ПРЕПАРАТ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ТЕЛЯТ С СИНДРОМОМ ДИАРЕИ

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к препарату для профилактики желудочно-кишечных болезней телят с синдромом диареи.

Уровень техники

Известны способы лечения желудочно-кишечных болезней телят с применением различных средств: антибиотиков, сульфаниламидов, электролитов, витаминов, ферментов, фитопрепаратов и др., например, для подавления и предотвращения развития гнилостной микрофлоры известны способы лечения противомикробными препаратами: диарином (см. Андреева Н.Л. и др. Фармако-токсикологические свойства диарина // Ветеринария. 2002. - №8. - С.44-45), терфуменом (см. Рахманов И.X. Применение терфумена для терапии и профилактики желудочно-кишечных болезней новорожденных телят: Автореф. дис канд. вет. наук, - Воронеж, 1998),в состав которого входят макролидытилозин и эритромицин, сульфадимизин и глюкоза, эрициклином (см. Кашко Л.С, Мосин В.М., Гомаюнов В.М., Шуклин В.П. Эффективность эрициклина при лечении желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят // Докл. РАСХН. 1996. - №3. - С.33-34.), байтрилом (см. Мищенко В.А., Яременко Н.А. и др. Некоторые аспекты патогенеза диареи новорожденных телят. - Ветеринария. - 1999. - 9. - С.20-23.), флубактрином в суточной дозе 20 мг флумехина на 1 кг массы животного, гентамицином - в первый день 5 г гентамицина порошка на 100 кг массы тела, разделенные на два приема с интервалом 12 ч, в последующие 2-4 дня - 4 г. Гентамицина порошка на 100 кг массы тела 1 раз/сут; окситетрациклина в дозе 20 мг окситетрациклина на 1 кг массы тела 1 раз в трое суток, но не более трех раз (см. Лекарственные средства ветеринарного применения в России / Справочник. - М.: АстраФармСервис. - 2011. - 512 с.).

Недостатками данных препаратов являются невысокая эффективность лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней телят.

Известен способ лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний телят и поросят, включающий пероральное применение препарата пентациклин, который дают один раз в сутки путем примешивания к сыпучему корму, выпаивания с водой или молоком в дозах 100-500 мг/кг массы тела животного (см. пат. RU №2427366, МПК A61K 31/00, A61P 31/04, опубл. 27.08.2011 г.).

Недостатками данного способа лечения и профилактики являются появление в сычуге телят дисбактериоза и подавление жизнедеятельности полезной микрофлоры.

Известен способ лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней новорожденных телят, который включает назначение бактериостатических, регидратационных и симптоматических средств. В качестве противомикробного, бактериостатического и регидратационного средства применяют лекарственный препарат, содержащий мас.%: норсульфазол - 1,624, глюкоза - 1,169, натрия хлорид - 6,23, калия хлорид - 0,649, кальция хлорид - 0,2. Препарат применяют орально, предварительно растворив 500 г препарата в 8 л горячей воды, 2 раза в сутки в течение трех суток в дозе 0,7-1,5 л на животное и уменьшают порцию молозива в первый день на 50-100%, во второй день - на 25%. За 40 минут до каждого введения препарата телятам дают отвар коры дуба из расчета 15 г и 1 раз в сутки подкожно вводят 20%-ный раствор кофеин-бензоат натрия в дозе 3 мл (см. пат. RU №2437653, МПК A61K 31/00, опубл. 27.12.2011 г.).

Недостатком вышеперечисленных препаратов является то, что они могут также вызвать в сычуге телят дисбактериоз и подавить жизнедеятельность полезной микрофлоры.

Известен способ лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний телят и поросят путем перорального введения им препарата, содержащего прополис. Препарат содержит спиртовой экстракт прополиса, натрий карбоксилметилцеллюлозу, глюкозу, воду дистиллированную. Предлагаемый препарат "Биогель-5" для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний телят и поросят состоит из следующих компонентов: 20%-ный спиртовый экстракт прополиса с содержанием прополисного бальзама 100 мг/мл - 5, натрий карбоксиметилцеллюлоза - 2, глюкоза - 10, вода дистиллированная - 83. Препарат представляет собой однородную, полужидкой консистенции с незначительным придонным осадком светло-коричневого цвета непрозрачную массу со специфическим для прополиса запахом и сладковатым вкусом. При встряхивании осадок легко смешивается общей массой препарата, а при подогревании до 40-45°С вязкость препарата снижается. Препарат выпаивают два раза в день в дозе 10-200 мл за 30-40 мин до выпойки молока, молозива. Терапевтическая эффективность составляет 98-100 (см. пат. RU №2074727, МПК A61K 35/64, опубл. 10.03.1997 г.).

Недостатком данного способа лечения и профилактики является то, что он может быть использован только в качестве вспомогательного средства.

Известен способ профилактики желудочно-кишечных заболеваний у телят, включающий использование препарата «ЭВЛ-Se КОМПОЗИЦИЯ», раствор, который вводят животным внутрь групповым способом с водой (молоком или его заменителем) один раз в сутки в течение 10 дней в разовой дозе 1,0 мл на голову. Применение способа позволяет снизить заболеваемость, уменьшить сроки выздоровления животных, повысить среднесуточные привесы, способствует ускоренному становлению микрофлоры и не вызывает побочных явлений. В состав препарата «ЭВЛ-Se КОМПОЗИЦИЯ» входят десять компонентов действующих веществ, каждый из которых имеет широкое применение в гомеопатической практике: Arsenicumalbum (D10), Lycopodium (D7), Phosphorus (D29), Podophyllum (D7), Veratrumalbum (D7), Colocyntis (D7), Thjaoccidentalis (D7), Vincetoxicum (D3), Echinaceapurpurea (D3), Selenium-Se (D5) (см. пат. RU №2392951, МПК A61K 36/00, A61K 33/36, A61K 33/00, опубл. 27.06.2010 г.).

Недостатком данного способа профилактики является длительность лечения, высокая стоимость.

