ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ СИНДРОМА ДЕФИЦИТА ВНИМАНИЯ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ СИНДРОМА ДЕФИЦИТА ВНИМАНИЯ

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лечения синдрома дефицита внимания (СДВ).

Из уровня техники известно нейротропное лекарственное средство на основе антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 (RU 2156621 C1, A61K 39/395, 27.09.2000). Однако данное лекарственное средство не во всех случаях лечения неврологическо-поведенческих расстройств, в том числе синдрома дефицита внимания, обеспечивает достаточную терапевтическую эффективность.

Изобретение направлено на повышения эффективности лечения синдрома дефицита внимания (СДВ).

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что лекарственное средство для лечения синдрома дефицита внимания, содержащее активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100, согласно изобретению, выполнено в виде фармацевтической композиции и содержит в качестве дополнительного-усиливающего компонента активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

При этом активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения.

Фармацевтическая композиция может быть выполнена в твердой лекарственной форме и содержать эффективное количество частиц нейтрального носителя, насыщенного смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной-потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированной-потенцированной формы антител к эндотелиальной NO-синтазе, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Причем водные или водно-спиртовые растворы активированных-потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе получены путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения из матричных растворов аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

Предпочтительно каждый из компонентов сверхмалых доз аффинно очищенных антител используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведении, приготовленных по гомеопатической технологии.

Решение поставленной задачи обеспечивается также тем, что в способе лечения синдрома дефицита внимания путем введения в организм активированной-потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100, согласно изобретения, дополнительно (одновременно и сочетано) вводят активированную-потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к эндотелиальной NO-синтазе.

При этом активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения..

Предпочтительно используют приготовленные в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы смесь различных разведении антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сочетании со смесью различных разведении антител к эндотелиальной NO-синтазе, приготовленных по гомеопатической технологии.

Кроме того, лекарственное средство содержит действующие компоненты в объемном соотношении 1:1, при этом каждый компонент используют в виде смеси трех соответствующих матричных растворов, разведенных, соответственно, в 100¹², 100³⁰, и 100²⁰⁰ раз, что эквивалентно сотенным разведениям С12, С30, С200, приготовленных по гомеопатической технологии.

Заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать, предпочтительно, по 1-2 таблетке 2-4 раза в день.

При лечении синдрома дефицита внимания возможно раздельное, но сочетанное и одновременное применение (введение в организм) заявленной фармацевтической композиции в виде двух отдельно приготовленных препаратов как в виде растворов, так и в твердых лекарственных формах (таблеток), каждый из которых содержит активированную-потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и, соответственно, активированную-потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к эндотелиальной NO-синтазе.

Предложенное сочетание активированных-потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе в фармацевтической композиции (т.е. форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе, приготовленных по гомеопатической технологии потенцирования путем многократного последовательного разведения в сочетании с внешним механическим воздействием - вертикальным встряхиванием каждого разведения (см., например, В. Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29), которые обладают активностью, обусловленной технологией потенцирования, в фармакологических моделях и/или клинических методах лечения синдрома дефицита внимания) обеспечивает получение неожиданного синергетического терапевтического эффекта, подтвержденного на адекватных (валидных) экспериментальных моделях и клинических исследованиях, который заключается в повышении эффективности лечения синдрома дефицита внимания (СДВ). Указанный технический результат обусловлен усилением нейропротекторной активности антител к белку S-100, усилением вегето-стабилизирующего эффекта, нормализацией вегетативного статуса, синергическим влиянием обоих компонентов на нейрональную пластичность, и, вследствие этого, повышением устойчивости мозга к токсическим воздействиям, что улучшает интегративную деятельность и восстанавливает межполушарные связи головного мозга, способствует устранению когнитивных нарушений, стимулирует репаративные процессы и ускоряет восстановление функций ЦНС, повышает умственную работоспособность, восстанавливает процессы обучения и памяти, нормализует соматовегетативные проявления, увеличивает мозговой кровоток, и, соответственно обеспечивает повышение эффективности лечения синдрома дефицита внимания.

При этом заявленное лекарственное средство, как и составляющие ее компоненты, не обладают седативным и миорелаксантным действием, не вызывают пристрастия и привыкания.

Кроме того, заявленное лекарственное средство расширяет арсенал препаратов, предназначенных для лечения и профилактики синдрома дефицита внимания.

На графике показано уменьшение выраженности симптомов СДВГ (суммарный балл по шкале ADHDRS-IV-Home Version) через 2, 4, 6, 8, 12 недели терапии по сравнению с исходным значением.

Лекарственное средство приготовляют, преимущественно, следующим образом.

Для приготовления активированной-потенцированной формы действующих компонентов используют моноклональные или, преимущественно, поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам, описанным, например, в книге: Иммунологические методы, под ред. Г. Фримеля, М., «Медицина», 1987, с.9-33; или, например, в статье Laffly E., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N1-2. P.33-55.

