Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ЭНТЕРО- И ПАНКРЕАТОПРОТЕКТИВНОГО ДЕЙСТВИЯ НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Изобретение относится к медицине и может быть применено как способ энтеро- и панкреатопротективного действия нестероидных противовоспалительных препаратов.

Нестероидные противовоспалительные препараты (кетанов, кетонал, целебрекс) являются селективными ингибиторами циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2). ЦОГ-2 индуцируется в ответ на воспалительный процесс, что приводит к синтезу и накоплению воспалительных простаноидов (в частности, ПГЕ2), что, в свою очередь, вызывает воспаление, отек и болевой синдром. Простагландины усиливают ощущение боли, инициируя воспаление ткани в месте ее повреждения, поэтому наряду с противовоспалительным действием эти препараты обладают выраженным обезболивающим действием. Целебрекс (целекоксиб) не ингибирует ЦОГ-1, следовательно, не влияет на простаноиды, синтезируемые за счет активации ЦОГ-1, и, благодаря этому, не препятствует развитию процессов, связанных с действием ЦОГ-1 в тканях (язвенные поражения желудка и двенадцатиперстной кишки, перфорации, обструкции, отсутствие ингибирования ЦОГ-2-зависимой агрегационной активности тромбоцитов).

Известен способ лечения болевого синдрома нестероидными противовоспалительными препаратами, принятый за аналог (1 - Burian М, Geisslinger G. Clinical pharmacology of the selective COX-2 inhibitors. Orthopade. 2003 Dec; 32(12):1078-87).

Известен способ лечения болевого синдрома противовоспалительными препаратами путем погружения хвоста подопытного животного в раствор, содержащий диметилсульфоксид и испытываемый противовоспалительный препарат (2 - Karadas В. et al. Additive interaction of intraperitoneal dexmedetomidine and topical nimesulide, celecoxib, and DFU for antinociception. Eur J Pharmacol. 2007 Feb 5; 556(1-3):62-8). Данный способ принят за прототип. Диметилсульфоксид по характеру действия в остром опыте - нейротропный препарат. Вызывает симптомы возбуждения ЦНС (повышение рефлекторной возбудимости, агрессивность, клонические судороги), а также признаки угнетения нервных функций (урежение дыхания, адинамия, боковое положение). Диметилсульфоксид обладает гемолитическими свойствами, вызывает гемолиз и гематурию. Усиливает жажду и мочеотделение. Диметилсульфоксид легко проникает через все биологические мембраны.

Однако способ-прототип обладает ограниченной эффективностью лечения заболеваний воспалительного тракта, протекающих с воспалением, и применяемый препарат токсичен.

Целью изобретения является повышение эффективности лечения язвы желудка и двенадцатиперстной кишки и панкреатита нестероидными противовоспалительными препаратами при снижении токсичности.

Технический результат достигается тем, что перед моделированием проводят курсы введения кетанова, целебрекса или кетонала, при этом препараты вводят парентерально, причем в течение первых трех дней курса в дозе 2,5-3,1 мг/кг, с последующим введением в течение трех дней в дозе 1,5-2,4 мг/кг, далее в течение четырех дней в дозе 0,5-1,4 мг/кг с последующим повторением курса через 1,5-2 мес, причем первые три дня повторного курса доза препарата составляет 0,7-2,0 мг/кг, последующие три дня доза составляет 2,1-2,6 мг/кг, заключительные четыре дня доза препарата составляет 2,7-3,1 мг/кг.

Способ реализуется следующим образом.

Опыты на контрольной группе животных (без введения НПВС).

Эксперименты проводились на 15 крысах линии Вистар весом 200-250 г.

Модель язвы желудка и двенадцатиперстной кишки и панкреатита создавали путем нанесения 100%-ной ацетоуксусной кислоты на серозную оболочку желудка на границе антрального и фундального отделов и на серозную оболочку бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки; модель панкреатита создавали путем введения 0,05-1,0 мл 100%-ной ацетоуксусной кислоты в панкреатический проток.

