Результат интеллектуальной деятельности: Способ усиления роста меланомы В16/F10 по сравнению с ростом меланомы В16/F10 при самостоятельной перевивке и замедления роста LLC (карциномы Льюиса) по сравнению с ростом LLC при самостоятельной перевивке при первично-множественных злокачественных опухолях на фоне первичного иммунодефицита

Изобретение относится к онкологии, а именно к экспериментальной онкологии, и может быть использовано для изучения первично-множественного процесса в эксперименте.

Первичные иммунодефицитные расстройства–первичный иммунодефицит (ПИД) представляют собой группу из более чем 400 наследственных заболеваний, которые возникают при отсутствии или дисфункции хотя бы одного компонента иммунной системы (см. BousfihaA. etal., 2019; TangyeS.G. etal., 2020). Пациенты с ПИД имеют более высокий риск развития тяжелых и часто смертельных инфекций, аллергии, аутоиммунных осложнений и злокачественных новообразований (см. HaasO.A., 2018;deWitJ. etal., 2019). Не так давно ПИД считался редким состоянием. Однако с появлением высокопроизводительных технологий секвенирования следующего поколения точность диагностики ПИД заметно улучшилась (см. GalloV. etal., 2016), как следствие, частота ПИД увеличилась примерно с 1/10000 до 1/1000– 1/5000 за последние годы (см. TangyeS.G. etal., 2020). Обнаружение новых генетических дефектов продолжает увеличивать частоту ПИД. По этим причинам лучшее понимание осложнений, связанных с ПИД, имеет решающее значение для улучшения лечения и клинических результатов пациентов.

Среди осложнений, связанных с ПИД, особое внимание уделяется раку. Несколько крупных когортных исследований, проведенных в различных частях мира, показали повышенный относительный риск развития рака у пациентов с ПИД (см. Jonkman-Berk B.M. et al., 2015; Mayor P.C. et al., 2018). Рак при ПИД часто включает гематологические злокачественные новообразования, которые могут возникать из-за внутренней неспособности регулировать генетическую нестабильность и трансформацию клеток во время дифференцировки гемопоэтических клеток и/или из-за измененного иммунного надзора за опухолью с помощью цитотоксических лимфоцитов. Во время диверсификации B-клеточного рецептора (BCR) и T-клеточного рецептора (TCR), B- и T-клетки претерпевают сложные генетические изменения, включая двухцепочечные разрывы ДНК, репарацию ДНК, пролиферацию и гибель клеток (AltF.W. etal., 2013).

Иммунологический надзор за опухолью осуществляет несколько типов иммунных клеток с цитотоксическими лимфоцитами, CD8₊Т-клетками и естественными киллерами (NK), которые играют важную роль в элиминации раковых клеток (Martinez-LostaoL. etal., 2015). Обнаружение и уничтожение раковых клеток зависит от способности цитотоксических лимфоцитов формировать стабильный и функциональный литический иммунологический синапс (IS).

IS можно определить как интерфейс между цитотоксической иммунной клеткой и клеткой-мишенью. Центр IS состоит из замкнутого наноразмерного пространства, называемого синаптической щелью, где происходит большая часть межклеточных коммуникаций. И цитотоксическая клетка, и клетка-мишень взаимодействуют с множеством комплементарных рецепторов и лигандов через синаптическую щель. Для CD8+ Т-клетки, взаимодействие между Т-клеточным рецептором (TCR) и основным комплексом гистосовместимости (MHC) класса I имеет решающее значение для уничтожения клетки-мишени.

