×
20.05.2013
216.012.3f44

Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ ИРИСА МЕЧЕВИДНОГО (I. ENSATA THUNB.) IN VITRO

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к способу получения растений-регенерантов ириса мечевидного (I.ensata Thunb.) in vitro. Способ включает стерилизацию бутонов при условии, что бутоны, смоченные в 96%-ном этиловом спирте, обжигают в пламени спиртовки, обеззараживают в 0,1%-ном растворе сульфохлорантина в течение 20 минут, затем части трубки околоцветника делят на фрагменты 3×3 мм и высаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 3-5 мкМ НУК в сочетании с 4-8 мкМ БАП. Затем культивируют и укореняют. При этом через 30 суток культивирования образовавшиеся зачатки побегов с флоральными элементами пересаживают на питательные среды с БАП 20 мкМ и через 30 суток культивирования побеги укореняют на среде Мурасиге-Скуга с НУК 3 мкМ. Изобретение позволяет получать растения-регенеранты прямым методом, минуя каллусную культуру, с высоким процентом укоренения. 3 ил., 2 табл.
Основные результаты: Способ получения растений-регенерантов ириса мечевидного (I.ensata Thunb.) in vitro, включающий стерилизацию бутонов, заключающийся в том, что бутоны, смоченные в 96%-ном этиловом спирте, обжигают в пламени спиртовки, обеззараживают в 0,1%-ном растворе сульфохлорантина в течение 20 минут, затем части трубки околоцветника делят на фрагменты 3×3 мм и высаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 3-5 мкМ НУК в сочетании с 4-8 мкМ БАП, затем культивируют и укореняют, отличающийся тем, что через 30 суток культивирования образовавшиеся зачатки побегов с флоральными элементами пересаживают на питательные среды с БАП 20 мкМ и через 30 суток культивирования побеги укореняют на среде Мурасиге-Скуга с НУК 3 мкМ.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию органов и тканей растений, и может быть использовано в цветоводстве для повышения коэффициента размножения, оздоровления посадочного материала, а также в селекционной практике для создания новых улучшенных сортов I.ensata.

Известен способ получения растений-регенерантов I.ensata, согласно которому в качестве эксплантов используют молодые побеги. Их культивируют на среде Мурасиге-Скуга, дополненной гормонами и сахарозой. Наблюдают индукцию двух видов каллуса: зеленого и белого. Из зеленого каллуса были получены побеги. Введение активированного угля в питательную среду положительно влияло на образование корней у этих побегов (Yabuya Т, Ikeda Y., Adachi Т. (1991) In vitro propagation of Japanese garden iris iris ensata Thunb. // Euphytica 57, P.77-82).

Недостатком данного способа (аналога) является следующее. Получение каллусной ткани с последующей индукцией органогенеза или соматического эмбриогенеза не пригодно для использования при микроразмножении сортов растений, так как повышается вероятность сомаклональной изменчивости исходного материала.

Наиболее близким является способ получения растений-регенерантов I.ensata на основе индукции развития почек в эксплантах околоцветник - завязь прямым путем, минуя каллусообразование. Экспланты культивировали на питательных средах Мурасиге-Скуга, дополненных фитогормонами НУК(α-нафтилуксусная кислота) и БАП (6-бензиламинопурин) в количестве 0-5 мг/л. Отмечена высокая способность к побегообразованию у данного типа эксплантов. Укоренить побеги автору не удалось (Kawase К, Mizutani Н, Yoshioka М, Fukuda S (1995) Shoot formation on floral organs of Japanese iris in vitro // Journal of the Japanese Society for Horticultural Science 64, P.143-8).

Недостатками данного способа является отсутствие способности к укоренению у полученных побегов I.ensata.

Наиболее близким является способ прямой регенерации флоральных элементов в ткани трубки околоцветника I.ensata. Бутоны, смоченные в 96% этиловом спирте, обжигали в пламени спиртовки. Следующий этап обеззараживания проводили в 0,1% растворе сульфохлорантина в течение 20 минут. Части цветка делили на фрагменты 3×3 мм. В качестве эксплантов использовали фрагменты трубки околоцветника. Экспланты высаживали на питательные среды на основе MS (по прописи Мурасиге и Скуга), дополненные фитогормонами: 1-нафтилуксусной кислотой (НУК) 3-5 мкМ и 6-бензиламинопурином (БАП) 4-8 мкМ. Данным способом трубка околоцветника I.ensata способна регенерировать флоральные элементы (Тихомирова Л.И. Особенности индукции морфогенеза из различных фрагментов цветка ириса в культуре in vitro // Turczaninowia. 2010. - №13 (3). - C.147-151).