Известны способы лечения диспепсии новорожденного молодняка, включающие в качестве вяжущих и слабо дезинфицирующих средств такие препараты природного и растительного происхождения, как отвар тысячелистника (см. Щеткин А.А. Фитотерапия при диспепсии телят // Ветеринария. 1975. - №2. С.16-18), настоек горечавки и календулы (см. Абдырахманов Т.М. Лечебная эффективность настоек горечавки туркестанской и календулы при диспепсии телят // Патология и терапия кетоза овец и ягнят: Сб. трудов Самаркандского с.-х. института. 1989. - С.41-43), а также травяных сборов, например травяной сбор, состоящий из 1 части корня дуба и 1 части корневища аира, плодов черемухи 3 части и черники 2 части (см. Полушин Г.В. Лечение и профилактика новорожденных телят при диспепсии / Г.В. Полушин, С.В. Старченков, Г.Г. Щербаков // Лечение и профилактика новорожденных телят при диспепсии. СПб ГАВМ. - С.Петербург. - 1999. - С.31-32), водного экстракта из ромашки, коры дуба по 50,0, зверобой и тысячелистник по 25,0 на 1 л воды, в дозе 200 мл 2 раза в день в течение 6-7 дней (см. Микулич Е.Л. Фитотерапия в профилактике и лечении желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят // Актуальные проблемы интенсивного развития животноводства. Горки, 1998. - С.324-328).

Недостатками данных способов лечения и профилактики являются длительность лечения и невысокая эффективность.

Известен способ лечения желудочно-кишечных болезней телят, включающий выпаивание телятам ЭМ-препарата «Байкал ЭМ-1» в смеси с настоем фитосбора в соотношении 1:1. При этом фитосбор включает из расчета на 100 мл воды 0,5 г травы зверобоя продырявленного, 0,5 г травы лабазника вязолистного, 0,35 г травы тысячелистника обыкновенного, 0,35 г травы крапивы двудомной, 0,2 г корневищ бадана толстолистного, 0,2 г корней и корневищ сабельника болотного и 0,15 г иголок хвои сосны обыкновенной. Смесь выпаивают по схеме: 1 день - двукратно в дозах 30 мл и 50 мл; 2 день - трехкратно в дозе 100 мл; в последующие дни - пятикратно в дозе 100 мл до клинического выздоровления (см. пат. RU №2381806, МПК A61K 36/00, A61K 35/66, опубл. 20.02.2010 г.).

Эти и другие настои и отвары не могут быть использованы в качестве основного средства для лечения диспепсии у новорожденных телят из-за недостаточной эффективности, а только в качестве средств вспомогательной терапии.

Известен способ профилактики и лечения дисбактериозов молодняка сельскохозяйственных животных с помощью пробиотика «Сахабактисубтил», который способствует повышению иммунобиологической реактивности организма телят и поросят, улучшает усвоение питательных компонентов корма и положительно влияет на прирост живой массы (см. Первый съезд ветеринарных фармакологов России. - Воронеж 21-23 июня 2007 г.: Материалы съезда. - Воронеж. - 2007. - С.459-463).

Недостатком данного способа профилактики является невысокая эффективность лечения животных при заболеваниях желудочно-кишечного тракта.

Однако применение пробиотиков не всегда сопровождается положительным эффектом, что может быть обусловлено неудачным подбором использованных для их приготовления штаммов, нарушением технологии и другими причинами, снижающими качество препаратов. Использование в комплексной терапии с антибиотиками пробиотиков на основе живых микроорганизмов затруднено или исключается. Кроме того, пробиотические препараты обладают ограниченным спектром действия, так как они направлены против узкой группы возбудителей.

Известен лечебно-профилактический биопрепарат «Бактиспорин», включающий биомассу штамма Bacillus subtilis 3Н (ГИСК №248), при этом он дополнительно содержит наполнитель при следующем соотношении компонентов, мас.%: биомасса штамма Bacillus subtilis (ГИСК №248) - живых микробных клеток - (1-5)×10⁹ в 1 мл растворителя - 92-95, наполнитель - 5-8 (см. пат. RU №2130316, МПК A61K 35/74, C12N 1/20, опубл. 20.05.1999 г.).

Однако он неэффективен против ряда возбудителей острых кишечных инфекций, например, вызываемых бактериями Pseudomonasspp., Streptococcusspp., Enterococcusspp.

Известен способ коррекции иммунной недостаточности и профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта новорожденных телят. Телятам подкожно вводят антигистаминную сыворотку с титром антител к гистамину не ниже 1:256, в дозе 10,0-15,0 мл на голову, один раз в сутки, трехкратно в 1-й, 3-й и 6-й дни жизни. Антигистаминная сыворотка [8] представляет собой жидкость соломенно-желтого цвета и содержит антитела против гистамина. Кроме того, в сыворотке содержится ряд других биологических компонентов, среди которых важное значение имеют гаммаглобулин, церулоплазмин, лизоцим и самое важное - антитела против гистамина с титром не ниже 1:256. Данный препарат получают путем гипериммунизации лошадей гистаглобулином по определенной схеме (см. пат. RU №2223786, МПК A61K 39/395, A61P 1/00, A61P 37/00, опубл. 20.02.2004).

Выбор в качестве средства лечения АГС с высоким титром антител против гистамина позволяет нейтрализовать избыток одного из основных медиаторов воспаления - гистамина - у животных с желудочно-кишечными заболеваниями. Усиленное высвобождение биологически активных веществ, в том числе и гистамина, происходит прежде всего в самом кишечнике, вследствие развития дегенеративно-некротических и воспалительных процессов в слизистой оболочке кишечника в результате воздействия различных повреждающих агентов, в том числе условно-патогенных бактерий и их токсинов.

Избыток гистамина изменяет трофику стенки желудочно-кишечного тракта, повышает проницаемость, снижает барьерную и избирательную функцию, вызывает внезапные спастические сокращения кишечной стенки, что еще больше расстраивает процессы пищеварения. Накопление большого количества гистамина в организме больных телят происходит из-за снижения у них активности гистаминазы, недостаточности гистаминергических механизмов, в результате чего еще больше нарушаются обменные процессы, приводящие к снижению естественной резистентности организма и развитию иммунодефицитных состояний.

