×
27.03.2013
216.012.317c

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЦИДИВОВ У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ ЛЕЙКОЗОМ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования рецидивов у больных острым лейкозом. В лимфоцитах периферической крови определяют активность глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ) и НАДФ-зависимой декарбоксилирующей малатдегидрогеназы (НАДФМДГ). При сочетании активности Г3ФДГ в пределах от 0 до 0,02 мкЕ и активности НАДФМДГ в пределах от 0,25 до 6,21 мкЕ прогнозируют возникновение рецидива у больных острым лейкозом. Изобретение позволяет своевременно диагностировать прогрессирование острого лейкоза, корректировать план и тактику лечения данной категории больных и улучшить результаты их реабилитации. 2 пр., 1 табл.
Основные результаты: Способ прогнозирования рецидивов у больных острым лейкозом путем исследования крови, отличающийся тем, что определяют активность двух дегидрогеназ - глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ) и НАДФ-зависимой декарбоксилирующей малатдегидрогеназы (НАДФМДГ), и при сочетании активности Г3ФДГ в пределах от 0 до 0,02 мкЕ и активности НАДФМДГ в пределах от 0,25 до 6,21 мкЕ прогнозируют возникновение рецидива у больных острым лейкозом.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и онкологии, и может быть использовано при диагностике больных острыми лейкозами.

Острые лейкозы занимают одно из первых мест по частоте встречаемости среди гемобластозов. В большинстве случаев конкретная причина возникновения заболевания неизвестна. Однако болезнь неуклонно прогрессирует, и достигнутая ранее ремиссия переходит в рецидив. Появление рецидива свидетельствует о том, что опухолевый клон видоизменился и стал более злокачественным. Появление повторных рецидивов значительно ухудшает качество жизни больных и влияет, в конечном итоге, на исход заболевания в целом.

Известен способ прогнозирования рецидивов у больных острыми лейкозами по индексу ингибирования сыворотки крови больного острым лейкозом в реакции гемагглютинации с эритроцитами барана и стандартной кроличьей гемолитической сывороткой. При значении индекса ингибирования, равном или более 1,1, прогнозируют низкую эффективность лечения и высокую вероятность развития раннего рецидива [1]. Известный способ является недостаточно точным, длительным, трудоемким и имеет низкую чувствительность метода.

Задачей изобретения является создание информативного способа прогнозирования рецидивов у больных острым лейкозом.

Задача достигается тем, что в лимфоцитах периферической крови больных острым лейкозом определяют активность двух дегидрогеназ - глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ) и НАДФ-зависимой декарбоксилирующей малатдегидрогеназы (НАДФМДГ). При сочетании активности Г3ФДГ в пределах от 0 до 0,02 мкЕ и активности НАДФМДГ в пределах от 0,25 до 6,21 мкЕ прогнозируют возникновение рецидива у больных острым лейкозом.

Пороговые интервалы значений активностей Г3ФДГ и НАДФМДГ получены опытным путем на основании сопоставления значений активностей исследуемых дегидрогеназ и данных по развитию рецидивов у больных острым лейкозом, полученных при последующем наблюдении за клиническим состоянием больных в стадии первичной атаки и полной ремиссии. У больных острым лейкозом, независимо от вида в стадии первичной атаки показатели активности дегидрогеназ варьировали: Г3ФДГ - в пределах от 0,02 до 0,88 мкЕ, а НАДФМДГ - в пределах от 6,21 до 20,87 мкЕ, в стадии полной ремиссии: Г3ФДГ - в пределах от 0,06 до 2,37 мкЕ, а НАДФМДГ - в пределах от 6,21 до 22,23 мкЕ. Рецидивы диагностировались при появлении в показателях миелограммы больных более 25% бластов после достигнутой ремиссии.