Недостатками данного способа (прототипа) является отсутствие способности к размножению и укоренению полученных флоральных элементов I.ensata, a также отсутствие подтверждения идентичности материнским экземплярам.

Задачей изобретения является создание способа получения растений-регенерантов, идентичных материнским растениям I.ensata, способных к дальнейшему размножению и укоренению.

Сущность изобретения

Способ получения растений-регенерантов I.ensata, заключающийся в том, что образование побегов осуществляется непосредственно из ткани экспланта, минуя стадию каллусообразования, зачатки побегов с флоральными элементами разделяют и пересаживают на питательные среды с БАП 20 мкМ и полноценные вегетативные побеги укореняют на среде с НУК 3 мкМ.

Способ получения растений-регенерантов ириса мечевидного (I.ensata Thunb.) in vitro, заключающийся в том, что бутоны, смоченные в 96% этиловом спирте, обжигают в пламени спиртовки, обеззараживают в 0,1% растворе сульфохлорантина в течение 20 минут, затем части трубки околоцветника делят на фрагменты 3×3 мм и высаживают каждый фрагмент на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 3-5 мкМ НУК в сочетании с 4-8 мкМ БАП, затем культивируют и укореняют, а через 30 суток культивирования образовавшиеся зачатки побегов с флоральными элементами пересаживают на питательные среды с БАП 20 мкМ и через 30 суток культивирования побеги укореняют на среде Мурасиге-Скуга с НУК 3 мкМ.

Способ обеспечивает высокий процент выхода генетически стабильных регенерантов. Для подтверждения идентичности материнским экземплярам проводят анализ методом RAPD полногеномной ДНК.

Способ реализуют следующим образом.

Получение растений-регенерантов I.ensata осуществляют в два этапа, в качестве эксплантов используют фрагменты трубки околоцветника.

1 этап. Цветки берут в фазе бутонизации (VII этап органогенеза), когда они плотно закрыты листочками обертки. Стерилизацию материала проводят в условиях ламинар-бокса. Бутоны цветка, смоченные в 96% этиловом спирте, обжигают в пламени спиртовки, далее проводят обеззараживание в 0,1% растворе сульфохлорантина в течение 20 минут. Подобный способ обеспечивает на 100% стерильность и жизнеспособность материала. Части трубки околоцветника делят на фрагменты размером не более 3×3 мм и помещают на питательные среды.

Питательные среды готовят по прописи Мурасиге и Скуга, содержащие 30 г/л сахарозы. В них вводят фитогормоны в разных концентрациях: 3-5 мкМ НУК в сочетании с 4-8 мкМ БАП, всего девять вариантов сред (таблица 1) pH среды доводят до 5,8-5,9 и добавляют 0,6% агара. Среды разливают в пластиковые контейнеры по 30 мл или в культуральные флаконы по 10 мл. Автоклавируют приготовленные питательные среды в течение 20 мин при 120°С. Экспланты культивируют в условиях фотопериода 16/8 часов свет/темнота при 24-26°С.

В первые две недели культививования in vitro все экспланты увеличиваются в размерах и приобретают зеленую окраску. Далее еще через две недели в тканях экспланта развиваются зачатки вегетативных побегов, у которых вместо примордиев первых листьев формируются структуры, похожие на доли околоцветника - флоральные элементы. Со временем эти структуры приобретают характерную для цветков данного сорта окраску (Фиг.1).

2 этап. Для получения вегетативных побегов I.ensata из фрагментов трубки околоцветника готовят питательные среды. Зачатки побегов с флоральными элементами пересаживают на питательные среды (используются среды Мурасиге-Скуга или Гамборга B5), содержащие 20 мкМ БАП (таблица 2). Этап, во время которого из эксплантов формируются вегетативные побеги, характеризуется как промежуточный. Через 30 дней регенерируют полноценные побеги с зелеными листьями. В результате данным способом через 60 суток получают полноценные вегетативные побеги I.ensata в количестве 5-8 штук на один эксплант (Фиг.2), которые укореняют на среде Мурасиге-Скуга с НУК 3 мкМ. А после этапа укоренения получают растения-регенеранты, идентичные материнским экземплярам. Для подтверждения идентичности растений-регенерантов и материнских растений I.ensata проводят анализ с помощью ПЦР (Фиг.3).