Фоновая частота медленных волн ЭМА двенадцатиперстной кишки составляла 18,5±0,9 в мин, амплитуда - 0,23±0,03 мВ. Моделирование язвы желудка и язвы 12-перстной кишки незначительно изменяет показания медленноволновой активности 12-перстной кишки на 10-й день модели: частота медленных волн ЭМА двенадцатиперстной кишки составила 19,1±1,3 в мин и амплитуда - 0,21±0,05 мВ. Таким образом, на 10-й день модели ЭМА 12-перстной кишки достоверно не изменяется.

Фоновая частота медленных волн ЭМА панкреатического протока составляла 11,7±0,6 в мин, амплитуда - 0,17±0,03 мВ. Моделирование панкреатита приводило к изменению электромоторной активности панкреатического протока на 10-й день модели: частота медленных волн увеличивается на 10-15%, амплитуда увеличилась на 25-30%.

Морфологическое исследование язвы желудка и двенадцатиперстной кишки на 10-й день модели показало, что у стенки язвенного дефекта обнаруживается детрит, главные железы желудка заполнены вязким секретом, кистозно расширены; венозные сосуды резко дилатированы, кровенаполнены; ворсинки двенадцатиперстной кишки деформированы и инфильтрированы лимфоидными клетками, грануляционная ткань сформирована, сосуды расширены, отмечается стаз крови.

Морфологическое исследование ткани поджелудочной железы на 10-й день моделирования панкреатита выявило отек дольки, увеличение междольковой и внутридольковой соединительной ткани. Тонкие внутридольковые соединительнотканные прослойки разделяют небольшие группы клеток. В междольковом пространстве расположены расширенные вены с краевым стоянием эритроцитов. Плотность расположения эндокриноцитов в островках снижена: обнаружены расширенные промежутки между клетками, заполненные соединительной тканью с единичными капиллярами. Обнаруживаются небольшие скопления разрушенных клеток. Отмечается дистрофия островков Лангерганса. В панкреатическом протоке обнаружено скопление белкового секрета, затрудняющего его отток в двенадцатиперстную кишку и создающее условия для развития панкреатита.

Опытная группа животных с введением НПВС.

Предварительное хроническое введение кетанова увеличивает электромоторную активность 12-типерстной кишки на 10-й день модели: частота возрастает до 21,6±2,3 в мин (16,2%), амплитуда - до 0,47±0,05 мВ (104,3%). Таким образом, кетанов стимулирует электромоторную активность двенадцатиперстной кишки.

Предварительное хроническое введение кетонала увеличивает частоту медленных волн ЭМА двенадцатиперстной кишки на 10-й день модели: до 21,8±2,3 в мин (11,8%) и увеличивает амплитуду - до 0,54±0,07 мВ (134,8%). Таким образом, кетонал изменяет хроноинотропные взаимоотношения сократительной активности двенадцатиперстной кишки за счет увеличения амплитуды локального ответа.

Предварительное хроническое введение целебрекса увеличивает частоту медленных волн ЭМА двенадцатиперстной кишки на 10-й день модели: до 27,0±3,3 в мин (17%) и амплитуду до 0,7±0,08 мВ (203%). То есть целебрекс усиливает и учащает медленноволновую электромоторную активность, усиливая моторику двенадцатиперстной кишки в целом. Таким образом, электромоторная активность тонкой кишки в ответ на хроническое введение нестероидных противовоспалительных препаратов характеризуется увеличением амплитудночастотных характеристик медленноволновой активности.

Морфологическое исследование язвы желудка и двенадцатиперстной кишки в условиях предварительного введения нестероидных противовоспалительных препаратов показало, что препараты оказывают гастропротективное действие за счет улучшения функционирования желудочных желез, восстановления кровоснабжения области поражения, что способствует более быстрой эпителизации язвы. Дуоденопротективное действие хронического введения нестероидных противовоспалительных препаратов выражается в более выраженном развитии рубцовой ткани и эпителизации язвенного дефекта, восстановлении деятельности бруннеровых желез, а также в нормализации диаметра сосудов подслизистого и мышечного слоя, что и приводит к оптимизации электромоторной активности двенадцатиперстной кишки на фоне хронического введения нестероидных противовоспалительных препаратов.