Появление острого лейкоза - сложный комплексный процесс, отражающий этапы взаимодействия организма с опухолью. Клетками, играющими важную роль в иммунологическом противоопухолевом надзоре, являются лимфоциты, следовательно, изменения в метаболизме данных клеток ведут к нарушению их функции и к несостоятельности противоопухолевой защиты организма в целом. Поэтому и ранние нарушения следует искать на уровне метаболизма самой клетки, где и начинает формироваться первая реакция на опухоль. Следовательно, дегидрогеназы, являющиеся ферментами внутриклеточного метаболизма, наиболее полно отражают изменения, происходящие в клетках. Это позволяет использовать их в качестве маркеров при прогрессировании заболевания и появлении рецидивов.

Глицерол-3-фосфатдегидрогеназа (Г3ФДГ) характеризует интенсивность переноса продуктов липидного катаболизма на окислительно-восстановительные реакции гликолиза. Снижение данной реакции приводит к ингибированию гликолиза в клетке.

НАДФ-зависимая декарбоксилирующая малатдегидрогеназа (НАДФМДГ) осуществляет окисление малата до пирувата. Фермент локализуется в цитоплазматическом компартменте и является конкурентом для Г6ФДГ за кофактор. Данный фермент является ключевым ферментом липидного анаболизма. НАДФМДГ также осуществляет шунтирующую реакцию для цикла трикарбоновых кислот, тем самым стимулируя интенсивность аэробных реакций.

Способ осуществляется следующим образом.

У больного с диагнозом острого лейкоза, независимо от стадии и типа заболевания, забирают венозную кровь из локтевой вены свободным током в пробирки с гепарином. Выделяют лимфоциты путем центрифугирования на градиенте плотности фиколл-верографина по стандартной методике A.Boyum. Подсчитывают концентрацию лимфоцитов, например в камере Горяева. Чистота выхода лимфоцитов должна составлять не менее 97%. Используют 1 млн выделенных клеток для определения активности Г3ФДГ и НАДФМДГ одним из известных способов, например биолюминесцентным [2]. Для этого суспензию выделенных лимфоцитов, содержащую клетки в концентрации 1,0 млн/мл разрушают путем осмотического лизиса с добавлением дистиллированной воды (1:5 по объему) и 1,0-2,0 мМ дитиотреитола. Затем непосредственно определяют активность дегидрогеназ. Для этого в 150 мкл инкубационной смеси, содержащей соответствующий субстрат и кофактор, вносят 50 мкл суспензии разрушенных лимфоцитов. Конкретные значения концентраций субстратов и кофакторов, а также рН среды для определяемых ферментов представлены в таблице.

Фермент Субстрат, мМ Кофактор, мМ РН буфера
Г3ФДГ Глюкоза-3-фосфат - 0,5 НАД-0,35 9,8
НАДФМДГ Малат - 7,5 НАДФ-0,375 9,8

После инкубации исследуемых проб при 37°С в течение 30 минут к 200 мкл инкубационной смеси добавляют 50 мкл флавинмононуклеотида (ФМН) в концентрации 1,5×1015 М, 50 мкл 0,0005% миристинового альдегида и 10 мкл ферментативной системы НАДФН: ФМН оксидоредуктаза-люцифераза (все реактивы биолюминесцентной системы разводят в 0,1М К+, Na+ -фосфатном буфере с рН 7,0). После смешивания биолюминесцентных реактивов и инкубационной пробы с помощью биолюминометра, например марки "БЛМ-8803", измеряют свечение. Учитывая, что в клетках имеется определенное количество субстратов для течения различных метаболических реакций, в том числе и катализируемых исследуемыми ферментами, определяют показатели, условно названные "субстратный фон ферментов". Определение ведут в тех же условиях, что и для вышеперечисленных дегидрогеназ, но в инкубационную смесь вместо соответствующего субстрата вносят буфер. В результате измерения свечения на биолюминометре получают относительные значения активности исследуемых ферментов. Чтобы получить абсолютные значения активности, строят график зависимости интенсивности биолюминесценции от концентрации НАДФН (калибровочный график). Для этого 200 мкл стандартного раствора НАДФН в диапазоне 10-9-10-4 М вносят в кюветы биолюминометра, содержащие ФМН, миристиновый альдегид и НАДФН: ФМНоксидоредуктазу-люциферазу в концентрациях, указанных выше, после чего производят измерение интенсивности биолюминесценции. Активность дегидрогеназ рассчитывают по формуле:

где А - активность дегидрогеназы, Е на 104 лимфоцитов (1Е=1 мкмоль/мин);

∆[С] - разница концентраций НАДФН в пробах "фермент" и "фонфермента", мкмоль;

V - объем пробы, мл;

Т - время инкубации, мин.

Возникновение рецидива у больных острым лейкозом прогнозируют, если значения активности Г3ФДГ находятся в интервале 0-0,02 мкЕ, а значения активности НАДФМДГ - в интервале 0,25-6,21 мкЕ.

Клинический пример 1. Больная Н., 58 лет, поступила на стационарное лечение в гематологическое отделение ККБ №1 г.Красноярска с диагнозом: острый миелобластный лейкоз, ремиссия. Больная поступила на очередной курс химиотерапии на поддержание ремиссии. При поступлении состояние больной средней степени тяжести, беспокоит сильная слабость.

Проведено обследование по заявленному способу.

Активность ферментов в лимфоцитах крови составила:

Г3ФДГ: 0,01 мкЕ (в интервале значений: 0-0,02 мкЕ)

НАДФМДГ: 5,04 мкЕ (в интервале значений: 0,25-6,21 мкЕ)

Уровни активности ферментов снижены, у больной прогнозируют развитие рецидива острого миелобластного лейкоза.

В показателях миелограммы больной найдено 45% бластов, диагностирован ранний рецидив и назначена полихимиотерапия на индукцию ремиссии.

Клинический пример 2. Больной М., 47 лет, поступил на стационарное лечение в гематологическое отделение ККБ №1 г.Красноярска с диагнозом: острый миелобластный лейкоз, ремиссия. При поступлении состояние больного средней степени тяжести, беспокоит выраженная слабость, повышенная утомляемость. Проведено обследование по заявленному способу.

Активность ферментов в лимфоцитах крови составила:

Г3ФДГ: 1,37 мкЕ (вне интервала значений: 0-0,02 мкЕ)

НАДФМДГ: 10,23 мкЕ (вне интервала значений: 0,25-6,21 мкЕ)

По результатам определения активности Г3ФДГ и НАДФМДГ развитие рецидива не прогнозируют: у больного ремиссия. В показателях миелограммы больного найдено 5% бластов, что подтвердило диагноз ремиссии. Больному назначен курс полихимиотерапии на поддержание ремиссии.

Данный способ апробирован на 70 больных острым миелобластным лейкозом и 65 больных острым лимфобластным лейкозом, проходивших лечение в гематологическом отделении Краевой клинической больницы №1 г.Красноярска. Активность Г3ФДГ и НАДФМДГ в лимфоцитах крови определяли с помощью биолюминесцентного метода. У 17 больных острым миелобластным лейкозом и 22 больных острым лимфобластным лейкозом был спрогнозирован рецидив заболевания, который в дальнейшем был подтвержден дополнительными методами исследования. У 1 больного острым миелобластным лейкозом и 2 больных острым лимфобластным лейкозом прогноз не совпал. По сочетанию активности Г3ФДГ и НАДФМДГ было спрогнозировано развитие рецидива, но рецидив не развился, диагностирована ремиссия заболевания. Таким образом, отмечено совпадение прогноза в 98,0%.

Технический результат от реализации предлагаемого способа:

- повышение точности прогнозирования развития рецидивов у больных острыми лейкозами за счет оценки особенностей метаболизма клеток иммунной системы;

- сокращение длительности исследования;

- возможность ранней диагностики рецидива острого лейкоза;

- расширение арсенала средств для прогнозирования возникновения

рецидива у больных острыми лейкозами.

