×
27.05.2014
216.012.c8fc

Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ЗАМЕДЛЕННОГО ТИПА У МОРСКИХ СВИНОК НА МИКОБАКТЕРИИ M.BOVIS

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к области аллергологии и иммунологии и предназначено для оценки влияния иммунобиологических препаратов на кожную реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). Предложен способ моделирования ГЗТ у морских свинок на микобактерии М. bovis. Осуществляют внутрикожное введение альбиносам самкам морских свинок, полученных близкородственным скрещиванием брат х сестра (F), авирулентных микобактерий М. bovis штамм BCG с последующим формированием групп(-ы) животных по размеру воспалительной реакции в ответ на внутрикожное введение микобактерий М. bovis штамм BCG через 30-35 дней. Предлагаемый способ эффективен в изучении механизмов развития ГЗТ и оценке противотуберкулезных препаратов. 2 табл., 5 пр.
Основные результаты: Способ моделирования гиперчувствительности замедленного типа у морских свинок на микобактерии М. bovis, включающий внутрикожное введение альбиносам самкам морских свинок, полученных близкородственным скрещиванием брат x сестра (F), авирулентных микобактерий М. bovis штамм BCG, отличающийся тем, что из совокупности сенсибилизированных животных формируют группу(-ы) животных по размеру воспалительной реакции в ответ на внутрикожное введение микобактерий М. bovis штамм BCG через 30-35 дней.

Изобретение относится к аллергологии и иммунологии, в частности к моделированию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) на микобактерии в организме морских свинок. Предлагаемый способ может быть использован при оценке влияния иммунобиологических препаратов на кожную реакцию ГЗТ; изучении механизмов развития реакций ГЗТ; оценке противотуберкулезных препаратов.

Известен способ моделирования гиперчувствительности замедленного типа у морских свинок [OIE Manual of Diagnostic Test and Vaccines for Terrestrial Animals - 6-th ed. - 2008. - Vol.l. -P. 693], который заключается в том, что животным внутримышечно вводят патогенные микобактерии на физиологическом растворе в минимальной инфицирующей дозе, что приводит к медленному прогрессированию инфекционного процесса.

Недостатком этого способа является эпидемиологическая опасность для персонала, вероятность рассеивания микобактерий в окружающей среде, трудность в подборе минимальной дозы микобактерий, не приводящей к гибели животных ранее чем предполагается проведение основного этапа исследования.

Известен способ моделирования гиперчувствительности замедленного типа у морских свинок [Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов. 36-й доклад. Серия технических докладов 745. ВОЗ. Женева. 1988 г. С.43], который заключается в том, что животным внутримышечно вводят инактивированные микобактерии в адъюванте.

Недостатком данного способа являет развитие ГЗТ на измененные микобактериальные антигены, что снижает специфичность моделирования ГЗТ.

Известен способ моделирования гиперчувствительности замедленного типа у морских свинок, который был выбран за прототип [HBASAC- BCG combined vaccine for intracutaneous injection and preparation method and thereof, №US 7,579,003 B2, Aug. 25, 2009]. Сущность способа заключается во внутрикожном введении авирулентных микобактерии М. bovis штамм BCG на физиологическом растворе. В данном случае антигенный состав используемых аттенуированных микобактерий является близким по отношению к патогенным микобактериям, что обуславливает моделирование ГЗТ, адекватной инфекционному процессу.

Недостатком данного способа является широкая вариабельность кожных реакций ГЗТ в ответ на ППД для млекопитающих. Так, в экспериментальных группах рандинбредных морских свинок вариабельность кожных реакций ГЗТ колеблется: от 12,70% до 26,98%, (диапазон от средних Gv=11-25% до значительных Gv>25% значений), что не учитывается как значимый фактор, который может привести к получению недостоверных результатов, при реализации заявленных задач, а также необходимости перестановки эксперимента. В свою очередь, показатель коэффициент вариации характеризует воспроизводимость результатов эксперимента, в обратной зависимости: чем ниже коэффициент вариации, тем выше воспроизводимость результатов исследования [Г.Ф.Лакин. Биометрия. - М., Высшая школа, 1990. с 50-51].