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток. Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение в индивидуальном виде проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемыми в соответствии с изобретением веществами-антигенами: мозгоспецифическим белком S-100 и эндотелиальной NO-синтазой. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифические антисыворотки с высоким содержанием антител, которые используют для получения активированных-потенцированных форм компонентов. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.

Предпочтительным для приготовления заявленной фармацевтической композиции является использование поликлональных антител к мозгоспецифическому белком S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе, которые в качестве матричного (первичного) раствора с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, используют для последующего приготовления активированной-потенцированной формы.

Предпочтительной для приготовления каждого компонента является использование смеси трех водно-спиртовых разведении первичного матричного раствора антител, разведенных, соответственно, в 100¹², 100³⁰, и 100²⁰⁰ раз, что соответствует сотенным разведениям С12, С30 и С200, приготовленной по гомеопатической технологии. При выполнении заявленного лекарственного средства в твердой лекарственной форме на лактозу наносится смесь указанных компонентов.

Предпочтительным для приготовления заявленного лекарственного препарата является использование поликлональных антител к мозгоспецифическому белком S-100 и эндотелиальной NO-синтазе, которые могут быть получены иммунизацией кроликов следующим образом.

Пример 1.

Для проведения экспериментальных исследований были использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной биотехнологической фирмой.

Поликлональные антитела к эндотелиальной NO-синтазе получают, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и цельную молекулу эндотелиальной NO-синтазы следующей последовательности:

1 MGNLKSVGQE PGPPCGLGLG LGLGLCGKQG PASPAPEPSR АРАРАТРНАР DHSPAPNSPT

61 LTRPPEGPKF PRVKNWELGS ITYDTLCAQS QQDGPCTPRR CLGSLVLPRK LQTRPSPGPP

121 PAEQLLSQAR DFINQYYSSI KRSGSQAHEE RLQEVEAEVA STGTIHLRES ELVFGAKQAW

181 RNAPRCVGRI QWGKLQVFDA RDCSSAQEMF TYICNHIKYA TNRGNLRSAI TVFPQRAPGR

241 GDFRIWNSQL VRYAGYRQQD GSVRGDPANV EITELCIQHG WTPGNGRFDV LPLLLQAPDE

301 APELFVLPPE LVLEVPLGAP HTGVVRGPGL RWYALPAVSN MLLEIGGLEF SAAPFSGWYM

361 STEIGTRNLC DPHRYNILED VAVCMDLDTR TTSSLWKDKA AVEINLAVLH SFQLAKVTIV

421 DHHAATVSFM KHLDNEQKAR GGCPADWAWI VPPIYGSLPP VFHQEMVNYI LSPAFRYQPD

481 PWKGSATKGA GITRKKTFKE VANAVKISAS LMGTLMAKRV KATILYASET GRAQSYAQQL

541 GRLFRKAFDP RVLCMDEYDV VSLEHEALVL VVTSTFGNGD PPENGESFAA ALMEMSGPYN

601 SSPRPEQHKS YKIRFNSVSC SDPLVSSWRR KRKESSNTDS AGALGTLRFC VFGLGSRAYP

661 HFCAFARAVD TRLEELGGER LLQLGQGDEL CGQEEAFRGW AKAAFQASCE TFCVGEEAKA

721 AAQDIFSPKR SWKRQRYRLS AQAEGLQLLP GLIHVHRRKM FQATVLSVEN LQSSKSTRAT

781 ILVRLDTAGQ EGLQYQPGDH IGISAPNRPG LVEALLSRVE DPPPPTESVA VEQLEKGSPG

841 GPPPSWVRDP RLPPCTVRQA LTFFLDITSP PSPRLLRLLS TLAEEPSEQQ ELETLSQDPR

901 RYEEWKLVRC PTLLEVLEQF PSVALPAPLL LTQLPLLQPR YYSVSSAPNA HPGEVHLTVA

961 VLAYRTQDGL GPLHYGVCST WLSQLKTGDP VPCFIRGAPS FRLPPDPYVP CILVGPGTGI

1021 APFRGFWQER LHDIESKGLQ PHPMTLVFGC RCSQLDHLYR DEVQDAQERG VFGRVLTAFS

1081 REPDSPKTYV QDILRTELAA EVHRVLCLER GHMFVCGDVT MATSVLQTVQ RILATEGDME

1141 LDEAGDVIGV LRDQQRYHED IFGLTLRTQE VTSRIRTQSF SLQERHLRGA VPWAFDPPGP

1201 DTPGP

Возможно для получения поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе использование в качестве иммуногена (антигена) цельной молекулы эндотелиальной NO-синтазы следующей последовательности:

