ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРИДИНА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В КАЧЕСТВЕ БЫСТРО ДИССОЦИИРУЮЩИХСЯ АНТАГОНИСТОВ ДОПАМИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ 2

Область, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к (1-бензилпиперидин-4-ил)-(пиридин-2-ил)аминам, которые представляют собой быстро диссоциирующиеся антагонисты допаминовых рецепторов 2, к способам получения этих соединений, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения в качестве активного ингредиента. Эти соединения, благодаря тому что они обладают антипсихотическим действием и не оказывают побочного действия на двигательную функцию организма, могут найти свое применение в медицине для лечения или предупреждения расстройств центральной нервной системы, например шизофрении.

Предшествующий уровень техники

В WO2007/001975 и WO96/18628 описаны (1-бензилпиперидин-4-ил)-(6-цианопиридин-2-ил)амины в качестве промежуточных соединений, используемых для получения соединений, которые обладают антагонистической активностью по отношению к гистамину H3 и активностью, направленной против ВИЧ. Как было неожиданно обнаружено, соединения согласно изобретению, обладают антагонистической активностью по отношению к допаминовому рецептору D2.

Описание изобретения

Шизофрения представляет собой тяжелое и хроническое психическое заболевание, которым страдает приблизительно 1% населения. Клинические симптомы этого заболевания проявляются относительно рано и возникают, в основном, в подростковом возрасте или в период полового созревания. Симптомы шизофрении обычно подразделяются на позитивные симптомы, включая галлюцинации, бред и дезорганизованное мышление, и негативные симптомы, включая социальное отчуждение, эмоциональное уплощение, бедность речи и неспособность испытывать удовольствие. Кроме того, пациенты с шизофренией страдают нарушением познавательной способности, такой как нарушение внимания и памяти. Этиология такого заболевания до сих пор неясна, однако была высказана гипотеза, что в основе симптомов шизофрении лежит нарушение действия нейромедиаторов. Одной из наиболее часто рассматриваемых гипотез является допаминергическая гипотеза, которая утверждает, что за позитивные симптомы, наблюдаемые у пациентов с шизофренией, ответственна гиперактивность в переносе допамина. Эта гипотеза основана на наблюдении того факта, что лекарственные средства, усиливающие действие допамина, такие как амфетамин или кокаин, могут индуцировать психоз, а также на существовании корреляции между клиническими дозами антипсихотических средств и их активностью в блокировании рецепторов допамина D2. Все имеющиеся в продаже антипсихотические средства оказывают терапевтическое действие на позитивные симптомы посредством блокирования допаминового рецептора D2. Очевидно, что помимо клинической эффективности антипсихотических средств, большинство побочных эффектов, вызываемых этими средствами, таких как экстрапирамидальные симптомы (ЭПС) и поздняя дискинезия, также ассоциируется с блокированием допамина. В большинстве случаев такие опасные для здоровья побочные эффекты ассоциируются с приемом типичных антипсихотических средств или антипсихотических средств первого ряда (например, галоперидол). Менее выраженные побочные эффекты возникают при приеме нетипичных антипсихотических средств или антипсихотических средств второго ряда (например, рисперидона, оланзапина), и даже фактически отсутствуют при приеме клозапина, который рассматривается как прототип нетипичного антипсихотического средства. Из различных теорий, предлагаемых для объяснения более редких случаев появления ЭПС, наблюдаемых при приеме нетипичных антипсихотических средств, особое внимание заслуживает теория, появившаяся в последние пятнадцать лет, а именно гипотеза мультирецепторов. Она появилась в результате исследований по связыванию с рецепторами, которые показали, что многие нетипичные антипсихотические средства, помимо их взаимодействия с допаминовыми рецепторами D2, взаимодействуют с различными другими рецепторами нейромедиаторов, а в частности с серотониновыми рецепторами 5-HT2, тогда как типичные антипсихотические средства, такие как галоперидол, с большей селективностью связываются с рецепторами D2. В последние годы эта теория была поставлена под сомнение, поскольку все основные нетипичные антипсихотические средства полностью захватывают рецепторы серотонина 5-HT2 при клинически релевантных дозах, но отличаются тем, что они индуцируют побочное действие на двигательные функции. В качестве альтернативы гипотезе мультирецепторов Kapur и Seeman («Does fast dissociation from the dopamine D2 receptor explain the action of atypical antipsychotics?: A new hypothesis», Am. J. Psychiatry 2001, 158: 3 p.360-369) высказали предположение, что нетипичные антипсихотические средства могут отличаться от типичных антипсихотических средств скоростью их диссоциации от допаминовых рецепторов D2. Быстрая диссоциация от рецептора D2 должна придавать антипсихотическому средству большую адаптацию к физиологическому переносу допамина, что стимулирует антипсихотическое действие, не вызывая побочного действия на двигательную функцию. Эта гипотеза, в частности, подтверждается при применении клозапина и кветиапина. Эти два лекарственных средства имеют наибольшую скорость диссоциации от допаминовых рецепторов D2, а поэтому они представляют наименьший риск индуцирования ЭПС у человека. И наоборот, типичные антипсихотические средства, ассоциирующиеся с высокой частотой возникновения ЭПС, являются типичными антагонистами, которые имеют наименьшую скорость диссоциации от допаминовых рецепторов D2. Поэтому идентификация новых лекарственных средств исходя из их скорости диссоциации от рецептора D2, очевидно, является надежной стратегией в разработке новых нетипичных антипсихотических средств. Другой целью является объединение таких свойств, как быстрая диссоциация, с селективностью к допаминовым рецепторам D2. Считается, что профиль множества рецепторов для современных нетипичных антипсихотических средств является причиной возникновения других побочных эффектов, таких как увеличение массы тела и диабет. Такой подход к поиску селективных антагонистов D2 не применялся уже в течение нескольких лет, но авторы настоящего изобретения уверены, что использование таких селективных соединений в клиниках позволит уменьшить частоту возникновения метаболических расстройств, ассоциированных с действием современных нетипичных антипсихотических лекарственных средств.

Задачей настоящего изобретения является получение новых соединений, которые представляют собой быстро диссоциирующиеся антагонисты допаминового рецептора 2, которые имеют преимущественный фармакологический профиль, описанный выше, а в частности оказывают незначительное побочное действие на двигательную функцию и в незначительной степени взаимодействуют или почти не взаимодействуют с другими рецепторами, что приводит к снижению риска развития метаболических расстройств.

В настоящем изобретении эта задача достигается новыми соединениями формулы (I):

и их фармацевтически приемлемыми солями, сольватами и стереоизомерными формами,

где R представляет собой водород или С_1-6алкил;

R¹ представляет собой фенил; фенил, замещенный 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена, циано, С_1-4алкила, С_1-4алкилокси, перфторС_1-4алкила и перфторС_1-4алкилокси; тиенил; тиенил, замещенный 1 или 2 заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена и С_1-4алкила; С_1-4алкил; или С_1-4алкил, замещенный гидроксилом, С_3-8циклоалкилом или С_5-7циклоалкенилом;

R² представляет собой водород или С_1-6алкил;

каждый из R³, R⁴, R⁵ и R⁶ независимо представляет собой водород, галоген, С_1-4алкил, трифторметил, циано или OR⁷;

R⁷ представляет собой водород, С_1-6алкил, С_3-8циклоалкил, С_3-8циклоалкилС_1-4алкил или перфторС_1-4алкил;

при условии, что R⁶ не является циано, если R¹ представляет собой фенил, а R³, R⁴ и R⁵ представляют собой водород.