Технической задачей является повышение воспроизводимости получаемых результатов при моделировании гиперчувствительности замедленного типа у морских свинок на микобактерии М. bovis штамм BCG.

Техническая задача достигается способом моделирования гиперчувствительности замедленного типа у морских свинок на микобактерии, включающим внутрикожное введение альбиносам самкам морских свинок, полученных близкородственным скрещиванием брат х сестра (F2) авирулентных микобактерий М. bovis штамм BCG с последующем, формированием групп(-ы) животных по размеру воспалительной реакции в ответ на внутрикожное введение микобактерии М. bovis штамм BCG, через 30-35 дней.

Основанием предлагаемого способа являются исследования, проведенные на детях, вакцинированных авирулентными микобактериями М. bovis штамм BCG (вакцина BCG), у которых была показана корреляционная зависимость между интенсивностью кожной реакции ГЗТ, развивающейся в ответ на введение туберкулина, и размером поствакцинального рубчика на месте введения микобактерий М. bovis штамм BCG [Клименко Л.И., Полякова Т.С., Бучковская И.Ю./ Оценка качества вакцинации БЦЖ по развитию поствакцинального знака / Запорожский медицинский журнал №1 (70). 2012. С.86-88]. При этом корреляционная зависимость, полученная на детях, предполагает подобную зависимость у лабораторных животных - альбиносов самок морских свинок, полученных близкородственным скрещиванием брат х сестра (F2). Так, проведенные исследования продемонстрировали, что между размером воспалительной реакции, в ответ на внутрикожное введение микобактерий М. bovis штамм BCG, и воспалительной реакцией на внутрикожное введение ППД для млекопитающих имеется положительная корреляционная зависимость, соответствующая 0,85 (р>0,01). В свою очередь, высокий показатель коэффициента корреляции позволяет получать группы животных с близкими значениями воспалительной реакции, в ответ на внутрикожное введение ППД для млекопитающих, при использовании интервальных оценок.

Заявленное изобретение отличается от прототипа тем, что для сенсибилизации количество животных определяют по таблице 1 с учетом частоты (интервала) и после развития состояния ГЗТ, перед проведением исследования осуществляют подбор животных, полученных близкородственным скрещиванием брат х сестра (F2) в группы(-у) по размеру воспалительной реакции на месте введения микобактерий М. bovis штамм BCG, согласно таблице 1.

Реализация предлагаемого способа возможна в двух вариантах.

При реализации первого варианта предполагается использовать количество животных для сенсибилизации не менее 15 голов с использованием 3 номера интервала воспалительной реакции на введение М. bovis штамм BCG и наибольшей частотой интервала - (0,4).

При осуществлении второго варианта предполагается использование всех номеров интервалов, поэтому для сенсибилизации животных используется не менее 100 голов, что обеспечит распределение по всем интервалам воспалительной реакции на введение М. bovis штамм BCG и количество животных не менее 10 голов.

Способ осуществляется следующим образом. Определяют количество животных (альбиносов, самок морских свинок, полученных близкородственным скрещиванием брат x сестра (F2), массой 500-600 г), необходимое для осуществления исследования (при этом n≥6; при n=6, количество животных необходимое для сенсибилизации будет соответствовать 15), по формуле (I):

где:

N - количество животных, необходимое для сенсибилизации;

n - количество животных, необходимое для постановки эксперимента;

f - частота интервала (табличное значение).

Приготавливают суспензию с содержанием количеств мг микобактерий в физиологическом растворе, соответствующем 0,2 мг/ 0,1 см3, рассчитывая количество биомассы микобактерий М. bovis штамм BCG и объем физиологического раствора, необходимые для приготовления требуемого количества суспензии.

Количество биомассы микобактерий М. bovis штамм BCG, необходимое для сенсибилизации морских свинок, рассчитывается по формуле (II).

где:

M - биомасса микобактерии (мг) М. bovis штамм BCG

0,2 - доза микобактерии (мг), необходимая для сенсибилизации одного животного;

N - количество животных, необходимое для сенсибилизации;

Объем физиологического раствора, необходимый для приготовления суспензии, рассчитывается по формуле (III).

