Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ С ВЫСОКОЙ ЧАСТОТОЙ СПОНТАННОГО ОПУХОЛЕОБРАЗОВАНИЯ

Изобретение относится к медицине, а именно к способам лечения экспериментальных животных с высокой частотой спонтанного опухолеобразования, и может быть использовано самостоятельно или в комбинации с современными методами противоопухолевой терапии.

Известен способ лечения мышей линии СЗН, предрасположенных к развитию рака молочной железы, при котором добавление в питание животных синтетического антиоксиданта 2-меркаптоэтиламина увеличило среднюю продолжительность жизни на 26%. Возникновение опухолей наблюдалось в более отдаленные сроки, однако частота развития спонтанных опухолей не изменилась [Harman D. Free-radical theory of aging: increasing the functional life span // Ann. N.Y. Acad. Sci. - 1994. - Vol.717. - P.1-15].

Задачей изобретения является повышение эффективности лечения экспериментальных животных с высокой частотой спонтанного опухолеобразования.

Поставленная задача решается тем, что в заявляемом способе используется комплексный фитоадаптогенный препарат фитомикс-40 (фм-40) на основе компонентов 40 экстрактов растений, включая женьшень, родиолу розовую, элеутерококк, лимонник, аралию, заманиху, зверобой, календулу, подорожник, калган, бессмертник, сосновые и березовые почки, толокнянку, эвкалипт, можжевельник, солодку, ромашку, чагу, валериану, спорыш, пустырник, душицу, мяту перечную, одуванчик, пижму, толокнянку, тысячелистник, хвощ полевой, чабрец, череду, кориандр, шиповник, калину, рябину черноплодную, боярышник, клюкву, бруснику, чернику, смородину черную [патент РФ №2099410; Шейченко В.И., Бочарова О.А., Шейченко О.П., Бочаров Е.В., Барышников А.Ю., Быков В.А. Аналитические возможности метода ЯМР для определения компонентов препарата фитомикс-40. // Заводская лаборатория. - 2006. - Т.72. - №8. - с.15-23].

Заявляемый способ осуществляли следующим образом.

Исследование проводили на 230 мышах-самцах линии СВА с высокой частотой спонтанного образования гепатокарцином. В исследование были включены опытная группа, состоящая из 70 мышей, и 2 контрольные группы (I группа - 90 мышей и II группа - 70 мышей). Опытные мыши получали 10% раствор препарата фм-40 с питьевой водой. Лечение осуществляли препаратом фм-40, который применяли с шестимесячного возраста мышей (периода возникновения первых гепатокарцином) до их естественной гибели трехнедельными курсами с недельным интервалом. Мыши I контрольной группы получали в качестве питья воду, мыши II контрольной группы получали 3% раствор этанола в лечебном режиме.

В каждой группе забивали 10-13 мышей в возрасте 22 месяцев. Остальные мыши находились под наблюдением до их естественной гибели. Определяли объем опухолей (мм³) в печени, который вычисляли по стандартной формуле. Гистологическое исследование печени проводили на парафиновых срезах. Наличие лимфоцитарной инфильтрации и деструкции опухолевых участков в печени животных опытных групп являлось благоприятным прогностическим фактором течения опухолевого процесса [Оllе D., Loewe R., Yu P., Mihm M. Focus on TILs: Prognostic significance of tumor infiltrating lymphocytes in human melanoma // Cancer Immun. - 2009. - Vol.9. - №3. - p.245-251; Wansom D., Light E., Thomas D., Worden F., Prince M., Urba S., Chepeha D., Kumar В., Cordell K., Eisbruch A., Taylor J., Moyer J., Bradford C., D'Silva N. Infiltrating lymphocytes and human papillomavirus-16-associated oropharyngeal cancer. // Laryngoscope. - 2012. - Vol.122. - №1. - р.121-127].

Для оценки качества жизни определяли вес мышей, наличие алопеции, двигательную активность животных оценивали в тесте «открытого поля» в автоматическом режиме. Принимая во внимание, что цитокины ИЛ-6 и ИЛ-10 участвуют в патогенезе кахексии животных, повышая уровень С-реактивного белка и усиливая расщепление мышечных белков, а также ИЛ-6 оказывает негативное влияние на функциональную активность волосяных фолликулов, определяли уровни ИЛ-6 и ИЛ-10 в сыворотке крови [Krzystek-Korpacka M., Matusiewicz M., Diakowska D., Grabowski K. et al. Acute-phase response proteins are related to cachexia and accelerated angiogenesis in gastroesophageal cancers. // Clin. Chem. Lab. Med. - 2008. - Vol.46. - №3. - p.359-364; Deans D., Tan В., Ross J. et al. Cancer cachexia is associated with the IL10-1082 gene promoter polimorphism in patients with gastroesophageal malignancy. // Am. J. Clin. Nutr. - 2009. - Vol.89. - №4. - p.1164-1172; Biswas S., Pinson D., Bronshteyn I., LeVine S. IL-6 deficiency allows for enhanced therapeutic value after bone marrow transplantation across a minor histocompatibility barrier in the twitcher (globoid cell leukodystrophy) mouse. // J. Neurosci. Res. - 2001. - Vol.65. - №4. - p.298-307].