Соединения согласно изобретению представляют собой быстро диссоциирующиеся антагонисты рецептора D2. Такое свойство делает соединения согласно изобретению особенно подходящими для их применения в качестве лекарственного средства для лечения или предупреждения шизофрении, шизофреноформного расстройства, шизоаффективного расстройства, бреда, кратковременного психотического расстройства, разделяемого психотического расстройства, психотического расстройства, вызываемого общим патологическим процессом, психотического расстройства, индуцированного употреблением лекарственных средств, психотического расстройства неясной этиологии; психоза, ассоциированного с деменцией; тяжелого депрессивного расстройства, дистимии, предменструальной дисфории, депрессивного расстройства неясной этиологии; биполярного расстройства I, биполярного расстройства II, циклотимического расстройства, биполярного расстройства неясной этиологии; расстройства настроения, вызываемого общим патологическим процессом, расстройства настроения, индуцированного употреблением лекарственных средств, расстройства настроения неясной этиологии; генерализованного тревожного состояния, обсессивно-компульсивного расстройства, панического расстройства, расстройства, ассоциированного с сильным стрессом, расстройства, ассоциированного с посттравматическим стрессом, умственной отсталости; глубокого нарушения развития; расстройства, связанного с дефицитом внимания, расстройства, связанного с дефицитом внимания/гиперактивностью, дизруптивного расстройства поведения; личностного расстройства параноидального типа, личностного расстройства шизоидного типа, личностного расстройства шизотипического типа; тиков, синдрома Туретта; зависимости от лекарственных средств; расстройств, вызываемых злоупотреблением наркотиков; расстройств, вызываемых «синдромом отмены»; трихокриптомании.

Специалистом в данной области могут быть выбраны нужные соединения исходя из экспериментальных данных, представленных ниже в «Экспериментальной части». В настоящее изобретение входит любое из этих соединений.

К первой группе соединений относятся соединения формулы (I), где R, R³, R⁵ и R⁶ представляют собой водород, а R⁴ представляет собой трифторметил.

Ко второй группе соединений относятся соединения формулы (I), где R, R³, R⁵ и R⁶ представляют собой водород, а R⁴ представляет собой циано.

К третьей группе соединений относятся соединения формулы (I), где R, R³, R⁴ и R⁶ представляют собой водород, а R⁵ представляет собой циано.

К четвертой группе соединений относятся соединения формулы (I), где R, R⁴, R⁵ и R⁶ представляют собой водород, а R³ представляет собой циано.

К пятой группе соединений относятся соединения формулы (I), где R² представляет собой водород или метил.

Из соединений формулы (I) и их стереоизомерных форм наибольший интерес представляют, например:

[1-(3,4-дифторбензил)пиперидин-4-ил]-(5-трифторметилпиридин-2-ил)амин (El);

6-{метил-[1-(4-трифторметилбензил)пиперидин-4-ил]амино}никотинонитрил (E2);

6-[1-(3-трифторметилбензил)пиперидин-4-иламино]никотинонитрил (E3);

6-[1-(3-фтор-5-трифторметилбензил)пиперидин-4-иламино]никотинонитрил (E4);

6-[1-(3,5-дифторбензил)пиперидин-4-иламино]никотинонитрил (E5);

6-[1-(3,4,5-трифторбензил)пиперидин-4-иламино]никотинонитрил (E6);

2-{метил-[1-(3-трифторметилбензил)пиперидин-4-ил]амино}изоникотинонитрил (E7);

6-[1-(3-фтор-5-трифторметилбензил)пиперидин-4-иламино]пиридин-2-карбонитрил (E8) и

(1-бензилпиперидин-4-ил)-(5-трифторметилпиридин-2-ил)амин (Dl).

Используемый в настоящей заявке термин «С_1-4алкил», используемый отдельно или в комбинации, такой как «С_1-4алкилокси», «перфторС_1-4алкил», «диС_1-4алкиламино», включает, например, метил, этил, пропил, бутил, 1-метилпропил, 1,1-диметилэтил; термин «перфторС_1-4алкил» включает, например, трифторметил, пентафторэтил, гептафторпропил и нонафторбутил; термин «С_3-8циклоалкил» включает циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил; термин «С_5-7циклоалкенил» включает циклопентенил, циклогексенил и циклогептенил. Термин «галоген» включает фтор, хлор, бром и йод.

Термин «фармацевтически приемлемые соли» включает терапевтически эффективные соли присоединения нетоксичных кислот, образуемые соединениями формулы (I). Указанные соли могут быть получены путем обработки основной формы соединений формулы (I) соответствующими кислотами, например неорганическими кислотами, например галогенводородной кислотой, в частности хлористоводородной кислотой, бромистоводородной кислотой, серной кислотой, азотной кислотой и фосфорной кислотой; и органическими кислотами, например уксусной кислотой, гидроксиуксусной кислотой, пропановой кислотой, молочной кислотой, пировиноградной кислотой, щавелевой кислотой, малоновой кислотой, янтарной кислотой, малеиновой кислотой, миндальной кислотой, фумаровой кислотой, яблочной кислотой, винной кислотой, лимонной кислотой, метансульфоновой кислотой, этансульфоновой кислотой, бензолсульфоновой кислотой, пара-толуолсульфоновой кислотой, цикламовой кислотой, салициловой кислотой, пара-аминосалициловой кислотой, памовой кислотой и миндальной кислотой. И наоборот, указанные солевые формы могут быть превращены в свободные формы путем обработки соответствующим основанием.

Термин «сольваты» означает гидраты и алкоголяты, которые могут быть образованы соединениями формулы (I).

Используемый в описании термин «стереохимические изомерные формы» определяет все возможные изомерные формы, которые могут быть образованы соединениями формулы (I). Если это не упоминается или не указывается особо, то названия химических соединений означают смесь всех возможных стереохимических изомерных форм, где указанные смеси содержат все диастереомеры и энантиомеры основной молекулярной структуры. Более конкретно, стереогенные центры могут иметь R- или S-конфигурацию; заместители на двухвалентных циклических (частично) насыщенных радикалах могут иметь цис- или транс-конфигурацию. Соединения, включающие двойные связи, могут иметь E- или Z-стереохимию в указанной двойной связи. Стереохимические изомерные формы соединений формулы (I) входят в объем настоящего изобретения.