Для NK-клеток распознавание активирующих и ингибирующих лигандов рецепторами, специфичными для NK-клеток, приводит к ответной реакции киллинга. Эти взаимодействия запускают внутриклеточные сигналы, которые позволяют цитотоксическим лимфоцитам соответственно реагировать на встреченную клетку. Когда родственная клетка-мишень является здоровой клеткой, образуется тормозной синапс. Этот ингибирующий синапс предотвращает участие литического аппарата цитотоксических лимфоцитов и, таким образом, предохраняет здоровые клетки от цитотоксических пагубных эффектов (WurzerH. etal., 2019). Когда цитотоксические клетки контактируют с антигенпрезентирующими клетками (APC), такими как дендритные клетки (DC), литический каскад не запускается, и собранный синапс называется регуляторным синапсом (WurzerH. etal., 2019). Регуляторные синапсы необходимы для стимуляции праймирования CD8+Т-клеток с помощью DC, но также для лицензирования DC с помощью CD4+ T-клеток. Наконец, если клетка-мишень распознается как злокачественная, формируется литический IS (WurzerH. etal., 2019).

Характерной чертой литического IS является секреция цитотоксических молекул внутри щели. После высвобождения цитотоксические молекулы проникают в раковые клетки и вызывают их гибель, в основном за счет апоптоза. Направленное высвобождение цитотоксических гранул в направлении клетки-мишени гарантирует, что окружающие здоровые клетки не будут затронуты защитным механизмом иммунного надзора (HsuH.T. etal., 2016). У пациентов с ВЗОМТ с аномально функциональными цитотоксическими лимфоцитами иммунный надзор нарушен (BousfihaA. etal., 2019; TangyeS.G.etal., 2020). В результате у пациентов с ПИД часто возникают и прогрессируют злокачественные новообразования. Нарушения функций цитотоксических клеток могут происходить на нескольких этапах во время уничтожения раковых клеток и могут влиять на несколько субклеточных сетей. Например, у пациентов с ПИД часто изменяется IS. В большинстве случаев потеря молекул в актине и цитоскелете микротрубочек вызывает дефектное образование IS. Актин и цитоскелет микротрубочек необходимы для поддержки архитектуры и динамики IS, особенно трех концентрических надмолекулярных активационных кластеров (SMAC) (центральных, периферических и дистальных), наблюдаемых в IS T-клеток (HammerJ.A. etal., 2019). Помимо мутаций в белках цитоскелета, у пациентов с ПИД обычно обнаруживаются мутации в молекулах аппарата экзоцитоза.

За последнее десятилетие достижения и доступность инструментов генетической диагностики, таких как секвенирование следующего поколения, пролили свет на распространенность ПИД с примерно 400 выявленными нарушениями (BousfihaA. etal., 2019). Также были проведены крупные многоцентровые исследования в разных странах для описания сложности клинических проявлений (AbolhassaniH. etal., 2018). Систематические обзоры эпидемиологических данных, описывающих частоту и характер злокачественных новообразований, связанных с ПИД, дали удивительные выводы. Во-первых, у пациентов с ПИД злокачественные новообразования возникают чаще и раньше (RiazI.B. etal., 2019 ). Во-вторых, природа злокачественных новообразований, связанных с ПИД, отличается от злокачественных новообразований, вызванных вторичной иммуносупрессией. Большинство злокачественных новообразований проявляется в виде меланомы и почечно-клеточного рака (HauckF. etal., 2018).

Из-за ослабленной иммунной системы пациенты с ПИД не могут эффективно искоренить патогены, способствующие развитию рака. Окружающая среда с ослабленным иммунитетом пациентов с ПИД не может успешно остановить распространение патогенов, способствующих развитию рака, и неспособна эффективно устранять опухолевые клетки, как только они появляются. У пациентов с ПИД процесс «поиска и уничтожения» опухоли, организованный цитотоксическими CD8+ Т-клетками и NK-клетками, часто является дефектным. Отсутствие как CD8+Т-клетки и NK-клетки, описанные при некоторых тяжелых комбинированных иммунодефицитах, могут легко сделать практически невозможным иммунный надзор за опухолью. Однако некоторые изменения, обычно обнаруживаемые у пациентов с ПИД, менее заметны в том смысле, что они нарушают функции цитотоксических лимфоцитов, а не просто препятствуют их развитию. Это особенно характерно для генетических мутаций с негативными последствиями для формирования, стабильности или функции IS (Mastio J. etal., 2020).