Недостатком такого способа является необходимость точного соблюдения доз и схем применения, так как может возникнуть аллергический эффект в виде анафилактического шока.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятым авторами за прототип является препарат агровит, в состав которого входят поливинилпиролидон, нитрат серебра и спирт этиловый, при этом арговит обладает широким спектром антимикробной активности в отношении аэробной и анаэробной микрофлоры, в том числе антибиотикорезистентной; проявляет вирулицидную и фунгицидную активность; оказывает противовоспалительное действие. Выпускается в виде концентрированного раствора, используется в виде разбавленных водных растворов (см. Шкиль Н.Н., Шкиль Н.А., Бурмистров В.А., Соколов М.Ю. Антимикробные свойства, фармакотоксикологические характеристики и терапевтическая эффективность препарата агровит при желудочно-кишечных болезнях телят. - Научный журнал КубГАУ, №68(04). - 2011. - С.1-11).

Препарат применяется для профилактики и лечения кишечных инфекций различной этиологии у всех видов сельскохозяйственных животных и пушных зверей. Для профилактики гастроэнтеритов телят с синдромом диареи арговит применяют в виде 0,3% водного раствора, из расчета 1-2 мл/кг живой массы в течение 2-5 дней в зависимости от клинического состояния. При тяжелом течении болезни дозу препарата удваивают (см. Шкиль Н.Н., Шкиль Н.А., Бурмистров В.А., Соколов М.Ю. Антимикробные свойства, фармакотоксикологические характеристики и терапевтическая эффективность препарата агровит при желудочно-кишечных болезнях телят. - Научный журнал КубГАУ, №68(04). - 2011. - С.1-11).

Недостатком данного препарата является отсутствие в его составе иммуномодуляторов.

Раскрытие изобретения

Задачей предлагаемого изобретения является разработка препарата для профилактики желудочно-кишечных заболеваний телят с синдромом диареи, обладающего высокой эффективностью профилактики желудочно-кишечных болезней телят, антибактериальным иммуномодулирующим действием и антистрессовым, антиоксидантным эффектом, за счет применения биосовместимого комплексного препарата.

Технический результат, который может быть достигнут с помощью предлагаемого изобретения, сводится к антибактериальному, иммуномодулирующему действию, антистрессовому, антиоксидантному эффекту и повышению эффективности профилактики желудочно-кишечных болезней у телят с синдромом диареи.

Технический результат достигается с помощью препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят с синдромом диареи, включающего нитрат серебра в виде коллоидной системы 0,1-3,0%, при этом он дополнительно содержит левамизол основание, кислоту аскорбиновую и воду для инъекций при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Сущность получения препарата для профилактики желудочно-кишечных телят заключается в следующем: исходные вещества в мас.%, а именно нитрат серебра 0,01-0,5, левамизол основание 3,0-8,0, кислоту аскорбиновую 1,0-12,0 и воду для инъекций - остальное смешивают в асептических условиях и упаковывают.

Таким образом, препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят обеспечивается фармакологическим действием компонентов препарата и определяется следующими компонентами.

Бактерицидные свойства серебра и его соединений известны с древнейших времен. Препараты серебра широко используют в медицине и ветеринарии в 20-40 годы XX века. Химия и биохимия соединений серебра значительно продвинулась вперед. Для них обнаружены иммуномодулирующая активность, синергетическое усиление эффективности в комплексе серебра с сульфаниламидами и другими лекарственными средствами (см. Ершов Ю.А., Есменская Н.Б., Лобанов Ф.И., Плетнева Т.В. Биотестирование водных растворов лекарственных препаратов серебра парамециями // Применение препаратов серебра в медицине. - 1994. - СОРАМН. - с.84-88; Bult A., Klasen H.B. The characterization of the silver compounds of some sulfanilamide derivates. // Arch. Pharm. - 1978 - P.855-861).

Серебро воздействует на нуклеиновые кислоты бактерий. Очевидно, что присоединение серебра останавливает размножение идиоплазмы, стабилизирующей РНК и ДНК. При этом останавливается копирование генетической информации, необходимой для размножения клеток (см. Landsdown A.B.G. Silver 1: Its antibacterial properties and mechanism of action // Journal of wound care. - 2002. - N 11(2). - S.125-130).

Молекулярные и биохимические основы антимикробной активности серебра и его препаратов достаточно сложны и связаны с комплексообразующим, биохимическим и каталитическим действием серебра на бактериальные ферменты, белки и мембранные структуры (см. Копейкин В.В. Лекарственные серебросодержащие препараты и их медико-биологические свойства / Применение препаратов серебра в медицине. 1993, СО РАМН ИКИ, с.36-40; Рощин А.В., Орджоникидзе Э.К. Серебро - некоторые аспекты токсокинетики // Гигиена труда и профзаболевания, 1984, №10, с.25-28).

Положительным моментом является большое различие в токсичности соединений серебра для низших форм жизни (одноклеточные, бактерии, вирусы и т.д.), и для высших организмов (животные, человек), достигающее 5-6 порядков (100 тыс. - 1 миллион раз) (см. Копейкин В.В. Лекарственные серебросодержащие препараты и их медико-биологические свойства / Применение препаратов серебра в медицине. 1993, СО РАМН ИКИ, с.36-40). То есть концентрации соединений серебра, летальные для микроорганизмов, практически безвредны для животных и человека.

Биологические функции аскорбиновой кислоты, то есть витамина С, заключаются в участии окислительно-восстановительных процессов, регуляции углеводного обмена, процессах свертывания крови, стимуляции гемопоэза, образовании стероидных гормонов надпочечников, нормализации проницаемости капилляров (см. Мельниченко В.И. Антиоксиданты в ветеринарии: новые возможности. - Ветеринарная клиника. - 2006, №7). Одним из основных свойств аскорбиновой кислоты является способность к окислительно-восстановительным превращениям. Аскорбиновая кислота способна окисляться в дегидроаскорбиновую кислоту и, таким образом, вместе с ней она представляет окислительно-восстановительную систему, теряющую и присоединяющую электроны и протоны. Витамин С восстанавливает витамин E, но сам при этом окисляется (см. YiO. S., Han D., Shin H.Q. Synergistic antioxidative effects of tocopherol and ascorbic acid in fish oil (lecitin) water system. J. Am. Oil Cyem. Soc. - 1991; 5(8). - C.881-883). Добавки витамина С улучшают иммунные реакции за счет поддержания уровня содержания витамина Е в крови и тканях, витамин Е также является выраженным стимулятором иммунной системы (См. Bendich A., D'Apolito Р., Gabriel E., Machlin I.J. Modulation of the immune system function of guinea pigs by dietary vitamin E and С following exposure to oxygen // Fed. Proc. - 1983. - 42. - P.923).

