×
20.05.2023
223.018.6761

Результат интеллектуальной деятельности: Способ выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени

Вид РИД

Изобретение

№ охранного документа
0002794654
Дата охранного документа
24.04.2023
Аннотация: Изобретение относится к биотехнологии, в частности к лабораторной диагностике возбудителей инфекционных заболеваний, а также к практике ветеринарной службы. Для получения достоверной диагностики выявления генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания и в сырье для их приготовления животного происхождения способ выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени включает выделение ДНК из биологического материала от инфицированных животных сорбционным методом, постановку одноэтапной полимеразной цепной реакции - с одновременным проведением циклов амплификации с детекцией с использованием положительных и отрицательных контролей, внутреннего экзогенного контрольного образца в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×10 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, положительного контрольного образца, представляющего собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома вируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) и фрагмент генома бактериофага Т4, специфичных для участка генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) и генома бактериофага Т4, а также олигонуклеотидных праймеров. При этом все фрагменты геномов, входящие в смесь, взяты в равных частях, а для эндогенного внутреннего контроля используют флуоресцентный краситель - ROX. 4 табл., 1 пр.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к лабораторной диагностике возбудителей инфекционных заболеваний, а также к практике ветеринарной службы.

Известен способ выявления вируса лейкоза КРС по нуклеотидным последовательностям консервативных областей вирусного генома с использованием полимеразной цепной реакции в реальном времени (патент РФ №2521330, кл. C12Q 1/68, G01N 33/569, 2013 г.), включающий выделение ДНК вируса лейкоза из биологического материала от инфицированных животных сорбционным методом, постановку полимеразной цепной реакции - с добавлением внутреннего положительного контроля и проведением последовательно 40 циклов амплификации с флуоресцентной детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома возбудителя олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченного зонда, положительного и отрицательного контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей для специфического сигнала и сигнала внутреннего контроля и интерпретацию результатов на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией.

Известно использование для диагностики эндогенного внутреннего контроля, для снижения доли ошибочных результатов ПЦР в тест-системе «ЛЕЙКОЗ» для выявления вируса лейкоза КРС методом ПЦР (http://www.interlabservice.ru/upload/iblock/195/Leykoz.MANUAL.150413.pdf, 2015 г.).

В качестве такого контроля используют фрагмент гена α-актина КРС с присутствием специфической полосы на электрофореграмме на уровне 582 п.н.

Недостатком применения фрагмента гена α-актина КРС в качестве эндогенного внутреннего контроля является то, что он не является видоспецифичным для КРС, так как встречается и у других видов животных и имеет высокий уровень структурного сходства (более 90% идентичности) у разных видов позвоночных животных. Это снижает надежность его использования в целях внутреннего контроля ПЦР при исследовании биологического материала для выявления вируса лейкоза КРС, поскольку не дает достаточных оснований утверждать, что в исследуемом образце амплифицируется именно фрагмент ДНК КРС.

Наиболее близким техническим решением является изобретение (патент РФ №2700245, кл. C12Q 1/68, 2019 г.) включающий выделение ДНК из биологического материала от инфицированных животных сорбционным методом, постановку одноэтапной полимеразной цепной реакции - с одновременным проведением циклов амплификации с детекцией с использованием специфичных для участка генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) олигонуклеотидных праймеров, зондов, красителей, положительных и отрицательных контролей, внутреннего контрольного образца в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, положительного контрольного образца, представляющего собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) и фрагмент генома бактериофага Т4, со следующими нуклеотидными последовательностями:

измерение по каналу JOE(HEX)/Yellow накопление флуоресцентного сигнала для специфического сигнала тестирования наличия генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) и по каналу FAM/Green - сигнала внутреннего контрольного образца, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считается положительным, ДНК провируса лейкоза присутствует, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, ДНК провируса лейкоза отсутствует, то результат реакции - отрицательный.

Общим недостатком известных технических решений является отсутствие возможности получения достоверной диагностики выявления генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания животного происхождения.

Техническим результатом заявляемого технического решения является получение достоверной диагностики выявления генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания и в сырье для их приготовления животного происхождения.

