10.04.2015
216.013.3ee9

СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ КОПЕЕЧНИКА ЧАЙНОГО (HEDYSARUM THEINUM KRASNOB.)

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
№ охранного документа
0002547593
Дата охранного документа
10.04.2015
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения копеечника чайного, где вызревшие простерилизованные семена копеечника чайного (Hedysarum theinum Krasnob.) высаживают на питательные среды Мурасиге-Скуга для введения в культуру ткани, через 20-30 суток развившиеся побеги пересаживают на среды размножения MS, затем образовавшиеся конгломераты микропобегов делят и пересаживают на среды, содержащие 1,0 БАП+L-глютамин и аденин сульфат 100 мг/л. Растения-регенеранты размножают, укореняют и адаптируют к нестерильным условиям. Изобретение позволяет повысить эффективность процесса, тиражируемости, адаптации в условиях гидропоники и получить стандартные саженцы копеечника чайного. 4 ил., 1 табл.
Основные результаты: Способ размножения копеечника чайного (Hedysarum theinum Krasnob.), включающий в себя культуру ткани, отличающийся тем, что используют семена копеечника чайного, которые высаживают на питательные среды Мурасиге-Скуга (MS), не содержащие гормоны, через 20-30 суток развившиеся побеги пересаживают на среды размножения MS с добавлением 5 мкМ БАП, 2,5 мкМ кинетина, 5 мкМ ГК (гибберелловой кислоты), образовавшиеся микропобеги делят и пересаживают на среды, содержащие 1,0 БАП+L-глютамин и аденин сульфат 100 мг/л, чередуют среды с высоким и низким содержанием БАП через один пассаж, укореняют побеги на среде MS, дополненной 3 мкМ НУК, адаптируют к нестерильным условиям на гидропонной установке с ¼ минерального состава среды MS.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и может быть использовано для массового получения качественного посадочного материала лекарственного растения копеечника чайного.

Известны методы культивирования тканей in vitro (аналог) двух видов копеечника - копеечника забытого и копеечника альпийского (Ляпкова Н.С., Хадеева Н.В., Шаин С.С., Майсурян А.Н. Разработка методов культивирования тканей копеечника in vitro. Биотехнология, 1999, 1, С.55-61). Авторам удалось получить каллусные ткани листового, стеблевого и корневого происхождения, а также изолированные корни этих растений.

Культивирование недифференцированно растущих клеток растений не всегда гарантирует сохранение биосинтеза видоспецифичных соединений в условиях in vitro. Кроме того, выращивание клеточных культур, а также культивирование изолированных корней на питательной среде, содержащей фитогормоны, существенно ограничивает вероятность дальнейшего использования получаемой растительной массы и тем самым снижает ценность метода.

Наиболее близким к предлагаемому способу является «Культура корня Hed.th. (Hedysarum theinum Krasnob.) - продуцент изофлавонов» (Патент РФ №2360964 от 10.07.2009, Бюл. №19). Задача изобретения - получение культуры корня Hed.th., интенсивно растущей в условиях in vitro на безгормональных питательных средах, сохраняющей способность к синтезу изофлавонов, характерных для корней целого растения, и обладающей генетической и биохимической стабильностью, для контролируемого выращивания лекарственного сырья в любое время года.

Поставленная задача решалась созданием новой культуры корня Hedysarum theinum Krasnob., депонированной в Коллекции генетически трансформированных корней растений при Институте физиологии растений РАН - под обозначением Hed.th. - продуцента изофлавонов: ононина, гликозида тексазина, малонилононина, формононетина.

Недостатком данного метода является культивирование только корней, а наземная часть при этом отсутствует. Вегетативные органы также представляют лекарственную ценность и могут быть использованы.

Заявляемый способ размножения копеечника чайного методом культуры in vitro позволяет получить активно растущие растения-регенеранты с полноценными вегетативными органами и корневой системой.

Сущность способа размножения копеечника чайного (Hedysarum theinum Krasnob.) заключается в том, что используются вызревшие простерилизованные семена копеечника чайного, которые высаживают на питательные среды Мурасиге-Скуга (MS), не содержащие гормоны, через 20-30 суток развившиеся побеги пересаживают на среды размножения MS с добавлением 5 мкМ БАП (6-бензиламинопурина), 2,5 мкМ кинетина и 5 мкМ ГК, затем образовавшиеся конгломераты микропобегов делят и пересаживают на среды, содержащие 1,0 БАП+L-глютамин и аденин сульфат 100 мг/л. Микропобеги размножают и укореняют в последующих пассажах. После адаптации к нестерильным условиям получают стандартные саженцы копеечника чайного.