В настоящее время рак стал серьезной угрозой для здоровья человека. В различных исследованиях из разных стран сообщалось, что частота первично множественных злокачественных опухолей варьировала от 0,52% до 11,7% (DemandanteC.G. et al., 2007; Lv, M.В. et al., 2017). В разных географических регионах частота, характеристики и выживаемость, связанные с первично-множественными злокачественными опухолями (ПМЗО), были различны. Сообщается, что в 2015 году в Китае насчитывалось около 4292 000 вновь диагностированных случаев рака, что соответствует почти 12 000 новых диагнозов рака в среднем каждый день (Chen W. et al., 2016). В Соединенных Штатах в 2015 году насчитывалось в общей сложности 1658,370 новых случаев заболевания раком (Siegel R.L. et al., 2015). Исследование пациентов, подвергшихся сканированию всего тела с помощью ПЭТ/КТ, показало, что как минимум у 1,2% пациентов с раком была обнаружена другая первичная злокачественная опухоль (Ishimori T. et al., 2005). Вероятность развития синхронных злокачественных новообразований варьирует от 34,9 до 41%, а для метахронных новообразований от 59 до 66% в разных исследованиях (Sapalidis, K. etal., 2016). Мета анализ, основанный на литературных источниках, показывает, что частота развития второй опухоли составляет от 3 до 5%, третьей опухоли около 0,5% и четвертой опухоли 0,3% (Sisti A. et al., 2016).

Для изучения механизмов канцерогенеза важно подобрать соответствующую модель. На сегодняшний день наиболее часто используют мышиные и крысиные модели. Мышь имеет ряд преимуществ по сравнению с другими млекопитающими: финансово выгодное содержание, короткий репродуктивный цикл, возможность использования методов генной инженерии. Линию мышей BALB/c (Bagg albino C) и C57Bl/6J – инбредную линию черной масти, используют практически во всех медицинских и биологических исследованиях. Обе вышеперечисленные линии являются стандартными для онкологии. Также для работ иммунологов и онкологов требуются мыши с подавленным иммунитетом. У этих мышей отсутствует тимус, что формирует у них первичный иммунодефицит, и волосяной покров. Они известны под названием «голые мыши» (Nude mouse).

Известен способ воспроизведения метастазов печени в эксперименте путем перевивки злокачественной опухоли в селезенку белых беспородных крыс, предварительно выведенную под кожу. После заживления операционной раны в ткань селезенки имплантируют суспензию опухолевых клеток саркомы 45 в физиологическом растворе в объеме 0,1 мл в разведении 1×10⁶. Через 2,5-3 недели проводят морфологическое исследование печени. Предложенный способ исключает влияние стрессорных факторов (оперативное вмешательство, общая анестезия) на процесс метастазирования злокачественной опухоли в печень, приближая его к естественному; позволяет отслеживать динамику роста первичного опухолевого узла, предполагает распространение метастазов в печень только наиболее значимым -- гематогенным путем, и может быть применен для разработки методов экспериментальной терапии этой патологии (см. Патент РФ № 2538243).

Известен способ моделирования лимфогенного и гематогенного метастазирования мышиной меланомы В16/F10 у белых нелинейных крыс, заключающийся в том, что через 2 недели после предварительного выведения селезенки под кожу передней брюшной стенки в нее имплантируют суспензию опухолевых клеток мышиной меланомы В16/F10  в физиологическом растворе в объеме 0,1 мл и в разведении 1:10, и через полгода от момента перевивки регистрируют лимфогенный и гематогенный путь распространения меланомы с морфологически подтвержденным метастатическим поражением внутренних органов: печени, тимуса, лимфатических узлов, поджелудочной железы (см. Патент РФ № 2615908).