где:

V - объем физиологического раствора (см3), необходимый для приготовления суспензии;

0,2 - доза микобактерии (мг), необходимая для сенсибилизации одного животного;

N - количество животных, необходимое для сенсибилизации;

2 - коэффициент перевода расчетной массы микобактерий М. bovis штамм BCG в объем суспензии.

Далее животных внутрикожно в депелированный участок на брюшной стенке сенсибилизируют микобактериями М. bovis штамм BCG. Через 30-35 дней животных нумеруют и на месте введения микобактерии М. bovis штамм BCG, определяют линейные размеры воспалительной реакции, (сумма продольного и поперечного диаметров, деленная на 2), результаты протоколируются и согласно таблице 1 (графа интервалы воспалительных реакций на введение М. bovis штамм BCG) формируется группа(-ы). Данных животных используют для проведения исследования.

Пример выполнения предлагаемого способа.

Пример 1. В работе предполагается проведение исследования на одной группе животных в количестве 10 голов. Расчеты предполагается осуществлять с использованием номера интервала 3.

По таблице 1 (графа частота интервала - f) рассчитывается общее количество животных, необходимое для сенсибилизации. Так, для получения 10 животных, подставляем значение 10 в формулу I, и получаем расчетное значение 25 голов.

Пример 2. Приготавливается суспензия микобактерий М. bovis штамм BCG на физиологическом растворе. Для этого определяют количество мг микобактерий, необходимое для сенсибилизации группы животных (N=25), по формуле (II), в результате получают значение 5 мг. После этого определяют объем физиологического раствора, на котором приготавливается суспензия, по формуле (III), и получают значение 2,5 см3.

Пример 3. Осуществляют внутрикожную сенсибилизацию 25 голов альбиносов самок морских свинок, полученных близкородственным скрещиванием брат х сестра (F2), массой 500-600 гр, в дозе 0,1 см3, в депилированный участок кожи на брюшной стенке.

Пример 4. Через 30-35 дней после сенсибилизации формируют группу животных согласно таблице 1, с значениями воспалительной реакций на введение М. bovis штамм BCG, входящими в интервал 13,0-13,5 мм.

Пример 5. На сформированной группе осуществляется постановка эксперимента.

В таблице 2 приведены результаты вариации аллергических реакций ГЗТ прототипа и предлагаемого способа: группа 1 сформирована случайным образом, без подборки по воспалительной реакции на месте введения микобактерий М. bovis BCG; группа 2 сформирована по размеру воспалительной реакции на внутрикожное введение микобактерий М. bovis BCG.

Из полученных данных видно, что значение коэффициента вариации на дозы ППД для млекопитающих значимо ниже в группе животных, сформированной в соответствии с предлагаемым способом, в сравнении с группой, сформированной по способу-прототипа (р>0,05).

В зависимости от планируемого эксперимента предлагаемый способ предполагает следующие варианты использования.

1. При проведении единичных сравнительных исследований целесообразно использование небольшого количества животных центрального номера интервала 3, обеспечивающего частоту интервала, равную 0,4.

2. При проведении масштабных, в том числе фундаментальных исследований, сравнительных исследований, целесообразным является сенсибилизация не менее 100 голов животных, что обеспечит получение в группах количества животных от 10 и более и все номера интервалов.

Результатом предлагаемого способа является повышение воспроизводимости результатов исследований при оценке влияния иммунобиологических препаратов на кожную реакцию ГЗТ, изучении механизмов развития реакций ГЗТ и оценке противотуберкулезных препаратов.