Технический результат достигается тем, что в способе выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, включающем выделение ДНК из биологического материала от инфицированных животных сорбционным методом, постановку одноэтапной полимеразной цепной реакции - с одновременным проведением циклов амплификации с детекцией с использованием положительных и отрицательных контролей, внутреннего экзогенного контрольного образца в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, положительного контрольного образца, представляющего собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома вируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) и фрагмент генома бактериофага Т4, специфичных для участка генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) и генома бактериофага Т4, а также олигонуклеотидных праймеров, зондов со следующими нуклеотидными последовательностями:

измерение по каналу JOE(HEX)/Yellow накопление флуоресцентного сигнала для специфического сигнала тестирования наличия генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) и по каналу FAM/Green - сигнала внутреннего контрольного образца, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считается положительным, ДНК провируса лейкоза присутствует, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, ДНК провируса лейкоза отсутствует, то результат реакции - отрицательный, согласно изобретению в качестве биологического материала используют пробы продуктов и сырья животного происхождения, а в смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) и фрагмент генома бактериофага Т4 добавляют фрагмент гена бета-актина крупного рогатого скота, который используют в качестве эндогенного внутреннего контроля с праймерами, имеющими следующие нуклеотидные последовательности:

при этом все фрагменты геномов и ген бета-актина крупного рогатого скота, входящие в смесь положительного контрольного образца взяты в равных частях, а для эндогенного внутреннего контроля используют флуоресцентный краситель - ROX.

Новизна заявляемого технического решения заключается в том, что для повышения точности выявления генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания животного происхождения используют фрагмент гена бета-актина крупного рогатого скота в качестве эндогенного внутреннего контроля.

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».

Заявляемый способ рекомендовано использовать в ветеринарной службе, для выявления генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания, что соответствует критерию «промышленная применимость».

Способ выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания осуществляют следующим образом

Предварительно сорбционным методом выделяют из биологического материала, в качестве которого использованы пробы продуктов питания или сырья для их приготовления животного происхождения геном провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV), взятый от животных.

Далее проводят постановку одноэтапной полимеразной цепной реакции - с одновременным проведением циклов амплификации с детекцией с использованием специфичных для участка генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) олигонуклеотидных праймеров, зондов, красителей, положительных и отрицательных контролей, внутреннего контрольного образца в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл и положительного контрольного образца, представляющего собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV), фрагмент генома бактериофага Т4 и фрагмент гена бета-актина крупного рогатого скота, который используют в качестве эндогенного внутреннего контроля, при этом все фрагменты геномов и гена, входящие в смесь положительного контрольного образца взяты в равных частях со следующими нуклеотидными последовательностями:

Затем измеряют по каналу JOE(HEX)/Yellow накопление флуоресцентного сигнала для специфического сигнала тестирования наличия генома провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) и по каналу FAM/Green - сигнала внутреннего контрольного образца, а для эндогенного внутреннего контроля используют канал - ROX/Orange, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считается положительным, ДНК провируса лейкоза присутствует, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, ДНК провируса лейкоза отсутствует, то результат реакции - отрицательный.

Ген бета-актина является белком, синтезирующийся практически во всех клетках организма и отвечающий за их подвижность.

Использование для положительного контрольного образца гена бета-актина крупного рогатого скота в качестве эндогенного внутреннего контроля обусловлено тем, что обеспечивается возможность контролировать корректное прохождение реакции в каждой пробирки, а также контролируется этап выделения ДНК из образцов.

Выбор последовательности и расчет первичной структуры олигонуклеотидных праймеров и зондов.

Праймеры, специфичные для ДНК Bovine leukosis virus были отобраны на основе консервативного участка гена "pol" (Bovine leukemia virus complete genome, AF033818.1) и спроектированы с использованием Primer Express Software v3.0 (Applied Biosystems). С помощью BLAST праймеры были проверены на отсутствие гомологии с последовательностями других вирусов и генома человека. Термодинамический анализ выбранных праймеров был выполнен с помощью Vector NTI. Расчетная длина специфического фрагмента составила 98 пар нуклеотидов.

Для детекции продуктов амплификации был подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд TMBLV-P (комплементарный участку нук-леотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров TMBLV-F и TMBLV-R). Зонд был помечен красителем R6G. Для гашения самопроизвольной флуоресценции на 3"-конце олигонуклеотидного зонда прикреплен гаситель BHQ-1. Основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПНР были описаны с помощью программы "Oligo 6.0".