1 MGNLKSVAQE PGPPCGLGLG LGLGLCGKQG PATPAPEPSR APASLLPPAP EHSPPSSPLT

61 QPPEGPKFPR VKNWEVGSIT YDTLSAQAQQ DGPCTPRRCL GSLVFPRKLQ GRPSPGPPAP

121 EQLLSQARDF INQYYSSIKR SGSQAHEQRL QEVEAEVAAT GTYQLRESEL VFGAKQAWRN

181 APRCVGRIQW GKLQVFDARD CRSAQEMFTY ICNHIKYATN RGNLRSAITV FPQRCPGRGD

241 FRIWNSQLVR YAGYRQQDGS VRGDPANVEI TELCIQHGWT PGNGRFDVLP LLLQAPDDPP

301 ELFLLPPELV LEVPLEHPTL EWFAALGLRW YALPAVSNML LEIGGLEFPA APFSGWYMST

361 EIGTRNLCDP HRYNILEDVA VCMDLDTRTT SSLWKDKAAV EINVAVLHSY QLAKVTIVDH

421 HAATASFMKH LENEQKARGG CPADWAWIVP PISGSLTPVF HQEMVNYFLS PAFRYQPDPW

481 KGSAAKGTGI TRKKTFKEVA NAVKISASLM GTVMAKRVKA TILYGSETGR AQSYAQQLGR

541 LFRKAFDPRV LCMDEYDVVS LEHETLWLVV TSTFGNGDPP ENGESFAAAL MEMSGPYNSS

601 PRPEQHKSYK IRFNSISCSD PLVSSWRRKR KESSNTDSAG ALGTLRFCVF GLGSRAYPHF

661 CAFARAVDTR LEELGGERLL QLGQGDELCG QEEAFRGWAQ AAFQAACETF CVGEDAKAAA

721 RDIFSPKRSW KRQRYRLSAQ AEGLQLLPGL IHVHRRKMFQ ATIRSVENLQ SSKSTRATIL

781 VRLDTGGQEG LQYQPGDHIG VCPPNRPGLV EALLSRVEDP PAPTEPVAVE QLEKGSPGGP

841 PPGWVRDPRL PPCTLRQALT FFLDITSPPS PQLLRLLSTL AEEPREQQEL EALSQDPRRY

901 EEWKWFRCPT LLEVLEQFPS VALPAPLLLT QLPLLQPRYY SVSSAPSTHP GEIHLTVAVL

961 AYRTQDGLGP LHYGVCSTWL SQLKPGDPVP CFIRGAPSFR LPPDPSLPCI LVGPGTGIAP

1021 FRGFWQERLH DIESKGLQPT PMTLVFGCRC SQLDHLYRDE VQNAQQRGVF GRVLTAFSRE

1081 PDNPKTYVQD ILRTELAAEV HRVLCLERGH MFVCGDVTMA TNVLQTVQRI LATEGDMELD

1141 EAGDVIGVLR DQQRYHEDIF GLTLRTQEVT SRIRTQSFSL QERQLRGAVP WAFEPPGSDT

1201 NSP

Возможно для получения поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе использование в качестве иммуногена (антигена) синтетического пептида эндотелиальной NO-синтазы, выбранного, например, из следующих аминокислотных последовательностей:

1192-1195

PWAF

1189-1192:

GAVP

1185-1205:

RHLRGAVPWAF DPPGPDTPGP

1194-1205:

AF DPPGPDTPGP

1186-1196:

HLRGAVPWAF D

1186-1205:

HLRGAVPWAF DPPGPDTPGP

Перед отбором крови за 7-9 дней проводят 1-3 внутривенных инъекций для повышения уровня антител. В процессе иммунизации у кроликов отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства растворимых антигенов достигается через 40-60 дней после первой инъекции. После окончания первого цикла иммунизации кроликов в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию, включающую 1-3 внутривенные инъекции. Для получения антисыворотки из иммунизированных кроликов собирают кровь в центрифужную пробирку объемом 50 мл. С помощью деревянного шпателя удаляют со стенок пробирки образовавшиеся сгустки и помещают палочку в сгусток, образовавшийся в центре пробирки. Кровь помещают в холодильник (температура 4°C) на ночь. На следующий день удаляют сгусток, прикрепившийся к шпателю, и центрифугируют оставшуюся жидкость при 13000 g в течение 10 мин. Супернатант (надосадочная жидкость) является антисывороткой. Полученная антисыворотка должна быть желтого цвета. Добавляют к антисыворотке 20% (весовая концентрация) NaN₃ до конечной концентрации 0,02% и хранят до использования в замороженном состоянии при температуре -20°C (или без добавления NaN₃ - при температуре -70°C). Для выделения из антисыворотки антител к эндотелиальной NO-синтазе производят абсорбцию на твердой фазе в следующей последовательности:

1. 10 мл антисыворотки кролика разбавляют в 2 раза 0,15 М NaCl добавляют 6,26 г Na₂SO₄, перемешивают и инкубируют 12-16 ч при 4°C;

2. выпавший осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 10 мл фосфатного буфера и затем диализуют против того же буфера в течение ночи при комнатной температуре;

3. после удаления осадка центрифугированием раствор наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером;

4. фракцию антител определяют, измеряя оптическую плотность элюата при 280 нм.

Затем производят очистку антител методом аффинной хроматографии путем прикрепления полученных антител к эндотелиальной NO-синтазе, который находится на нерастворимом матриксе с последующим элюированием концентрированными растворами соли.

