомы;

- невозможность проводить обследование вне кабинета офтальмолога: таблица имеет относительно большие размеры и должна быть стационарно закреплена; необходим специальный осветительный аппарат; требуется минимальное расстояние 5 метров в комнате, где проводится обследование. Все это затрудняет применение таблицы вне кабинета офтальмолога, при скрининговом обследовании детей в дошкольных учреждениях или у детей с отклонениями в нервно-психическом развитии.

Технический результат: выявление миопии у детей дошкольного возраста в условиях невозможности проверки остроты зрения с помощью таблицы Орловой.

Указанная задача по определению остроты зрения у детей дошкольного возраста достигается путем определения в слезной жидкости детей активности фермента γ-глутамилтранспептидазы (γ-ГТП). При активности этого фермента в слезе свыше 11 Е/л диагностируют миопическое изменение рефракции глаза.

Диагностика миопии по биохимическому анализу слезы предлагается впервые.

Способ осуществляется следующим образом.

Объект исследования - слезная жидкость. Слезную жидкость собирают по методу Н.А. Терехиной (Терехина Н.А. Петрович Ю.А., Батуева Р.А. Влияние метода сбора слезной жидкости на ее состав // Лаб. дело. - 1989. - №6. - С.27-30): слезотечение стимулируют поднесенным к носу комочком ваты, смоченным 10% раствором нашатырного спирта. Не касаясь глаза, чтобы избежать даже небольшой микротравмы, глазной пипеткой собирают слезу с наружной поверхности нижнего века. Для получения точных результатов пациентам в течение суток перед исследованием необходимо воздержаться от применения глазных капель и мазей, тем самым избежать разведения слезы и влияния медикаментов на секрецию и биохимический состав слезной жидкости.

Проводят спектрофотометрическое (например, спектрофотометр Apel PD-303, Япония) определение активности γ-глутамилтранспептидазы (К.Ф. 2.3.2.1) по методу V. Kulhanek, D. Dimov (Kulhanek V., Dimov D. Comparison of four methods for the estimation of gamma-glutamyl transpeptidase activity in biological fluids // Clin. Chim. Acta. - 1967. - V.16, №2. - P.271-277) в слезной жидкости детей дошкольного возраста. Принцип метода основан на способности γ-ГТП переносить остаток γ-глутамила с γ-L-(+)-глутамил-N-анилида на дипептидный акцептор, которым является глицилглицин. Фермент активируется хлористым натрием. При переносе остатка γ-глутамила на акцептор освобождается N-нитроанилин, концентрацию которого, пропорциональную активности фермента, измеряют фотометрически после остановки реакции подкислением.

Используемые реактивы (например, набор реактивов фирмы «Ольвекс диагностикум», Санкт-Петербург, Россия).

1. Субстрат (28 мг γ-L-глутамил-N-нитроанилид и 82 мг хлорида натрия). Раствор субстрата хранят в холодильнике 1 неделю. Ввиду разложения субстрата его нагревание и растворение можно повторять не более двух раз.

2. Буферный раствор pH 8,3 (0,55 М глицилглицина). Буферный раствор хранят в холодильнике.

3. 10% раствор уксусной кислоты.

В контрольную и опытную пробирки вносят раствор субстрата, содержавшего 0,4 мл 0,18 М трис-буфер pH=8,25 и 0,64 М глицилглицин и 0,1 мл 3,5 мМ раствора γ-L-глутамил-3-карбокси-4-нитроанилида. В опытную пробирку добавляют 0,05 мл слезной жидкости; содержимое перемешивают и инкубируют точно 15 минут при 37°C на водяной бане. Потом в обе пробирки добавляют по 1 мл раствора уксусной кислоты (85 г/л) и по 2 мл дистиллированной воды, а в контрольную пробирку дополнительно 0,05 мл слезной жидкости. После перемешивания измеряют оптическую плотность опытной пробы против контрольной при λ=405 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Для определения активности γ-ГТП используют калибровочный график, который отражает зависимость оптической плотности пробы от активности фермента. Активность γ-ГТП в слезной жидкости глаза выражают в международных единицах активности (Е/л), обозначающих количество микромолей N-нитроанилина, освобожденного из субстрата под действием 1 литра слезной жидкости за 1 мин при 37°C в данных условиях.

При обнаружении активности этого фермента в слезе свыше 11 Е/л диагностируют миопическое изменение рефракции глаза.

Примеры конкретного выполнения:

Пример 1. Больная Л., 5 лет, поступила в детское глазное отделение в плановом порядке. Диагноз: Врожденная миопия высокой степени обоих глаз со сложномиопическим астигматизмом. Амблиопия рефракционная, высокой степени. Активность γ-ГТП в слезной жидкости правого глаза - 16 Е/л, левого глаза - 17 Е/л, т.е. выше 11 Е/л, что подтверждает диагноз миопии.

Пример 2. Больная Л., 6 лет, поступила в детское глазное отделение в плановом порядке. Диагноз: Миопия высокой степени левого глаза. Сложный миопический астигматизм левого глаза. Амблиопия рефракционная левого глаза. Активность γ-ГТП в слезной жидкости левого глаза - 13 Е/л, т.е. выше 11 Е/л, что подтверждает диагноз миопии.

Пример 3. Обследуемый К., 4 года, здоров. Активность γ-ГТП в слезной жидкости правого глаза - 5 Е/л, левого глаза - 6 Е/л. Миопии нет.

Пример 4. Обследуемый В., 3 года, здоров. Активность γ-ГТП в слезной жидкости обоих глаза - 8 Е/л. Миопии нет. Положительный эффект.

Исследуемый параметр - активность γ-ГТП в слезной жидкости здоровых детей - стабильный показатель, не зависящий от пола и возраста детей.

При миопической рефракции глаза нарушаются анатомо-морфологические размеры глазного яблока, особенно при близорукости. У детей увеличение переднезадней оси глаза при миопии ведет к натяжению, лабильности клеток тканей глазного яблока и слезной железы и выходу γ-ГТП в слезную жидкость.

Выявление активности этого фермента в слезной жидкости детей дошкольного возраста свыше 11 Е/л свидетельствует о миопическом изменении рефракции глаза.