В качестве внутреннего контрольного образца использовался бактериофаг Т4, имеющий геномную ДНК порядка 169-170 тысяч пар нуклеотидов (Enterobacteria phage Т4Т, complete genome GenBank: HM137666.1). В результате анализа был выбран участок между 400 и 500 нуклеотидами, содержащий уникальные нуклеотидные последовательности, рассчитаны первичные структуры олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих выбранный участок генома. Праймеры были спроектированы с использованием Primer Express Software v3.0 (Applied Biosystems) и исследованы с использованием BLAST, чтобы подтвердить их специфичность.

Для использования в качестве эндогенного внутреннего контроля разработаны праймеры на участок гена бета-астина, на основе референсной последовательности NCBI [ВТ030480 1776 bp mRNA linear МАМ 04-MAY-2007 DEFINITION Bos taurus actin, beta (ACTB), mRNA, complete cds.]. Зонд на 3'-конце помечен флуоресцентным красителем РОХ. Для гашения самопроизвольной флуоресценции на 3'-конце олигонуклеотидного зонда (АС-Р) поставлен гаситель BHQ-2.

Пример конкретного осуществления способа выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания

Список сокращений, используемых в примере:

ВКО - внутренний контрольный образец

К- - отрицательный контроль

ВК- - отрицательный контроль этапа экстракции

К+ - положительный контроль

ОКО - отрицательный контрольный образец

ПКО - положительный контрольный образец

ПЦР РВ - полимеразная цепная реакция с флуоресценной детекцией в режиме реального времени

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

НК - нуклеиновая кислота

BLV - Bovine leukosis virus

Для исследования пробы продуктов или сырье для их приготовления животного происхождения, гомогенизируют с использованием стерильных фарфоровых ступок и пестиков, затем готовят 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе или фосфатном буфере. Суспензию переносят в пробирку объемом 1,5 мл и центрифугируют при 10-12 тыс. об./мин в течение 2 минут. Надосадочную жидкость используют для экстракции НК. В некоторых случаях образовавшуюся суспензию не центрифугируют, а отстаивают при комнатной температуре в течение 5 мин, затем верхнюю фазу по 0,4-0,5 мл переносят пастеровской пипеткой (или наконечником с аэрозольным барьером) в пробирки на 1,5 мл, и в количестве 0,1 мл используют для выделения НК.

Молоко в объеме до 10 мл центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10-15 мин. Надосадочную жидкость осторожно отбирают, оставив над осадком примерно 0,2 мл жидкости. Осадок ресуспендируют в оставшейся надосадочной жидкости и 0,1 мл суспензии используют для выделения ДНК.

Затем проводят исследование с помощью наборов реагентов «ПЦР-ЛЕЙКОЗ-FOOD-ФАКТОР», состоящие из комплекта реагентов для проведения мультиплексной ПЦР РВ (комплект №1) и комплекта контрольных образцов (комплект №2).

Набор выпускается в двух вариантах:

• Для анализа 55 образцов (включая контрольные образцы).

• Для анализа 110 образцов (включая контрольные образцы).

Наборы используются в соответствии инструкции ТУ 21.10.60-250-51062356-2021 Для диагностики in vitr (http://www.vetfaktor.ru/.)

Состав набора приведен в таблицах 1 и 2.

В набор не входят реактивы для экстракции нуклеиновых кислот.

Выделение ДНК может проводиться, например, с помощью наборов на основе сорбционного метода, в состав которых входит силика или микроцентрифужные колонки, и также наборов на основе фенол-хлороформной экстракции и т.п. Исследования состоят из 3-х этапов:

- экстракция НК;

- проведение ПНР РВ;

- учет результатов анализа.

Для экстракции ДНК из продуктов питания рекомендуется использовать комплект реагентов «ДНК-ПЛАНТ-ФАКТОР» по инструкции (или аналогичный) https://www.vetfaktor.ru/products/nabory-dlya-vydeleniya-nk/gmo-s-factor-kat-edp001-vet-55-prob.html.

Отобрать необходимое количество одноразовых пробирок объемом 1,5 мл, включая отрицательный контроль выделения. Внести во все пробирки с исследуемыми образцами, включая пробирку для ОКО, по 10 мкл ВКО BLV-F (суспензия бактериофага Т4). Внести исследуемые пробы в объеме согласно инструкции к набору для выделения НК, в пробирку отрицательного контроля выделения (ВК-) вместо исследуемой пробы внести ОКО2 (Вместо ОКО допускается использование физиологического раствора, ТЕ-буфера, дистиллированной воды. Реагенты должны быть чистыми и стерильными. Запрещается использовать забуференный физиологический раствор!) (пробирку обозначить как ВК-).