Полученный, таким образом, буферный раствор поликлональных кроличьих антитела к эндотелиальной NO-синтазе, очищенных на антигене, с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл, используют в качестве матричного (первичного) раствора для последующего приготовления активированной - потенцированной формы.

Для получения поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют мозгоспецифический белок S-100, физико-химические свойства которого описаны в статье М.В. Старостина, С.М. Свиридов, Нейроспецифический белок S-100, Успехи современной биологии, 1977 г., т.5, с.170-178; книге М.Б. Штарк, Мозгоспецифические белки /антигены/ и функции нейрона, М., "Медицина", 1985 г.; с.12-14, выделенный из ткани головного мозга быка по следующей методике:

- замороженную в жидком азоте ткань растирают в порошок на специальной мельнице;

- экстракцию белков проводят в соотношении 1:3 (вес/объем) в экстрагирующем буфере при гомогенизации;

- гомогенат прогревают в течение 10 мин при 60°C и охлаждают до 4°C на ледяной бане;

- термолабильные белки удаляют центрифугированием;

- проводят ступенчатое фракционирование сульфатом аммония с последующим удалением выпадающих в осадок примесных белков;

- содержащую белок S-100 фракцию осаждают 100% насыщенным сульфатом аммония при снижении pH до 4,0 и собирают центрифугированием;

- осадок растворяют в минимальном объеме буфера, содержащего ЭДТА и меркаптоэтанол, диализируют против деионизованной воды и лиофильно высушивают;

- фракционирование кислых белков продолжают хроматографией на ионообменных носителях - ДЭАЭ целлюлозе ДЕ-52 и затем ДЭАЭ-сефадексе А-50;

- собранные и отдиализованные фракции, содержащие белок S-100, разделяют по молекулярному весу гель-фильтрацией на сефадексе G-100;

- очищенный белок S-100 диализируют и лиофильно высушивают.

Молекулярный вес очищенного мозгоспецифического белка S-100 составляет - 21000 д.

Благодаря высокому содержанию аспарагиновой и глутаминовой кислот мозгоспецифический белок S-100 является сильнокислым и занимает крайнее анодное положение при электрофорезе в прерывистой буферной системе в полиакриламидном геле, что облегчает его идентификацию.

Для получения мозгоспецифической антисыворотки к выделенному мозгоспецифическому белку S-100 готовят смесь очищенного белка S-100 (антигена) в комплексе с метилированным бычьим сывороточным альбумином в качестве носителя с полным адъювантом Фрейнда, которую вводят подкожно лабораторному животному - кролику в область спины в количестве 1-2 мл. На 8-й, 15-й день проводят повторную иммунизацию. Забор крови производят (например, из вены уха) на 26-й и 28-й день.

Полученная антисыворотка имеет титр 1:500-1:1000, образует единственную полосу преципитации с экстрактом из нервной ткани, но не реагирует с экстрактами гетерологичных органов и формирует единственный пик преципитации как с чистым белком S-100, так и с экстрактом нервной ткани, что свидетельствует о моноспецифичности полученной антисыворотки.

Активированную-потенцированную форму каждого компонента готовят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части упомянутого матричного раствора в 9 частях (для десятичного разведения D) или в 99 частях (для сотенного разведения C) или в 999 частях (для тысячного разведения M) нейтрального растворителя в сочетании с многократным (не менее 10 раз) вертикальным встряхиванием ("динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см., например, В. Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29).

Внешнюю обработку в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения C12 одну часть упомянутого матричного раствора антител к мозгоспецифическому белку S-100 (или к NO-синтазе) с концентрацией 2,5 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя (преимущественно 70% этилового спирта) и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают - потенцируют полученное 1-е сотенное C1 разведение. Из 1-го сотенного C1 разведения приготовляют 2-ое сотенное разведение C2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение C12. Таким образом, 12-е сотенное разведение C12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно в разных емкостях 12 раз 1-ой части исходного матричного раствора антител к мозгоспецифическому белку S-100 с концентрацией 2,5 мг/мл в 99-ти частях нейтрального растворителя, т.е. раствор, приготовленный разведением матричного раствора в 100¹² раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведении C30 и C200.

При использовании в качестве компонента (например, активированной-потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100) смеси различных, преимущественно сотенных, разведений, каждое разведение компонента (например, С12, С30, С200) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до их предпоследнего разведения (соответственно, до получения С11, С29, С199) и затем вносят в одну емкость по одной части каждого полученного предпоследнего разведения и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения). При этом получают активированную-потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением матричного раствора, соответственно, в 100¹², 100³⁰ и 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных разведении С12, С30 и С200, приготовленных по гомеопатической технологии.

Возможно использование действующего вещества в виде смеси других различных разведении по гомеопатической технологии, например, десятичных и или сотенных, (С12, С30, С100; D20, С30, С100 или D10, С30, M100 и т.д.), эффективность которых определяют экспериментально.