Известен способ для получения злокачественной опухоли, растущей в ткани легкого. Взвесь опухолевых клеток перед введением разводят стерильным физиологическим раствором 1:5 по объему и набирают в стерильный шприц. Самцам белых беспородных крыс, после фиксации их на спине, вводят опухолевую взвесь в подключичную вену в дозе 0,5 мл. На 14-21 сутки от момента перевивки саркомы 45 у самцов развивается визуализируемая опухоль, которую можно извлечь и перевить. По мнению авторов, этот способ должен обеспечивать100% воспроизводимость, приводя к перевивке опухолевых трансплантатов во всех случаях, что, в свою очередь, даст возможность постановки массовых экспериментов за относительно короткий срок и в большом количестве при простоте исполнения (см. Патент РФ № 2388064).

Известен способ для получения злокачественной опухоли,
растущей в ткани легкого путем введения самцам белых беспородных крыс в подключичную вену бензпирена в дозе 0,5 мл. Опухоль развивается чере4-4,5 месяца. На этой модели удобно изучать патогенез злокачественного роста. Модель дает возможность постановки массовых экспериментов при простоте исполнения (см. Патент № 2375758).

Карцинома легких LLC возникла спонтанно у мышей С57Bl/6 в 1951 г. Пролиферативный пул в момент перевивки опухоли – 73,8% (см. Козлов А.М., Софьина З.П., 1978). Меланома В16 возникла спонтанно у основания уха в коже мыши линии C57BL/6 в 1954году. При перевивке под кожу развитие опухоли составляет 100% (см. Фадеева, Е. В., 2010).

Техническим результатом настоящего изобретения является создание экспериментальной модели роста В16/F10 и карциномы легких Льюис(LLC) у мышей BALB/c Nude для изучения патогенеза первично-множественных злокачественных опухолей (ПМЗО).

Технический результат достигается тем, что самкам мышей линии BALB/cNude последовательно под кожу спины с двух сторон перевивают два опухолевых штамма: 0,5 мл взвеси опухолевых клеток мышиной меланомы В16/F10 в физиологическом растворе в разведении 1:10, справа и LLC 2 млн клеток в 0,5 мл физиологического раствора, слева; при этом после извлечения иглы места введения плотно прижимают ватным тампоном, смоченным в 70% спирте с добавлением йода, на 1 минуту, чтобы исключить вытекание опухолевого материала.

Изобретение «Способ модификации злокачественного роста при первично-множественных злокачественных опухолях на фоне первичного иммунодефицита» является новым, так как оно неизвестно в области экспериментальной онкологии об изменении роста меланомы В16/F10 и LLC у мышей линии BALB/c Nude для изучения патогенеза полинеоплазий в условиях первичного иммунодефицита.

Новизна изобретения заключается в использовании самок мышей линии BALB/c Nude для создания модели ПМЗО в условиях первичного иммунодефицита, при которой развитие сочетанного злокачественного процесса: меланомы В16/F10 и LLC в организме идёт по нестандартному «сценарию». Воспроизведение модели ПМЗО путем подкожной перевивкимеланомы В16/F10 и LLC мышам линии BALB/c Nude изменяет скорость роста обеих опухолей по сравнению с самостоятельной перевивкой: усиливает рост В16/F10 и замедляет LLC.

Изобретение «Способ усиления роста меланомы В16/F10 по сравнению с ростом меланомы В16/F10 при самостоятельной перевивке и замедления роста LLC (карциномы Льюиса) по сравнению с ростом LLC при самостоятельной перевивке при первично-множественных злокачественных опухолях на фоне первичного иммунодефицита» является промышленно применимым, так как может быть использовано в научно-исследовательских учреждениях онкологического профиля для воспроизведения экспериментальной модели роста двух морфологически разнородных злокачественных опухолей, изучения их роста, патогенеза, поиска способов воздействия на них.

«Способ усиления роста меланомы В16/F10 по сравнению с ростом меланомы В16/F10 при самостоятельной перевивке и замедления роста LLC (карциномы Льюиса) по сравнению с ростом LLC при самостоятельной перевивке при первично-множественных злокачественных опухолях на фоне первичного иммунодефицита» осуществляется следующим образом.