Необходимым условием клонального микроразмножения является стабильное воспроизводство исходного генотипа. Однако соблюдение этого условия вызывает ряд трудностей, т.к. биологически активные компоненты питательных сред способны вызвать генетические изменения в клетках, что приводит к генетической вариабельности полученных регенерантов. Методом RAPD-анализа полногеномной ДНК отличий между материнскими экземплярами I.ensata и растениями-регенерантами, полученными методом прямой регенерации побегов из ткани экспланта трубки околоцветника, не обнаружено.

Способом получения растений-регенерантов ириса мечевидного (I.ensata Thunb.) in vitro получают побеги в количестве 5-8 штук на один эксплант, способные к дальнейшему размножению и укоренению. Высокий процент укоренения до 100% достигается на средах Мурасиге и Скуга, дополненных 3 мкМ НУК.

Таблица 1
Пути морфогенеза I.ensata в культуре in vitro в зависимости от состава питательной среды и типа экспланта
Количество гормонов в мкМ и их соотношение Тип экспланта
трубка околоцветника
1БАП 1 НУК (1:1) контроль -
4БАП 3 НУК (1,3:1) РФЭ, геммогенез
4БАП 4 НУК (1:1) РФЭ, геммогенез
4БАП 5 НУК (1:1,25) РФЭ, геммогенез
6БАП 3 НУК (2:1) РФЭ, геммогенез
6БАП 4 НУК (1,5:1) РФЭ, геммогенез
6БАП 5 НУК (1,2:1) РФЭ, геммогенез
8БАП 3 НУК (2,6:1) РФЭ, геммогенез
8БАП 4 НУК (2:1) РФЭ, геммогенез
8БАП 5 НУК (1,6:1) РФЭ, геммогенез
Примечание. Прочерк означает отсутствие регенерации у эксплантов, РФЭ - рост флоральных элементов.

Таблица 2
Содержание БАП мкМ в питательных средах на этапе 1 Содержание БАП мкМ в питательных средах этапа 2
5 7,5 10 20
4 гибель экспланта гибель экспланта гибель экспланта активный гемогенез
6 гибель экспланта гибель экспланта гибель экспланта активный гемогенез
8 гибель экспланта гибель экспланта гибель экспланта активный гемогенез
1 гибель экспланта гибель экспланта гибель экспланта гибель экспланта
Зависимость формирования вегетативных побегов из вторичных эксплантов от содержания БАП в питательной среде

Способ получения растений-регенерантов ириса мечевидного (I.ensata Thunb.) in vitro, включающий стерилизацию бутонов, заключающийся в том, что бутоны, смоченные в 96%-ном этиловом спирте, обжигают в пламени спиртовки, обеззараживают в 0,1%-ном растворе сульфохлорантина в течение 20 минут, затем части трубки околоцветника делят на фрагменты 3×3 мм и высаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 3-5 мкМ НУК в сочетании с 4-8 мкМ БАП, затем культивируют и укореняют, отличающийся тем, что через 30 суток культивирования образовавшиеся зачатки побегов с флоральными элементами пересаживают на питательные среды с БАП 20 мкМ и через 30 суток культивирования побеги укореняют на среде Мурасиге-Скуга с НУК 3 мкМ.
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ ИРИСА МЕЧЕВИДНОГО (I. ENSATA THUNB.) IN VITRO
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ ИРИСА МЕЧЕВИДНОГО (I. ENSATA THUNB.) IN VITRO
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ ИРИСА МЕЧЕВИДНОГО (I. ENSATA THUNB.) IN VITRO
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 21-30 из 32.
10.04.2015
№216.013.3ee9

Способ размножения копеечника чайного (hedysarum theinum krasnob.)

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения копеечника чайного, где вызревшие простерилизованные семена копеечника чайного (Hedysarum theinum Krasnob.) высаживают на питательные среды Мурасиге-Скуга для введения в культуру ткани,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547593
Дата охранного документа: 10.04.2015
27.04.2015
№216.013.461d

Набор синтетических олигонуклеотидов для выявления видовой принадлежности вереска обыкновенного (calluna vulgaris (l.) hull.)