При потенцировании вместо встряхивания в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять внешнее воздействие ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Для получения заявленной фармацевтической композиции водные или водно-спиртовые растворы действующих компонентов смешивают, преимущественно, в объемном соотношении 1:1 и используют в жидкой лекарственной форме.

Заявленная фармацевтическая композиция может быть использована и в твердой лекарственной форме, которая содержит эффективное количество частиц нейтрального носителя - лактозы, насыщенного путем пропитывания до насыщения смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной-потенцированной формой антител к мозгоспецифическому белку S-100 и активированной-потенцированной формой антител к эндотелиальной NO-синтазе, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие, преимущественно, лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Для получения твердой оральной формы заявленного лекарственного средства производят в установке кипящего слоя (например, типа «Huttlin Pilotlab» производства компании Huttlin GmbH) орошение до насыщения вводимых в псевдоожиженный - кипящий слой частиц нейтрального вещества - лактозы (молочного сахара) с размером частиц 150÷300 мкм, предварительно полученным водным или водно-спиртовым раствором активированных-потенцированных форм антител к С мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной синтазе оксида азота (NO-синтазе), преимущественно, в соотношении 1 кг раствора антител на 5 или 10 кг лактозы (1:5-1:10) с одновременной сушкой в потоке подаваемого под решетку нагретого воздуха при температуре не выше 40°С. Расчетное количество 0,17÷0,34 от массы твердой оральной формы) высушенных частиц, насыщенных активированной-потенцированной формой антител, загружают в смеситель и смешивают с микрокристаллической целлюлозой, вводимой в количестве 3÷8 масс. частей от общей массы загрузки - от массы твердой оральной формы. Затем в эту смесь добавляют 25÷45 масс. частей от общей массы загрузки «ненасыщенной» чистой лактозы (для снижения стоимости и некоторого упрощения и ускорения технологического процесса без снижения эффективности лечебного воздействия) и стеарат магния в количестве 0,1÷0,3 масс. частей от общей массы загрузки. Полученную таблеточную массу равномерно перемешивают и таблетируют прямым сухим прессованием (например, в таблет-прессе Korsch - XL 400) с формированием круглых таблеток массой 150÷500 мг. После таблетирования получают таблетки массой 300 мг, пропитанные водно-спиртовым раствором активированной-потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100 и NO-синтазы в сверхмалой дозе каждого компонента, приготовленной из матричного раствора, разведенного, соответственно, в 100¹², в 100³⁰ в 100²⁰⁰, что эквивалентно смеси сотенных разведении С12, С30 и С200 по гомеопатической технологии.

Предпочтительно заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать по 1-2 таблетке 2-4 раза в день.

Пример 1.

Исследование влияния комплексного препарата, в состав которого входят активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100 (анти-S100) и к эндотелиальной NO-синтазе (анти-eNOS) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении C12, C30, C200, в соотношении 1:1 (СМД анти-S100 + анти-eNOS), а также компонентов, входящих в его состав - активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-S100), полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведении C12, C30, C200 и активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NO-синтазе, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-eNOS), полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведении C12, C30, C200, проводили in vitro на связывание стандартного лиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма-1 рецептором человека оценивали радиолигандным методом.

Сигма-1 рецептор - внутриклеточный рецептор, локализованный в клетках центральной нервной системе, клетках большинства периферических тканей и иммунокомпетентных клетках. Рецепторы демонстрируют уникальную способность транслоцироваться, которая вызывается множеством психотропных препаратов. Динамика сигма-1 рецепторов непосредственно связана с различными влияниями, осуществляемыми препаратами при действии на сигма-1 рецепторы. Эти влияния включают регуляцию каналов активности, экоцитоз, передачу сигналов, ремоделирование плазменной мембраны (формирование рафтов), и транспортировку липидов/метаболизм. Все это может способствовать развитию пластичности нейронов в мозге. Имеются доказательные данные, что сигма-1 рецепторы оказывают модулирующее влияние на все основные нейромедиаторные системы: норадренергическую, серотонинергическую, дофаминергическую, холинергическую системы и NMDA-регулируемые глутаматные эффекты. Сигма-1 рецептор играет важную роль в патофизиологии нейроденегенративных заболеваний, психических и аффективных расстройств, инсульта, участвует в процессах обучения и памяти. В связи с этим способность лекарственных средств оказывать влияние на эффективность взаимодействия лигандов с сигма-1 рецептором указывает на наличие нейропротекторного, противоишемического, анксиолитического, антидепрессивного, антиастенического компонентов в спектре их фармакологической активности, что позволяет рассматривать данные препараты в качестве эффективных лекарственных средств, в том числе, для лечения цереброваскулярных заболеваний.

В качестве контроля была использована потенцированная дистиллированная вода (смесь гомеопатических разведении C12+C30+C200).

