Результат интеллектуальной деятельности: Способ получения аутологичной обогащенной тромбоцитами плазмы у пациентов с пониженным уровнем гематокрита

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для получения аутологичной богатой тромбоцитами плазмы (PRP-плазма, Platelentrichplasma), применяемой, в частности, в офтальмологии, при хирургическом лечении идиопатических макулярных разрывов сетчатки.

Применение PRP-плазмы в настоящее время остается одним из перспективных направлений лечения большого спектра офтальмологических заболеваний, в частности, идиопатических макулярных разрывов сетчатки.

Эффективность лечения в наибольшей степени зависит от качества PRP, которая в идеале не должна содержать иных компонентов, кроме жизнеспособных, богатых факторами роста тромбоцитов при максимально возможном их числе.

Известные методики получения PRP-плазмы различаются количеством забираемой крови, длительностью процедуры приготовления PRP, используемым оборудованием и конечной концентрацией тромбоцитов в полученной плазме.

Известен способ получения аутоплазмы с богатым содержанием тромбоцитов, получивший название Плазмолифтинг™, применяющийся в травматологии, спортивной медицине, стоматологии, косметологии. Эта технология предусматривает использование специализированных пробирок (Номер регистрационного удостоверения: ФСЗ №2008/01447 от 24 мая 2010 г.), на внутренней стенке которых в верхней и средней ее части нанесен мелкодисперсионный гепарин натрия, в нижней части разделительный гель. Разделительный гель отделяет эритроциты, создавая необходимую терапевтическую концентрацию тромбоцитов в плазме, а также дополнительно фильтрует низкомолекулярные жирные кислоты и холестерин, пропуская аминокислоты, витамины, электролиты и гормоны. Гель сохраняет состав тромбоцитарной аутоплазмы. В пробирке находится инфузионная форма гепарина натрия для предотвращения свертывания крови и преждевременной активации тромбоцитов.

Проводят забор крови из вены пациента с помощью иглы-бабочки. Кровью наполняют пробирку до тех пор, пока не компенсируется созданный вакуум в пробирке. Затем устанавливают пробирку в центрифугу. Время между процедурой забора крови и центрифугированием не должно превышать 10 минут. Относительная сила центрифугирования: 850-1250 об/мин в течение 5 минут.

Известен способ получения аутологичной обогащенной тромбоцитами плазмы для лечения макулярных разрывов, состоящий в заборе крови из вены пациента в объеме 10 мл с помощью иглы-бабочки и помещении ее в специальную пробирку, на внутренней стенке которой в верхней и средней частях нанесен мелкодисперсный гепарин натрия, в нижней части - разделительный гель, помещении пробирки в центрифугу и осуществлении центрифугирования в течение 10 мин с относительной силой центрифугирования 1000 об/мин, после чего проводят забор плазмы шприцом, избегая попадания геля в иглу. Время между процедурой забора крови и центрифугированием составляет 2-3 минуты (патент RU №2606338).

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ получения аутологичной богатой тромбоцитами плазмы крови с использованием пробирок YCELLBIO-KIT производства Южная Корея (РУ №РЗН 2014/2149 от 08.12.2014), включающий забор крови, смешивание с антикоагулянтом (цитрат натрия+декстроза), перенесение крови в пробирку YCELLBIO-KIT и центрифугирование при комнатной температуре со скоростью вращения 4000 об/мин в течение 5 минут (патент RU №2713772). Для мужчин объем забираемой крови составляет 12,5 мл, для женщин - 13,5 мл.

Однако у пациентов с пониженным уровнем гематокрита эти и другие известные методики не позволяют получить плазму с достаточной для терапевтического воздействия концентрацией тромбоцитов.

Гематокрит, или гематокритное число, - это величина, которая определяется отношением объема форменных элементов крови (эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов) к объему всей крови. Обозначается данная величина как Ht, определяется по общему анализу крови и измеряется в процентах или литрах. Поскольку красные клетки составляют 99% от всего количества кровяных клеток, гематокритом принято считать часть крови, приходящуюся на эритроциты. Следовательно, снижение данного показателя наблюдается при уменьшении количества эритроцитов.

Чаще всего пониженный гематокрит сигнализирует об анемии. Кроме этого, он может быть снижен при некоторых других заболеваниях, в том числе при разжижении крови, что часто характерно для пожилых пациентов, принимающих антикоагулянты длительное время, или получающих слишком много жидкости (например, при избыточном введении внутривенных растворов). Также понижение гематокрита наблюдается при хронических воспалительных процессах, онкологических заболеваниях, заболеваниях сосудов, болезнях почек и печени.

Для мужчин гематокритная величина в норме составляет:

- от 18 до 45 лет - 39-49%;

- от 45 лет - 40-50%.

Для женщин:

- от 18 до 45 лет -35-45%;

- от 45 лет - 35-47%.

Предлагаемое изобретение решает задачу разработки способа получения PRP-плазмы с концентрацией тромбоцитов, достаточной для эффективного проведения хирургических вмешательств на сетчатке, используя при этом стандартизированное оборудование, у пациентов с уровнем гематокрита ниже 39% у мужчин и ниже 35% у женщин.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Для приготовления PRP-плазмы у пациентов с пониженным уровнем гематокрита выполняют забор венозной крови в объеме 12,5 мл для мужчин и 13,5 мл для женщин в подсоединенный к катетеру шприц с предварительно набранным антикоагулянтом в количестве 1,5 мл, закрывают шприц, содержимое перемешивают и вводят в пробирку YCELLBIO-KIT иглой 18 G через парацентральное отверстие в крышке пробирки; проводят центрифугирование в течение 5 минут при комнатной температуре со скоростью вращения 4000 об/мин, извлекают слой PRP-плазмы, проводят забор дополнительно 2 мл крови, вводят ее в пробирку YCELLBIO-KIT с оставшейся смесью; после чего выполняют повторное центрифугирование содержимого пробирки в течение 4 мин со скоростью вращения 4000 об/мин, извлекают слой PRP-плазмы и добавляют к ранее полученному.