Морфологическое исследование тканей поджелудочной железы кишки в условиях предварительного введения нестероидных противовоспалительных препаратов и моделирования панкреатита показало, что препараты оказывают панкреатопротективное действие за счет улучшения функционирования экзокриноцитов и эндокриноцитов, предотвращения развития соединительной ткани, улучшения кровоснабжения области поражения и освобождения просвета протока от вязкого секрета, что способствует более быстрому восстановлению функционирования железы. Энтеро- и панкреатопротективное действие определяют по активации электромоторной активности панкреатического протока: частота медленных волн увеличивается на 20-30%, амплитуда увеличилась на 40-60%.

Способ далее поясняют примеры его реализации.

Пример 1.

Крысе линии Вистар весом 200 г предварительно вводят внутримышечно нестероидный противовоспалительный препарат, причем в течение первых трех дней курса в дозе 2,5 мг/кг, с последующим введением в течение трех дней в дозе 1,5 мг/кг, далее в течение четырех дней в дозе 0,5 мг/кг с последующим повторением курса через 1,5 мес, причем первые три дня повторного курса доза препарата составляет 0,7 мг/кг, последующие три дня доза составляет 2,1 мг/кг, заключительные четыре дня доза препарата составляет 2,7 мг/кг. Далее в условиях нембуталового наркоза (40 мг/кг внутримышечно) проводили лапаротомию и регистрировали электромоторную активность желудка и двенадцатиперстной кишки и панкреатического протока с помощью серебряных электродов с площадью контактной поверхности 1,5 мм².

Модель язвы желудка создавали путем нанесения 100%-ной ацетоуксусной кислоты на серозную оболочку желудка на границе антрального и фундального отделов; модель язвы двенадцатиперстной кишки создавали путем нанесения 100%-ной ацетоуксусной кислоты на серозную оболочку бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки; модель панкреатита создавали путем введения 0,05 мл 100%-ной ацетоуксусной кислоты в панкреатический проток.

Фоновая частота медленных волн ЭМА двенадцатиперстной кишки составляла 17,6 в мин, амплитуда - 0,2 мВ. Предварительное хроническое введение кетанова увеличивает электромоторную активность: частота возрастает до 19,7 в мин (12%), амплитуда - до 0,42 мВ (104%, р<0,05). То есть кетанов стимулирует электромоторную активность двенадцатиперстной кишки при моделировании язвы.

Хроническое введение кетонала увеличивает частоту медленных волн ЭМА двенадцатиперстной кишки при моделировании язвы - до 19,8 в мин (больше на 12,5%) и увеличивает амплитуду - до 0,54±0,07 мВ (больше на 170%, р<0,05). То есть кетонал изменяет хроноинотропные взаимоотношения сократительной активности двенадцатиперстной кишки при язве желудка и двенадцатиперстной кишки.

Хроническое введение целебрекса в дозе 2,5 мг/кг увеличивает частоту медленных волн ЭМА двенадцатиперстной кишки до 26,4 в мин (50%, р<0,05) и амплитуду до 0,7 (204,3%), р<0,01). Таким образом, целебрекс усиливает и учащает медленноволновую электромоторную активность, усиливая моторику двенадцатиперстной кишки в целом.

То есть электромоторная активность тонкой кишки при моделировании язвы желудка и двенадцатиперстной кишки в ответ на хроническое введение нестероидных противовоспалительных препаратов характеризуется увеличением амплитудно-частотных характеристик медленноволновой активности.

Моделирование язвы желудка и двенадцатиперстной кишки и панкреатита на фоне последовательного применения кетанова, кетанала, целебрекса приводит к активации электромоторной активности бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки: частота медленных волн увеличивается на 12%, амплитуда увеличилась вдвое; ЭМА панкреатического протока при моделировании панкреатита на фоне действия нестероидных противовоспалительных препаратов приводит к активации электромоторной активности панкреатического протока: частота медленных волн увеличивается на 20%, амплитуда увеличилась на 43%.