Самкам мышей линии BALB/c Nude под кожу спины чуть ниже правой лопатки вводят 0,5 мл взвеси опухолевых клеток мышиной меланомы В16/F10 в физиологическом растворе в разведении 1:20, с другой стороны – чуть ниже левой лопатки подкожно вводят 0,5 мл опухолевой взвеси LLC, содержащей 0,5 млн. опухолевых клеток. Для этого, соблюдая все условия асептики, ассистент фиксирует мышь спиной кверху, предварительно обработав кожу 5% спиртовым раствором йода. Экспериментатор рукой в стерильной перчатке захватывает кожную складку, в центре которой прокалывает кожу и вводит опухолевую взвесь В16/F10 с одной стороны, а LLC– с другой. После извлечения иглы места введения плотно прижимает ватным тампоном, смоченным в 70% спирте с небольшим добавлением йода, на 1 минуту, чтобы исключить вытекание опухолевого материала. Контролем служат мыши-самки линии BALB/c Nude с самостоятельной перевивкой либо меланомы В16/F10, либо LLC в той же дозе и объёме.

Особенности роста опухолей при самостоятельной и сочетанной перевивке опухолей представлены в таблице.

Таблица

Объем опухолей и продолжительность жизни мышей самок Nude

с ПМЗО

Примечание: ^* – значимость отличий по сравнению с изолированным ростом меланомы, ⁺ – значимость отличий по сравнению с изолированным ростом карциномы Льюиса, ¹ – значимость отличий карцинома Льюиса от меланомы в модели ПМЗО.

Как видно из результатов таблицы опухоли, перевитые в самостоятельном варианте: меланома В16/F10, либо LLC на 15 сутки после перевивки имели практически одинаковый объем опухолевого узла. У мышей с сочетанной перевивкой (модель ПМЗО) на 15 сутки опухоли имели различных объем, отличающийся от объема опухолей при самостоятельной перевивке: объем меланомы В16/F10 при сочетанной перевивке был в 2,8 раза больше, чем при самостоятельной, а объем LLC, напротив, в 2,2 раза меньше. При этом объем меланомы В16/F10 в этот срок исследования был больше объема LLC в 5,5 раза (см. Таблица). На 22 сутки после перевивки объем меланомы В16/F10 при сочетанной перевивке был в 1,8раза (р<0,05) больше, чем при самостоятельной, а объем LLC, напротив, в 2,3 раза меньше. При этом объем меланомы В16/F10 в этот срок исследования был больше объема LLC в 3,4 раза, а при самостоятельной перевивке не имел статистически значимых отличий (см. Таблица).

Таким образом, сочетанная подкожная перевивка меланомы B16/F10 и LLC мышам BALB/c Nude увеличивала злокачественный потенциал меланомы и уменьшала злокачественный потенциал LLC, что сопровождалось уменьшением продолжительности жизни животных по сравнению с самостоятельной перевивкой каждой опухоли.

Технико-экономическая эффективность «Способ усиления роста меланомы В16/F10 по сравнению с ростом меланомы В16/F10 при самостоятельной перевивке и замедления роста LLC (карциномы Льюиса) по сравнению с ростом LLC при самостоятельной перевивке при первично-множественных злокачественных опухолях на фоне первичного иммунодефицита» заключается в том, что воспроизведение модели ПМЗО в условиях первичного иммунодефицита путем последовательной подкожной перевивки меланомы В16/F10 и LLC мышам линии BALB/c Nude изменяет их злокачественный потенциал: активизирует рост В16/F10 и замедляет рост LLC. Это дает возможность изучать патогенез синхронного злокачественного процесса при опухолях различной гистологической структуры и влияния на них коморбидной патологии, какой является первичный иммунодефицит, а также проводить поиск мишеней для таргетной терапии ПМЗО. Способ экономичен, доступен для исполнения.

Список литературы.

1. Кит О.И., Франциянц Е.М., Каплиева И.В., Трепитаки Л.К., Евстратова О.Ф. Способ получения метастазов печени в эксперименте. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2014; 157 (6): 745-747.