Уровень экспрессии лейкоцитарных интегринов LFA-1 (CD11a) и Mac-1 (CD11b) на лимфоцитах периферической крови определяли с использованием метода проточной цитофлуометрии. Содержание цитокинов ИЛ-6 и ИЛ-10 в сыворотке крови определяли с использованием иммуноферментного анализа. Среднюю продолжительность жизни (СПЖ) и медиану выживаемости определяли по методу Каплан-Мейера. Статистический анализ результатов проводили с использованием однофакторного дисперсионного анализа ONE-WAY ANOVA программы "STATISTICA-6,0», достоверными считали различия при Р<0,05.

Результаты определения изучаемых параметров в контрольных группах не имели различий, поэтому мыши двух контрольных групп были объединены в одну контрольную группу (n=160).

Мыши опытной группы имели полноценный шерстный покров в отличие от мышей контрольной группы, у которых в 16,6% случаев наблюдалась алопеция. Эти данные коррелировали со снижением уровня сывороточных цитокинов ИЛ-6 и ИЛ-10 в опытной группе по сравнению с контрольной группой (114,8±12,3 пг/мл и 46,8±5,3 пг/мл) и (139,1±6,6 пг/мл и 60,9±3,9 г/мл) соответственно, Р<0,05. Экспрессия лейкоцитарных интегринов LFA-1 и Мас-1 в опытной группе была выше значений в контрольной группе и составила (40,7±1,9% и 11,5±1,1%) и (35,4±1,6% и 7,8±1,0%) соответственно, р≤0,05. Эти данные свидетельствуют об усилении иммунореактивности животных под воздействием препарата фм-40 при его применении в профилактическом режиме. Двигательная активность мышей опытной группы в возрасте 31 месяца соответствовала двигательной активности мышей контрольной группы в возрасте 24 месяцев. СПЖ мышей контрольной группы составила 22 месяца.

У мышей опытной группы, получавших препарат фм-40, выявлено снижение частоты возникновения спонтанных опухолей на 30% по сравнению с мышами контрольной группы (Р≤0,001). Количество опухолей на мышь у мышей опытной группы сравнимо с контрольной группой (1,6±0,2 и 2,7±0,3 соответственно, Р=0,06). Средний объем опухолевой массы на мышь в опытной группе был ниже на 82,3% по сравнению с контрольной группой (185,1±67,4 мм³ и 1043,1±230,0 мм³ соответственно, Р<0,05).

Вес мышей, получавших препарат фм-40, был выше, чем в контрольной группе, и составил 34,6±0,5 г и 24,4±0,2 г соответственно, Р<0,01. Мыши опытной группы имели полноценный шерстный покров в отличие от мышей контрольной группы, у которых в 16,6% случаев наблюдалась алопеция. Уровни сывороточных цитокинов ИЛ-6 и ИЛ-10 у мышей опытной группы были ниже значений у мышей в контрольной группе и составили (111,4±10,5 пг/мл и 45,1±5,6 пг/мл) и (139,1±6,6 пг/мл и 60,9±3,9 пг/мл) соответственно, Р<0,05. Экспрессия лейкоцитарных интегринов LFA-1 и Mac-1 у мышей опытной группы, получавших препарат фм-40, была выше этих значений в контрольной группе и составила (42,3±2,9% и 12,8±1,7%) и (35,4±1,6% и 7,8±1,0%) соответственно, Р<0,05.

СПЖ мышей опытной группы, получавших фм-40, увеличилась по сравнению с животными контрольной группы на 28,2% (28,2 и 22 месяца соответственно, Р=0,001).

Медиана выживаемости мышей опытной группы увеличилась на 33,6% по сравнению с контрольной группой и составила 28,2 и 21,1 месяцев соответственно, Р≤0,001.

Изобретение иллюстрируется фигурами 1-2.

На фиг.1 представлен участок трабекулярно-ацинарной гепатокарциномы низкой степени дифференцировки у мыши контрольной группы (гистология печени, окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×400, стрелки).

На фиг.2 представлен участок лимфоцитарной инфильтрации гепатокарциномы у мыши опытной группы, получавшей препарат фм-40 (окраска гематоксилином и эозином, увеличение ×400, стрелки).

Технический результат заявляемого способа заключается в увеличении средней продолжительности жизни, медианы выживаемости животных, в снижении частоты возникновения спонтанных опухолей и улучшении качества их жизни.