Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ОЦЕНКИ РИСКА РАЗВИТИЯ ВНУТРИУТРОБНОЙ ИНФЕКЦИИ У НОВОРОЖДЕННОГО ПРИ НАЛИЧИИ У МАТЕРИ АНТИТЕЛ КЛАССА G К CHLAMYDIA TRACHOMATIS В КРОВИ

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству. Известно, что ВОЗ регистрирует до 92 миллионов новых случаев заражения Chlamydia trachomatis каждый год, в т.ч. 3-4 млн в США, 5 млн в Западной Европе и до 16 млн в Африке. У женщин выявляется в среднем 11,4-20% в группах высокого риска (сексуально активные, малообразованные молодые женщины (до 20-25 лет)). В общей популяции, с учетом асимптоматических случаев, Chl. tr. выявляется в 3% случаев и в 9,5% среди учащихся (студентов) (Taylor B.D., Haggerty C.L. Management of Chlamydia trachomatis genital tract infection: screening and treatment challenges.// Infect Drug Resist. 2011; 4: 19-29).

Хламидиоз обычно протекает бессимптомно, однако персистирующая инфекция либо повторное заражение могут приводить к развитию тяжелых осложнений и оказывать значительное влияние на фертильность. Chlamydia trachomatis выявляется у многих женщин с трубным фактором бесплодия, поскольку способствует развитию воспаления и последующему образованию спаек в трубах и яичниках (Stephens A.J., Aubuchon M., Schust D.J. Antichla-mydial Antibodies, Human Fertility, and Pregnancy Wastage// Infectious Diseases in Obstetrics and Gynecology. 2011; 2011: 525182). Данный возбудитель нередко обнаруживается при спонтанных выкидышах, замершей и эктопической беременности. Беременность на фоне хламидийной инфекции часто заканчивается преждевременными родами в сроке 32-35 недель, а внутриутробное инфицирование плода либо заражение во время родов приводит к развитию пневмонии, конъюнктивита у новорожденных, последующему развитию заболеваний ЦНС, повышению процента инвалидизации и детской смертности (Rours G.I.J.G., Duljts L., Moll H.A., Arends L.R., de Groot R., Jaddoe V.W., Hofman A., Steegers E.A.P., Mackenbach J.P., Ott A., Willemse H.F.M., van der Zwaan E.A.E., Verkooijen R.P., Verbrugh H.A. Chlamydia trachomatis infection during pregnancy associated with preterm delivery: a population-based prospective cohort study Eur J Epidemiol. 2011; 26(6): 493-502). При этом у инфицированных детей сразу после рождения могут отсутствовать симптомы заболевания и едва ли не единственным неинвазивным прогностическим критерием оказывается оценка ребенка по шкале Апгар и анализ содержимого околоплодных вод, полученных в родах.

Известен способ прогнозирования риска внутриутробной инфекции у новорожденных (Патент RU 2246247, МПК А61В 5/00, опубликован 27.05.2003; Автор: Зильбер М.Ю.) Способ позволяет повысить точность прогноза за счет учета экстрагенитальной патологии, создающей фундамент для начальных сдвигов в гомеостазе и ослабления резистентности к внешним воздействиям. У новорожденных используют контрольный набор факторов риска, который включает определение температуры тела у матери в родах, оценку по шкале Апгар, массы ребенка при рождении (г), характеризуют каждый фактор риска, оценивают в баллах и по значению суммы баллов прогнозируют риск внутриутробной инфекции. Кроме того, в набор факторов риска включают экстрагенитальную патологию и ее наличие, хронические очаги инфекции и их обострение, острые инфекционные заболевания, перенесенные во время беременности, дородовое излитие вод, характер околоплодных вод, при этом если факторы риска соответственно характеризуются: наличие одного патологического заболевания, наличие инфекции вне обострения, однократно перенесенное во время беременности острое инфекционное заболевание, излитие вод при доношенной беременности, цвет вод - светлые, умеренное многоводие, температура тела матери в родах до 37,5°С, оценка по шкале Апгар 7-8, масса ребенка при рождении больше 2500, но меньше 2900, то каждый из них оценивают по 1 баллу; если факторы риска характеризуются: сочетание патологий, обострение хронических очагов инфекции более одного раза, острые инфекционные заболевания, перенесенные во время беременности дважды, дородовое излитие вод при беременности в 36 недель, характер околоплодных вод - мекониальные, выраженное многоводие, температура тела матери в родах от 37,5 до 38°С, оценка по шкале Апгар 5-6, масса ребенка при рождении от 1500 до 2500, то каждый из них оценивают по 2 балла; если факторы риска характеризуются: наличие трех и более патологических заболеваний, обострение хронических очагов инфекции в каждом триместре беременности, острые инфекционные заболевания перенесены во время беременности в каждом триместре, дородовое излитие вод за 6 недель до родов, характер околоплодных вод - мутные, с запахом, температура тела матери в родах более 38°С, оценка по шкале Апгар менее 5, масса ребенка при рождении менее 1500, то каждый из них оценивают в 3 балла, при этом если сумма баллов не превышает или равна 8 баллам, то риск внутриутробной инфекции у новорожденного минимальный, при сумме баллов от 9 до 13 риск средний, при сумме баллов 13 и выше риск максимальный.