Витамин C восстанавливает селенит до элементарного селена, а элементарная сера и селен легко восстанавливаются, образуя сульфиды и селениды, содержащие два или более атомов серы и селена. Селеноцистин белков посредством переноса электронов может соединятся с элементарным селеном с образованием селенсодержащих связей.

Левамизол (Levamisolum) - 2,3,5,6-тетрагидро-6-фенилимида-зо-[2,1-b]-тиазола гидрохлорид. Белый аморфный или кристаллический порошок. Легко растворим в воде. Первоначально этот препарат был предложен в качестве противоглистного средства. При изучении антигельминтного действия левамизола было обнаружено, что он повышает общую сопротивляемость организма и может быть использован как средство для иммунотерапии. Опыты на изолированных клетках и наблюдения за здоровыми и больными животными показали, что препарат способен восстановить измененные функции T-лимфоцитов и фагоцитов и вследствие его тимомиметического эффекта может регулировать клеточные механизмы иммунологической системы. Более подробные исследования показали, что левамизол, избирательно стимулируя регуляторную функции T-лимфоцитов, может выполнять функции иммуномодулятора, способного усилить слабую реакцию клеточного иммунитета, ослаблять сильную и не действовать на нормальную реакцию. В связи с этими свойствами левамизол был предложен для лечения различных заболеваний, в патогенезе которых придают значение расстройствам иммуногенеза: первичные и вторичные иммунодефицитные состояния, аутоиммунные болезни, хронические и рецидивирующие инфекции, опухоли и др. Левамизол как иммуностимулирующий препарат может быть эффективен в комплексной терапии различных заболеваний (См. Машковский М.Д. - M38 Лекарственные средства: В 2-х томах. Т.2. - 11-е изд. стер. - М.: Медицина, 1988. - 576 c. ISBN 5-225-00036-3).

Левамизол - высокоэффективный антгельминтик, используемый при желудочно-кишечных и легочных нематодозах. Препарат вызывает увеличение числа как T-, так и B-лимфоцитов, титр естественных антител и процесс антителообразования у интактных животных. Полученные данные показали, что левамизол у интактных животных в основном стимулирует клеточный иммунитет. Он вызывает быстрый эффект: уже через сутки количество T-лимфоцитов увеличивается в 2 раза по сравнению с контрольными животными. У спонтанно зараженных в эти же дни левамизол в дозе 10 мг/кг по АДВ вызывал повышение уровня Т-лимфоцитов в 5 раз. Возрастающая активность T-лимфоцитов, наступающая под действием левамизола, очевидно, играет немаловажную роль в способности препарата повышать иммунобиологические свойства организма (см. Даугалиева Э.Х. Филиппов В.В. Иммунный статус и пути его коррекции при гельминтозах сельскохозяйственных животных. - М.: ВО «Агропромиздат». - 1991. - 188 с.).

В качестве растворителя выбрана вода, так как все составляющие лекарственного средства являются водорастворимыми соединениями.

Краткое описание чертежей и иных материалов

В таблице 1 дан препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят с синдромом диареи, антимикробная активность препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят.

В таблице 2 - то же, параметры острой токсичности препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят при однократном внутрижелудочном введении (мг/кг по ДВ) (n=10).

В таблице 3 - то же, динамика массы тела белых крыс-самок при многократном введении препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят.

В таблице 4 - то же, гематологические показатели белых мышей (n=10).

В таблице 5 - то же, биохимические показатели сыворотки крови белых мышей (n=10).

В таблице 6 - то же, сравнительная эффективность различных схем профилактики телят.

В таблице 7 - то же, гематологические и иммунологические показатели крови телят (n=8).

В таблице 8 - то же, сравнительная эффективность профилактики телят (n=10).

В таблице 9 - то же, содержание общего белка и белковых фракций сыворотки крови телят (n=10).

В таблице 10 - то же, биохимические показатели крови телят (n=10).

Осуществление изобретения

Примеры конкретного осуществления получения препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят с синдромом диареи.

В структуре заболеваний телят в ранний постнатальный период превалирующее место занимают нарушения функции пищеварительной системы, клинически проявляющиеся диареей, обуславливающей развитие выраженной дегидратации, токсемии, иммунодефицитов, нарушения обмена веществ.

Этиопатогенетически поражения органов пищеварения отличаются значительным полиморфизмом, включающим широкий спектр различных факторов, в том числе генетических, физиологических, санитарно-гигиенических и инфекционных. Массовые нарушения функции пищеварения, клинически проявляющиеся диареями, регистрируются у 70-100% новорожденных телят уже к концу первых суток после рождения. Больные телята отказываются от молозива, постоянно лежат, быстро наступает обезвоживание, интоксикация, энофтальмия, резко понижается тонус.

Гибель новорожденных телят, как правило, наступает на 2-5 день или 7-10 дни. Обычно погибает от 15 до 55% новорожденных телят.

Пример 1. Препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят готовят следующим образом: исходные вещества в мас.%, а именно, нитрат серебра 0,001, левамизол основание 2,0, кислоту аскорбиновую 0,5 и воду для инъекций - остальное, смешивают в асептических условиях и упаковывают.

Результат: исследования антимикробного действия препарата показывают, что концентрация препарата проявляет недостаточно выраженное бактерицидное действие.

Пример 2. Препарат готовят аналогично примеру 1, но исходные вещества в мас.%, берут в следующем соотношении, а именно, нитрат серебра 0,01, левамизол основание 3,0, кислоту аскорбиновую 1,0 и воду для инъекций - остальное, смешивают в асептических условиях и упаковывают.