Изобретение относится к области молекулярной генетики, геносистематики и фармакогнозии и предназначено для выявления видовой принадлежности вереска обыкновенного (Calluna vulgaris (L.) Hull.). Предложен набор синтетических олигонуклеотидов для ПЦР с фрагментом ITS2 ядерной ДНК, включающий...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002549453
Дата охранного документа: 27.04.2015
10.06.2015
№216.013.521f

Способ получения высших сульфидов титана

Изобретение может быть использовано в неорганической химии при получении высших сульфидов титана TiS, TiS и TiS. Синтез высших сульфидов титана проводят в режиме самораспространяющегося высокотемпературного синтеза (СВС) в вакууме 10 атм. В качестве исходных веществ используют порошкообразный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002552544
Дата охранного документа: 10.06.2015
10.06.2015
№216.013.547b

Способ получения монофазной интерметаллической тонкой пленки

Изобретение относится к области физики низкоразмерных структур, а именно к способу получения монофазной интерметаллической тонкой пленки с наноразмерной структурой на стеклянной подложке, и может быть использовано в различных высокотехнологичных областях промышленности и науки для создания...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002553148
Дата охранного документа: 10.06.2015
10.07.2015
№216.013.5dc1

Набор синтетических олигонуклеотидов для детектирования количества копий гена бета-глюкуронидазы в трансгенных растениях

Изобретение относится к области биохимии, в частности к набору синтетических олигонуклеотидов для детектирования количества копий бета-глюкуронидазы в трансгенных растениях, включающему проведение полимеразной цепной реакции с помощью праймеров и разрушаемой пробы. Изобретение позволяет...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002555542
Дата охранного документа: 10.07.2015
10.08.2015
№216.013.6e0d

Способ лечения ожогов кисти и профилактики послеожоговых рубцовых деформаций и синдактилий

Изобретение относится к медицине, а именно к комбустиологии и хирургии, и может быть использовано при лечении ожогов кисти и профилактики послеожоговых рубцовых деформаций и синдактилий. Для этого проводят хирургическую обработку ожоговых поверхностей кисти с последующим нанесением...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002559731
Дата охранного документа: 10.08.2015
10.08.2015
№216.013.6e22

Способ лечения ожогов кисти и профилактики послеожоговых рубцовых деформаций и синдактилий

Изобретение относится к медицине, а именно к комбустиологии, хирургии, и может быть использовано при лечении ожогов кисти и профилактики послеожоговых рубцовых деформаций и синдактилий. Для этого осуществляют хирургическую обработку ожоговых поверхностей кисти с последующим нанесением...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002559752
Дата охранного документа: 10.08.2015
10.12.2015
№216.013.985b

Способ получения лекарственного растительного сырья лапчатки белой (potentilla alba l.) в условиях гидропоники

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений-регенерантов лапчатки белой (Potentilla alba L.) в условиях гидропоники, включающий использование черенков материнских растений, размножение и выращивание, где в качестве эксплантов используются...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002570623
Дата охранного документа: 10.12.2015
27.01.2016
№216.014.bca7

Набор синтетических олигонуклеотидов для выявления видовой принадлежности володушки многожильчатой (bupleurum multinerve dc.)

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к набору синтетических олигонуклеотидов для выявления видовой принадлежности володушки многожильчатой (Bupleurum multinerve DC.), включающий проведение полимеразной цепной реакции с фрагментом ITS2 ядерной ДНК. При этом для...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002573937
Дата охранного документа: 27.01.2016
13.01.2017
№217.015.68f2

Способ эндоскопического лечения острых термохимических повреждений слизистой оболочки трахеи и/или бронхов

Изобретение относится к медицине, хирургии. Выполняют процедуру санации трахео-бронхиального дерева с покрытием области повреждения методом аппликации композицией, включающей в качестве действующего вещества коллаген человека 1 типа, в качестве контрастирующего вещества 0,2% водный раствор...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002591544
Дата охранного документа: 20.07.2016
Показаны записи 21-30 из 38.
10.04.2015
№216.013.3ee9

Способ размножения копеечника чайного (hedysarum theinum krasnob.)