2. Кит О.И., Франциянц Е.М., Каплиева И.В., Трепитаки Л.К. Способ получения метастазов печени в эксперименте. Патент РФ № 2538243 опубл. 10.01.2015. Бюл. № 1.

3. Кит О.И., Франциянц Е.М., Каплиева И.В., Трепитаки Л.К. Способ моделирования лимфогенного и гематогенного метастазирования мышиной меланомы В16 у белых нелинейных крыс. Патент РФ № 2615908, опубл. 11.04.2017, Бюл. № 11.

4. Козлов А.М., Софьина З.П. Частота, сроки и тип метастазирования различных перевиваемых опухолей мышей./Бюлл. Экспериментальной биологи и имедицины. 1978; 12: 715-717.

5. Сидоренко Ю.С., Франциянц Е.М., Комарова Е.Ф., Погорелова Ю.А., Шихлярова А.И. Способ получения экспериментальных злокачественных опухолей легких. Патент РФ №2375758 C1, 10.12.2009.

6. Сидоренко Ю.С., Франциянц Е.М., Ткаля Л.Д. Способ воспроизведения злокачественного процесса в эксперименте Патент РФ №2388064, опубл. 27.04.10, Бюл. 12: 7.

7. Фадеева Е.В. Экспериментальная модель меланомы В16 и методы иммунотерапии// Междунар. журн. эксперим. образования. – 2010. – № 8. – С. 49–50.

8. Abolhassani H., Chou J., Bainter W., Platt C.D, Tavassoli M., Momen T. Clinical, immunologic, and genetic spectrum of 696 patients with combined immunodeficiency. J Allergy Clin Immunol. 2018; 141(4): 1450–1458. DOI: 10.1016/j.jaci.2017.06.049

9. Alt F.W., Zhang Y., Meng F.L., Guo C., Schwer B. Mechanisms of programmed DNA lesions and genomic instability in the immune system. Cell. 2013); 152(3): 417–429. DOI: 10.1016/j.cell.2013.01.007

10. Bousfiha A., Jeddane L., Picard C., Al-Herz W., Ailal F., Chatila T. Human Inborn Errors of Immunity: 2019 Update of the IUIS Phenotypical Classification. J Clin Immunol. 2020; 40(1): 66–81. DOI: 10.1007/s10875-020-00758-x

11. Chen W., Zheng R., Baade P.D. Cancer statistics in China, 2015. CA Cancer J Clin. 2016; 66: 115–132.

12. Demandante C.G., Troyer D.A., Miles T.P.Multiple primary malignant neoplasms: case report and a comprehensive review of the literature. Am J Clin Oncol. 2003; 26: 79–83.

13. Haas O.A. Primary Immunodeficiency and Cancer Predisposition Revisited: Embedding Two Closely Related Concepts Into an Integrative Conceptual Framework. Front Immunol. 2018; 9: 3136. DOI: 10.3389/fimmu.2018.03136

14. Hammer J.A., Wang J.C, Saeed M., Pedrosa A.T. Origin, Organization, Dynamics, and Function of Actin and Actomyosin Networks at the T Cell Immunological Synapse. Annu Rev Immunol. 2019; 37: 201–224. DOI: 10.1146/annurev-immunol-042718-041341

15. Hauck F., Voss R., Urban C., Seidel M.G. Intrinsic and extrinsic causes of malignancies in patients with primary immunodeficiency disorders. J Allergy Clin Immunol. 2018; 141(1): 59–68. DOI: 10.1016/j.jaci.2017.06.009

16. Hsu H.T., Mace E.M., Carisey A.F., Viswanath D., Christakou A.E., Wiklund M. NK cells converge lytic granules to promote cytotoxicity and prevent bystander killing. J Cell Biol. 2016; 215 (6): 875–889. DOI: 10.1083/jcb.201604136

17. Gallo V., Dotta L., Giardino G., Cirillo E., Lougaris V., D’assante R. Diagnostics of Primary Immunodeficiencies through Next-Generation Sequencing. Front Immunol. 2016; 7: 466. DOI: 10.3389/fimmu.2016.00466

18. Ishimori T., Patel P.V., Wahl R.L. Detection of unexpected additional primary malignancies with PET/CT. J. Nucl. Med. Offic. Publ. Soc. Nucl. Med. 2005; 46(5): 752–757.

