СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АСКОРБАТА КАЛЬЦИЯ В БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВКАХ МЕТОДОМ ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИИ

Изобретение относится к области количественного определения аскорбата кальция с выраженными антиоксидантными свойствами в биологически активных добавках (БАД). Метод определения - вольтамперометрия.

В настоящее время в клинической практике широко используются препараты кальция, такие как хлорид кальция и карбонат кальция. Кальций играет важную роль в различных физиологических процессах организма. Установлено, что ионы кальция необходимы для осуществления процесса передачи нервных импульсов и активности некоторых ферментов. В настоящее время БАД на основе кальция немного. Аскорбат кальция стимулирует защитные силы организма, улучшает усвоение железа из пищи, играет важную роль в образовании и поддержании функций соединительных тканей и костей. Фактически аскорбат кальция - это сочетание витамина С и кальция, который в присутствии первого легче усваивается организмом. Кроме этого аскорбат кальция благотворно влияет на состояние сосудов, усвоение многих минералов, регулирует выработку важных гормонов, помогает быстрее справиться с повреждениями кожи.

Аскорбат кальция является веществом с выраженными антиоксидантными и психотропными свойствами. Он представляет собой комплекс кальция, где в качестве биоактивного лиганда является аскорбиновая кислота.

На фиг. 1 представлена структурная формула аскорбата кальция.

Выявлено, что от содержания чистого компонента - аскорбата кальция в биологически активных добавках зависит качество БАД по проявлению антиоксидантных и психотропных свойств. В связи с этим актуальным является контроль содержания аскорбата кальция в БАД.

В настоящее время из методик количественного определения аскорбата кальция в БАД используют метод комплексонометрического титрования Ca²⁺ в аммонийном буфере с индикатором эриохромом черным Т (Государственная фармакопея СССР XI-М.: Медицина, 1987. Вып. 1.-336 С.). Недостатком метода является то, что данный способ не позволяет проводить количественное определение аскорбата кальция в БАД с необходимой чувствительностью.

Наиболее близким по технической сущности является электрохимическое определение аскорбата кальция в БАД методом капиллярного электрофореза (Система капиллярного электрофореза. 09AR03.01.11-1/www.lumex.ru).

Метод измерения основан на разбавлении пробы жидкого БАД и определении массовой концентрации анализируемого компонента - аскорбата кальция методом капиллярного электрофореза в варианте мицеллярной электрокинетической хроматографии. Детектирование аскорбата кальция проводят по собственному поглощению при длине волны 254 нм. Диапазон измеряемых концентраций аскорбата кальция от 10 до 1000 мг/дм³.

Несмотря на хорошую чувствительность и селективность определения аскорбата кальция в БАД метод капиллярного электрофореза в варианте мицеллярной электрокинетической хроматографии имеет ряд недостатков: оборудование и растворители имеют высокую стоимость, для проведения специальной пробоподготовки требуются дорогостоящие реактивы.

Для обеспечения контроля качества БАД путем определения аскорбата кальция необходимо разработать вольтамперометрическую методику количественного определения аскорбата кальция в БАД.

Новая техническая задача - увеличение чувствительности и экспрессности способа определения аскорбата кальция в таблетированной форме БАД методом вольтамперометрии.

Способ измерений молярной концентрации аскорбата кальция в пробах БАД основан на измерении вольтамперометрического сигнала окисления енольной группы аскорбата кальция в БАД, используя метод добавок, в диапазоне концентраций от 1,5·10^-5 до 6,7·10^-4 моль/дм³.

Определению не мешают другие функциональные группы органических соединений БАД (-СOOH, -СН₂OH, -OLi).

Поставленная задача достигается тем, что аскорбат кальция переводят из таблетированной формы в раствор и проводят вольтамперометрическое определение. Проводят анодную вольтамперометрию на индикаторном стеклоуглеродном электроде при потенциале +0,32 В относительно насыщенного хлорид-серебряного электрода на фоне хлористого калия 0,1 моль/дм³ при постоянно-токовой форме развертки потенциала со скоростью 30 мВ/с с областью определяемых содержаний аскорбата кальция от 1,5·10^-5 до 6,7·10^-4 моль/дм³.

Градуировочная зависимость тока окисления аскорбата кальция от его концентрации в ячейке в условиях постоянно токовой вольтамперометрии на стеклоуглеродном электрод (СУЭ) приведена на фиг.2

Область прямолинейной зависимости тока окисления аскорбата кальция от его концентрации в электрохимической ячейке достаточна для применения методики при оценке количественного содержания аскорбата кальция в БАД.

Значения пределов повторяемости, воспроизводимости и критического диапазона измерений концентрации аскорбата кальция при доверительной вероятности Р=0,95 представлена в таблице 1.

Пример. Определение аскорбата кальция в таблетках БАД «Аскорбат комплекс».

Одну таблетку растирают в ступке до получения порошка. Порошок взвешивают и переносят в колбу 50 см³, добавляют 10-15 см³ буферного раствора хлористого калия 0,1 моль/дм³ и нагревают на водяной бане при температуре 45-50°С в течение 10 минут. После этого раствор фильтруют через бумажный фильтр, который промывают буфером два раза по 5 мл. Затем в кварцевый стаканчик вместимостью 20 мл вносят 10,0 мл раствора фонового электролита в растворе хлористого калия 0,1 моль/дм³ и помещают в электрохимическую ячейку вольтамперометрического анализатора (ТА-2, г. Томск). Опускают в раствор электроды: индикаторный - стеклоуглеродный электрод, вспомогательный и электрод сравнения - насыщенные хлорид-серебряные электроды. Регистрацию фоновой линии проводят в постояннотоковом режиме съемки при линейной скорости развертки потенциала 30 мВ/с. Отсутствие пиков на вольтамперограмме и воспроизводимые кривые свидетельствовали о чистоте фона. После получения удовлетворительных кривых фона, вносят аликвоту фильтрата аскорбата кальция объемом 0,1 см³. Перемешивают раствор 10 секунд газом азотом, успокаивают 20 секунд и снимают вольтамперограмму в тех же условиях. Анодный пик регистрируют при потенциале +0,32 В. Концентрацию аскорбата кальция оценивают по высоте анодного пика методом добавок аттестованных смесей аскорбата кальция по общепринятой методике.

Предложенный способ количественного определения аскорбата кальция отличается простотой, не требует больших трудозатрат, значительного количества реактивов и отличается высокой экспрессностью и чувствительностью.

Предложенный способ может быть использован для количественного определения аскорбата кальция в БАД и лекарственных формах