СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНКСИОЛИТИЧЕСКИМ И АНТИДЕПРЕССИВНЫМ ДЕЙСТВИЕМ, НА ОСНОВЕ ЭКСТРАКТА СЕМЯН ЛОТОСА ОРЕХОНОСНОГО (Nelumbo nucifera)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к созданию средства на основе экстракта семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera), обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием.

По данным ВОЗ, тревожно-депрессивные состояния, являясь широко распространенным проявлением стресс-обусловленных заболеваний центральной нервной системы, встречаются более чем у 120 млн. человек во всем мире. По данным ряда исследователей, в зависимости от предъявляемых критериев, тревога как патологическое состояние встречается в 5-25%, а смешанные тревожно-депрессивные расстройства встречаются у 13% населения [3]. Рост тревожных и тревожно-депрессивных состояний, связанных с увеличением стрессогенных воздействий в современном обществе угрожает не только психическому здоровью населения, но и провоцирует также развитие психосоматических заболеваний. Хорошо известно, что практически всегда психические эквиваленты этого психического расстройства сочетаются с соматическими жалобами, чаще всего с нарушениями функции сердечно-сосудистой, иммунной и эндокринной систем. Поэтому поиск путей коррекции указанных патологических состояний является одной из важнейших задач современной психофармакологии. Несмотря на то, что современная медицина научилась справляться с состоянием повышенной тревожности и депрессией, существуют проблемы терапевтической резистентности к известным психотропным препаратам и формирования серьезных осложнений психофармакотерапии аффективных расстройств. Средства растительного происхождения могут сыграть существенную роль в решении этих проблем.

В настоящее время известны следующие анксиолитические и антидепрессивные средства природного происхождения: «Деприм» и «Негрустин» (зверобой продырявленный); «Гипер» (зверобой продырявленный, белокудренник, боярышник, витамин С, витамин В, витамин В₆, витамин В₁₂, магния карбонат); «Пассилат» (страстоцвет, боярышник, валериана, витамин B₁, витамин В₆, витамин B₁₂). Близким к предлагаемому изобретению является средство, обладающее анксиолитическим и антидепрессивным действием из высушенных измельченных надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia) или их водных или водно-этанольных экстрактов (патент РФ №2354397). Однако, идентичной совокупности признаков нами не обнаружено в патентной и научно-медицинской литературе.

Задачей настоящего изобретения является создание отечественного средства на растительной основе с анксиолитическим и антидепрессивным действием, обладающего широким спектром терапевтической активности. Впервые установлено, что в качестве средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием, можно использовать водно-спиртовой экстракт семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera).

Лотос орехоносный применяют в народной медицине с давних времен. Основные биологически активные вещества экстракта семян лотоса - это флавоноиды (кверцетин, изокверцетин, нелумбозид), лейкоантоцианиды (лейкоцианидин, лейкодельфинидин), алкалоиды (нуцефирин). Плоды лотоса входят в состав более чем двухсот препаратов китайской и индийской медицины. Экстракт семян Лотоса орехоносного обладает гепатопротективным и антиоксидантным действием. Лотос орехоносный обладает мочегонным, жаропонижающим, гипогликемическим видами активности. В литературе отсутствуют данные о применении водно-спиртового экстракта семян Лотоса орехоносного в качестве средства, обладающего анксиолитическим действием.

Способ приготовления экстракта семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera), полученного путем водно-спиртового экстрагирования 50%-ным этиловым спиртом при соотношении 3:1 в аппарате Сокслета (согласно протоколу WHO CG-04) [4]:

500 г семян высушивали, измельчали до порошкообразного состояния с размером частиц 0,2 мм и подвергали водно-спиртовому экстрагированию 50%-ным этиловым спиртом в аппарате Сокслета, затем отгоняли спирт в ротационном испарителе, при следующем соотношении компонентов: мас.%

Выход активного вещества (суммы алкалоидов) экстракта - около 7% вязкого смолообразного вещества.

Решение задачи настоящего изобретения - использование экстракта семян Лотоса орехоносного по предлагаемому назначению - стало возможным благодаря экспериментальному выявлению его новых свойств, а именно способности нормализовать функции ЦНС за счет анксиолитической и антидепрессивной активности.

Пример 1.

Был проведен химический анализ полученного экстракта семян Лотоса орехоносного. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии изучен состав алкалоидов, содержащихся в экстракте. Согласно проведенному нами химическому анализу основным активными компонентами семян Лотоса орехоносного при используемом способе экстрагирования были следующие алкалоиды (в % соотношении):

Дигидроремерин 27,14

Ремерин 21,87

Нуциферин 14,73

Лиензинин 14,25

Изолиензинин 11,02

Неферин 6,21

Процианидин 4,78

Оценку анксиолитической активности экстракта семян Лотоса орехоносного проводили на 92 белых беспородных половозрелых крысах-самках по изучению особенностей поведения в «Суок-тесте». Животные содержались в виварии при свободном доступе к воде и пищи.