19. Jonkman-Berk B.M., Van Den Berg J.M., Ten Berge I.J., Bredius R.G., Driessen G.J., Dalm V.A. Primary immunodeficiencies in the Netherlands: national patient data demonstrate the increased risk of malignancy. Clin Immunol. 2015; 156(2): 154–162.DOI: 10.1016/j.clim.2014.10.003

20. Lv M., Zhang X., Shen Y., Wang F., Yang J., Wang B., Yang J. Clinical analysis and prognosis of synchronous and metachronous multiple primary malignant tumors. Medicine. 2017; 96(17): e6799. DOI: 10.1097/MD.0000000000006799

21. Martinez-Lostao L., Anel A., Pardo J. How Do Cytotoxic Lymphocytes Kill Cancer Cells? Clin Cancer Res. 2015; 21(22): 5047–5056. DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-15-0685

22. Mastio J., Saeed M.B., Wurzer H., Krecke M., Westerberg L.S., Thomas C. Higher Incidence of B Cell Malignancies in Primary Immunodeficiencies: A Combination of Intrinsic Genomic Instability and Exocytosis Defects at the Immunological Synapse. Frontiers in immunology. 2020; 11: 581119. DOI:10.3389/fimmu.2020.581119

23. Mayor P.C., Eng K.H., Singel K.L., Abrams S., Odunsi K., Moysich K.B. Cancer in primary immunodeficiency diseases: Cancer incidence in the United States Immune Deficiency Network Registry. J Allergy Clin Immunol. 2018; 141(3): 1028–1035. DOI: 10.1016/j.jaci.2017.05.024

24. Riaz I.B., Faridi W., Patnaik M.M., Abraham R.S. A Systematic Review on Predisposition to Lymphoid (B and T cell) Neoplasias in Patients With Primary Immunodeficiencies and Immune Dysregulatory Disorders (Inborn Errors of Immunity). Front Immunol. 2019; 10: 777.DOI: 10.3389/fimmu.2019.00777

25. Sapalidis K., Schizas N., Lazopoulos A., Kamparoudi P., Paliouras D., Sardeli C., Barbetakis N. Multiple metachronous and synchronous malignancies with lung and thorax involvement. Report of two cases. Respiratory medicine case reports. 2018; 24: 5–7. DOI: 10.1016/j.rmcr.2018.03.006

26. Siegel R.L., Miller K.D., Jemal A. Cancer statistics, 2015. CA Cancer J Clin. 2015; 65: 5–29.

27. Sisti A., Tassinari J., Nisi G., Grimaldi L., Sisti G., Di.Tommaso M., Fambrini M. Synchronous and metachronous malignancies after malignant struma ovarii in the SEER database. In vivo. 2016; 30(5): 713–716.

28. Tangye S.G., Al-Herz W., Bousfiha A., Chatila T., Cunningham-Rundles C., Etzioni A. Human Inborn Errors of Immunity. 2019 Update on the Classification from the International Union of Immunological Societies Expert Committee. J Clin Immunol. 2020; 40(1): 24–64. DOI: 10.1007/s10875-019-00737-x

29. Wit J., Brada R.J.K., Van Veldhuizen J., Dalm V., Pasmans S. Skin disorders are prominent features in primary immunodeficiency diseases: A systematic overview of current data. Allergy. 2019; 74(3): 464–482. DOI: 10.1111/all.13681

30. Wurzer H., Hoffmann C., Al Absi A., Thomas C. Actin Cytoskeleton Straddling the Immunological Synapse betweenCytotoxic Lymphocytes and Cancer Cells. Cells. 2019; 8(5): 463. DOI: 10.3390/cells8050463