Данный способ, безусловно, имеет свои достоинства, особенно в плане неинвазивности и отсутствия необходимости проведения дорогостоящих дополнительных исследований, однако далеко не всегда удается собрать полный анамнез, а такие показатели как высокая температура тела и другие описанные в патенте проявления характерны для ярких клинических форм заболевания с высоким титром возбудителя, но малоприменимы для средних и низких титров, отличающихся стертостью симптоматики или полным ее отсутствием.

Известен способ прогнозирования инфицирования новорожденных и родильниц (Патент RU 2449277, МПК G01N 33/48, опубликован 05.08.2010, Авторы: Набережнев Ю.И., Орлова B.C., Головченко О.В., Калашникова И.В.). Околоплодные воды отбирают после преждевременного разрыва околоплодных оболочек при недоношенной беременности на сроке 22-36 недель беременности. Для этого в полость матки под контролем УЗ-луча вводят катетер, выполненный из эластичных материалов и состоящий из двух частей: наружная - интродьюсер, который служит для облегчения проникновения катетера через шейку матки, и внутренняя - сам капилляр в виде прозрачной трубки, заканчивающейся Luer-коннектором для прикрепления шприца типа Luer, при помощи которого создают отрицательное давление для отбора проб. В отобранных пробах выявляют инфекционные агенты: бактерии - Streptococcus spp.; Peptostreptococcus spp.; Staphylococcus aureus; Gardenerella vaginalis; Peptococcus spp.; Capnocytophaga spp.; Stomatococcus spp.; Bacterioides spp.; Enterococcus faecalis; Neisseria gonorrhea; Escherichia coli; Lactobacillus spp.; Clostridium spp., а также вирусы - adenovirus; parvovirus; cytomegalovirus; Epstein-Barr virus; herpes simplex virus; influenza А. Затем прогнозируют инфицирование новорожденных и родильниц выявленными инфекционными агентами. Предлагаемый способ является малоинвазивным, что исключает развитие осложнений во время и после взятия материала. Авторы считают, что на основании полученных результатов можно своевременно и рационально принять меры по борьбе с реализацией инфекции.

Однако данный способ требует длительного дополнительного обучения персонала, наличия высокоточного оборудования для УЗИ и специальных катетеров. К тому же рекомендации авторов ограничиваются недоношенной беременностью с преждевременным разрывом околоплодных оболочек.

Наиболее близким к заявленному является способ прогнозирования внутриутробной инфекции (патент РФ 2066454, МПК G01N 33/53, опубликован 10.09.1996; Авторы: Вольф В.Е., Левкович М.А.). С целью снижения гипердиагностики за счет повышения точности способа у беременных женщин с выявленной серопозитивностью по наличию антител к токсоплазменным и цитомегаловирусным антигенам определяют эти антитела и уровень иммуноглобулинов М, G, А в околоплодных водах и при выявлении специфических антител, а также общий JgM, JgA и высокого уровня JgG прогнозируют внутриутробную инфекцию.

Авторы считают, что способ позволяет выявить риск развития внутриутробной инфекции, снизить гипердиагностику и затраты на не обоснованное лечение. Однако специфичность и чувствительность предложенного метода вызывает обоснованные сомнения, особенно в случаях, когда у матери отмечается низкий титр антител к возбудителю, а симптоматика (включая проявления воспалительной реакции) стерта либо отсутствует.

Задачей изобретения является разработка обладающего достаточной чувствительностью малоинвазивного способа прогнозирования состояния новорожденного при наличии у матери антител класса G к Chlamydia trachomatis в крови без клинических проявлений патогенной инвазии путем исследования околоплодных вод в родах на содержание альфа-2-макроглобулина и альбумина.

Поставленная задача достигается способом оценки риска развития внутриутробной инфекции у новорожденного при наличии у матери антител класса G к Chlamydia trachomatis в крови путем исследования околоплодных вод. Берут образец околоплодных вод в процессе родов и определяют в них содержание альбумина (АЛБ) методом стандартного колориметрического теста, альфа-2-макроглобулина (α2-МГ) методом твердофазного иммуноферментного анализа. При концентрациях α2-МГ более 0,050 г/л и АЛБ более 4 г/л диагностируют высокий риск развития внутриутробной инфекции у новорожденного. При концентрации α2-МГ менее либо равной 0,050 г/л и АЛБ менее либо равной 4 г/л диагностируют низкий риск развития внутриутробной инфекции у новорожденного.

Новизна способа

- Берут образец околоплодных вод в процессе родов и определяют содержание в них альфа-2-макроглобулина (α2-МГ) методом твердофазного иммуноферментного анализа и альбумина (АЛБ) методом стандартного колориметрического теста.