Соединения формулы (I), полученные описанными ниже способами, могут быть синтезированы в форме рацемических смесей энантиомеров, которые могут быть отделены друг от друга хорошо известными методами разделения. Рацемические соединения формулы (I) могут быть превращены в соответствующие диастереомерные солевые формы посредством реакции взаимодействия с подходящей хиральной кислотой. Указанные диастереомерные солевые формы затем разделяют, например, посредством селективной или фракционированной кристаллизации, и из этих форм выделяют энантиомеры путем обработки щелочью. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединений формулы (I) включает проведение жидкостной хроматографии с использованием хиральной неподвижной фазы. Указанные стереохимически чистые изомерные формы могут быть также получены из соответствующих стереохимически чистых изомерных форм соответствующих исходных веществ при условии, что данная реакция будет проходить стереоспецифически. Если желательно получить конкретный стереоизомер, то предпочтительно, чтобы указанное соединение было синтезировано стереоспецифическими методами. В таких методах преимущественно используются энантиомерно чистые исходные вещества.

Фармакология

Для получения антипсихотических соединений, обладающих активностью, направленной на устранение позитивных симптомов, и имеющих улучшенный профиль безопасности (низкая частота возникновения ЭПС и отсутствие метаболических расстройств), авторами настоящего изобретения был проведен поиск соединений, селективно взаимодействующих с допаминовым рецептором D2 и быстро диссоциирующихся от этого рецептора. Соединения были сначала скринированы на их аффинность к D2 в анализе на связывание, проводимом с использованием [³Н]спиперона и клеточных мембран с человеческим рецептором D2L. Соединения, обнаруживавшие IC₅₀ менее чем 10 мкМ, тестировали в непрямом анализе, адаптированном с помощью метода, описанного в работе Josee E. Leysen and Walter Gommeren, Journal of Receptor Research, 1984, 4(7), 817-845, для оценки скорости их диссоциации.

Затем эти соединения скринировали с использованием панели более чем 50 общеизвестных рецепторов, сопряженных с G-белком (CEREP), и было обнаружено, что они имеют характерный профиль, то есть они имеют низкую аффинность по отношению к тестируемым рецепторам.

Некоторые из этих соединений были дополнительно протестированы на in vivo моделях в таких тестах, как «тест на подавление индуцированного апоморфином возбуждения у крыс», и было обнаружено, что указанные соединения обладают активностью и биологической доступностью при пероральном введении.

С точки зрения вышеописанной фармакологии, соединения формулы (I) могут быть использованы в качестве лекарственного средства, в частности в качестве антипсихотического средства. Более конкретно, указанные соединения могут быть использованы в качестве лекарственного средства для лечения или предупреждения шизофрении, шизофреноформного расстройства, шизоаффективного расстройства, бреда, кратковременного психотического расстройства, разделяемого психотического расстройства, психотического расстройства, вызываемого общим патологическим процессом, психотического расстройства, индуцированного употреблением лекарственных средств, психотического расстройства неясной этиологии; психоза, ассоциированного с деменцией; тяжелого депрессивного расстройства, дистимии, предменструальной дисфории, депрессивного расстройства неясной этиологии; биполярного расстройства I, биполярного расстройства II, циклотимического расстройства, биполярного расстройства неясной этиологии; расстройства настроения, вызываемого общим патологическим процессом, расстройства настроения, индуцированного употреблением лекарственных средств, расстройства настроения неясной этиологии; генерализованного тревожного состояния, обсессивно-компульсивного расстройства, панического расстройства, расстройства, ассоциированного с сильным стрессом, расстройства, ассоциированного с посттравматическим стрессом, умственной отсталости; глубокого нарушения развития; расстройства, связанного с дефицитом внимания, расстройства, связанного с дефицитом внимания/гиперактивностью, дизруптивного расстройства поведения; личностного расстройства параноидального типа, личностного расстройства шизоидного типа, личностного расстройства шизотипического типа; тиков, синдрома Туретта; зависимости от лекарственных средств; расстройств, вызываемых злоупотреблением наркотиков; расстройств, вызываемых «синдромом отмены»; трихокриптомании.

Для оптимизации лечения пациентов, страдающих расстройствами, упомянутыми в предыдущем абзаце, соединения формулы (I) могут быть введены вместе с другими психотропными соединениями. Таким образом, в случае шизофрении они могут быть направлены на устранение негативных и когнитивных симптомов.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения теплокровных животных, страдающих такими расстройствами, где указанный способ включает системное введение соединения формулы (I) в количестве, которое является терапевтически эффективным для лечения вышеописанных расстройств.

Настоящее изобретение также относится к применению соединений формулы (I), определенных выше, в целях приготовления лекарственного препарата, в частности антипсихотического лекарственного препарата, более конкретно лекарственного препарата для лечения или предупреждения шизофрении, шизофреноформного расстройства, шизоаффективного расстройства, бреда, кратковременного психотического расстройства, разделяемого психотического расстройства, психотического расстройства, вызываемого общим патологическим процессом, психотического расстройства, индуцированного употреблением лекарственных средств, психотического расстройства неясной этиологии; психоза, ассоциированного с деменцией, тяжелого депрессивного расстройства, дистимии, предменструальной дисфории, депрессивного расстройства неясной этиологии; биполярного расстройства I, биполярного расстройства II, циклотимического расстройства, биполярного расстройства неясной этиологии; расстройства настроения, вызываемого общим патологическим процессом, расстройства настроения, индуцированного употреблением лекарственных средств, расстройства настроения неясной этиологии; генерализованного тревожного состояния, обсессивно-компульсивного расстройства, панического расстройства, расстройства, ассоциированного с сильным стрессом, расстройства, ассоциированного с посттравматическим стрессом; умственной отсталости; глубокого нарушения развития; расстройства, связанного с дефицитом внимания, расстройства, связанного с дефицитом внимания/гиперактивностью, дизруптивного расстройства поведения; личностного расстройства параноидального типа, личностного расстройства шизоидного типа, личностного расстройства шизотипического типа; тиков, синдрома Туретта; зависимости от лекарственных средств; расстройств, вызываемых злоупотреблением наркотиков; расстройств, вызываемых «синдромом отмены»; трихокриптомании.

Врач-специалист по лечению таких заболеваний может определить терапевтически эффективную суточную дозу исходя из представленных ниже результатов теста. Терапевтически эффективная суточная доза может составлять от примерно 0,01 мг/кг до примерно 10 мг/кг массы тела, более предпочтительно, от примерно 0,05 мг/кг до примерно 1 мг/кг массы тела.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) в качестве активного ингредиента.