Таким образом, предложенный высокочувствительный информативный способ позволяет своевременно диагностировать прогрессирование заболевания, корректировать план и тактику лечения данной категории больных и улучшить результаты их реабилитации.

Источники информации

1. Родосская Н.К., Черноусова Г.М. Способ прогнозирования рецидива у больных острым лейкозом. RU 2319151. Опубл. 10.03.2008.

2. Савченко А.А., Сунцова Л.Н. Высокочувствительное определение активности дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови человека биолюминесцентным методом. // Лаб. дело. - 1989. - №11. - С.23-25.

Способ прогнозирования рецидивов у больных острым лейкозом путем исследования крови, отличающийся тем, что определяют активность двух дегидрогеназ - глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ) и НАДФ-зависимой декарбоксилирующей малатдегидрогеназы (НАДФМДГ), и при сочетании активности Г3ФДГ в пределах от 0 до 0,02 мкЕ и активности НАДФМДГ в пределах от 0,25 до 6,21 мкЕ прогнозируют возникновение рецидива у больных острым лейкозом.
Источник поступления информации: Роспатент

Показаны записи 1-5 из 5.
20.06.2013
№216.012.4dd4

Способ дифференциальной диагностики первой и второй групп здоровья у детей коренного населения крайнего севера

Изобретение относится к медицине, а именно к способу дифференциальной диагностки первой и второй групп здоровья у детей коренного населения Крайнего Севера. Сущность способа состоит в том, что в цельной периферической крови определяют активность фермента глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (ГЗФДГ)....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002485506
Дата охранного документа: 20.06.2013
27.01.2014
№216.012.9ba3

Ванадиевая каталитическая система для сополимеризации этилена с альфа-олефинами (варианты) и способ получения сополимера этилена с альфа-олефинами (варианты)

Изобретение относится к металлоорганической химии, в частности к новым каталитическим системам сополимеризации этилена с α-олефинами и способу получения сополимеров этилена с α-олефинами. Описаны ванадиевые каталитические системы, состоящие из комплексного соединения ванадия, сокатализатора и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002505549
Дата охранного документа: 27.01.2014
10.06.2014
№216.012.ce22

Способ прогнозирования риска внутриутробного инфицирования новорожденного

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству. Определяют показатели, характеризующие течение беременности: при экстрагенитальной патологии матери во время беременности: обострения воспалительных заболеваний мочевыделительной системы (циститы, пиелонефриты); обострения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002518541
Дата охранного документа: 10.06.2014
20.05.2015
№216.013.4be6

Способ прогнозирования развития терминальной стадии у больных хроническим миелолейкозом

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования развития терминальной стадии у больных хроническим миелолейкозом. Сущность способа состоит в том, что в лимфоцитах периферической крови больных хроническим лейкозом в развернутой стадии определяют активность двух дегидрогеназ...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002550944
Дата охранного документа: 20.05.2015
20.01.2016
№216.013.a066

Способ прогнозирования инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для прогноза развития инфекционных осложнений у больных миеломной болезнью. Для этого в сыворотке крови больных определяют уровень содержания цитокинов - фактора некроза опухоли-альфа (ФНО-альфа),...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002572704
Дата охранного документа: 20.01.2016
Показаны записи 1-10 из 13.
10.07.2013
№216.012.5312

Способ прогнозирования риска развития церебральной ишемии у новорожденных

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и неврологии. В третьем триместре беременности оценивают факторы риска и присваивают им баллы: угроза выкидыша у матери - 1 балл; анемия у беременной - 2 балла; мочеполовая инфекция у матери - 1 балл; хроническая внутриутробная гипоксия...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002486869
Дата охранного документа: 10.07.2013
20.09.2013
№216.012.6a1b