Способ реализуют следующим образом.

Перед стерилизацией семена копеечника чайного промывают под проточной водой в течение 15-25 минут. Стерилизацию проводят в условиях ламинар-бокса 0,1% раствором сулемы 10 минут. Затем трижды промывают стерильной дистиллированной водой. Этот способ стерилизации позволяет получить 70% эксплантов «стерильными» и жизнеспособными. Питательные среды для этапа введения в культуру ткани готовят по прописи Мурасиге-Скуга (MS), они не содержат гормоны, на них высаживают простерилизованные семена (Фиг.1. Побеги копеечника чайного на этапе введения в культуру ткани).

Через 20-30 суток развившиеся побеги пересаживают на среды размножения MS с добавлением 5 мкМ БАП (6-бензиламинопурина), 2,5 мкМ кинетина и 5 мкМ ГК (гибберелловой кислоты) (табл.1) для микроразмножения (Фиг.2. Микроразмножение копеечника чайного). Образовавшиеся конгломераты микропобегов легко делятся на одиночные, которые пересаживают на среды, содержащие 1,0 мкМ БАП+L-глютамин и аденин сульфат (100 мг/л). Для длительного получения активно пролиферирующей культуры необходимо использовать схему чередования сред с высоким и низким содержанием БАП через один пассаж. В результате чего получают стерильную культуру копеечника со стабильным коэффициентом размножения 3,3±0,4. Число побегов на один эксплант за один пассаж составляет от 2 до 15 штук. Укореняют побеги на среде Мурасиге-Скуга дополненной 3 мкМ НУК (α-нафтилуксусная кислота). Адаптацию растений-регенерантов копеечника чайного к нестерильным условиям проводят на гидропонной установке, используя ¼ минерального состава среды MS (Фиг.3.) Через 25-30 суток адаптации получают стандартные саженцы (Фиг.4. Растение-регенерант копеечника чайного после адаптации на гидропонной установке).

На основании теоретического расчета по формуле Bn=B1×G(n-1) (где n - количество месяцев культивирования, B1 - количество микропобегов, G - коэффициент размножения) от одного растения при данном способе культивирования можно получить за 12 месяцев до 159432 саженцев копеечника чайного, если коэффициент размножения равен 3,0.

Высокая эффективность процесса, тиражируемость, адаптация в условиях гидропоники определяют промышленную применимость предлагаемого способа.

Таблица 1.
Влияние гормонального состава питательных сред и схемы культивирования на побегообразование у копеечника чайного
Гормональный состав питательной среды, мкМ, (№ среды) Высота растений, мм Коэффициент размножения Примечание
1,0 БАП+L-глютамин и аденин сульфат 100 мг/л (78) 30,1±0,1 1,0 рост в длину, гибель побегов 40%
2,5 БАП (98) 20,3±0,2 1,8±0,1 гибель побегов 20%
5 БАП+2,5 кинетина +5 ГК (204) 30,7±0,2 2,5±0,5 гибель побегов 20%
5 БАП+1 НУК 30±0,7 2,0±0,2 гибели побегов 30%
Чередование сред 204 и 78 40,5±0,1 3,3±0,4. стабильный рост и размножение

Способ размножения копеечника чайного (Hedysarum theinum Krasnob.), включающий в себя культуру ткани, отличающийся тем, что используют семена копеечника чайного, которые высаживают на питательные среды Мурасиге-Скуга (MS), не содержащие гормоны, через 20-30 суток развившиеся побеги пересаживают на среды размножения MS с добавлением 5 мкМ БАП, 2,5 мкМ кинетина, 5 мкМ ГК (гибберелловой кислоты), образовавшиеся микропобеги делят и пересаживают на среды, содержащие 1,0 БАП+L-глютамин и аденин сульфат 100 мг/л, чередуют среды с высоким и низким содержанием БАП через один пассаж, укореняют побеги на среде MS, дополненной 3 мкМ НУК, адаптируют к нестерильным условиям на гидропонной установке с ¼ минерального состава среды MS.
СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ КОПЕЕЧНИКА ЧАЙНОГО (HEDYSARUM THEINUM KRASNOB.)
СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ КОПЕЕЧНИКА ЧАЙНОГО (HEDYSARUM THEINUM KRASNOB.)
СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ КОПЕЕЧНИКА ЧАЙНОГО (HEDYSARUM THEINUM KRASNOB.)
СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ КОПЕЕЧНИКА ЧАЙНОГО (HEDYSARUM THEINUM KRASNOB.)
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-10 из 25.
27.02.2013
№216.012.2c3e