Выделять НК из анализируемых и контрольных образцов согласно протоколу инструкции производителя набора для выделения НК.

Выделенную ДНК можно хранить в течение одной недели при температуре от 2°С до 8°С или в течение года при температуре не выше минус 16°С.

Для проведения ПЦР осуществляют подготовку образцов, при этом общий объем реакционной смеси - 25 мкл, объем ДНК-пробы - 10 мкл.

Успешное прохождение реакции контролируют использованием ПКО BLV-F, ВКО BLV-F и ДНК буфера.

В отдельной пробирке смешать компоненты набора из расчета на каждую реакцию ПЦР:

5 мкл ПЦР СМЕСЬ BLV-F;

10 мкл смеси ПЦР БУФЕР BLV-F;

0,5 мкл TAQ POLYMERASE

Перемешать смесь на вортексе и сбросить капли кратковременным центрифугированием.

Отобрать необходимое количество пробирок для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб. Внести по 15 мкл приготовленной реакционной смеси.

Используя наконечники с фильтром в подготовленные пробирки внести:

а) в пробирку отрицательного контроля ПЦР (К-) 10 мкл ДНК буфера;

б) в ряд пробирок для исследуемых проб - в каждую внести по 10 мкл ДНК соответствующей пробы, полученной по п. 7.1 (включая пробу ВК-);

в) в пробирку с положительным контролем ПЦР (К+) 10 мкл ПКО BLV-F.

Далее проводят реакцию ПЦР РВ с флуоресцентной детекцией на приборе «Rotor-Gene Q».

Параметры температурно-временного режима амплификации на этом приборе представлены в таблице 3.

Поместить подготовленные для проведения ПЦР пробирки в ячейки амплификатора. Запрограммировать прибор согласно инструкции производителя этого прибора.

Интерпретация результатов анализа

Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в режиме «реального времени» в соответствии с инструкцией производителя к прибору.

Учет результатов ПЦР-анализа проводится по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла «Ct» для исследуемого образца).

Результат считается достоверным в случае корректного прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и экстракции ДНК в соответствии с таблицей 4.

Появление любого значения Ct в таблице результатов для отрицательного контроля этапа экстракции ВК- на канале JOE(HEX)/Yellow и для отрицательного контроля этапа ПЦР К- на любом из каналов свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты анализа по всем пробам считаются недействительными. Требуется повторить анализ всех проб, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации (рекомендуется поставить смывы).

Образцы, для которых по каналу FAM/Green значение Ct отсутствует или превышает 32 цикл (и при этом по каналу JOE(HEX)/Yellow отсутствует значение Ct) требуют повторного проведения исследования с этапа ПЦР. Задержка в значениях пороговых циклов для исследуемых образцов на канале FAM/Green указывает на присутствие ингибиторов в пробе(ах) или на ошибки при экстракции ДНК или при постановке реакции. Требуется провести исследование, начиная с этапа экстракции ДНК.

Если для выделенных образцов по каналу ROX/Orange значение Ct отсутствует или превышает 32 цикл, повторно проводят исследования с этапа выделения ДНК. Задержка в значениях пороговых циклов может указывать на не корректный забор материала и отсутствие ДНК КРС.

Образец считается положительным (ДНК провируса лейкоза КРС присутствует) если наблюдается экспоненциальный рост сигнала на канале JOE(HEX)/Yellow, при этом значения Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (табл. 4). Если для исследуемого образца по каналу JOE(HEX)/Yellow значение Ct определяется позднее 32 цикла при корректном прохождении положительных и отрицательных контролей - он считается спорным и исследуется повторно с этапа выделения НК. Если при повторной постановке наблюдается схожий результат (Ct на канале JOE(HEX)/Yellow более 32), требуется повторное взятие материала от того же животного для проведения ПЦР-исследования и (или) использование альтернативных методов диагностики.

В случае получения значения Ct на канале JOE(HEX)/Yellow менее 32 при исследовании повторно взятого от животного материала - образец считать положительным.