Для облегчения введения рассматриваемые соединения могут быть получены в виде различных фармацевтических форм в зависимости от способа их введения. Соединения согласно изобретению, в частности соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные или основно-аддитивные соли, стереохимические изомерные формы, N-оксидные формы и пролекарства, или любые их подгруппы или комбинации могут быть получены в виде различных фармацевтических форм в зависимости от целей их введения. В качестве соответствующих композиций могут быть указаны все композиции, обычно используемые для системного введения лекарственных средств. Для получения фармацевтических композиций согласно изобретению эффективное количество конкретного соединения, необязательно, в виде аддитивных солей, используемых в качестве активного ингредиента, тщательно смешивают с фармацевтически приемлемым носителем, который может быть приготовлен в различных формах широкого ряда в зависимости от нужной формы вводимого препарата. Такие фармацевтические композиции предпочтительно приготавливают в виде стандартных лекарственных форм, в частности форм для перорального введения, ректального введения, чрескожного введения, парентеральной инъекции или введения путем ингаляции. Например, при получении композиций в виде лекарственной формы для перорального введения, в случае жидких препаратов для перорального введения, таких как суспензии, сиропы, эликсиры, эмульсии и растворы, могут быть использованы любые стандартные фармацевтические среды, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п.; в случае порошков, драже, капсул и таблеток могут быть использованы твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, разбавители, замасливатели, связующие вещества, дезинтегрирующие агенты и т.п. Таблетки и капсулы, благодаря простоте их введения, представляют собой наиболее предпочтительные стандартные лекарственные формы для перорального введения, в которых обычно используются твердые фармацевтические носители. Для парентеральных композиций, носитель обычно, по меньшей мере в значительной степени, включает стерильную воду, хотя для повышения растворимости могут быть включены и другие ингредиенты. Так, например, могут быть получены растворы для инъекций, в которых носитель включает физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Растворы для инъекций, содержащие соединения формулы (I), могут быть приготовлены в масле для пролонгированного действия. Маслами, подходящими для этой цели, являются, например, арахисовое масло, кунжутное масло, масло из семян хлопчатника, кукурузное масло, соевое масло, синтетические сложные эфиры глицерина и длинноцепочечных жирных кислот, их смеси и другие масла. Могут быть также приготовлены суспензии для инъекций, в которых могут быть использованы соответствующие жидкие носители, суспендирующие агенты и т.п. Также рассматриваются препараты в твердой форме, которые непосредственно перед их использованием могут быть превращены в жидкие формы препаратов. В композициях, подходящих для чрескожного введения, носитель содержит, но необязательно, агент, усиливающий пенетрацию, и/или подходящий смачивающий агент, который объединяют, но необязательно, с подходящими любыми другими добавками в небольших количествах, если эти добавки не оказывают какого-либо значительного негативного воздействия на кожу. Указанные добавки могут облегчать нанесение данного препарата на кожу, и/или они могут быть полезными для получения нужных композиций. Такие композиции могут быть введены различными способами, например в виде чрескожного пластыря типа «spot-on» или мази. Кислотно- или основно-аддитивные соли соединений формулы (I), благодаря своей повышенной водорастворимости по сравнению с соответствующими основаниями и кислотами, являются более подходящими для получения водных композиций.

Вышеупомянутые фармацевтические композиции для облегчения их введения и достижения однородности дозы особенно предпочтительно приготавливать в виде стандартной лекарственной формы. Используемый в описании термин «стандартная лекарственная форма» означает физически дискретные единицы, подходящие для их использования в качестве разовых доз, каждая из которых содержит предварительно определенное количество активного ингредиента, рассчитанное так, чтобы оно в сочетании с нужным фармацевтическим носителем продуцировало желаемый терапевтический эффект. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (включая таблетки с насечками или таблетки с покрытиями), капсулы, драже, пакеты с порошком, облатки, суппозитории, растворы или суспензии для инъекций и т.п. и их дробные дозы.

Поскольку соединения согласно изобретению являются эффективными для перорального введения, фармацевтические композиции, содержащие такие соединения для перорального введения, являются особенно предпочтительными.

Для повышения растворимости и/или стабильности соединений формулы (I) в фармацевтических композициях может оказаться предпочтительным использование α-, β- или γ-циклодекстринов или их производных, в частности циклодекстринов, замещенных гидроксиалкилом, например 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина. Для повышения растворимости и/или стабильности соединений согласно изобретению в фармацевтических композициях могут быть также использованы сорастворители, такие как спирты.

Получение соединений

Соединения формулы (I), где R, R¹, R², R³, R⁴, R⁵ и R⁶ являются такими, как определено выше, могут быть получены посредством реакции взаимодействия соединения формулы (II)

где R², R³, R⁴, R⁵ и R⁶ являются такими, как определено выше, с реагентом формулы R¹-CHY-R (III-a), где R и R¹ являются такими, как определено выше, а Y представляет собой уходящую группу, такую как галоген, например хлор, бром или йод, или сульфонилоксигруппу, например метилсульфонилокси, трифторметилсульфонилокси или метилфенилсульфонилокси, в присутствии основания, такого как карбонат калия или диизопропилэтиламин, в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил, и в подходящих условиях проведения реакции, например при соответствующей температуре или при соответствующем нагревании, либо при микроволновом облучении в течение периода времени, достаточного для завершения реакции.

Альтернативно, соединения формулы (I), где R, R¹, R², R³, R⁴, R⁵ и R⁶ являются такими, как определено выше, могут быть получены посредством реакции взаимодействия соединения формулы (II), где R², R³, R⁴, R⁵ и R⁶ являются такими, как определено выше, с реагентом формулы R¹-C(=O)-R (III-b), где R и R¹ являются такими, как определено выше, путем восстановительного N-алкилирования в присутствии подходящего восстановителя, такого как триацетоксиборгидрид натрия, подходящего кислотного катализатора, такого как уксусная кислота, в подходящем для данной реакции инертном растворителе, таком как 1,2-дихлорэтан.

Соединения формулы (II), где R², R³, R⁴, R⁵ и R⁶ являются такими, как определено выше, могут быть получены путем удаления защитной группы в промежуточном соединении формулы (IV)

где L представляет собой подходящую защитную группу, такую как бензил или трет-бутоксикарбонил, а R², R³, R⁴, R⁵ и R⁶ являются такими, как определено выше, в подходящих условиях, таких как реакция взаимодействия с 1-хлорэтил-хлорформиатом, в присутствии подходящего основания, такого как диизопропилэтиламин, в дихлорметане, если L представляет собой бензильную группу, или в присутствии трифторуксусной кислоты в дихлорметане, если L представляет собой трет-бутоксикарбонильную группу.

Соединения формулы (IV), где R², R³, R⁴, R⁵ и R⁶ являются такими, как определено выше, а L представляет собой подходящую защитную группу, могут быть получены посредством реакции взаимодействия соединения формулы (V),

где R² является таким, как определено выше, а L представляет собой подходящую защитную группу, такую как бензил или трет-бутоксикарбонил, с хлорпиридином формулы (VI)

где R³, R⁴, R⁵ и R⁶ являются такими, как определено выше, где указанную реакцию проводят в чистом виде или в присутствии основания, такого как диизопропилэтиламин, в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил, и в подходящих условиях проведения реакции, например, при соответствующей температуре или при соответствующем нагревании, либо при микроволновом облучении в течение периода времени, достаточного для завершения реакции.

Хлорпиридин формулы (VI) может быть получен промышленным методом, если R³, R⁵ и R⁶ представляют собой водород, а R⁴ представляет собой трифторметил или циано, если R³, R⁴ и R⁶ представляют собой водород, а R⁵ представляет собой циано, и если R⁴, R⁵ и R⁶ представляют собой водород, а R³ представляет собой циано, либо он может быть получен методами, известными специалистам.