Добавление 2 мл венозной крои в пробирку после первого центрифугирования и повторное центрифугирование в течение 4 мин позволяет получить PRP-плазму у пациентов с пониженным уровнем гематокрита, в которой уровень тромбоцитов по сравнению с исходным увеличивается в 8-9 раз, что подтверждено лабораторными исследованиями. Полученный уровень тромбоцитов является оптимальным для эффективного проведения хирургического лечения офтальмологических заболеваний, в частности, идиопатических макулярных разрывов сетчатки.

Технический результат от реализации способа заключается в получении PRP-плазмы с концентрацией тромбоцитов, достаточной для проведения эффективного хирургического лечения офтальмологических заболеваний с достижением высокого функционального и анатомического результатов у пациентов с пониженным уровнем гематокрита.

Изобретение осуществляется следующим образом.

Выполняют забор крови из кубитальной вены за 30 минут до операции, перед премедикацией, в подсоединенный к катетеру-бабочке шприц объемом 20 мл с предварительно набранным антикоагулянтом (Цитрат натрия+Декстроза) - 1,5 мл, учитывая пол пациента (12,5 мл для мужчин и 13,5 мл для женщин).

После этого шприц закрывают, перемешивают содержимое путем 6-8-кратного переворачивания или вращения (без встряхивания), и переносят кровь в пробирку YCELLBIO-KIT (РУ №РЗН 2014/2149 от 08.12.2014).

Для облегчения введения кровь вводят в парацентральное отверстие крышки пробирки под углом 45° иглой 18G.

Центрифугирование проводят на лабораторной центрифуге «Armed» 80-2S с угловым ротором при комнатной температуре (от +18 до +24°С). Диапазон скорости вращения прибора - от 1000 до 4000 об/мин с шагом 500 об/мин.

Пробирку с кровью помещают в центрифугу. В противоположную ячейку ставят такую же пробирку, заполненную водой, в качестве противовеса для уравновешивания образцов. Устанавливают частоту вращения 4000 об/мин и время центрифугирования 5 минут.

После центрифугирования извлекают слой PRP-плазмы тупоконечной тонкостенной канюлей 27 G через центральное отверстие в центре пробирки. Затем проводят забор дополнительно 2 мл крови, вводят ее в пробирку YCELLBIO-KIT с оставшейся смесью, и выполняют повторное центрифугирование содержимого пробирки в течение 4 мин со скоростью вращения 4000 об/мин, извлекают слой PRP-плазмы и добавляют к ранее полученному.

Изобретение иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациентка В., 58 лет.

Обратилась в Тамбовский филиал ФГАУ «НМИЦ «МНТК Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова с жалобами на искривление и снижение зрения на левом глазу в течение 2 месяцев. При обследовании острота зрения на левом глазу 0,05. ВГД=20 мм рт.ст. При офтальмоскопии левого глаза обнаружен сквозной дефект в макуле. При обследовании на оптическом когерентном томографе выявлен макулярный разрыв D=600 мкм, без задней отслойки стекловидного тела. Диагноз: OS: Идиопатический макулярный разрыв. Уровень гематокрита, определенный по общему анализу крови, составил 32%, что обусловило использование предлагаемого способа

Проведена операция микроинвазивная субтотальная витрэктомия с применением богатой тромбоцитами плазмы, полученной из 13,5 мл крови и 2 мл добавленной крови указанным способом.

При контрольной явке через 1 месяц корригированная острота зрения левого глаза 0,5. ВГД 19 мм рт.ст. При офтальмоскопии: передний отрезок без особенностей, авитрия, макулярный разрыв блокирован, сетчатка прилежит.

При осмотре через 3 месяца после операции корригированная острота зрения левого глаза 0,6. ВГД 19 мм рт.ст. При офтальмоскопии: передний отрезок без особенностей, авитрия, макулярный разрыв блокирован, сетчатка прилежит.

Пример 2. Пациент Д., 53 года.

Обратился в Тамбовский филиал ФГАУ «НМИЦ «МНТК Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова с жалобами на снижение зрения правого глаза в течение 5 месяцев. 2 года назад была проведена факоэмульсификация катаракты обоих глаз. При обследовании острота зрения на правом глазу 0,05, ВГД=20 мм рт.ст. При офтальмоскопии правого глаза - интраокулярная линза (ИОЛ) в капсульном мешке, в центральной области сетчатки, сквозной дефект в макуле. При обследовании на оптическом когерентном томографе выявлен макулярный разрыв D=700 мкм. Диагноз: OD: Артифакия. Идиопатический макулярный разрыв.

Уровень гематокрита, определенный по общему анализу крови, составил 37%, что обусловило использование предлагаемого способа.

Проведена операция микроинвазивная субтотальная витрэктомия с применением богатой тромбоцитами плазмы, полученной из 12,5 мл крови указанным способом. При контрольной явке через 1 месяц острота зрения правого глаза 0,3, ВГД 18 мм рт.ст. При офтальмоскопии: передний отрезок без особенностей, ИОЛ в капсульном мешке, авитрия, макулярный разрыв блокирован, сетчатка прилежит.

При осмотре через 3 месяца после операции корригированная острота зрения правого глаза 0,7. ВГД 19 мм рт.ст. При офтальмоскопии: передний отрезок без особенностей, ИОЛ в капсульном мешке, авитрия, макулярный разрыв блокирован, сетчатка прилежит.