- При концентрации α2-МГ более 0,050 г/л и АЛБ более 4 г/л прогнозируют наличие внутриутробной инфекции у новорожденного.

- При концентрации α2-МГ менее либо равной 0,050 г/л и АЛБ менее либо равной 4 г/л прогнозируют отсутствие внутриутробной инфекции у новорожденного.

Совокупность существенных признаков изобретения позволяет получить новый технический результат, заключающийся в возможности выявить внутриутробную инфицированность новорожденного, что позволяет принять своевременные терапевтические меры и повысить шансы на выживание и выздоровление ребенка в неонатальном периоде.

Способ неинвазивен и не требует особых сложных условий и технологий забора околоплодных вод у матери.

По результатам проведенного исследования чувствительность способа составила 90% по отношению к α2-МГ и 81% по отношению к АЛБ, а специфичность при прогнозировании состояния ребенка в послеродовом периоде колебалась в пределах 81% по отношению к α2-МГ и 98% по отношению к АЛБ.

При осуществлении теста используется иммуноферментный и колориметрический методы анализа, внедренные в большинстве лабораторных баз, что не требует дополнительного обучения персонала.

Используемые в предлагаемом методе α2-МГ и АЛБ выбраны нами вследствие того, что содержание α2-МГ и АЛБ вне циркуляции (кровь) считают маркерами проницаемости.

Данным методом обследовано 35 родильниц с наличием в крови антител к Chlamydia trachomatis. Тест на содержание α2-МГ и АЛБ в околоплодных водах проводился в родах, состояние родившихся детей оценивали по шкале Апгар, наличие внутриутробной инфекции устанавливали клинико-лабораторными методами исследования в раннем неонатальном периоде и подтверждали результатами гистологического исследования плаценты.

Способ осуществляется следующим образом. У родильниц с наличием в крови верифицированных антител класса G к Chlamydia trachomatis забирают 5-10 мл околоплодных вод во время вскрытия плодного пузыря или при самопроизвольном подтекании околоплодных вод. В полученном образце определяют концентрацию альфа-2-макроглобулина методом твердофазного иммуноферментного анализа и альбумина методом стандартного колориметрического теста. При выявлении концентрации α2-МГ более 0,050 г/л и АЛБ более 4 г/л в околоплодных водах с вероятностью более 80% диагностируют высокий риск развития внутриутробной инфекции у новорожденного, а при концентрации α2-МГ менее либо равной 0,050 г/л и АЛБ менее либо равной 4 г/л диагностируют низкий риск развития внутриутробной инфекции у новорожденного.

Пример 1.

Пациентка Б., 21 год, первобеременная, первородящая. Соматически здорова. На учете в женской консультации с 11 недель беременности. Беременность протекала без осложнений. Проведено 2 биохимических скрининга в 13 и 16 недель. Риск врожденных пороков развития низкий. Проведено 3 УЗИ скрининга в 14, 23, 32 недели. При сроке беременности 32 недели по УЗИ диагностировано многоводие. Обнаружены в крови антитела класса G к Chlamydia trachomatis в титре 1:40 в первой половине беременности. Специфическое лечение не проводилось.

В родах: в околоплодных водах уровень α2-МГ - 0,007 г/л, уровень АЛБ - 1,16 г/л. Оценка ребенка по шкале Апгар=8 баллов. Диагностирован низкий риск развития внутриутробной инфекции.

Период новорожденности без осложнений. По результатам гистологии: зрелая плацента.

Пример 2.

Пациентка С., 20 лет, первобеременная, первородящая. Соматически здорова. На учете в женской консультации с 13 недель беременности. Беременность протекала без осложнений. Проведен 1 биохимический скрининг в 15 недель. Риск врожденных пороков развития низкий. Проведено 3 УЗИ скрининга в 14, 23, 32 недели. При сроке беременности 32 недели по УЗИ диагностировано многоводие. Обнаружены в крови антитела класса G к Chlamydia trachomatis в титре 1:40 в первой половине беременности. Специфическое лечение не проводилось.

В родах: в околоплодных водах уровень α2-МГ - 0,278 г/л, уровень АЛБ - 8,1 г/л. Оценка ребенка по шкале Апгар=8 баллов, однако диагностирован высокий риск развития внутриутробной инфекции у новорожденного.

Период новорожденности протекал с желтухой новорожденного, транзиторной лихорадкой. По результатам гистологии: восходящая инфекция I ст., серозный хорионамнионит.

Таким образом, нам удалось разработать достаточно эффективный способ прогнозирования состояния новорожденного в родах у женщин с наличием в крови антител класса G к Chlamydia trachomatis без клинических проявлений заболевания, позволяющий с достаточно высокой точностью прогнозировать дальнейшее состояние новорожденного сразу после родов и наличие у него внутриутробной инфекции, несмотря на отсутствие ее клинических проявлений, что позволяет оптимизировать лечебную тактику новорожденных и своевременно начать лечение внутриутробной инфекции и повысить шансы на выживание и выздоровление ребенка в неонатальном периоде.