Моделирование язвы желудка и двенадцатиперстной кишки и панкреатита на фоне действия нестероидных противовоспалительных препаратов сопровождается усилением моторной активности двенадцатиперстной кишки и панкреатического протока.

Морфологическое исследование язвы желудка и двенадцатиперстной кишки показало, что края язвенного дефекта (язвы желудка) подрыты, дно выполнено серым налетом, главные железы желудка заполнены вязким секретом, кистозно расширены; вены подслизистого и мышечного слоя резко дилатированы, кровенаполнены; ворсинки кишки (язва дуоденума) деформированы и инфильтрированы лимфоидными клетками, сосуды расширены. Морфологическое исследование поджелудочной железы при моделировании панкреатита показало частичную деструкцию экзо- и эндокриноцитов, расширение венозных сосудов со стазом крови и избыточное развитие соединительной ткани.

Морфологическое исследование язвы желудка и двенадцатиперстной кишки и панкреатина в сравнимые сроки в условиях предварительного введения нестероидных противовоспалительных препаратов показало, что препараты оказывают гастропротективное действие за счет улучшения функционирования желудочных желез, восстановления кровоснабжения области поражения, что способствует более быстрому рубцеванию язвы. Дуоденопротективное действие хронического введения нестероидных противовоспалительных препаратов состоит в более выраженном развитии рубцовой ткани и эпителизации язвенного дефекта, восстановлении деятельности бруннеровых желез, а также в нормализации диаметра сосудов подслизистого и мышечного слоя, что способствует повышению электромоторной активности двенадцатиперстной кишки на фоне хронического введения нестероидных противовоспалительных препаратов. Панкреатопротективное действие хронического введения нестероидных противовоспалительных препаратов состоит в сохранении ткани поджелудочной железы и нормальном ее кровоснабжении, нормализации пассажа секрета по панкреатическому протоку.

Энтеро- и панкреатопротективное действие определяют по активации электромоторной активности панкреатического протока: частота медленных волн увеличивается с 10 до 12 в мин (20%), амплитуда увеличилась на с 1,0 до 1,4 мВ (40%).

Таким образом, нестероидные противовоспалительные препараты при парентеральном введении оказывают гастро-, энтеро- и панкреатопротективное действие.

Пример 2.

Крысе линии Вистар весом 250 г препараты вводили парентерально в течение первых трех дней курса в дозе 3,1 мг/кг, с последующим введением в течение трех дней в дозе 2,4 мг/кг, далее в течение четырех дней в дозе 1,4 мг/кг с последующим повторением курса через 2 мес, причем первые три дня повторного курса доза препаратов составляет 2,0 мг/кг, последующие три дня доза составляет 2,6 мг/кг, заключительные четыре дня доза препарата составляет 3,1 мг/кг. Далее в условиях нембуталового наркоза (40 мг/кг внутримышечно) проводили лапаротомию и регистрировали электромоторную активность желудка, двенадцатиперстной кишки. Электромоторную активность желудка и восходящего отдела двенадцатиперстной кишки регистрировали с помощью серебряных электродов с площадью контактной поверхности 2,0 мм².

Модель язвы желудка создавали путем нанесения 100%-ной ацетоуксусной кислоты на серозную оболочку желудка на границе антрального и фундального отделов; модель язвы двенадцатиперстной кишки создавали путем нанесения 100%-ной ацетоуксусной кислоты на серозную оболочку бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки. модель панкреатита создавали путем введения 0,1 мл 100%-ной ацетоуксусной кислоты в панкреатический проток.

Фоновая частота медленных волн ЭМА двенадцатиперстной кишки составляла 17,6 в мин, амплитуда - 0,2 мВ. Хроническое введение кетанова увеличивает электромоторную активность: частота возрастает до 26,4 в мин (50%), амплитуда - до 0,61 мВ (204%). То есть кетанов стимулирует электромоторную активность двенадцатиперстной кишки.

