Результат интеллектуальной деятельности: Способ специфической профилактики ринопневмонии и мыта лошадей ассоциированной вакциной в условиях табунного содержания

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способам профилактики инфекционных болезней лошадей.

Способ включает иммунизацию ассоциированной вакциной из ровных частей вакцины против инактивированной вакцины против ринопневмонии лошадей из штамма вируса ринопневмонии СВ/69 и инактивированной вакцины против мыта из штамма бактерий Str. equi Н-5/1. Способ позволяет повысить эффективность вакцинации за счет создания иммунитета высокой напряженности и снижения трудоемкости.

Известна живая вакцина против ринопневмонии лошадей, сухая культуральная из штаммов СВ/69 (инструкция по применению утверждена Россельхознадзором 20.12.2006 г.). Однако инструкция по использованию указанной вирус-вакцины предусматривает двукратное введение, что вызывает определенные трудности при ее применении в табунном коневодстве. Также как показали предварительные исследования, нежелательно применения живых вакцин в экстремальных условиях табунного содержания вследствие их повышенной реактогенности.

Известен способ специфической профилактики ринопневмонии и сальмонеллезного аборта лошадей, включающий одновременное введение в разные места инактивированной вакцины против сальмонеллезного аборта из штамма бактерий Sal. abortus equi БН-12 и живой вирус-вакцины против ринопневмонии лошадей из штамма вируса СВ/69 (Петрова С.Г., 2006).

Однако данный способ предусматривает введение двух разных вакцин в разные места. Для профилактики ринопневмонии используется живая, а не инактивированная вакцина. Следовательно, способ является малоэффективным в условиях табунного содержания лошадей.

Вышеназванные вакцины вводятся отдельно в разные места, что значительно усложняет процесс иммунизации и повышает его трудоемкость.

Известен способ профилактики мыта лошадей, который предусматривает иммунизацию лошадей вакциной из штамма бактерий Streptococcus equi Н-5/1 с добавлением культуры штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП (патент РФ на изобретения №2703485, опубл. 17.10.2019 г., бюл. 29). Однако этот способ не используется для профилактики ринопневмонии лошадей.

Известен способ специфической профилактики ринопневмонии и сальмонеллезного аборта лошадей ассоциированной вакциной в условиях табунного содержания (патент РФ на изобретения №2424823, опубл. 27.07.2011 г., бюл. №21). Однако вакцина не используется для профилактики мыта лошадей.

Предложен способ специфической профилактики ринопневмонии, сальмонеллезного аборта и мыта лошадей ассоциированной вакциной (патент РФ на изобретение №2506093, опубл. 10.02.2014 г., бюл. №4).

Однако трехвалентная вакцина может быть использована при заболевании сальмонеллезом, ринопневмонией и мытом. Обычно молодняк лошадей наиболее часто болеет ринопневмонией и мытом. Сальмонеллез у молодых лошадей регистрируется единично. Также трехвалентная вакцина обладает остаточной токсичностью, которая подтверждена на лабораторных мышах. Высокая себестоимость трехвалентной вакцины снижает экономическую эффективность иммунопрофилактики. В трехвалентной вакцине в качестве компонента против мыта использован штамм бактерий Streptococcus equi Н-34, который в настоящее время снят с депонирования (снижение иммуногенности). В качестве нового способа профилактики ринопневмонии и мыта использован новый штамм мытного стрептококка Streptococcus equi Н-5/1.

Установлено, что ринопневмония обладает иммунодепрессивными способностями, которая осложняет течение мыта. Доказано одновременное течение ринопневмонии, мыта и сальмонеллеза у молодняка лошадей. Ввиду того, что ринопневмония может протекать одновременно с мытом актуальным остается разработка двухвалентной комбинированной вакцины против мыта и ринопневмонии лошадей, предусматривающей однократную иммунизацию против двух болезней.

В доступной нам литературе нет данных об аналогах двухвалентной вакцины для профилактики ринопневмонии и мыта лошадей. Введение разных вакцин в ограниченный период массовых обработок при табунном коневодстве является трудоемким мероприятием. Одновременное введение разных иммунобиологических препаратов запрещается ветеринарным законодательством.

В основу изобретения положена задача разработки способа профилактики ринопневмонии и мыта молодняка лошадей ассоциированной инактивированной вакциной.

Технический результат изобретения. Для изготовления ассоциированной вакцины используют равные части инактивированной вакцины из штамма вируса СВ/69 и инактивированной вакцины из штамма бактерий Streptococcus equi Н-5/1. К вакцине добавляют культуральную жидкость штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП, которая повышает иммуногенность вакцины и иммунобиологическую реактивность организма. Введение ассоциированной вакцины с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП вызывает иммунитет высокой напряженности не менее чем у 75-80% вакцинированных лабораторных животных и снижает заболеваемость мытом и ринопневмонией (предохраняет от заболевания 96,8% молодняка).