Таблица 1
Интервалы воспалительной реакции на внутрикожное введение микробактерий M.Bovis штамм BCG и ППД для млекопитающих
Номер интервала Интервалы суммы аллергической реакции на введение ППД для млекопитающих (мм) Интервалы воспалительной реакции на введение М. bovis штамм BCG (мм) Частота интервала ГО
1 38,0-39,5 10,0-10,5 0,1
2 40,0-42,5 11,0-12,5 0,2
3 43,0-45,5 13,0-13,5 0,4
4 46,0-48,5 14,0-15,5 0,2
5 49,0-50,5 16,0-16,5 0,1
Таблица 2
Вариация значений аллергической туберкулиновой реакции ГЗТ в группах морских свинок, сформированных различными способами
Группа 1 Группа 2
жи 25 ME 5 ME 1 ME Сумм. 25 ME 5 ME 1 ME Сумм.
вот
ного
(мм) (мм) (мм) р-я (мм) (мм) (мм) (мм) р-я (мм)
1 17,0 11,0 10,5 38,5 14,5 13,0 11,0 38,5
2 21,5 15,5 13,0 50,0 15,5 12,5 11,0 39,0
3 17,5 13,5 11,0 42,0 16,0 12,5 11,0 39,5
4 15,5 16,0 14,0 45,5 15,5 12,5 10,0 38,0
5 16,0 15,0 10,5 41,5 17,0 11,0 10,5 38,5
6 17,0 18,5 13,0 48,5 16,0 12,0 11,5 39,5
7 20,0 16,5 15,5 52,0 16,5 12,5 10,5 39,5
8 17,5 17,0 12,5 47,0 15,5 15,0 9,0 39,5
9 19,0 15,0 13,0 47,0 15,0 14,0 10,5 39,5
10 16,5 12,5 10,5 39,5 18,0 12,0 9,5 39,5
Gv 10,56 14,73 13,77 9,60 6,35 8,74 7,29 1,45

Примечание: Gv- коэффициент вариации

Сумм, р-я - суммарная реакция

Способ моделирования гиперчувствительности замедленного типа у морских свинок на микобактерии М. bovis, включающий внутрикожное введение альбиносам самкам морских свинок, полученных близкородственным скрещиванием брат x сестра (F), авирулентных микобактерий М. bovis штамм BCG, отличающийся тем, что из совокупности сенсибилизированных животных формируют группу(-ы) животных по размеру воспалительной реакции в ответ на внутрикожное введение микобактерий М. bovis штамм BCG через 30-35 дней.
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-5 из 5.
20.06.2014
№216.012.d3a4

Спин-меченое производное кинуренина и способ его получения

Изобретение относится к новому спин-меченому производному кинуренина, обладающего высокой фотостабильностью и имеющего структурную формулу: Описан также способ его получения. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 ил., 1 пр.
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519951
Дата охранного документа: 20.06.2014
10.09.2015
№216.013.7898

Спин-меченое производное кинуренина и способ его получения

Изобретение относится к спин-меченому производному кинуренина с удлиненным линкером между кинурениновой и радикальной частями молекулы, обладающему высокой фотостабильностью и имеющему следующую структурную формулу I, а также к способу его получения, характеризующемуся тем, что к суспензии...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002562461
Дата охранного документа: 10.09.2015
20.09.2015
№216.013.7bc2

Способ получения гемостатического средства на основе окисленной целлюлозы с использованием микроволнового воздействия (варианты)

Изобретение относится к производству монокарбоксицеллюлозы для получения гемостатических материалов. Согласно изобретению предложены два варианта получения гемостатического средства на основе окисленной целлюлозы под воздействием микроволнового излучения. Вариант 1 осуществляется следующим...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002563279
Дата охранного документа: 20.09.2015
14.06.2019
№219.017.8321

Способ оценки сенсибилизирующих свойств микобактерий и микобактериальных антигенов

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки сенсибилизирующих свойств микобактерий и микобактериальных антигенов. Для этого вводят в организм морских свинок-альбиносов или морских свинок с белыми боками материал, содержащий микобактерии или...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002691398
Дата охранного документа: 13.06.2019
29.02.2020
№220.018.073c

Способ оценки сенсибилизирующих свойств атипичных микобактерий

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для оценки сенсибилизирующих свойств атипичных микобактерий. Для этого осуществляют подкожное введение 2-3 морским свинкам-альбиносам, или морским свинкам с белыми боками, исследуемого вида атипичных микобактерий в дозе 1...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002715220
Дата охранного документа: 26.02.2020
Показаны записи 1-10 из 46.
27.02.2013
№216.012.29bb