Результат: исследования антимикробного действия препарата показывают, что концентрация препарата, проявляет выраженное бактерицидное действие.

Пример 3. Препарат готовят аналогично примеру 1, но исходные вещества в мас.%, берут в следующем соотношении, а именно, нитрат серебра 0,1, левамизол основание 7,5, кислоту аскорбиновую 5,0 и воду для инъекций - остальное, смешивают в асептических условиях и упаковывают.

Результат: Исследования антимикробного действия препарата показывают, что концентрация препарата, проявляет выраженное бактерицидное действие.

Пример 4. Препарат готовят аналогично примеру 1, но исходные вещества в мас.%, берут в следующем соотношении, а именно, нитрат серебра 0,5, левамизол основание 8,0, кислоту аскорбиновую 12,0 и воду для инъекций - остальное, смешивают в асептических условиях и упаковывают.

Результат: Исследования антимикробного действия препарата показывают, что концентрация препарата, проявляет выраженное бактерицидное действие.

Пример 5. Препарат готовят аналогично примеру 1, но исходные вещества в мас.%, берут в следующем соотношении, а именно, нитрат серебра 0,8, левамизол основание 9,0, кислоту аскорбиновую 15,0 и воду для инъекций - остальное, смешивают в асептических условиях и упаковывают.

Результат: Исследования антимикробного действия препарата показывают, что концентрация препарата, проявляет побочные действия препарата, а именно подавление в сычуге телят жизнедеятельности полезной микрофлоры.

Таким образом, наиболее оптимальным препаратом является препарат полученный по примерам 2, 3, 4.

Пример 6. Определение антимикробного действия препарата.

Определение антимикробного действия препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят проводят методом диффузии в агар согласно Государственной Фармакопеи Российской Федерации, XII издание. - Москва. - 2010. - 600 с. Метод основан на оценке угнетения роста тест-микроорганизмов определенными концентрациями испытуемого средства. Для проверки антимикробного действия используют 24-часовые тест-культуры, выращенные на скошенном мясопептонном агаре (МПА). Микробные культуры с МПА смывают 2-3 миллилитрами физиологического раствора и готовят взвесь, содержащую 500 млн микробных тел в 1 мл по стандарту мутности. На поверхность агара в чашках Петри одинакового диаметра делают посев сплошным газоном стандартных взвесей используемых тест-культур. Для этого 2 мл взвеси помещают в чашку Петри, взвесь равномерно распределяют по поверхности, а излишки взвеси полностью удаляют. Все чашки Петри ставят в термостат 37°C на 18-20 часов строго горизонтально для получения круглых зон угнетения роста микрофлоры. После инкубации диаметр зон угнетения роста измеряют с помощью миллиметровой линейки.

В эксперименте используют тест-культуры: 1) Staphylococcusaureus (209) (АТСС 25923); 2) Escherichiacoli 675; (АТСС 25922) 3) Pseudomonasaeruginosa (АТСС 27853). Данные результатов исследований представлены в таблице 1.

Результаты микробиологического исследования показывают, что препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят обладает бактериостатическим действием в отношении грамположительных бактерии рода Staphylococcus и грамотрицательных палочек Escherichiacoli. В отношении спорообразующих палочек рода Pseudomonasaeruginosa обладает ярко выраженным бактерицидным действием. Это свидетельствует о широком спектре антибактериального действия препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней.

Таким образом, наиболее оптимальной является 10%-ная концентрация препарата, проявляющая выраженное бактерицидное действие.

Для токсикологических исследований и оценки действия препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят берут следующее соотношение компонентов, мас.%:

Токсикологические исследования препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят. Для определения летальных доз препарата используют клинически здоровых белых мышей массой 20-22 г, исследования проводят согласно «Методических указаний по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных» (ВНИИ незаразных болезней животных, 1987 г.). Действующим веществом препарата является комбинация нитрата серебра, левамизола основания и аскорбиновой кислоты. Способом введения выбран внутрижелудочный так как этот препарат предназначен для перорального введения сельскохозяйственным животным. В таблице 2 представлены данные исследования острой токсичности препарата для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней телят.

При анализе результатов определения острой токсичности препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят установлено, что при внутрижелудочном введении его ЛД₅₀ для белых мышей составляет 351,25 мг/кг массы тела, что позволило отнести препарат к III классу опасности - вещества умеренно опасные (ГОСТ 12.1.007-76 «Классификация и общие требования безопасности»). Симптомы отравления были однотипны и проявлялись возбуждением, адинамией. Эти симптомы наблюдают у разных животных от 20 до 120 минут.

Хроническую токсичность препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят оценивают на белых беспородных крысах-самках (n=30) при его многократном пероральном введении в дозе, равной 1/50 ЛД₅₀. Применение препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии белых крыс: поведение, грумминг, аппетит, частота дыхания крыс как в период применения препарата, так и в течение недели наблюдения после прекращения введения были в норме. Случаев гибели подопытных крыс-самок не регистрируют, динамика изменения живой массы опытных и контрольных животных не имеет достоверных отличий (таблица 3).

Для оценки влияния препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят на гематологические и биохимические показатели используют лабораторных белых мышей, которые были разделены на четыре группы (n=10). Животным первой группы вводят внутрижелудочно физиологический раствор, они служат контролем. Мышам второй, третьей и четвертой групп вводят внутрижелудочно испытуемый препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят в дозах 10, 30 и 50 мг/кг живой массы соответственно. Через три дня после введения препарата получают кровь путем декапитации для гематологических и биохимических исследований. Результаты исследований представлены в таблицах 4, 5.

Анализируя полученные результаты отмечают, что существенных изменений крови животных, которым вводят препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят, по сравнению с контрольными не отмечено. Уровень гемоглобина, количество эритроцитов и лейкоцитов находится в пределах физиологических значений для данного вида животных.

В таблице 5 отображены результаты биохимических исследований сыворотки крови белых мышей.