В опыте (для измерения общего связывания) в инкубационную среду вносили 20 мкл комплексного препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS или по 10 мкл СМД AT к S100 или 10 мкл СМД AT к NOS. Таким образом, количество СМД анти-S100 + анти-eNOS, вносимых в экспериментальную лунку при тестировании комплексного препарата, было идентично количеству СМД AT к S100 и СМД AT к NOS тестируемых в качестве монопрепаратов, что позволяет провести сравнение эффективности комплексного препарата с его отдельными компонентами, входящими в его состав. Потенцированную дистиллированную воду вносили в инкубационную среду в объеме 20 мкл и 10 мкл.

Затем вносили 160 мкл (~200 µg белка) гомогената мембран клеток линии Jurkat (линия лейкемических Т-лимфоцитов человека), и в последнюю очередь 20 мкл радиолиганда меченого тритием [³H]пентазоцин (15 нМ).

Для измерения неспецифического связывания вместо препаратов или потенцированной воды в инкубационную среду вносили 20 мкл немеченого лиганда - галоперидол (10 мкМ).

Радиоактивность измеряли на сцинтилляционном счетчике (Topcount, Packard) с использованием сцинтилляционной смеси (Microscint 0, Packard) после инкубации в течение 120 минут при температуре 22°C в 50 мМ Tris-HCl буфере (pH=7,4) и фильтрации на стекловолоконных фильтрах (GF/B, Packard). Специфическое связывание (в опыте или контроле) рассчитывали как разницу между общим (в опыте или контроле) и неспецифическим связыванием.

Результаты представлены в виде процента ингибирования специфического связывания в контроле (в качестве контроля использовали дистиллированную воду) (Таблица 1).

Результаты, отражающие ингибирование выше 50%, представляют собой значительные эффекты исследуемых соединений; ингибирование от 25% до 50%, свидетельствуют об эффектах от слабого до умеренного; ингибирование менее 25% считаются незначительными эффектами исследуемого соединения и находятся в пределах уровня фона.

Таким образом, в условиях данной экспериментальной модели показано, что: комплексный препарат СМД анти-S100 + анти-eNOS более эффективно, чем отдельные его компоненты (СМД анти-S100 и СМД анти-eNOS), ингибирует связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека; СМД анти-S100, внесенные в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл, ингибируют связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма-1 рецептором человека, но выраженность эффекта уступает выраженности эффекта комплексного препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS; СМД анти-eNOS, внесенные в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл, не оказывали влияния на связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма-1 рецептором человека; потенцированная вода, внесенная в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл или 20 мкл, не оказывала влияния на связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма-1 рецептором человека.

Пример 2.

Для исследования свойств заявленного лекарственного средства для лечения пациентов с синдромом дефицита внимания и гиперактивности (СДВГ) группы активного препарата были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных-потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных на антигене кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100 (анти-S100) и к эндотелиальной NO-синтазе (анти-eNOS) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (с концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведении C12, C30, C200 (СМД анти-S100 + анти-eNOS). Для пациентов группы сравнения были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-S100), полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведении C12, C30, c50. Для пациентов контрольной группы (плацебо) были использованы таблетки массой 300 мг, содержащие вспомогательные вещества (лактозы моногидрат - 267 мг, целлюлоза микрокристаллическая - 30 мг, магния стеарат - 3 мг).

Оценку эффективности активного препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS в лечении пациентов с синдромом дефицита внимания и гиперактивности (СДВГ) проводили в ходе сравнительного двойного слепого плацебоконтролируемого исследования с участием 146 детей в возрасте от 6 до 12 лет (средний возраст 9,3±0,24 лет), которые были рандомизированы в три группы в зависимости от назначенной терапии. В течение 12 недель пациенты группы активного препарата №1 (n=46) получали композицию СМД анти-S100 + анти-eNOS по 2 таблетки 2 раза в день; участники группы сравнения №2 (n=50) получали СМД анти-S100 по 2 таблетки 2 раза в день; пациенты контрольной группы №3 (n=50) получали плацебо по 2 таблетки 2 раза в день. Все пациенты, включенные в исследование, имели клинически выраженные проявления СДВГ, что подтверждалось высокими баллами по шкале оценки симптомов СДВГ (ADHDRS-IV-Home Version): 33,8±0,92 в группе №1; 32,5±1,14 в группе №2 и 33,6±0,91 в группе №3. Большинство детей характеризовалось умеренной степенью тяжести СДВГ в соответствии с опросником CGI-ADHD-Severity. Суммарный балл по данной шкале составил 4,0±0,02 балла в группе №1, 4,0±0,03 балла в группе №2, 4,0±0,00 балла в группе №3. Таким образом, исходно пациенты трех групп имели сопоставимые показатели степени тяжести СДВГ. По результатам неврологического, клинико-лабораторного и инструментального обследования на момент включения в исследование у пациентов не регистрировалось каких-либо патологических отклонений. В процессе лечения пациенты наносили врачу 6 визитов в течение 12 недель, в ходе которых врач-исследователь регистрировал динамику выраженности клинических проявлений СДВГ (суммарный балл по шкале ADHDRS-IV-Home Version) и тяжести заболевания (по шкале CGI-ADHD-Severity), осуществлял контроль назначенной и сопутствующей терапии, оценивал безопасность проводимого лечения.