Образец считается отрицательным (ДНК провируса лейкоза КРС отсутствует), если не наблюдается рост сигнала флуоресценции на канале JOE(HEX)/Yellow, при этом значения Ct по каналам ROX/Orange и FAM/Green и Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (Табл. 4).

Для доказательства эффективности выявления ДНК провируса лейкоза крупного рогатого скота (Bovine leukosis virus, BLV) в продуктах питания методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени проводился сравнительный анализ чувствительности заявляемого с прототипом. Оказалось, что чувствительность ПЦР с флуоресцентной детекцией при обнаружении ДНК провируса лейкоза КРС в продуктах питания на 2,8-3,4% выше, чем в прототипе.

Источник поступления информации: Роспатент

Showing 121-130 of 465 items.
26.12.2018
№218.016.aaef

Способ обнаружения дефекта электрического кабеля

Изобретение относится к электроизмерениям и может использоваться для обнаружения и локализации дефекта в виде замокшего участка электрического кабеля. Технический результат: повышение точности определения дефекта, возможность определения длины замокшего участка кабеля. Сущность: перед...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002676053
Дата охранного документа: 25.12.2018
26.12.2018
№218.016.ab3a

Станок вибрационный для шлифования семян

Изобретение относится к сельскохозяйственному машиностроению. Предложен станок вибрационный для шлифования семян, содержащий шлифовальный барабан с разгрузочным окном, бункер-дозатор, выгрузной лоток, установленные упруго на основании. Барабан выполнен из секций, каждая их которых смонтирована...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002675958
Дата охранного документа: 25.12.2018
26.12.2018
№218.016.abe4

Способ повышения продуктивности и качества мяса цыплят-бройлеров

Изобретение относится к птицеводству, в частности к способу повышения продуктивности и качества мяса цыплят-бройлеров. Способ включает дозированное введение инулинсодержащего пребиотика в питание цыплят, в качестве которого используют добавку, содержащую инулин не менее 97% от сухого вещества....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002675973
Дата охранного документа: 25.12.2018
11.01.2019
№219.016.ae90

Мельница

Изобретение относится к технике измельчения сыпучих материалов и может найти применение в пищевой, строительной, химической и металлургической промышленности, а также в сельскохозяйственном производстве. Мельница содержит барабан, привод, загрузочную и разгрузочную цапфы. Барабан изготовлен по...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002676709
Дата охранного документа: 10.01.2019
16.01.2019
№219.016.afc5

Способ лечения уролитиаза у плотоядных

Изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использовано для лечения уролитиаза у плотоядных. Для этого внутримышечно вводят спазмолитический препарат - папаверин в дозе 0,1 мл на кг массы тела в течение 2-3 дней. После введения папаверина в течение 2-х дней подряд в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002677195
Дата охранного документа: 15.01.2019
16.01.2019
№219.016.afef

Вибрационное устройство для измельчения сыпучих материалов

Изобретение относится к технике измельчения сыпучих материалов и может найти применение в пищевой, строительной, химической и металлургической промышленности, а также в сельскохозяйственном производстве. Устройство содержит привод, барабан с загрузочной и разгрузочной цапфами. Барабан выполнен...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002677138
Дата охранного документа: 15.01.2019
16.01.2019
№219.016.affe

Способ получения концентрированного белкового корма

Изобретение относится к масложировой промышленности, а также к сельскому хозяйству. Способ получения концентрированного белкового корма включает обрушивание и дробление семян, их отвеивание, прессование семян с получением жмыха в пресс-экструдере, очистку жмыхового масла, при этом оставшиеся...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002677137
Дата охранного документа: 15.01.2019
18.01.2019
№219.016.b150

Установка для предпосевной обработки семян

Изобретение относится к области сельскохозяйственного машиностроения, в частности к оборудованию для предпосевной обработки семенного материала, и может быть использовано для подготовки к посеву мелкосемянных культур, например моркови. Установка для предпосевной обработки семян содержит...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002677305
Дата охранного документа: 16.01.2019
22.01.2019
№219.016.b2b1

Початкоотделяющий аппарат

Изобретение относится к области сельскохозяйственного машиностроения, преимущественно к кукурузоуборочным комбайнам. Початкоотделяющий аппарат содержит пару встречно вращающихся рифленых вальцов, установленные над ними початкоотделяющие пластины, которые содержат в своей средней части со...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002677784
Дата охранного документа: 21.01.2019
25.01.2019
№219.016.b3e2