Анализируя результаты биохимических исследований можно отметить, что существенных изменений в показателях крови животных, которым вводят препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят в дозах 10 и 20 мг/кг, по сравнению с контрольными не отмечено. У белых мышей, получивших препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят в дозе 50 мг/кг массы тела в сыворотке крови, установлено увеличение активности АлАТ и АсАТ - соответственно на 16,2 и 13,5%, повышение содержания амилазы - на 13,7%, незначительную гипопротеинэмию и повышение концентрации общего и прямого билирубина соответственно на 16,1 и 21,9%. Установленные изменения обусловлены высокой дозой препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят, но в то же время значения этих показателей не выходят за границы нормы для данного вида животных.

Эффективность препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят определяют в научно-производственных опытах в условиях хозяйства, длительно неблагополучного по желудочно-кишечным болезням, обусловленным воздействием на организм ассоциаций патогенной и условно патогенной микрофлоры на фоне нарушения условий содержания и кормления стельных коров и телят.

В опыте используют новорожденных телят черно-пестрой породы в возрасте 2-10 суток. По принципу аналогов из новорожденных телят с начальными признаками диспепсии сформировано 3 группы животных (n=10). Условия содержания и кормления телят всех групп было одинаковым. Телятам назначают полуголодную диету, пропуская очередные две выпойки молозива и заменяя их физиологическим раствором. В следующее кормление выпаивают уменьшенные на 40% порции молока, восполняя объем дачей физиологического раствора за 15 минут до кормления. Всем подопытным животным для снятия общей интоксикации и улучшения парентерального питания вводят реополиглюкин с глюкозой внутривенно в дозе 5 мл на кг живой массы в сутки, изотонический раствор натрия хлорида внутривенно в дозе 50-100 мл на животное. Для животных первой группы схема профилактики включает препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят на основе серебра в виде 0,1% водного раствора, из расчета 1,5 мл/кг живой массы в течение 2-4 дней в зависимости от клинического состояния. Во второй группе телятам подкожно вводят препарат «Байтрил 5%» - раствор для инъекций в дозе 1 мл на 20 кг массы животного (2,5 мг энрофлоксацина на 1 кг массы) в течение 3-5 дней. Больным телятам третьей группы назначают левомецитин перорально 2 раза в сутки в дозе 10 мг/ кг массы животного. Все препараты используют до исчезновения клинических признаков диспепсии.

Терапевтическую эффективность препаратов устанавливают, учитывая количество выздоровевших телят, а также продолжительность и тяжесть течения болезни (таблица 6).

В результате проведенных исследований наибольший терапевтический эффект при профилактике заболевших диспепсией телят установлен в первой группе, где в схему лечения больных телят включен препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят на основе серебра. В этой группе наименьшая средняя длительность лечения - 3,8±0,62 суток, что меньше показателей второй и третьей групп на 17,4 и 26,9% соответственно.

При равной терапевтической эффективности профилактики животных второй и третьей групп продолжительность была разной и составляет соответственно 4,6±0,71 и 5,2±0,51 суток.

Таким образом, профилактика больных диспепсией телят с применением препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят, реополиглюкина с глюкозой и изотонического раствора натрия хлорида, дает 90%-ный терапевтический эффект, превосходящий эффективность терапии с использованием Байтрила 5% и левомецитина.

Для определения профилактической эффективности препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят по принципу аналогов сформировано три опытных и одна контрольная группа из телят трехдневного возраста черно-пестрой породы по 8 животных в каждой группе. Телятам первой, второй и третьей опытных групп перорально вводят препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней соответственно в дозах 1,0, 1,5 и 2,0 мл/кг массы тела в течение трех дней. Животным контрольной группы препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят не применяют. В случае заболевания животных лечат с использованием препаратов, применяемых в данном хозяйстве (Тримеразин таблетки внутрь из расчета 1 таблетка на 15 кг массы животного. Суточную дозу препарата вводят в два приема с 12-часовым интервалом. Профилактику проводят до исчезновения клинических признаков заболевания и в течение двух последующих дней, + 4% раствор гентамицина внутримышечно два раза в сутки с интервалом 10-12 часов в дозе 0,5 см³ на 10 кг массы животного два раза в сутки, + отвар коры дуба по 150-200 мл в день). Результаты исследований представлены в таблице 7.

В результате проведенных исследований установлено, что в крови животных первой, второй и третьей групп в сравнении с телятами контрольной группы увеличилось количество эритроцитов соответственно на 6,1, 15,5 и 11,0%, лейкоцитов - соответственно на 8,2, и 15,2%. Установлено статистически достоверное повышение концентрации гемоглобина у животных опытных групп соответственно на 10,3, 16,7 и 14,5%.

Применение препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят оказало положительное влияние на суммарную концентрацию альбумина и глобулинов, бактерицидную активность сыворотки крови и ферментативную активность лизоцима. Так, в крови животных первой, второй и третьей группы ЛАСК в сравнении данными «контроля» была больше соответственно на 19,6, 32,8 и 34,4%.

Профилактическая эффективность трехкратного применения препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят в дозе 1,0 мл/кг массы тела составила 75%, 1,5 и 2,0 мл/кг - 87,5%).

Сравнительную оценку схем лечения с использованием разработанного препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят проводят на 30 телятах 2-5-дневного возраста, которых разделили по типу аналогов на три равноценные группы. Первая группа - контроль, сформирована из клинически здоровых телят. Во вторую и третью группу включают животных с первичными клиническими признаками диспепсии: учащенная дефекация, фекалии жидкие, угнетение общего состояния, ослабление или отсутствие аппетита, учащение дыхания и пульса, температура тела в пределах нормы. При проявлении первых признаков заболевания пропускают два или три очередных кормления. Для предотвращения обезвоживания при легком течении заболевания применяют оральный способ регидратации, используя раствор Рингера-Локка в дозе 200-300 мл. Если состояние теленка улучшалось, то в каждое последующее кормление количество молозива увеличивают на 200-300 мл. Тримеразин таблетки вводят из расчета 1 таблетка на 15 кг массы животного. Суточную дозу препарата вводят перорально в два приема с 12-часовым интервалом. Лечение проводят до исчезновения клинических признаков заболевания и в течение двух последующих дней. Подкожно вводят Байтрил 5% инъекционный раствор в следующих дозе - 1 мл на 20 кг массы животного (2,5 мг энрофлоксацина на 1 кг массы) один раз в сутки в течение 3-5 дней. Энрофлоксацин, входящий в состав препарата, относится к группе фторхинолонов, обладает широким спектром антибактериального и антимикоплазменного действия, подавляет рост и развитие грамположительных и грамотрицательных бактерий. Телятам третьей группы дополнительно применяют разработанный препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят в дозе 1.5 мл/кг массы тела животного перорально в течение 3-5 дней.

