Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ОЦЕНКИ ВЛИЯНИЯ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ БЕРЕМЕННОЙ НА ПРОНИКНОВЕНИЕ ПОВЫШЕННОГО КОЛИЧЕСТВА АРАХИДОНОВОЙ КИСЛОТЫ В ПУПОВИННУЮ КРОВЬ НОВОРОЖДЕННОГО

Цель изобретения - разработать способ оценки, подтверждающий, что обострение герпес-вирусной инфекции у беременной в период гестации становится причиной повышенного проникновения через фетоплацентарный барьер ворсинок плаценты арахидоновой кислоты в пуповинную кровь, что приводит к повреждению эндотелия кровеносных сосудов пуповины перекисями жирных кислот.

Арахидоновая жирная кислота является главным субстратом для синтеза эйкозаноидов у человека (Климов А.Н., Никульчева Н.Г., 1999). Она находится в фосфолипидах клеточных мембран и составляет около 1% свободных жирных кислот плазмы, циркулируя в виде комплекса с альбумином. Свободная арахидоновая кислота быстро метаболизируется, превращаясь в эйкозаноиды.

Арахидоновая кислота поступает в организм с пищей и частично синтезируется, что обеспечивает ее постоянное присутствие в организме человека. В составе липидов арахидоновая кислота находится в печени, головном мозгу. В фосфолипидах надпочечников арахидоновая кислота составляет около 20% от всех жирных кислот.

Арахидоновой кислоте принадлежит роль в регуляции лиганд-рецепторных взаимодействий, активности ионных каналов и регуляторных ферментов в качестве внутриклеточного мессенджера через взаимодействие с клеточными жирно-кислотно-связывающими белками. При активации клетки стимулы, изменяющие типы и геометрическую ориентацию фосфолипидов, и активность фосфолипазы А₂, приводит к освобождению арахидоновой кислоты с последующим метаболизмом ее по циклооксигеназному или липоксигеназному пути (Сальмон Д.А., Хигс Г.А., 1998). Таким стимулом могут быть продукты свободнорадикального окисления липидов (Самойлова Е.В.и др.,2010).

Особое внимание уделяется метаболизму арахидоновой кислоты в тромбоцитах и эндотелии сосудов. Под воздействием циклооксигеназы в эндотелии сосудов образуются циклические эндоперекиси и простогландины, которые превращаются в тромбоксан A₂ (TXA₂) (Сальмон Д.А., Хигс Г.А., 1998). Тромбоксан А₂ вызывает агрегацию тромбоцитов, тромбообразование, сужение сосудов, тканевой отек.

Освобождаемые при ферментном окислении арахидоновой кислоты свободные радикалы являются дополнительными факторами воспаления (Хорст А., 1982). Таким образом, увеличение содержания арахидоновой кислоты в крови плода или новорожденного становится сильным повреждающим фактором, особенно для эндотелия сосудов, поскольку происходит формирование перекисей жирных кислот, повреждающих стенку кровеносных сосудов.

Прототипом в исследовании мы избрали данные М.Т. Луценко и Н.А. Ишутиной (патент №2405155, зарегистрированный в Государственном реестре изобретений РФ 27 ноября 2010 г.). Авторами разработан способ определения содержания в периферической крови беременных арахидоновой кислоты при обострении герпес-вирусной инфекции, когда при титре антител к вирусу герпеса 1:3200 количество арахидоновой кислоты составляет 4,36±0,03%, при титре антител к вирусу герпеса 1:6400 - 5,12±0,03%, а при титре антител к вирусу герпеса 1:12800 - 5,64±0,02%.

Нарастание арахидоновой кислоты в крови беременной при обострении герпес-вирусной инфекции может явиться угрозой для ее проникновения через фетоплацентарный барьер в кровь плода. Поэтому в данной заявке, в отличие от предыдущей, мы представляем результаты анализа крови новорожденного и отмечаем:

1. При обострении герпес-вирусной инфекции у беременной в период гестации возбудитель проникает в пуповинную кровь, что регистрируется высоким титром антител к вирусу герпеса у новорожденных, родившихся от матерей, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции в период гестации.