Способ определения инфицированности хламидиями больных бронхиальной астмой

Изобретение относится к области медицины, а именно к аллергологии и пульмонологии. Для определения инфицированности хламидиями больных бронхиальной астмой присваивают клинико-анамнестическим показателям баллы, а затем их суммируют. Наличие в семье больного хламидиоза (любой локализации) - 3...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002492814
Дата охранного документа: 20.09.2013
10.06.2014
№216.012.ce22

Способ прогнозирования риска внутриутробного инфицирования новорожденного

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству. Определяют показатели, характеризующие течение беременности: при экстрагенитальной патологии матери во время беременности: обострения воспалительных заболеваний мочевыделительной системы (циститы, пиелонефриты); обострения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002518541
Дата охранного документа: 10.06.2014
10.06.2014
№216.012.d073

Способ прогнозирования развития атопического дерматита у детей грудного возраста

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования развития атопического дерматита у детей грудного возраста. Сущность способа состоит в том, что в мембранах эритроцитов пуповинной крови новорожденного с помощью газовой хроматографии определяют уровень гамма-линоленовой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519134
Дата охранного документа: 10.06.2014
20.09.2014
№216.012.f666

Способ дифференциальной диагностики стадий хронизации вирусного гепатита с у подростков

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, инфектологии и гепатологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики стадий хронизации вирусного гепатита С у подростков. Для осуществления изобретения в лимфоцитах, выделенных из венозной крови больных, определяют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002528911
Дата охранного документа: 20.09.2014
27.09.2014
№216.012.f932

Способ частичной замены цветоадаптированной фотокомпозитной реставрации зуба

Изобретение относится к медицине, а именно к терапевтической стоматологии, и предназначено для использования при коррекции фотокомпозитных реставраций. Проводят воздушно-абразивную обработку поверхности фотокомпозита и твердых тканей зуба низкоабразивным очищающим порошком на основе глицина...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002529631
Дата охранного документа: 27.09.2014
10.05.2015
№216.013.482c

Способ прогнозирования антиаритмической эффективности высококонцентрированного препарата омега-3 полиненасыщенных жирных кислот при лечении больных с желудочковыми нарушениями ритма сердца и постинфарктным кардиосклерозом

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и описывает способ прогнозирования антиаритмической эффективности высококонцентрированного препарата омега-3 полиненасыщенных жирных кислот при лечении больных с желудочковыми нарушениями ритма сердца и постинфарктным кардиосклерозом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002549983
Дата охранного документа: 10.05.2015
10.05.2015
№216.013.48a3

Способ оценки антропометрических параметров у юношей

Изобретение относится к медицине, а именно к антропологии и анатомии. Проводят антропометрические измерения в сантиметрах: длины тела (ДТ), длины ноги (ДН), плечевого диаметра (ПД), тазового диаметра (ТД) и окружности бедер (ОБ). После чего рассчитывают индекс типа телосложения (ИТТ) у юношей...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002550102
Дата охранного документа: 10.05.2015
20.05.2015
№216.013.4be6

Способ прогнозирования развития терминальной стадии у больных хроническим миелолейкозом

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования развития терминальной стадии у больных хроническим миелолейкозом. Сущность способа состоит в том, что в лимфоцитах периферической крови больных хроническим лейкозом в развернутой стадии определяют активность двух дегидрогеназ...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002550944
Дата охранного документа: 20.05.2015
27.06.2015
№216.013.5ae3

Способ прогноза прогрессирования желудочковой экстрасистолии у больных постинфарктным кардиосклерозом

Изобретение относится к медицине и описывает способ прогноза прогрессирования желудочковой экстрасистолии у больных постинфарктным кардиосклерозом (ПИКС) путем обследования пациентов, при этом у пациентов в период до года после перенесенного ОИМ, с умеренной частотой желудочковой...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002554808
Дата охранного документа: 27.06.2015
+ добавить свой РИД