Соединения формулы (I), где R, R¹, R², R³, R⁴, R⁵ и R⁶ являются такими, как определено выше, могут быть также получены посредством реакции взаимодействия хлорпиридина формулы (VI), где R³, R⁴, R⁵ и R⁶ являются такими, как определено выше, с производным пиперидина формулы (VII)

где R, R¹ и R² являются такими, как определено выше, в присутствии подходящего основания, такого как диизопропилэтиламин, в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил, и в подходящих условиях проведения реакции, например, при соответствующей температуре или при соответствующем нагревании, либо при микроволновом облучении в течение периода времени, достаточного для завершения реакции.

Соединения формулы (VII), где R, R¹ и R² являются такими, как определено выше, могут быть получены из трет-бутилового эфира пиперидин-4-илкарбаминовой кислоты (VIII)

посредством реакции восстановительного N-алкилирования с реагентом формулы R¹-C(=O)-R (III-b), где R и R¹ являются такими, как определено выше, в присутствии подходящего восстановителя, такого как триацетоксиборогидрид натрия, подходящего кислотного катализатора, такого как уксусная кислота, в инертном растворителе, подходящем для данной реакции, таком как 1,2-дихлорэтан, или в присутствии подходящего восстановителя, такого как водород, подходящего катализатора, такого как палладий-на-угле, и в инертном растворителе, подходящем для данной реакции, таком как метанол, с последующим проведением реакции удаления защитной трет-бутоксикарбонильной группы в промежуточном соединении формулы (IX) путем его обработки кислотой, такой как трифторуксусная кислота, с получением соединения формулы (VII), где R² является таким, как определено выше.

Альтернативно, соединения формулы (VII), где R, R¹ и R² являются такими, как определено выше, могут быть также получены посредством реакции взаимодействия трет-бутилового эфира пиперидин-4-илкарбаминовой кислоты (VIII) с реагентом формулы R¹-CHY-R (III-a), где R и R¹ являются такими, как определено выше, а Y представляет собой уходящую группу, такую как галоген, например хлор, бром или йод, или сульфонилоксигруппу, например метилсульфонилокси, трифторметилсульфонилокси или метилфенилсульфонилокси в присутствии основания, такого как диизопропилэтиламин, в подходящем растворителе, таком как дихлорметан, с последующим проведением реакции удаления защитной трет-бутоксикарбонильной группы в промежуточном соединении формулы (IX) путем его обработки кислотой, такой как трифторуксусная кислота, с получением соединения формулы (VII), где R² является таким, как определено выше.

Соединения формулы (VII), где R² ≠ Н, могут быть получены посредством реакции взаимодействия соединения формулы (Х)

где R и R¹ являются такими, как определено выше, с амином формулы R²-NH₂ (XI) в присутствии подходящего восстановителя, такого как водород, и подходящего катализатора, такого как палладий-на-угле, и в инертном растворителе, подходящем для данной реакции, таком как этанол.

Соединения формулы (X), где R и R¹ являются такими, как определено выше, могут быть получены посредством реакции взаимодействия 4,4-этилендиоксипиперидина (XII)

с реагентом формулы R¹-C(=O)-R (III-b), где R и R¹ являются такими, как определено выше, в присутствии подходящего восстановителя, такого как триацетоксиборогидрид натрия, подходящего кислотного катализатора, такого как уксусная кислота, в инертном растворителе, подходящем для данной реакции, таком как 1,2-дихлорэтан, с последующим проведением реакции снятия защиты промежуточного соединения формулы (XIII)

где R и R¹ являются такими, как определено выше, путем обработки кислотой, такой как соляная кислота.

Экспериментальная часть

Методы химического синтеза

Реакции, инициируемые микроволновым излучением, осуществляли на реакторе, работающем в одноимпульсном режиме: в микроволновом реакторе Emrys(TM) Optimizer microwave reactor (Personal Chemistry A.B., currently Biotage). Описание этого прибора можно найти в Интернете на сайте www.personalchemistry.com.

¹H-спектры регистрировали на спектрометрах Bruker DPX 360, DPX 400 или Bruker AV-500. Химические сдвиги выражали в м.д. по отношению к тетраметилсилану.

Определение температуры плавления осуществляли на аппарате Mettler FP62.

Градиентную ВЭЖХ осуществляли на аппарате HP 1100, поставляемом Agilent Technologies и снабженном четырехступенчатым насосом с дегазатором, устройством для автоматического взятия образцов, колоночным термостатом (установленным на 40°С, за исключением метода 4, который проводили при температуре 60°С), диодно-матричным детектором (DAD) и колонкой, техническое описание которой приводится ниже. Поток из колонки делили на МС-детекторе. МС-детектор был снабжен источником ионизации электрораспылением. В качестве газа-пропеллента использовали азот. Температура источника поддерживалась при 140°С. Сбор данных осуществляли с помощью компьютерной программы MassLynx-Openlynx.

Метод 1

Помимо общей процедуры проводили ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке ACE-C18 (3,0 мкм, 4,6×30 мм), поставляемой Advanced Chromatography Technologies, со скоростью потока 1,5 мл/мин, при 40°С. Хроматографию проводили в градиенте в следующих условиях: 80% A (0,5 г/л раствора ацетата аммония), 10% B (ацетонитрил), 10% C (метанол) до 50% B и 50% C, 6,5 минут, до 100% B, 7 минут, и колонку уравновешивали с доведением до начальных условий за 7,5 минут с удерживанием до 9,0 минут. Объем впрыска составлял 5 мкл. Данные масс-спектроскопии высокого разрешения (времяпролетной, TOF) собирали только в режиме ионизации положительными ионами путем сканирования с разрешением 100-750 в течение 0,5 секунды при времени пребывания 0,1 секунды. Напряжение капиллярной иглы составляло 2,5 кВ в режиме ионизации положительными ионами, а напряжение конуса составляло 20В. Для калибровки синхронизирующей массы в качестве стандартного вещества использовали лейцин-энкефалин.

Метод 2

Помимо общей процедуры проводили ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке патронного типа XDB-C18 (1,8 мкм, 4,6×30 мм), поставляемой Agilent, со скоростью потока 1,5 мл/мин, при 60°С. Хроматографию проводили в градиенте в следующих условиях: 80% A (0,5 г/л раствора ацетата аммония), 20% B (смесь ацетонитрила/метанола, 1/1) до 100% B, за 6,5 минут с удерживанием до 7 минут и колонку уравновешивали с доведением до начальных условий за 7,5 минут с удерживанием до 9,0 минут. Объем впрыска составлял 5 мкл. Данные масс-спектроскопии низкого разрешения (квадрупольный детектор ZQ) собирали путем сканирования с разрешением 100-1000 в течение 1,0 секунды при времени пребывания 0,3 секунды. Напряжение капиллярной иглы составляло 3 кВ. Напряжение конуса составляло 20 В и 50 В в режиме ионизации положительными ионами и 20 В в режиме ионизации отрицательными ионами.