В процессе наблюдения за животными учитывают их общее состояние, показатели температуры тела, пульса и дыхания, степень выраженности внешних признаков, выявляемых методами осмотра, пальпации, перкуссии и аускультации, сроки клинического выздоровления и процент сохранности. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 8.

Назначение комплексной терапии телятам, больным простой диспепсией, влияло на общее состояние животных, у них улучшился аппетит, фекальные массы уплотнялись дыхание и пульс нормализовались, исчезли признаки дегидратации. Включение в схему профилактики разработанного препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят позволило сократить продолжительность лечения на 30,4%, при этом среднесуточный прирост у животных этой группы был больше на 20,7 г, чем у животных второй группы и практически не уступал показателям телят контрольной группы.

До начала опыта, через 15 и 30 дней после начала лечения, от животных каждой группы берут кровь для биохимических исследований.

В сыворотке крови телят определяют содержание общего белка рефрактометрическим методом и белковых фракций - турбодиметрическим (нефелометрическим) методом, концентрацию общих липидов - с сульфофосфованилиновым реактивом - по Целнеру-Киршу (в изложении Л.В. Орловой), содержание общего холестерина сыворотки крови - по реакции Любермана-Бурхарда (в модификации Илька), таблица 5.

При определении показателей системы антиоксидантной защиты организма и продуктов свободнорадикального окисления пользовались общепринятыми методами (Кондрахин И.П., Архипов А.В. Методы ветеринарной лабораторной диагностики / Справочник. - М.: Колос С. - 2004. - 520 с. Определение общей антиоксидантной активности крови (ААО) проводят при помощи стандартного набора реактивов "Total Antioxidant Status" фирмы Randox.

О влиянии препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят на повышение обшей резистентности, нормализации некоторых физиологических процессов в организме животных судят по результатам клинического наблюдения, повышению функционального состояния антиоксидантной системы организма и снижению накопления токсичных продуктов перекисного окисления липидов.

Профилактика больных телят способствует увеличению содержания общего белка у животных второй и третьей группы через 30 дней после начала применения препаратов соответственно на 12,1 и 13,3%. В организме общий белок выполняет следующие функции: участвует в свертывании крови, поддерживает постоянство pH крови, осуществляет транспортную функцию (перенос жиров, билирубина, стероидных гормонов в ткани и органы), участвует в иммунных реакциях (табл.9).

Через 30 дней после начала профилактики животных с признаками диареи с применением в схеме разработанного препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят содержание гамма-глобулиновой фракции увеличилось с 22,0±2,4% до 34,5±3,2%, у телят сравниваемой группы при стандартной схеме - с 21,5±3,1% до 31,1±2,6%. Это свидетельствует о том, что иммунологическая перестройка происходит активнее при использовании разработанного препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят.

Результаты биохимических исследований представлены в таблице 10.

Из данных таблицы видно, что концентрация общих липидов у телят до профилактики находилась ниже физиологической нормы и составляет соответственно 2,16±0,08 и 2,24±0,04 г/л, что может быть следствием угнетения ферментных систем ресинтеза триглицеридов в стенке кишечника. Через 15 дней после начала проведения профилактики концентрация общих липидов у животных второй и третьей групп, достигла нижних границ нормы. Чрез 30 дней после начала проведения профилактики концентрация общих липидов у животных третьей группы, получавших разработанный препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят достигла значений «контроля» и была выше в сравнении с данными животных второй группы на 29,3%. при его заболеваниях. Аналогичные изменения показателей у животных получены и при определении концентрации холестерина.

Известно, что биологическая роль каталазы заключается в деградации перекиси водорода, образующейся в клетках в результате действия ряда флавопротеиновых оксидаз (ксантиноксидазы, глюкозооксидазы, моноаминоксидазы и др.), и обеспечении эффективной защиты клеточных структур от разрушения под действием перекиси водорода. В период наблюдения отмечают стабильную динамику роста активности каталазы у телят второй и третьей групп, причем данный показатель был выше у животных третьей группы через 15 дней после начала проведения профилактики на 8,9%, через 30 дней - на 13,2% в сравнении с данными второй опытной группы.

Известно также, что одним из ведущих патогенетических механизмов в развитии патологии является окислительный стресс, характеризующими показателями которого являются ААО и МДА в крови. Средний уровень общей антиоксидантной активности крови до профилактики у телят второй опытной группы составлял 0,98±0,24 ммоль/л, третьей опытной группы - 0,96±0,12 ммоль/л, что было ниже показателей «контроля» соответственно на 20,3% и 21,9%, при этом средние значения МДА составляют соответственно 24,17±2,12 нмоль/мл и 23,98±1,42 нмоль/мл, что достоверно выше значений контроля. Комплексная профилактика лечения больных телят способствовует повышению общей антиоксидантной активности крови и снижению концентрации МДА, причем более интенсивно эти процессы проходят у животных третьей группы, которым в схему профилактики был включен разработанный препарат для профилактики желудочно-кишечных болезней телят. Так, показатели ААО в крови телят третьей группы были достоверно выше на 14,9% в сравнении с данными второй опытной группы, а концентрация МДА - на 25,4% ниже.

Исследования показывают, что включение в схему профилактики разработанного препарата для профилактики желудочно-кишечных болезней телят стабилизирует содержание липидов и холестерина, активизирует процессы перекисного окисления липидов, снижает концентрацию малонового диальдегида, что снижает проницаемость клеточных мембран и повышает естественную резистентность у животных.

Таким образом, предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

- повышение лечебно-профилактической эффективности;

- повышение общей резистентности организма животных;

- повышение антиоксидантного действия.

