Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, может быть использовано при разработке средств специфической профилактики и, в частности, для получения вакцины против бешенства животных.

Известен способ получения антирабической вакцины для животных, включающий приготовление посевного материала из штамма вируса бешенства, инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей суспензии с последующим ее инактивацией и приготовлением целевого продукта. Инактивацию вируса проводят β-пропиолактоном (Патент РФ №2287343. «Способ получения антирабической вакцины», МПК A61K 39/205, Бюл. №26, 31.05.2005).

Недостатками известной вакцины являются сложность сбора вируссодержащей суспензии, недостаточный срок хранения целевого продукта.

Задачей заявленного технического решения является упрощение способа и повышение качества продукта за счет увеличения срока хранения целевого продукта.

Поставленная задача решается в способе получения антирабической вакцины для животных, включающем приготовление посевного материала из штамма вируса бешенства, инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей суспензии с последующей ее инактивацией и приготовлением целевого продукта тем, что инактивацию проводят добавлением к вируссодержащей суспензии этанола в конечной концентрации 18-20%, экспозицией 20-22 часа при температуре 36-37 °С при постоянном перемешивании, далее добавляют 4-6%-ную гидроокись алюминия в соотношении к реакционной смеси 1:(4,5-5,0).

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие признаки, аналогичные заявляемым, т.е. предложение соответствует критерию «новизна».

Предложение осуществимо в лабораторных и промышленных условиях, направлено на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

Нами впервые установлено, что инактивация вируссодержащей суспензии при определенных режимах этанолом приводит к получению целевого продукта без потери иммунологически активного материала, а это недопустимо при производстве эффективной инактивированной антирабической вакцины для животных, что позволяет получить неочевидный положительный эффект - упрощение и ускорение способа, увеличение срока хранения целевого продукта без потери его качества, т.е. предложение соответствует критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Способ иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. Культивирование зараженных вирусом бешенства клеток ВНК-21 проводят в суспензии в 10-литровом биореакторе при постоянном перемешивании. Через 1,2 и 3 сутки отбирают пробы для контроля инфекционной активности и отсутствия контаминации посторонней микрофлорой. По достижении титра инфекционности вируса 7,0 lg ЛД₅₀/см³ к вируссодержащей суспензии добавляют при постоянном перемешивании 96%-ный водный раствор этанола до конечной его концентрации 18%, при этом продолжается перемешивание суспензии и поддержание температуры 36 °С. Через 20 ч к вируссодержащей суспензии с инактивированным вирусом добавляют 4%-ную гидроокись алюминия в соотношении к реакционной смеси 1:4,5.

Пример 2. Культивирование инфицированных клеток проводят, как в примере 1, но к 7 л вируссодержащей суспензии добавляют 98%-ный водный раствор этанола до конечной концентрации 20%, при этом продолжаются перемешивание суспензии и поддержание температуры 37 °С. Через 22 ч к вируссодержащей суспензии с инактивированным вирусом добавляют 6%-ную гидроокись алюминия в соотношении к реакционной смеси 1:5,0.

Контроль вакцин, полученных согласно примерам 1 и 2 (Сер-1 и Сер-2) относительно национальной референс-вакцины и прототипа на остаточную инфекционность проводили через 1,5 года хранения их путем интрацеребральной инокуляции исследуемого материала мышам массой 10-12 г. Иммуногенность исследовали методом NIH. Результаты выражали в международных единицах (ME). Антителоиндуцирующую активность определяли путем исследования сыворотки крови вакцинированных однократно в дозе 1 мл собак и кошек в реакции нейтрализации (рH). Сыворотку получали через 27 дней после иммунизации животных. рH проводили на мышах против стандартного вируса бешенства шт.CVS относительно национальной референс-сыворотки с активностью 20 МЕ/мл.

Исходные серии вакцины (Сер-1 и Сер-2) не содержали в своем составе живого вируса бешенства и обладали практически одинаковой иммуногенной активностью при испытании их на мышах на уровне 2,53 МЕ/мл и 2,5 МЕ/мл соответственно. Через 18 месяцев хранения при 6-8 °С эти показатели снизились до 2,05 МЕ/мл и 2,1 МЕ/мл соответственно (на 16-19%), но продолжали отвечать международным требованиям, предъявляемым к антирабическим вакцинам, в то время как аналогичные показатели референс-вакцины и прототипа снизились на 40 и 55%, соответственно.

Этанол в составе жидкой антирабической вакцины в концентрациях 18-20% полностью инактивировал инфекционность вируса и надежно защищал вакцину от случайных загрязнений посторонними агентами без потери иммунологически активного материала.

Предлагаемая вакцина обладала высокой антителоиндуцирующей активностью для целевых животных. В сыворотке крови вакцинированных щенят и котят вакциной, хранившейся в течение 1,5 года в условиях бытового холодильника (6-8 °С), антитела определялись через 27 дней на уровне 3,4 МЕ/мл (щенята) и 2,2 (котята), что свидетельствует о надежной защите их от бешенства.

Вакцина по своим качественным показателям соответствует самым строгим современным требованиям экологической и биобезопасности, она не содержит антибиотиков, ртутьсодержащих препаратов и β-пропиолактона. Сохраняет активность при длительном хранении и при широком температурном диапазоне. Пригодна для надежной защиты животных от бешенства. Вакцина является конкурентоспособной лучшим международным препаратам.