Описание 1

(1-бензилпиперидин-4-ил)-(5-трифторметилпиридин-2-ил)амин (D1)

Смесь 2-хлор-5-трифторметилпиридина (0,33 г, 1,82 ммоль) и 4-амино-1-бензилпиперидина (0,70 мл, 3,43 ммоль) нагревали при 180°С в течение 1 часа. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и экстрагировали насыщенным раствором карбоната натрия (15 мл). Органический слой отделяли, сушили (Na₂SO₄), и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (силикагель; 0-2% аммиак в метаноле (7M)/дихлорметан). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением D1 (0,34 г, 81%) в виде твердого вещества. Для C₁₈H₂₀F₃N₃ вычислено 335; найдено 336 (MH⁺). Rt (время удерживания): 4,61 минут.

¹H-ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 1,47-1,61 (м, 2Н), 1,95-2,07 (м, 2Н), 2,12-2,26 (м, 2Н), 2,78-2,91 (м, 2Н), 3,53 (с, 2Н), 3,62-3,78 (м, 1Н), 4,75 (д, J=7,46 Гц, 1Н), 6,36 (д, J=8,91 Гц, 1H), 7,26 (дд, 1H), 7,29-7,37 (м, 4H), 7,55 (дд, J=8,81, 2,38 Гц, 1H), 8,31 (с, 1H).

ОПИСАНИЕ 2

Пиперидин-4-ил-(5-трифторметилпиридин-2-ил)амин (D2)

К перемешиваемому раствору (1-бензилпиперидин-4-ил)-(5-трифторметилпиридин-2-ил)амина (D1) (0,41 г, 1,22 ммоль) и диизопропилэтиламина (0,64 мл, 3,67 ммоль) в дихлорметане (15 мл) при 0°С, добавляли 1-хлорэтилхлорформиат (0,40 мл, 3,67 ммоль). Реакционную смесь оставляли для медленного нагревания до комнатной температуры, а затем перемешивали в течение 1 часа. Затем растворитель выпаривали в вакууме и неочищенный продукт растворяли в метаноле (15 мл). Реакционную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 1,5 часа. После выпаривания растворителя в вакууме остаток разбавляли 1М раствором соляной кислоты и экстрагировали дихлорметаном (15 мл). Водный слой отделяли, подщелачивали путем добавления насыщенного раствора карбоната натрия и экстрагировали дихлорметаном (2×25 мл). Органический слой отделяли, сушили (Na₂SO₄), и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (силикагель; 5-10% аммиак в метаноле (7M)/дихлорметан). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения D2 (0,25 г, 84%) в виде твердого вещества. Для C₁₁H₁₄F₃N₃ вычислено 245; найдено 246 (MH⁺). Rt: 1,86 минут. Температура плавления: 128,2°С.

¹H-ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 1,34-1,46 (м, 2Н), 2,01-2,12 (м, 2Н), 2,70-2,82 (м, 2Н), 3,13 (дт, J=12,75, 3,52, 3,42 Гц, 2Н), 3,72-3,85 (м, 1Н), 4,77 (д, J=7,26 Гц, 1Н), 6,38 (д, J=8,91 Гц, 1Н), 7,56 (дд, J=8,71, 2,28 Гц, 1Н), 8,32 (с, 1H).

Описание 3

Метил-[1-(3-трифторметилбензил)пиперидин-4-ил]амин (D3)

Смесь трет-бутилового эфира метилпиперидин-4-илкарбаминовой кислоты (26 г, 120 ммоль) и 4-(трифторметил)бензальдегида (22 г, 120 ммоль) в метаноле (250 мл) гидрировали при комнатной температуре в присутствии 10% палладия-на-активированном угле (3 г) и 0,005% раствора тиофена в метаноле (3 мл). После завершения поглощения водорода реакционную смесь фильтровали через слой целита и фильтрат упаривали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в растворе 5 н. соляной кислоты в изопропаноле и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 30 минут. Затем реакционную смесь снова разбавляли 5 н. раствором соляной кислоты в изопропаноле (50 мл) и кипятили с обратным холодильником еще 30 минут. Растворитель выпаривали в вакууме и неочищенный продукт осаждали из ацетона. Образовавшееся твердое вещество отфильтровывали, суспендировали в дихлорметане и экстрагировали насыщенным раствором аммиака. Органический слой отделяли, сушили (Na₂SO₄) и растворитель выпаривали в вакууме с получением соединения D3 (27,6 г, 85%) в виде твердого вещества. Для C₁₄H₁₉F₃N₂ вычислено 272; найдено 273 (MH⁺).

¹H-ЯМР (360 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 1,31-1,45 (м, 3Н), 1,83-1,91 (м, 2Н), 2,05 (дт, J=11,53, 2,20 Гц, 2Н), 2,32-2,41 (м, 1Н), 2,43 (с, 3Н), 2,77-2,87 (м, 2Н), 3,54 (с, 2Н), 7,38-7,45 (м, 1Н), 7,48-7,54 (м, 2Н), 7,58 (с, 1Н).

Описание 4

Трет-бутиловый эфир 4-(5-цианопиридин-2-иламино)пиперидин-1-карбоновой кислоты (D4)

Смесь 6-хлорникотинонитрила (0,5 г, 3,60 ммоль), трет-бутилового эфира 4-аминопиперидин-1-карбоновой кислоты (0,94 г, 4,68 ммоль) и диизопропилэтиламина (0,94 мл, 5,40 ммоль) в ацетонитриле (4 мл) перемешивали при 160°С в течение 1 часа при микроволновом облучении. Затем реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и экстрагировали насыщенным раствором хлорида аммония (15 мл). Органический слой отделяли, сушили (MgSO₄) и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали хроматографией на короткой открытой колонке (силикагель; 0-5% аммиак в метаноле (7M)/дихлорметан). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения D4 (0,93 г, 85%) в виде белого твердого вещества. Для C₁₆H₂₂N₄O₂ вычислено 302; найдено 303 (MH⁺).

Описание 5

6-(пиперидин-4-иламино)никотинонитрил (D5)

К размешиваемому раствору трет-бутилового эфира 4-(5-цианопиридин-2-иламино)пиперидин-1-карбоновой кислоты (D4) (0,93 г, 3,06 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (2,5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем растворитель выпаривали в вакууме и неочищенный продукт растворяли в дихлорметане и экстрагировали насыщенным раствором карбоната натрия (15 мл). Органический слой отделяли, сушили (MgSO₄) и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт осаждали из диэтилового эфира с получением соединения D5 (0,595 г, 96%) в виде белого твердого вещества. Для C₁₁H₁₄N₃ вычислено 202; найдено 203 (MH⁺).