Экстракционно-вольтамперометрический способ определения цинка, кадмия, свинца и меди

Изобретение относится к экстракционно-вольтамперометрическому способу определения цинка, кадмия, свинца и меди, позволяющего осуществлять поэлементный мониторинг природных вод и водных экосистем. Способ заключается в экстрагировании металлов из жидкой водной фазы в органическую компоненту...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002476853
Дата охранного документа: 27.02.2013
10.03.2013
№216.012.2ea1

Способ определения висмута

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения висмута(III) в технических объектах. Способ определения заключается в потенциометрическом титровании пробы комплексоном(III) с индикаторным электродом из металлического висмута при рН 1,9-4,2. Достигается...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477468
Дата охранного документа: 10.03.2013
27.04.2013
№216.012.385f

Способ микроклонального размножения ириса сибирского (i.sibirica l.)

Изобретение представляет собой способ микроклонального размножения I.sibirica L. in vitro. Растения, идентичные исходным экземплярам, получают методом прямой регенерации, минуя каллусную культуру, а в качестве эксплантов используют фрагменты трубки околоцветника и цветоножки. Экспланты...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002479992
Дата охранного документа: 27.04.2013
20.05.2013
№216.012.3f44

Способ получения растений-регенерантов ириса мечевидного (i. ensata thunb.) in vitro

Изобретение относится к способу получения растений-регенерантов ириса мечевидного (I.ensata Thunb.) in vitro. Способ включает стерилизацию бутонов при условии, что бутоны, смоченные в 96%-ном этиловом спирте, обжигают в пламени спиртовки, обеззараживают в 0,1%-ном растворе сульфохлорантина в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002481766
Дата охранного документа: 20.05.2013
27.01.2014
№216.012.9ca7

Способ определения свинца

Настоящее изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения свинца(II) в технических объектах. Способ определения свинца заключается в потенциометрическом титровании пробы комплексоном(III) с индикаторным электродом из металлического висмута с буферным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002505809
Дата охранного документа: 27.01.2014
27.01.2014
№216.012.9ca8

Способ определения меди

Настоящее изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения меди (II) в технических объектах. Способ определения меди заключается в прямом потенциометрическом титровании комплексоном (III) при рН от 4,1-9,0 с индикаторным электродом из металлического висмута...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002505810
Дата охранного документа: 27.01.2014
27.02.2014
№216.012.a748

Способ определения цинка

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения цинка (II) в технических и природных объектах. Способ заключается в потенциометрическом титровании пробы комплексоном (III) с индикаторным электродом из металлического висмута с буферным раствором при рН 4,1 -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002508539
Дата охранного документа: 27.02.2014
20.04.2014
№216.012.b990

Композиция на основе 24-эпибрассинолида для регулирования развития и защиты растений

Изобретение относится к области сельского хозяйства, точнее к химическим средствам, используется в растениеводстве. Композиция на основе 24-эпибрассинолида для регуляции развития и защиты растений включает в себя источник аминокислот - гидролизат соевого белка, ПАВ - гептаметилтрисилоксан,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002513232
Дата охранного документа: 20.04.2014
20.05.2014
№216.012.c596

Способ получения растений-регенерантов земляники (in vitro)

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений-регенерантов земляники in vitro, включающий в себя введение эксплантов в культуру, размножение и укоренение вновь образованных in vitro побегов, где в качестве эксплантов используют фрагменты...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002516341
Дата охранного документа: 20.05.2014
20.07.2014
№216.012.e151