Суок-тест представляет собой «гибрид» нескольких поведенческих моделей, что позволяет вести регистрацию широкого диапазона поведенческих реакций, от локомоции и исследовательской активности до вегетативных маркеров поведения. Как совершенно новая поведенческая модель, Суок-тест рекомендуется в психофармакологии для скрининга психотропных эффектов препаратов [2]. Об анксиолитической активности экстракта судили по следующим показателям: латентному периоду выхода из центра; времени, проведенном в темном и светлом отсеках Суок-теста; количеству и продолжительности грумингов; числу падений вниз; числу соскальзывания задних лап; числу остановок возле границы между черным и белым отсеком. Дополнительными показателями, характеризующими условно-рефлекторную, эмоциональную и смещенную активность, служили число посещенных сегментов; стойки; число и продолжительность остановок; число исследовательских заглядываний вниз; количество направленных в стороны движений головой при вытянутом положении тела.

Раствор экстракта семян Лотоса орехоносного (0,5%-ный), приготовленный на физиологическом растворе, вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 50 мг/кг массы тела. Животные были разделены на три группы: I - интактный контроль, II - животные, получавшие внутрижелудочно физиологический раствор, III - животные, получавшие внутрижелудочно раствор экстракта семян Лотоса орехоносного. Животные получали раствор экстракта семян Лотоса орехоносного и физиологический раствор ежедневно в одно и то же время с 10 до 12 часов. Экстракт семян Лотоса орехоносного и физиологический раствор вводили животным в течение 1, 2, 3, 4 и 6 недель и соответственно подразделяли животных на 1-, 2-, 3-, 4- и 5-ю группы. Каждую группу животных тестировали в Суок-тесте однократно через 30 минут после последнего введения растворов.

Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием t критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Различия считали достоверными при р≤0,05.

Проведенные нами исследования (Табл.1, 2) показали, что экстракт семян Лотоса орехоносного приводит к снижению времени латентности выхода из центра; уменьшению количества соскальзывания лап; уменьшению дефекации, начиная с первой недели внутрижелудочного введения экстракта семян Лотоса орехоносного по сравнению с интактными животными. При этом у животных, получавших физиологический раствор, происходит повышение уровня тревожности в ответ на процедуру внутрижелудочного введения (манипуляции с животными, взятие в руки), особенно на первой и второй неделях введения физиологического раствора. Это проявляется в снижение двигательной и исследовательской активности, повышении времени груминга и длительности остановок, появлении падений и особенно в светлом отсеке.

Тогда как экстракт семян Лотоса орехоносного, проявляет анксиолитическое действие, при этом поведенческие реакции изменяются не только относительно реакций животных, получающих физиологический раствор, но и относительно интактных крыс, что указывает на эффективность экстракта семян Лотоса орехоносного в качестве анксиолитического средства.

Пример 2.

Оценку антидепрессивного действия экстракта семян Лотоса орехоносного проводили на 24 белых беспородных половозрелых крысах-самках в тесте «Порсолт» (плавательный тест «отчаяния»). Животные содержались в виварии при свободном доступе к воде и пищи.

Тест «Порсолт», рекомендуемый при проведении психофармакологических исследований с целью выявления антидепрессивных свойств фармакологических веществ [1]. Установка представляет собой стеклянный цилиндр d=20 см и высотой 40 см, на 2/3 заполненный водой (t=25±1°С). Животное помещаются в цилиндр и регистрируются следующие параметры: время активного и пассивного (дрейф+полная неподвижность) плавания, латентный период (ЛП) до проявления первой иммобильности и первого движения, продолжительность иммобильности. Время наблюдения: 3 мин.

Раствор экстракта семян Лотоса орехоносного (0,5%-ный), приготовленный на физиологическом растворе, вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 100 мг/кг массы тела. Животные были разделены на три группы: I - интактный контроль, II - животные, получавшие внутрижелудочно физиологический раствор, III - животные, получавшие внутрижелудочно раствор экстракта семян Лотоса орехоносного. Животные получали раствор экстракта семян Лотоса орехоносного и физиологический раствор ежедневно в одно и то же время с 10 до 12 часов. Продолжительность введения экстракта семян Лотоса орехоносного и физиологического раствора составила 8 недель. Каждую группу животных тестировали в тесте «Порсолт» однократно через 30 минут после последнего введения растворов.

Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием t критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Различия считали достоверными при р≤0,05.

Проведенные нами исследования (Табл. 3) показали, что экстракт семян Лотоса орехоносного приводит к достоверному снижению латентного периода до первого движения и первой иммобильности, а также изменению соотношения «активное/пассивное плавание» за счет увеличения активного компонента по сравнению с интактными животными, что говорит о повышении на фоне введения экстракта семян Лотоса орехоносного физической выносливости в «аверсивной» водной среде и о проявлении им выраженных антидепрессивных свойств.

Таким образом, как показывают полученные нами экспериментальные данные, экстракт семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera) обладает выраженным анксиолитическим и антидепрессивным действием и может быть рассмотрен как основа для создания нового лекарственного препарата с последующим применением в клинической практике.

Литература

1. Андреева Н.И. Методические указания по изучению антидепрессивной активности фармакологических веществ / Н.И. Андреева // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей редакцией чл.-корр. РАМН, профессора Р.У. Хабриева. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - С.244-252.

2. Калуев А.В. Суок-тест - новая поведенческая модель тревоги / А.В. Калуев, П. Туохимаа // Нейронауки. - 2005. - №1. - С.17-23.

3. Santana L. A review of studies concerning treatment adherence of patients with anxiety disorders / L. Santana, L.F. Fontenelle // Patient Prefer Adherence. - 2011. - №5. - P.427-439.

4. WHO: protocol CG-04. Preparation of alcoholic extract for bioassay and phytochemical studies (APJF/IP, 1001 A). Geneva, World Health Organization, 1983.