Анализ эффективности 12-недельной терапии в трех группах показал снижение более чем на 25% от исходного суммарного балла по шкале ADHDRS-IV-Home Version у 75% (n=36) детей, принимавших композицию СМД анти-S100 + анти-eNOS; у 66% (n=33) пациентов, принимавших СМД анти-S100 и у 56% (n=28) детей, принимавших плацебо. Различия эффективности между группами, установленные при более детальной оценке с учетом трехуровневой градации улучшения состояния (снижение суммарного балла по шкале ADHDRS-IV на <25%; 25-49,9% или ≥50% от исходного значения), представлены в таблице 2. Значительное улучшение со снижением суммарного балла на 50 и более процентов от исходного отмечалось у 52% детей группы №1, принимавших СМД анти-S100 + анти-eNOS, и у 34% детей группы №2, принимавших СМД анти-S100 (против 8% пациентов группы №3, принимавших плацебо).

Динамика уменьшения выраженности симптомов СДВГ в течение периода лечения (значения суммарного балла по шкале ADHDRS-IV-Home Version на каждом из шести визитов) представлена на графике и в таблице 3. Значимое снижение (p<0,001) клинических проявлений СДВГ по сравнению с исходным состоянием происходило уже через 2 недели терапии во всех трех группах наблюдения. Положительная динамика оказалась более существенной у пациентов №1 и №2 групп, поскольку у них выявлялись значимые отличия суммарного балла ADHDRS-IV-Home Version не только при сопоставлении с визитом скрининга, но и при сравнении с показателями группы №3 плацебо. В последующие недели терапии эффективность лечения композицией СМД анти-S100 + анти-eNOS и монокомпонентным препаратом СМД анти-S100 нарастала, наиболее значимо в группе активного препарата (p<0,05). Итоговое снижение суммарного балла по шкале ADHDRS-IV-Home Version у детей группы №1 СМД анти-S100 + анти-eNOS составило 16,5 баллов, у пациентов группы №2 СМД анти-S100 - 12,4 баллов (против 6,3 баллов в группе №3 плацебо). В результате 12-недельного лечения выраженность клинических проявлений СДВГ у детей, лечившихся композицией СМД анти-S100 + анти-eNOS, снизилась почти на половину (-48,8%), а у пациентов, получавших СМД анти-S100, более чем на треть (-38,2%), по сравнению с исходным состоянием.

Прием композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS либо СМД анти-S100 оказывал влияние на оба кластера симптомов СДВГ, что подтверждалось динамикой оценок по двум разделам шкалы с ADHDRS-IV-Home Version (Таблица 3). Причем, лечение композицией СМД анти-S100 + анти-eNOS значимо превышало эффективность терапии монопрепаратом СМД анти-S100 по степени воздействия на выраженность проявлений и дефицита внимания, и гиперактивности/импульсивности.

Положительный терапевтический эффект активного препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS и препарата сравнения СМД анти-S100 продемонстрирован также при оценке результатов лечения пациентов по шкале оценки тяжести СДВГ (CGI-ADHR-Severity) (Таблица 4). Почти у четвертой части пациентов группы СМД анти-S100 + анти-eNOS тяжесть заболевания от умеренной снизилась до легкой и даже минимальной, что подтверждалось уменьшением среднего показателя по шкале CGI-ADHR-Severity на 15% через 3 месяца терапии (с 4,0±0,02 до 3,4±0,06; p<0,001). Эффект терапии монопрепаратом СМД анти-S100 был несколько меньше и составил -10% по шкале CGI-ADHR-Severity за 3 месяца (против -5% в группе плацебо).

В анализ безопасности были включены данные всех пациентов, участвовавших в исследовании. В течение всего периода наблюдения отмечалась хорошая, сопоставимая с плацебо, переносимость и активного препарата СМД анти-S100 + анти-eNOS, и препарата сравнения СМД анти-S100. Нежелательные явления были зарегистрированы у одного пациента группы СМД анти-S100 (преходящие в течение четвертой недели исследования головные боли) и у одного пациента группы плацебо (снохождение в течение второго месяца наблюдения). Перечисленные нежелательные явления не были связаны с проводимой терапией. Кроме того, в ходе лечения наблюдались единичные случаи острых респираторных заболеваний, также не связанные с проводимой терапией. Все пациенты исследуемых групп завершили лечение в сроки, установленные протоколом исследования, досрочно выбывших пациентов не было. Отсутствие патологических изменений по данным физикального осмотра пациентов и в ходе повторных анализов лабораторных показателей подтверждали безопасность исследуемой терапии.

По результатам физикального осмотра (ЧСС, САД, ДАД, температура тела) у пациентов не регистрировалось каких-либо патологических изменений во время лечения. Различия в анализируемых показателях по визитам и в сравниваемых группах не достигали статистической значимости и не выходили за рамки физиологически допустимых отклонений. Высокие показатели приверженности терапии дополнительно свидетельствовали как об эффективности, так и безопасности изучаемых препаратов. К концу 3-го месяца приверженность к лечению составила 99,8±1,15% и 98,8±2,25% в группах №1 СМД анти-S100 + анти-eNOS и №2 СМД анти-S100 соответственно (против 74,6±2,54% в группе №3 плацебо).