Способ экстракционного извлечения ртути (ii) из хлоридных растворов

Изобретение может быть использовано в аналитической химии для контроля полноты очистки технологических растворов от ионов ртути. Способ экстракционного извлечения ртути (II) из хлоридных растворов включает экстракцию ртути из водной фазы в органическую компоненту расслаивающей системы...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002523467
Дата охранного документа: 20.07.2014
Показаны записи 1-10 из 26.
27.02.2013
№216.012.2c3e

Экстракционно-вольтамперометрический способ определения цинка, кадмия, свинца и меди

Изобретение относится к экстракционно-вольтамперометрическому способу определения цинка, кадмия, свинца и меди, позволяющего осуществлять поэлементный мониторинг природных вод и водных экосистем. Способ заключается в экстрагировании металлов из жидкой водной фазы в органическую компоненту...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002476853
Дата охранного документа: 27.02.2013
10.03.2013
№216.012.2ea1

Способ определения висмута

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения висмута(III) в технических объектах. Способ определения заключается в потенциометрическом титровании пробы комплексоном(III) с индикаторным электродом из металлического висмута при рН 1,9-4,2. Достигается...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477468
Дата охранного документа: 10.03.2013
27.04.2013
№216.012.385f

Способ микроклонального размножения ириса сибирского (i.sibirica l.)

Изобретение представляет собой способ микроклонального размножения I.sibirica L. in vitro. Растения, идентичные исходным экземплярам, получают методом прямой регенерации, минуя каллусную культуру, а в качестве эксплантов используют фрагменты трубки околоцветника и цветоножки. Экспланты...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002479992
Дата охранного документа: 27.04.2013
20.05.2013
№216.012.3f44

Способ получения растений-регенерантов ириса мечевидного (i. ensata thunb.) in vitro

Изобретение относится к способу получения растений-регенерантов ириса мечевидного (I.ensata Thunb.) in vitro. Способ включает стерилизацию бутонов при условии, что бутоны, смоченные в 96%-ном этиловом спирте, обжигают в пламени спиртовки, обеззараживают в 0,1%-ном растворе сульфохлорантина в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002481766
Дата охранного документа: 20.05.2013
27.01.2014
№216.012.9ca7

Способ определения свинца

Настоящее изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения свинца(II) в технических объектах. Способ определения свинца заключается в потенциометрическом титровании пробы комплексоном(III) с индикаторным электродом из металлического висмута с буферным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002505809
Дата охранного документа: 27.01.2014
27.01.2014
№216.012.9ca8

Способ определения меди

Настоящее изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения меди (II) в технических объектах. Способ определения меди заключается в прямом потенциометрическом титровании комплексоном (III) при рН от 4,1-9,0 с индикаторным электродом из металлического висмута...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002505810
Дата охранного документа: 27.01.2014
27.02.2014
№216.012.a748

Способ определения цинка

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения цинка (II) в технических и природных объектах. Способ заключается в потенциометрическом титровании пробы комплексоном (III) с индикаторным электродом из металлического висмута с буферным раствором при рН 4,1 -...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002508539
Дата охранного документа: 27.02.2014
20.04.2014
№216.012.b990

Композиция на основе 24-эпибрассинолида для регулирования развития и защиты растений

Изобретение относится к области сельского хозяйства, точнее к химическим средствам, используется в растениеводстве. Композиция на основе 24-эпибрассинолида для регуляции развития и защиты растений включает в себя источник аминокислот - гидролизат соевого белка, ПАВ - гептаметилтрисилоксан,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002513232
Дата охранного документа: 20.04.2014
20.05.2014
№216.012.c596

Способ получения растений-регенерантов земляники (in vitro)

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений-регенерантов земляники in vitro, включающий в себя введение эксплантов в культуру, размножение и укоренение вновь образованных in vitro побегов, где в качестве эксплантов используют фрагменты...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002516341
Дата охранного документа: 20.05.2014
20.07.2014
№216.012.e151

Способ экстракционного извлечения ртути (ii) из хлоридных растворов

Изобретение может быть использовано в аналитической химии для контроля полноты очистки технологических растворов от ионов ртути. Способ экстракционного извлечения ртути (II) из хлоридных растворов включает экстракцию ртути из водной фазы в органическую компоненту расслаивающей системы...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002523467
Дата охранного документа: 20.07.2014

Похожие РИД в системе

+ добавить свой РИД