Описание 6

1-(3-фтор-5-трифторметилбензил)пиперидин-4-иламин (D6)

Смесь трет-бутилового эфира пиперидин-4-илкарбаминовой кислоты (4 г, 20,0 ммоль), 3-фтор-5-(трифторметил)бензилбромида (4,6 г, 18,1 ммоль) и диизопропилэтиламина (4,7 мл, 27,1 ммоль) в дихлорметане (25 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем добавляли трифторуксусную кислоту (32 мл) и реакционную смесь перемешивали еще 2 часа. Растворитель выпаривали в вакууме и добавляли насыщенный раствор карбоната натрия. Смесь экстрагировали дихлорметаном, и отделенные органические слои сушили (Na₂SO₄), фильтровали и растворитель выпаривали в вакууме с получением соединения D6 (4,0 г, 80%) в виде твердого вещества. Для C₁₃H₁₆F₄N₂ вычислено 276; найдено 277 (MH⁺).

Пример 1

[1-(3,4-дифторбензил)пиперидин-4-ил]-(5-трифторметилпиридин-2-ил)амин (El)

Смесь пиперидин-4-ил-(5-трифторметилпиридин-2-ил)амина (D2) (0,050 г, 0,2 ммоль), 3,4-дифторбензилбромида (0,031 мл, 0,24 ммоль) и карбоната калия (0,055 г, 0,4 ммоль) в ацетонитриле (2,5 мл) перемешивали при 100°С в течение 10 минут при микроволновом облучении. Затем реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и отфильтровывали. Фильтрат упаривали в вакууме и неочищенный продукт превращали в гидрохлоридную соль в диэтиловом эфире с получением соединения El (0,061 г, 74%) в виде твердого вещества. Для свободного основания C₁₈H₁₈F₅N₃·HCl вычислено 371; найдено 372 (MH⁺). Rt (метод 1): 5,15 минут. Температура плавления: 268,7°С.

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d ₆) δ м.д. 1,75-2,19 (м, 4H), 2,87-3,45 (м, 4H), 3,92-4,08 (м, 0,8H), 4,12-4,20 (м, 0,2Н), 4,29 (д, J=4,35 Гц, 0,8Н), 4,32 (д, J=5,18 Гц, 0,2Н), 6,70 (д, J=8,71 Гц, 0,8Н), 6,82 (д, J=8,91 Гц, 0,2Н), 7,41-7,61 (м, 2Н), 7,65-7,99 (м, 3Н), 8,28 (ушир.с, 0,8Н), 8,32 (ушир.с, 0,2Н), 10,85 (ушир.с, 0,2Н), 11,03 (ушир.с, 0,8Н).

Пример 2

6-{метил-[1-(3-трифторметилбензил)пиперидин-4-ил]амино}никотинонитрил (E2)

Смесь 6-хлорникотинонитрила (0,272 г, 1 ммоль), метил-[1-(3-трифторметилбензил)пиперидин-4-ил]амина (D3) (0,138 г, 1 ммоль) и диизопропилэтиламина (0,35 мл, 2 ммоль) в н-бутаноле (4 мл) перемешивали при 200°С в течение 2 часов при микроволновом облучении. Затем растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт разбавляли дихлорметаном и экстрагировали 10% раствором карбоната натрия. Органический слой отделяли, сушили (Na₂SO₄) и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали хроматографией на короткой открытой колонке (силикагель; 1% аммиак в метаноле (7M)/дихлорметан). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения E2 (0,333 г, 89%) в виде сиропа. Для C₂₀H₂₁F₃N₄ вычислено 374; найдено 375 (MH⁺). Rt (метод 2): 4,77 минут.

¹H-ЯМР (360 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 1,62-1,70 (м, 2Н), 1,86 (кв.д, J=12,26, 3,84 Гц, 2Н), 2,18 (тд, J=11,71, 2,20 Гц, 2Н), 2,95 (с, 3Н), 2,95-3,00 (м, 2Н), 3,58 (с, 2Н), 4,53-4,67 (м, 1Н), 6,47 (д, J=9,15 Гц, 1Н), 7,40-7,47 (м, 1Н), 7,50-7,55 (м, 2Н), 7,58 (дд, J=9,15, 2,56 Гц, 1Н), 7,61 (ушир.с, 1Н), 8,39 (д, J=2,20 Гц, 1Н).

Пример 3

6-[1-(3-трифторметилбензил)пиперидин-4-иламино]никотинонитрил (E3)

Смесь 6-(пиперидин-4-иламино)никотинонитрила (D5) (0,10 г, 0,49 ммоль), 3-(трифторметил)бензилбромида (0,082 мл, 0,54 ммоль) и диизопропилэтиламина (0,26 мл, 1,47 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Затем реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и экстрагировали насыщенным раствором хлорида аммония. Органический слой отделяли, сушили (MgSO₄) и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали хроматографией на короткой открытой колонке (силикагель; 0-2% аммиак в метаноле (7M)/дихлорметан). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения Е3 (0,062 г, 35%) в виде твердого вещества. Для C₁₉H₁₉F₃N₄ вычислено 360; найдено 361 (MH⁺). Rt (метод 1): 4,73 минут. Температура плавления: 111,6°С.

¹H-ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 1,55-1,77 (м, 2Н), 2,02-2,11 (м, 2Н), 2,22-2,36 (м, 2Н), 2,84-2,99 (м, 2Н), 3,57-3,72 (м, 2Н), 3,73-3,88 (м, 1Н), 4,90-5,00 (м, 1Н), 6,37 (д, J=8,91 Гц, 1Н), 7,47 (т, J=7,67 Гц, 1Н), 7,52-7,64 (м, 4Н), 8,35 (д, J=2,07 Гц, 1Н).

Пример 7

2-{метил-[1-(3-трифторметилбензил)пиперидин-4-ил]амино}изоникотинонитрил (E7)

Смесь 2-хлоризоникотинонитрила (0,272 г, 1 ммоль), метил-[1-(3-трифторметилбензил)пиперидин-4-ил]амина (D3) (0,138 г, 1 ммоль) и диизопропилэтиламина (0,35 мл, 2 ммоль) в н-бутаноле (4 мл) перемешивали при 190°С в течение 2 часов при микроволновом облучении. Затем растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт разбавляли дихлорметаном и экстрагировали 10% раствором карбоната натрия. Органический слой отделяли, сушили (Na₂SO₄) и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали хроматографией на короткой открытой колонке (силикагель; 1% аммиак в метаноле (7M)/дихлорметан). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения Е7 (0,105 г, 28%) в виде сиропа. Для C₂₀H₂₁F₃N₄ вычислено 374; найдено 375 (MH⁺). Rt (метод 1): 5,94 мин.

¹H-ЯМР (360 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 1,61-1,69 (м, 2Н), 1,79-1,92 (м, 2Н), 2,18 (тд, J=11,71, 2,20 Гц, 2Н), 2,91 (с, 3Н), 2,93-3,00 (м, 2Н), 3,58 (с, 2Н), 4,43-4,54 (м, 1Н), 6,65 (с, 1Н), 6,68 (дд, J=4,94, 1,28 Гц, 1Н), 7,40-7,48 (м, 1Н), 7,49-7,55 (м, 2Н), 7,61 (с, 1Н), 8,24 (дд, J=4,76, 0,73 Гц, 1Н).