В качестве компонента ассоциированной вакцины используют штамм бактерий Str. equi Н-5/1, депонированный в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) (справка о депонировании штамма от 31.05.2018 г., №1882/11, регистрационный номер ВКШМ-Б-141П от 22.05.2018). Штамм получен в лаборатории ветеринарной биотехнологии Якутского НИИ сельского хозяйства ФИЦ ЯНЦ СО РАН.

В качестве другого компонента ассоциированной вакцины применяют штамм вируса ринопневмонии СВ/69.

Для повышения эффективности ассоциированной вакцины и повышения иммунобиологической реактивности организма к вакцине в качестве иммуномодулятора добавляют культуральную жидкость бульонной культуры штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП. Штамм бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП выделен из мерзлотно-переходной среднесуглинистой почвы Якутии. Этот штамм депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ). Справки о депонировании выданы 17 октября 1994 г. за №002/9 и 6 февраля 2001 г. за №181/15. Получен патент РФ №2105810. «Штамм бактерий Bacillus subtilis, используемый для обеззараживания птичьего помета и навоза от патогенных микроорганизмов» от 27 февраля 1998 г. Лабораторными опытами подтверждена способность штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП стимулировать иммунологическую реактивность организма.

Штамм бактерий Str. equi Н-5/1 выращивают в мясопептонном бульоне, содержащем 10% сыворотки крови лошади и 1% глюкозы до накопления 3 млрд. микробных клеток в 1 мл. Бактериальную массу инактивируют формалином в течение 72 часов, затем добавляют гель гидроокиси алюминия до 6% концентрации.

Штамм СВ/69 культивируют в первичных культурах (или субкультуре) клеток почки поросенка, теленка, кролика или перевиваемых, чувствительных к вирусу культурах (ПТ, СПЭВ и др.) в течение 48-72 часов. Титр вируса культуральной жидкости до его инактивации формальдегидом должен составлять не менее 7,0-7,51 g₅₀/Mn.

Штамм бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП выращивают в мясопептонном агаре рН 7,0-7,2 в течение 5-7 суток при 37°С, затем суспензируют в физиологическом растворе хлористого натрия в концентрации 1 млрд. КОЕ в 1 мл. Фильтруют через миллипоровые фильтры.

Затем к 2 мл ассоциированной вакцины, состоящей с 1 мл инактивированной вакцины против ринопневмонии и 1 мл инактивированной вакцины против мыта, добавляют 1 мл культуральной жидкости штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП.

Для определения напряженности иммунитета отбирают 14 голов белых мышей в возрасте 10-14 суток массой 6-7 г. Первую группу (8 голов) вакцинируют двукратно с интервалом 14 дней, а вторую группу (6 голов) не вакцинируют и в дальнейшем используют в качестве отрицательного и положительного контролей. Вакцину вводят подкожно в область спины в дозе 0,3 мл.

Через 14 суток после повторной иммунизации опытных и контрольных белых мышей заражают интрацеребрально адаптированным нейротропным штаммом ПП1/1 вируса ринопневмонии лошадей в дозе 0,02*6,0 lg ТСД₅₀/мл. Эффективность иммунизации определяют по количеству мышей, устойчивых к заболеваемости и летальности. В течение 10 дней наблюдения за животными защитный эффект от экспериментального заражения вирусом ринопневмонии при двукратном введении вакцины составляет 75,5%. У мышей контрольной группы отмечают 100% заболевание и летальный исход.

Отбирают 20 белых мышей массой 18-20 грамм. Первую группу (10 голов) мышей иммунизируют ассоциированной вакциной в дозе 0,3 мл, а вторую группу (10 голов) не иммунизируют. Препарат вводят подкожно в область спины.

Через 14 дней после вакцинации] 0 голов мышей первой группы и 10 голов контрольной группы заражают суточной культурой патогенного штамма мытного стрептококка в дозе 5 LD₅₀. В течение 12 дней наблюдения за животными в первой группе заболевают и погибают 2 головы. В контрольной группе отмечают заболевание и падеж всех зараженных мышей.

Отбирают 40 голов молодняка лошадей 6-7 месячного возраста и иммунизируют однократно ассоциированной вакциной с культуральной жидкостью из штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП в дозе 3 мл.

В течение 6 месяцев наблюдения из первой группы заболевают мытом 2 головы. Эффективность иммунизации составляет 96,8%.

В группе неиммунизированного молодняка заболеваемость составляет 84,9%.

Прививка молодняка двухвалентной вакциной вызывает выработку гемагглютинизирующих антител к вирусу ринопневмонии (1:800-1:6400), и преципитирующих антител к стрептококкам (1:100) достаточно высоких титрах.

Таким образом, иммунизация инактивированной ассоциированной вакциной из штамма бактерий Str. equi Н-5/1 и штамма вируса СВ/69 с культуральной жидкостью штамма бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП вызывает иммунитет высокой напряженности и может быть использована в качестве способа профилактики ринопневмонии и мыта молодняка лошадей.