Способ повышения эффективности антибиотиков к резистентным e.coli

Способ по изобретению включает детоксикацию и полимеризацию 150-200 мг/мл испытуемых антибиотиков вначале 0,15±0,05% раствором глутарового альдегида при 38-40°С в течение 2-3 суток, а затем 0,1% раствором этония или 0,1% раствором алкилдиметилбензиламмония или 0,1% раствором Биопага - Д при...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002476210
Дата охранного документа: 27.02.2013
10.03.2013
№216.012.2d49

Способ повышения бактерицидной активности и обеспечения вирусоцидного и фунгицидного действия антибиотиков

Способ по изобретению предусматривает проведение детоксикации и полимеризации антибиотиков 0,15±0,05% раствором глутарового альдегида при 38-40°С в течение 3-5 суток, а затем 0,1% раствором алкилдиметилбензиламмония при 38-40°С в течение 3-5 суток. Способ обеспечивает эффективное бактерицидное,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477124
Дата охранного документа: 10.03.2013
10.03.2013
№216.012.2d54

Способ повышения активности стрептомицина на стрептомицино-резистентные микобактерии туберкулеза

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой способ повышения активности стрептомицина на стрептомицино-резистентные микобактерии туберкулеза, заключающийся в том, что детоксикацию и полимеризацию стрептомицина проводят вначале с помощью 0,15±0,05% раствора...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477135
Дата охранного документа: 10.03.2013
10.03.2013
№216.012.2d67

Способ профилактики транспортного стресса у животных

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности к способам профилактики стресса у животных при их транспортировке. Способ предусматривает подачу на электроды, закрепленные на лобной и затылочной областях черепа постоянного тока, плавно нарастающего в течение 2 мин от 0 до 6,5...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002477154
Дата охранного документа: 10.03.2013
10.06.2013
№216.012.460b

Устройство для очистки семян

Изобретение относится к разделению сыпучих смесей частиц с различным коэффициентом трения. Оно может быть использовано в сельском хозяйстве при очистке семян от трудновыделимых засорителей. Устройство содержит раму, колеблющийся стан с закрепленной в нем фрикционной плоскостью, привод,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002483511
Дата охранного документа: 10.06.2013
10.06.2013
№216.012.4643

Кормовая биологически активная добавка для молодняка свиней

Изобретение относится к кормопроизводству, в частности получению кормовых добавок, нормализующих обмен веществ и повышающих неспецифическую резистентность организма у животных. Биологически активная кормовая добавка для молодняка свиней содержит отходы культурального производства, полученные...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002483567
Дата охранного документа: 10.06.2013
10.06.2013
№216.012.48ad

Способ получения износостойких покрытий

Изобретение относится к области гальванотехники. Способ включает микродуговое оксидирование электроосажденного слоя железоалюминиевого покрытия стальной детали в течение 60-90 минут при плотности электрического тока 20-40 А/дм с подачей на поверхность детали под давлением через распылитель,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002484185
Дата охранного документа: 10.06.2013
27.06.2013
№216.012.50dd

Способ электролитического осаждения сплава железо-алюминий

Изобретение относится к области электролитического осаждения твердых, износостойких покрытий, в частности железоалюминиевых покрытий, применяемых для восстановления и упрочнения поверхностей деталей. Способ включает осаждение из электролита, содержащего кг/м: хлористый алюминий 50-600, железо...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002486294
Дата охранного документа: 27.06.2013
10.07.2013
№216.012.53ff

Способ химической мелиорации серых лесных почв

Изобретение относится к области сельского хозяйства и мелиорации. В способе дефекат вносят совместно с сульфатом магния в соотношении 5:1 и заделывают смесь в почву. Способ позволяет уменьшить почвенную кислотность, улучшить минеральное питание растений, повысить урожайность возделываемых...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002487106
Дата охранного документа: 10.07.2013
27.07.2013
№216.012.5920

Способ получения микрокапсул пестицидов методом осаждения нерастворителем

Изобретение относится в области микрокапсулирования, в частности микрокапсулирования пестицидов. Способ заключается в физико-химическом методе осаждения с использованием двух осадителей - бутанола и этанола. Оболочкой микрокапсул является натрийкарбоксиметилцеллюлоза. Изобретение обеспечивает...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002488437
Дата охранного документа: 27.07.2013
+ добавить свой РИД