Хроническое введение кетонала увеличивает частоту медленных волн ЭМА - с 18,4 до 27,2 в мин (больше на 48%) и увеличивает амплитуду - с 0,26 до 0,79 мВ (больше на 203%). То есть кетонал изменяет хроноинотропные взаимоотношения сократительной активности двенадцатиперстной кишки.

Последующее хроническое введение целебрекса увеличивает частоту медленных волн ЭМА с 19,4 до 28,9 в мин (49%) и амплитуду с 0,24 до 0,73 (203%). Таким образом, целебрекс усиливает и учащает медленноволновую электромоторную активность, усиливая моторику двенадцатиперстной кишки в целом.

То есть электромоторная активность тонкой кишки в ответ на хроническое введение нестероидных противовоспалительных препаратов характеризуется увеличением амплитудно-частотных характеристик медленноволновой активности.

Моделирование язвы желудка и двенадцатиперстной кишки и панкреатита на фоне последовательного применения кетанова, кетанала, целебрекса приводит к активации электромоторной активности желудка и бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки: частота медленных волн увеличивается до 50%, амплитуда увеличилась более, чем вдвое.

То есть, моделирование язвы двенадцатиперстной кишки на фоне действия нестероидных противовоспалительных препаратов сопровождается усилением моторной активности двенадцатиперстной кишки.

Энтеро- и панкреатопротективное действие определяют по активации электромоторной активности панкреатического протока: частота медленных волн увеличивается с 10 до 13 в мин (30%), амплитуда увеличилась с 1 до 1,6 мВ (60%).

Морфологическое исследование язвы желудка и двенадцатиперстной кишки показало, что стенки язвенного дефекта (язвы желудка) покрыты наложениями фибрина, протоки главных желез желудка блокированы вязким секретом, концевые отделы желез кистозно расширены; ворсинки кишки (язва дуоденума) разрушены, периульцерозная зона инфильтрирована лимфоидными клетками, венозные сосуды резко дилатированы, кровенаполнены. Морфологически при моделировании панкреатита отмечается наличие вязкого белкового секрета в протоке, стаз крови в сосудах, дезорганизации экзо- и эндокриноцитов.

Морфологическое исследование язвы желудка и двенадцатиперстной кишки в сравнимые сроки в условиях предварительного введения нестероидных противовоспалительных препаратов показало, что протоки желудочных желез свободны, кровоснабжение области поражения восстановлено. Хроническое введение нестероидных противовоспалительных препаратов приводит к более быстрому заживлению язвы двенадцатиперстной кишки, выраженному в виде развития рубцовой ткани и эпителизации язвенного дефекта, восстановления деятельности бруннеровых желез, а также к нормализации диаметра сосудов подслизистого и мышечного слоя. Хроническое введение нестероидных противовоспалительных препаратов приводит к нормализации функции экзо- и эндокриноцитов, освобождению протоков от вязкого белкового секрета.

Таким образом, нестероидные противовоспалительные препараты при парентеральном введении оказывают гастро-, и энтеро-, и панкреатопротективное действие.

Пример 3.

Крысе линии Вистар весом 250 г предварительно, парентерально вводят препараты кетонал, кетанов и целебрекс, причем в течение первых трех дней курса в дозе 3,0 мг/кг, с последующим введением в течение трех дней в дозе 2,0 мг/кг, далее в течение четырех дней в дозе 1,2 мг/кг с последующим повторением курса через 50 дней, причем первые три дня повторного курса доза препарата составляет 1,5 мг/кг, последующие три дня доза составляет 2,5 мг/кг, заключительные четыре дня доза препарата составляет 3,0 мг/кг. Далее в условиях нембуталового наркоза (40 мг/кг внутримышечно) проводили лапаротомию и регистрировали электромоторную активность желудка и двенадцатиперстной кишки. Электромоторную активность желудка и восходящего отдела двенадцатиперстной кишки регистрировали с помощью серебряных электродов с площадью контактной поверхности 1,7 мм².