Таким образом, проведенное исследование продемонстрировало эффективность и безопасность композиции СМД анти-S100 + анти-eNOS и монокомпонентного препарата СМД анти-S100 в лечении детей с СДВГ. Наиболее выраженный терапевтический эффект в результате 12-недельного курса отмечен у комплексного лекарственного средства (СМД анти-S100 + анти-eNOS), что проявлялось положительной динамикой клинических симптоматики у большинства (75%) детей. Композиция СМД анти-S100 + анти-eNOS оказывала корригирующее влияние на оба кластера симптомов СДВГ, в результате чего отмечалась значимая редукция нарушений внимания и проявлений гиперактивности у пациентов с СДВГ.

В процессе проведения исследования были использованы следующие методики и определялись следующие параметры состояния:

(г) обычно не может тихо, спокойно играть или заниматься чем-либо на досуге; (д) часто находится в движении или действует, будто "с моторчиком" (е) часто слишком много говорит Импульсивность (верное утверждение обвести) (ж) часто начинает отвечать, не дослушав вопрос до конца; (з) обычно с трудом дожидается своей очереди в различных ситуациях; (и) часто мешает другим, пристает к окружающим (например, вмешивается в беседы или игры) В. Некоторые симптомы импульсивности, гиперактивности и невнимательности начинают вызывать беспокойство окружающих в возрасте ребенка до семи лет. С. Проблемы, обусловленные вышеперечисленными симптомами, возникают в двух и более видах окружающей обстановки (например, в школе и дома). D. Имеются убедительные сведения о клинически значимых нарушениях в социальных контактах или школьном обучении. Е. Симптомы возникают не только как проявление первазивного расстройства развития (PDD), шизофрении или других психотических расстройств и не могут быть четко объяснены другим психическим расстройством (например, расстройством настроения, тревожным расстройством, диссоциативным расстройством или расстройством личности). Код, основанный на типе Условия Диагноз Выполняется критерий A1 Выполняется критерий A2 314.01 Синдром, сочетающий дефицит внимания и гиперактивность ДА ДА 314.00 Синдром дефицита внимания/гиперактивности, с доминированием невнимания ДА НЕТ 314.01 Синдром дефицита внимания/гиперактивности, с доминированием гиперактивности/импульсивности НЕТ ДА

Шкала оценки СДГВ (ADHDRS-IV-Home Version) (DuPaul G., et al. 1998) (заполняется исследователем со слов законных представителей/родителей) Примечание: Обведите ответ, который лучше всего отражает поведение ребенка, с момента последнего визита   Описание поведения Никогда/Редко Периодически Часто Очень часто 1. Был неспособен удерживать внимание на деталях; из-за небрежности, легкомыслия допускал ошибки в школьных заданиях 0 1 2 3 2. Наблюдались беспокойные движения в кистах и стопах; ерзал на стуле 0 1 2 3 3. С трудом сохранял внимание при выполнении заданий или во время игр 0 1 2 3 4. Покидал свое место в классе и в других ситуациях, когда требуется оставаться на своем месте 0 1 2 3 5. Складывалось впечатление, что ребенок не слушает обращенную к нему речь 0 1 2 3 6. Проявлял бесцельную двигательную активность: бегал, крутился, пытался куда-то залезть, причем в таких ситуациях, когда это неприемлемо 0 1 2 3 7. Был не в состоянии придерживаться предлагаемых инструкций и справиться до конца с выполнением уроков, домашней работы или обязанностей на рабочем месте (не связано с негативным или протестным поведением, неспособностью понять задание) 0 1 2 3 8. Не мог тихо, спокойно играть или заниматься чем-либо на досуге 0 1 2 3 9. Испытывал сложности в организации самостоятельного выполнения заданий и других видов деятельности 0 1 2 3 10. Находился в движении или действует, будто “с моторчиком” 0 1 2 3 11. Избегал вовлечения в выполнение заданий, которые требуют длительного сохранения умственного напряжения (например, школьных заданий, домашней работы) 0 1 2 3 12. Слишком много говорил 0 1 2 3 13. Терял вещи, необходимые в школе и дома (например, игрушки, школьные принадлежности, карандаши, книги) 0 1 2 3 14. Начал отвечать, не дослушав вопрос до конца 0 1 2 3 15. Легко отвлекался на посторонние стимулы 0 1 2 3 16. С трудом ожидал своей очереди 0 1 2 3 17. Проявлял забывчивость в повседневных ситуациях 0 1 2 3 18. Мешал другим, приставал к окружающим (например, вмешивается в беседы или игры) 0 1 2 3 Общий счет Невнимание (сумма всех нечетных пунктов) Гиперактивность/импульсивность (сумма всех четных пунктов)