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения копеечника чайного, где вызревшие простерилизованные семена копеечника чайного (Hedysarum theinum Krasnob.) высаживают на питательные среды Мурасиге-Скуга для введения в культуру ткани,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547593
Дата охранного документа: 10.04.2015
27.04.2015
№216.013.461d

Набор синтетических олигонуклеотидов для выявления видовой принадлежности вереска обыкновенного (calluna vulgaris (l.) hull.)

Изобретение относится к области молекулярной генетики, геносистематики и фармакогнозии и предназначено для выявления видовой принадлежности вереска обыкновенного (Calluna vulgaris (L.) Hull.). Предложен набор синтетических олигонуклеотидов для ПЦР с фрагментом ITS2 ядерной ДНК, включающий...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002549453
Дата охранного документа: 27.04.2015
10.06.2015
№216.013.521f

Способ получения высших сульфидов титана

Изобретение может быть использовано в неорганической химии при получении высших сульфидов титана TiS, TiS и TiS. Синтез высших сульфидов титана проводят в режиме самораспространяющегося высокотемпературного синтеза (СВС) в вакууме 10 атм. В качестве исходных веществ используют порошкообразный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002552544
Дата охранного документа: 10.06.2015
10.06.2015
№216.013.547b

Способ получения монофазной интерметаллической тонкой пленки

Изобретение относится к области физики низкоразмерных структур, а именно к способу получения монофазной интерметаллической тонкой пленки с наноразмерной структурой на стеклянной подложке, и может быть использовано в различных высокотехнологичных областях промышленности и науки для создания...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002553148
Дата охранного документа: 10.06.2015
10.07.2015
№216.013.5dc1

Набор синтетических олигонуклеотидов для детектирования количества копий гена бета-глюкуронидазы в трансгенных растениях

Изобретение относится к области биохимии, в частности к набору синтетических олигонуклеотидов для детектирования количества копий бета-глюкуронидазы в трансгенных растениях, включающему проведение полимеразной цепной реакции с помощью праймеров и разрушаемой пробы. Изобретение позволяет...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002555542
Дата охранного документа: 10.07.2015
10.08.2015
№216.013.6e0d

Способ лечения ожогов кисти и профилактики послеожоговых рубцовых деформаций и синдактилий

Изобретение относится к медицине, а именно к комбустиологии и хирургии, и может быть использовано при лечении ожогов кисти и профилактики послеожоговых рубцовых деформаций и синдактилий. Для этого проводят хирургическую обработку ожоговых поверхностей кисти с последующим нанесением...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002559731
Дата охранного документа: 10.08.2015
10.08.2015
№216.013.6e22

Способ лечения ожогов кисти и профилактики послеожоговых рубцовых деформаций и синдактилий

Изобретение относится к медицине, а именно к комбустиологии, хирургии, и может быть использовано при лечении ожогов кисти и профилактики послеожоговых рубцовых деформаций и синдактилий. Для этого осуществляют хирургическую обработку ожоговых поверхностей кисти с последующим нанесением...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002559752
Дата охранного документа: 10.08.2015
10.12.2015
№216.013.985b

Способ получения лекарственного растительного сырья лапчатки белой (potentilla alba l.) в условиях гидропоники

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений-регенерантов лапчатки белой (Potentilla alba L.) в условиях гидропоники, включающий использование черенков материнских растений, размножение и выращивание, где в качестве эксплантов используются...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002570623
Дата охранного документа: 10.12.2015
27.01.2016
№216.014.bca7

Набор синтетических олигонуклеотидов для выявления видовой принадлежности володушки многожильчатой (bupleurum multinerve dc.)

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к набору синтетических олигонуклеотидов для выявления видовой принадлежности володушки многожильчатой (Bupleurum multinerve DC.), включающий проведение полимеразной цепной реакции с фрагментом ITS2 ядерной ДНК. При этом для...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002573937
Дата охранного документа: 27.01.2016
13.01.2017
№217.015.68f2

Способ эндоскопического лечения острых термохимических повреждений слизистой оболочки трахеи и/или бронхов

Изобретение относится к медицине, хирургии. Выполняют процедуру санации трахео-бронхиального дерева с покрытием области повреждения методом аппликации композицией, включающей в качестве действующего вещества коллаген человека 1 типа, в качестве контрастирующего вещества 0,2% водный раствор...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002591544
Дата охранного документа: 20.07.2016
+ добавить свой РИД