Способ производства мясорастительных котлет с мясом страуса

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к технологии получения полуфабрикатов на мясорастительной основе. Способ производства мясорастительных котлет предусматривает измельчение на волчке мяса, лука репчатого свежего, свежего картофеля, куттерирование с одновременным введением...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002678118
Дата охранного документа: 23.01.2019
Showing 121-130 of 253 items.
26.08.2017
№217.015.e349

Машина полевая для заготовки и сбора зернового вороха

Изобретение относится к сельскохозяйственному машиностроению. Машина полевая для заготовки и сбора зернового вороха содержит энергосредство с передней и задней навесками. На переднюю навеску энергосредства навешаны жатка с мотовилом, режущим аппаратом и шнеком, роторное молотильно-сепарирующее...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002626161
Дата охранного документа: 21.07.2017
26.08.2017
№217.015.e396

Полимерное изделие для защиты сельскохозяйственных животных от эктопаразитов

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к средствам защиты сельскохозяйственных животных от укусов насекомых, и может быть использовано для защиты сельскохозяйственных животных от эктопаразитов в период их пастбищного содержания. Полимерное изделие для защиты...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002626199
Дата охранного документа: 24.07.2017
26.08.2017
№217.015.e53b

Стабилизатор напряжения постоянного тока

Изобретение относится к электротехнике и предназначено для стабилизации напряжения источников постоянного тока. Для повышения надежности работы стабилизатора напряжения и возможности принудительного регулирования выходного напряжения в стабилизаторе напряжения постоянного тока, содержащем...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002626462
Дата охранного документа: 28.07.2017
29.12.2017
№217.015.f166

Штамм "шевченко-2014" вируса геморрагической болезни кроликов для изготовления вакцинных, диагностических и лечебных препаратов

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается штамма вируса геморрагической болезни кроликов, семейства Caliciviridae, род Lagovirus. Представленный штамм депонирован под номером 55 в Автономной некоммерческой организации «Научно-исследовательский институт...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002631925
Дата охранного документа: 28.09.2017
29.12.2017
№217.015.f57f

Способ определения нематоцидной активности авермектинсодержащих субстанций и препаратов

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу биотестирования активности противопаразитарных субстанций и препаратов, содержащих в качестве активного вещества авермектины и их производные, с помощью олигохет вида Tubifex tubifex. Сущность способа заключается в том, что...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002637087
Дата охранного документа: 29.11.2017
29.12.2017
№217.015.f836

Способ подготовки биоматериала для контроля качества дезинфекции свинарников от вируса африканской чумы свиней

Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает отбор пробы навоза, гомогенизацию навоза с использованием стерильных фарфоровых ступок и пестиков, готовят 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе или фосфатном буфере. Проводят центрифугирование с разделением фаз...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002639572
Дата охранного документа: 21.12.2017
19.01.2018
№218.015.ffb8

Способ профилактики африканской чумы свиней

Изобретение относится к области ветеринарии. Предложен способ профилактики африканской чумы свиней, включающий выявление животных с инфекционным заболеванием на начальной стадии развития, убой больных и дальнейшее обследование остальных животных. Остальных животных в очаге инфекционного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002629399
Дата охранного документа: 29.08.2017
19.01.2018
№218.015.fffc

Препарат для лечения паразитозов мелких домашних животных

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения и профилактики паразитозов мелких домашних животных. Препарат содержит авермектины, меланин гречихи, спирт изопропиловый, Твин-80, 1,2-пропиленгликоль и пищевую приманку при следующем соотношении компонентов, мас. %:...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002629600
Дата охранного документа: 30.08.2017
19.01.2018
№218.016.0025

Лекарственное средство иммуномодулирующего действия

Изобретение относится к медицине, в частности к лекарственному средству, обладающему иммуномодулирующим и противовирусным действием. Лекарственное средство, обладающее иммуномодулирующим и противовирусным действием, представляющее собой экстракт травы солянки лиственничнолистной [Salsola...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002629331
Дата охранного документа: 28.08.2017
19.01.2018
№218.016.0035

Гидропонная установка

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к гидропонному выращиванию растений. Гидропонная установка содержит блок управления, культивационный сосуд с датчиком уровня воды, озонатор и установку теплоснабжения. Воздухопровод озонатора установлен в скважине. Установка...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002629277
Дата охранного документа: 28.08.2017
+ добавить свой РИД