2. Фетоплацентарный барьер ворсинок плаценты пропускает в кровь плода при беременности, осложненной герпес-вирусной инфекцией, более чем в контроле, количество арахидоновой кислоты.

3. У новорожденных в кровеносных сосудах пуповины при повышенном содержании арахидоновой кислоты в крови эндотелий сосудов повреждается, что регистрируется высокой интенсивностью реакции на перекиси жирных кислот.

Заявленный способ имеет следующие приемы:

Цель достигается определением с помощью газовой хроматографии (Газовый хроматограф «Кристалл 2000М» ЗАО СКВ «Хроматек», Россия) процентного содержания арахидоновой кислоты в пуповинной крови новорожденного от матерей, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции в период гестации (25 новорожденных) и у 20 новорожденных от матерей, не болевших в период гестации (контроль).

Титр антител к вирусу герпеса в пуповинной крови новорожденного определяли иммуноферментным методом на анализаторе «Stat-Fax-2100» (USA) с использованием наборов «Вектор-Бест» (Новосибирск).

Исследования проводились на базе акушерского отделения клиники ФГБУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г.и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 №266.

Гистохимические исследования (фигура 1, 2), отражающие повреждения эндотелия кровеносных сосудов пуповины новорожденного, проводились по методу Винклера-Шульце (Лили Р., 1969). Количественное содержание перекисей регистрировалось методом компьютерной цитофотометрии в условных единицах.

Исследования показали в пуповинной крови новорожденных, родившихся от матерей, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции в период гестации, при титре антител к вирусу герпеса 1:3200 содержание арахидоновой кислоты было 5,72±0,38%, а при титре антител к вирусу герпеса 1:12800 в пуповинной крови новорожденных содержание арахидоновой кислоты нарастало до 6,63±0,34% (контроль - 5,24±0,21%). У новорожденных с повышенным содержанием в пуповинной крови арахидоновой кислоты в эндотелии кровеносных сосудов появлялась интенсивная реакция на перекиси жирных кислот - 45,0±0,8 усл. ед. (контроль - 15,8±0,65 усл. ед.).

Таким образом, при обострении герпес-вирусной инфекции во время гестации возбудитель проникает через фетоплацентарный барьер ворсинок плаценты в пуповинную кровь плода, и у новорожденного отмечается нарастание процентного содержания в крови арахидоновой кислоты, приводящее к повреждению эндотелия пуповинных сосудов, что создает угрозу развития в них тромбоза.

На фигуре 1 изображена реакция на перекиси жирных кислот в эндотелии артерии пуповины новорожденного, родившегося от матери, не болевшей в период гестации. Интенсивность реакции по Винклеру-Шульце 15,8±0,65 усл. ед. Содержание арахидоновой кислоты в пуповинной крови - 5,24±0,21%.

На фигуре 2 изображена реакция на перекиси жирных кислот по Винклеру-Шульце в эндотелии артерии пуповины новорожденного (титр антител к вирусу герпеса - 1:12800), мать которого перенесла в период гестации обострение герпес-вирусной инфекции. Интенсивность реакции на перекиси жирных кислот 45,0±0,8 усл. ед. (контроль - 15,8±0,65 усл. ед.). В пуповинной крови содержится 6,63±0,34% арахидоновой кислоты.

Литература

1. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. Руководство для врачей. - Санкт-Петербург. Москва. Харьков. Минск: «Питер», 1999. - 504 с.

2. Лили Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. - М.: изд. «Мир», 1969. - С.177.

3. Луценко М.Т., Ишутина Н.А. Патент №2405155, зарегистрированный в Государственном реестре изобретений РФ 27 ноября 2010 г.

4. Сальмон Д.А., Хигс Г.А. Эйкозаноиды. - М.: «Медицина», 1998. - С.113-125.

5. Самойлова Е.В., Пиркова А.А. и др. Влияние липидов ЛПНП на активность секреторной фосфолипазы А₂ группы IIА// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2010 - т.150, №7. - С.45-47.

6. Хорст А. Молекулярные основы патогенеза болезней /пер. с польского/. М.: Медицина, 1982. - 456 с.