Модель язвы желудка создавали путем нанесения 100%-ной ацетоуксусной кислоты на серозную оболочку желудка на границе антрального и фундального отделов; модель язвы тощей кишки создавали путем нанесения 100%-ной ацетоуксусной кислоты на серозную оболочку тощей кишки в средней ее трети.

Фоновая частота медленных волн ЭМА тощей кишки на фоне язвы желудка и тощей кишки составляла 19,4 в мин, амплитуда - 0,23 мВ. Хроническое введение кетанова увеличивает электромоторную активность: частота возрастает с 19,4 до 25,4 в мин (31%), амплитуда - с 0,26 до 0,66 мВ (152%). То есть кетанов стимулирует электромоторную активность тощей кишки при язве желудка и тощей кишки.

Хроническое введение кетонала увеличивает частоту медленных волн ЭМА - с 18,4 до 23,6 в мин (больше на 28%) и увеличивает амплитуду - с 0,23 до 0,59 мВ (больше на 157%). То есть кетонал изменяет хроноинотропные взаимоотношения сократительной активности кишки при язве желудка и тощей кишки.

Хроническое введение целебрекса увеличивает частоту медленных волн ЭМА с 17,6 до 23,8 в амплитуду с 0,20 до 0,49 (143%). Таким образом, целебрекс усиливает и учащает медленноволновую электромоторную активность, усиливая моторику тощей кишки при язве желудка и тощей кишки.

Морфологическое исследование язвы желудка показало, что края язвы подрыты, дно заполнено детритом серо-желтого цвета, железы желудка кистозно расширены; венозные сосуды резко дилатированы, кровенаполнены. Морфологическое исследование язвы тощей кишки показало, что ворсинки деформированы и инфильтрированы лимфоидными клетками, сосуды расширены.

Морфологическое исследование панкреатической железы выявило отек дольки, увеличение междольковой и внутридольковой соединительной ткани. Тонкие внутридольковые соединительнотканные прослойки разделяют небольшие группы клеток. В междольковом пространстве расположены расширенные вены с краевым стоянием эритроцитов. Плотность расположения эндокриноцитов в островках снижена: обнаружены расширенные промежутки между клетками, заполненные соединительной тканью с единичными капиллярами. Обнаруживаются небольшие скопления разрушенных клеток. Отмечается дистрофия островков Лангерганса. В панкреатическом протоке обнаружено скопление белкового секрета, затрудняющего его отток в двенадцатиперстную кишку и создающее условия для развития панкреатита.

Морфологическое исследование язвы желудка и тощей кишки и поджелудочной железы в сравнимые сроки в условиях предварительного введения нестероидных противовоспалительных препаратов показало, что они оказывают гастропротективное действие за счет улучшения функционирования желудочных желез, восстановления кровоснабжения области поражения, что способствует более быстрой эпителизации язвы. Энтеропротективное действие хронического введения нестероидных противовоспалительных препаратов состоит в более выраженном развитии рубцовой ткани и эпителизации язвенного дефекта, восстановлении деятельности бруннеровых желез, а также в нормализации диаметра сосудов подслизистого и мышечного слоя, что обусловливает повышение электромоторной активности тощей кишки на фоне хронического введения нестероидных противовоспалительных препаратов. Отмечается нормализация пассажа белкового секрета по панкреатическому протоку, разрешение стаза крови, улучшение функционального состояния экзо- и эндокриноцитов.

Энтеро- и панкреатопротективное действие определяют по активации электромоторной активности панкреатического протока: частота медленных волн увеличивается с 12,5 в мин (25%), амплитуда увеличилась с 1,0 до 1,5 мВ (50%).

Источники информации

1. Burian М, Geisslinger G. Clinical pharmacology of the selective COX-2 inhibitors. Orthopade. 2003, Dec; 32(12):1078-87.

2. Karadas B. et al. Additive interaction of intraperitoneal dexmedetomidine and topical nimesulide, celecoxib and DFU for antinociception. Eur J Pharmacol. 2007, Feb, 5; 556(1-3):62-8.