Литература

1. Абдырахманов Т.М. Лечебная эффективность настоек горечавки туркестанской и календулы при диспепсии телят // Патология и терапия кетоза овец и ягнят: Сб. трудов Самаркандского с.-х. института. 1989. - С.41-43.

2. Алексин М.М. Сравнительная профилактическая эффективность энтеробифидина и лактобактерина при диспепсии новорожденных телят: Автореф. дис. канд. Ветеринар., наук: 16.00.01 / Витебская гос. акад. ветеринар, медицины. Витебск, 1996. - 18 с.

3. Андреева Н.Л. и др. Фармако-токсикологические свойства диарина // Ветеринария. 2002. - №8. - С.44-45.

4. Даугалиева Э.Х. Филиппов В.В. Иммунный статус и пути его коррекции при гельминтозах сельскохозяйственных животных. - М.: ВО «Агропромиздат». - 1991. - 188 с.).

5. Ершов Ю.А., Есменская Н.Б., Лобанов Ф.И., Плетнева Т.В. Биотестирование водных растворов лекарственных препаратов серебра парамециями // Применение препаратов серебра в медицине. - 1994.- СОРАМН. - с.84-88.

6. Кашко Л.С, Мосин В.М., Гомаюнов В.М., Шуклин В.П. Эффективность эрициклина при лечении желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят // Докл. РАСХН.1996. - №3. - С.33-34.

7. Кондрахин И.П., Архипов А.В. Методы ветеринарной лабораторной диагностики / Справочник. - М.: Колос С. - 2004. - 520 с.

8. Копейкин В.В. Лекарственные серебросодержащие препараты и их медико-биологические свойства / Применение препаратов серебра в медицине. 1993, СО РАМН ИКИ., с.36-40.

9. Лекарственные средства ветеринарного применения в России / Справочник. - М.: АстраФармСервис.- 2011. - 512 с.

10. Манукян С.Х. Лечение и профилактика при диспепсии телят препаратом ЖАК: Автореф. дис. канд. вет. наук. Ереван. - 1994. - 19 с.

11. Машковский М.Д. - М38 Лекарственные средства: В 2-х томах. Т. 2. - 11-е изд. стер. М.: Медицина, 1988. - 576 c. ISBN 5-225-00036-3

12. Мельниченко В.И. Антиоксиданты в ветеринарии: новые возможности. - Ветеринарная клиника. - 2006, №7.

13. Микулич Е.Л. Фитотерапия в профилактике и лечении желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят // Актуальные проблемы интенсивного развития животноводства. Горки, 1998. - С.324-328.

14. Михин Г.Г. Применение споробактерина жидкого для профилактики диспепсии новорожденных телят / Г.Г. Михин // Материалы межд. конф. - СПбГАВМ. 1996. - С.17.

15. Мищенко В.А., Яременко Н.А. и др. Некоторые аспекты патогенеза диареи новорожденных телят.- Ветеринария. - 1999. - 9. - с.20-23.

16. Ноздрин Г.А. Ветом-4 - эффективное средство лечения у телят диспепсии / Г.А. Ноздрин, А.И. Леляк, В.Г. Костромский // Новые вет.препараты. - СПбГАВМ. 1997. - №3. - С.5.

17. Первый съезд ветеринарных фармакологов России. - Воронеж, 21-23 июня 2007 г.: Материалы съезда. - Воронеж. - 2007. - С.459-463.

18. Полушин Г.В. Лечение и профилактика новорожденных телят при диспепсии / Г.В. Полушин, С.В. Старченков, Г. Г. Щербаков // Лечение и профилактика новорожденных телят при диспепсии. СПб ГАВМ. - С.Петербург.- 1999. - С.31-32.

19. Рахманов И.X. Применение терфумена для терапии и профилактики желудочно-кишечных болезней новорожденных телят: Автореф. дис канд. вет. Наук. - Воронеж, 1998.

20. Рощин А.В., Орджоникидзе Э.К. Серебро - некоторые аспекты токсокинетики // Гигиена труда и профзаболевания, 1984, №10, с.25-28.

21. Шкиль Н.Н., Шкиль Н.А., Бурмистров В.А., Соколов М.Ю. Антимикробные свойства, фармакотоксикологические характеристики и терапевтическая эффективность препарата агровит при желудочно-кишечных болезнях телят.- Научный журнал КубГАУ, №68(04). - 2011. - С.1-11.

22. Щеткин А.А. Фитотерапия придиспепсии телят // Ветеринария. 1975. - №2. С.16-18.

23. BendichA., D'ApolitoP., GabrielE., Machlinl. J. Modulation of the immunesystem function of guinea pigs by dietary vitamin Eand C followingexposure to oxygen // Fed. Proc. - 1983. - 42. - P.923.

24. Bult A., Klasen H.B. The characterization of the silver compounds of some sulfanilamide derivates. //Arch. Pharm. - 1978 - P.855-861.

25. Landsdown A.B.G. Silver 1: Its antibacterial properties and mechanism of action // Journal of wound care. - 2002. - N 11(2). - S.125-130.

26. YiO. S., Han D., Shin H.Q. Synergistic antioxidative effects of tocopherol and ascorbicacid in fish oil (lecitin) water system. J. Am. Oil Cyem. Soc. - 1991; 5(8). - C.881-883.

27. Патент RU №2427366 МПК A61K 31/00, A61P 31/04, опубл. 27.08.2011 г.

28. Патент RU №2130316, МПК A61K 35/74, C12N 1/20, опубл.20.05.1999 г.

29. Патент RU №2437653, МПК A61K 31/00 опубл. 27.12.2011 г.

30. Патент RU №2260437, МПК A61K 33/04, A61P 43/00 опубл. 20.09.2005 г.

31. Патент RU №2074727, МПК A61K 35/64, опубл. 10.03.1997 г.

32. Патент RU №2223786, МПК A61K 39/395, A61P 1/00, A61P 37/00, опубл. 20.02.2004

33. Патент RU №2392951, МПК A61K 36/00, A61K 33/36, A61K 33/00, опубл. 27.06.2010 г.

34. Патент RU №2381806, МПК A61K 36/00, A61K 35/66, опубл. 20.02.2010 г.