Пример 8

6-[1-(3-фтор-5-трифторметилбензил)пиперидин-4-иламино]пиридин-2-карбонитрил (E8)

Смесь 6-хлор-пиридин-2-карбонитрила (0,080 г, 0,58 ммоль), 1-(3-фтор-5-трифторметилбензил)пиперидин-4-иламина (D6) (0,191 г, 0,69 ммоль) и диизопропилэтиламина (0,201 мл, 1,15 ммоль) в 1-метилпирролидин-2-оне (1 мл) перемешивали при 200°С в течение 1 часа при микроволновом облучении. Затем реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и экстрагировали насыщенным раствором хлорида аммония. Органический слой отделяли, сушили (Na₂SO₄), и растворитель выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной флэш-хроматографией (силикагель; 0-2% аммиак в метаноле (7M)/дихлорметан). Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме, и неочищенный продукт очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ. Нужные фракции собирали и упаривали в вакууме с получением соединения E8 (0,90 г, 41%) в виде желтого твердого вещества. Для C₁₉H₁₈F₄N₄ вычислено 378; найдено 379 (MH⁺). Rt (метод 1): 5,25 мин. Температура плавления: 115,2°С.

¹H-ЯМР (400 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 1,51-1,67 (м, 2Н), 2,02-2,12 (м, 2Н), 2,21-2,33 (м, 2Н), 2,80-2,93 (м, 2Н), 3,54-3,65 (м, 2Н), 3,74-3,85 (м, 1Н), 4,60 (д, J=7,46 Гц, 1Н), 6,54 (д, J=8,71 Гц, 1Н), 6,95 (д, J=7,05 Гц, 1Н) 7,24 (д, J=8,29 Гц, 1Н), 7,30-7,37 (м, 1Н), 7,39-7,47 (м, 2Н).

Как описано в нижеследующих дополнительных примерах, соединения (E4-E6) получали из соединения D5 и с использованием соответствующих алкилирующих агентов в соответствии с процедурами, аналогичными процедурам, описанным в примере получения соединения Е3.

Пример Температура плавления (°С) Молекулярная формула Молекулярная масса, свободное основание МН+ Время удержания (мин) ЖХМС-метод Е3 111,6 C19H19F3N4 360 361 4,73 1 Е4 198,8 C19H18F4N4 378 379 5,02 1 Е5 102,6 C18H18F2N4 328 329 4,41 1 Е6 129,5 C18H17F3N4 346 347 4,63 1

Как описано в нижеследующих дополнительных примерах, соединения (E9-E11) получали из 6-хлорпиридин-2-карбонитрила и с использованием соответствующих производных 1-(бензил)пиперидин-4-иламина в соответствии с процедурами, аналогичными процедурам, описанным в примере получения соединения (Е8). Соответствующие производные 1-(бензил)пиперидин-4-иламина получали из трет-бутилового эфира пиперидин-4-илкарбаминовой кислоты и с использованием соответствующих алкилирующих агентов в соответствии с процедурами, аналогичными процедурам, описанным в разделе «Описание (D6)». 1-(бензил)пиперидин-4-иламин является коммерчески доступным.

Пример Температура плавления (°С) Молекулярная формула Молекулярная масса, свободное основание МН+ Время удержания (мин) ЖХМС-метод Е8 115,2 C19H18F4N4 378 379 5,25 1 Е9 158,6 C18H18F2N4 328 329 4,66 1 Е10 150,7 C18H17F2N4 346 347 4,33 2 Е11 Н.д. C18H20N4 292 293 3,63 1

Фармакология

Аффинность связывания in vitro с человеческим рецептором D2 _L

Замороженные мембраны клеток СНО, трансфецированных человеческим рецептором допамина D2_L, оттаивали, быстро гомогенизировали на гомогенизаторе Ultra-Turrax T25 и разводили в аналитическом Tris-HCl-буфере, содержащем NaCl, CaCl₂, MgCl₂, KCl (50, 120, 2, 1 и 5 мМ, соответственно; pH доводили до 7,7 добавлением HCl), до соответствующей концентрации белка, оптимизированной для специфического и неспецифического связывания. Радиоактивный лиганд [³Н]спиперон (NEN, удельная активность ~70 Ки/ммоль) разводили в аналитическом буфере при концентрации 2 нмоль/л. Затем полученный радиоактивный лиганд (50 мкл) вместе с 50 мкл или 10% ДМСО-контроля, либо бутакламола (в конечной концентрации 10^-6 моль/л), либо представляющего интерес соединения инкубировали (30 минут при 37°С) с 400 мкл полученного раствора мембраны. Мембраносвязанное активное вещество фильтровали на планшетах GF/B Unifilterplates на сборщике клеток Packard Filtermate и промывали трис-HCl-буфером, охлажденным льдом (50 мМ; pH 7,7; 6×0,5 мл). Фильтры оставляли для сушки, а затем добавляли сцинтилляционную жидкость и клетки подсчитывали в сцинтилляционном счетчике Topcount. Вычисление процента специфического связывания и построение кривых конкурентного связывания осуществляли с помощью компьютерной программы S-Plus (Insightful). Соединения имели величину pIC₅₀>5,0.

Быстрая диссоциация

Соединения, обнаруживающие IC₅₀, менее чем 10 мкМ, тестировали в непрямом анализе, адаптированном методом, описанным в публикации Josee E. Leysen и Walter Gommeren, Journal of Receptor Research, 1984, 4(7), 817-845, для оценки скорости их диссоциации. Соединения при концентрации, которая в 4 раза превышала IC₅₀, сначала инкубировали в течение одного часа с клеточными мембранами, содержащими человеческий рецептор D2L в объеме 2 мл при 25°С, а затем фильтровали через стекловолоконный фильтр в вакууме с использованием 40-луночного планшета Multividor. Сразу после этого вакуум откачивали. Затем на фильтр в течение 5 минут добавляли 0,4 мл предварительно нагретого буфера (25°С), содержащего 1 нМ [³Н]спиперона. Инкубирование прекращали путем подачи вакуума и немедленной промывки 2×5 мл буфера, охлажденного на льду. Связанную с фильтром радиоактивность измеряли на жидкостном сцинтилляционном спектрометре. Основная идея анализа основана на предположении, которое заключается в том, что чем быстрее соединение диссоциируется от рецептора D2, тем быстрее [³Н]спиперон связывается с рецептором D2. Так, например, при инкубировании рецепторов D2 с клозапином в концентрации 1850 нМ (4×IC₅₀), связывание с [³Н]спипероном составляло 60-70% от его общей связывающей способности (определенной в отсутствие лекарственного средства) после 5-минутного инкубирования на фильтре. При инкубировании с другими антипсихотическими средствами уровень связывания [³Н]спиперона варьировался в пределах 20-50%. Поскольку клозапин был включен в каждую процедуру фильтрации, то считалось, что тестируемые соединения являются быстро диссоциирующимися антагонистами D2 только в том случае, если они диссоциировались также быстро, как клозапин, или быстрее, чем клозапин. Эти соединения имели скорость диссоциации, превышающую скорость диссоциации клозапина, т.е. их скорость составляла >50%.