Результат интеллектуальной деятельности: Способ прогнозирования степени риска развития онкологических заболеваний населения, использующего воду открытых водоемов и водотоков для хозяйственно-питьевого водоснабжения

Изобретение относится к экологии, генетической токсикологии, к способам и средствам мониторинга окружающей среды, к области оценки экологического риска повышенной смертности населения в зоне загрязнения гидросферы, охране окружающей среды и здоровья населения.

Одним из последствий нарушения генетического здоровья населения является развитие онкологических заболеваний, которые представляют собой одну из ведущих причин смертности населения во всех странах. В то же время в генезе этой патологии играют роль как средовые, так и наследственные факторы, т.е. на формирование каждого индивидуального случая влияют генетические особенности индивида и частные экологические факторы. Среди многочисленных факторов, влияющих на генетические особенности населения, важная роль отводится загрязнению окружающей среды. Установлено наличие прямой связи загрязнения атмосферного воздуха, воды и почвы с увеличением частоты случаев онкологических заболеваний. Оценка относительной роли некоторых факторов окружающей среды в онкологической заболеваемости населения является одной из задач экологического мониторинга. Необходимо постоянно проводить контроль качества окружающей природной среды, постоянно испытывающей влияние деятельности человека, формировать и внедрять научные критерии рационального управления элементами экосистемы и их непрерывного мониторинга. Все эти мероприятия позволят своевременное выявлять приоритетные факторы канцерогенного риска, что можно рассматривать как одно из основных профилактических мероприятий.

Наиболее интенсивно используются водные ресурсы рек, непосредственно приближенных к промышленному и сельскохозяйственному производству. Необходимо отметить, что большая часть рек не входят в программы наблюдений, реализуемые государственными службами, но при этом играют большую хозяйственную роль. Основными видами антропогенного воздействия на природно-территориальные комплексы бассейнов рек являются: сельскохозяйственная деятельность (пашни, животноводческие комплексы, овощные хозяйства), вырубки, гари, дороги, пересекающие водотоки (автомобильные, асфальтированные), техногенное влияние городов и рекреация. Все они ведут к нарушению водного стока (гари, вырубки, пашни); химическому загрязнению реки (бытовые стоки, промышленные стоки); биологическому загрязнению (животноводческие хозяйства и орошение) и т.д. (Неустроева, М.В. Экологический мониторинг малых рек Красноярского края / М.В. Неустроева, У.В. Деева // Успехи современного естествознания. - 2008. - №7. - С.13).

На современном этапе развития природоохранной деятельности очевидна недостаточность определения состояния водоемов с помощью гидрохимических методов на основе системы предельно-допустимых концентраций (ПДК) для отдельных веществ. Весьма актуально выявление ранних последствий воздействий загрязнения на водные экосистемы, наступающих до изменения численности индикаторных организмов или их видового разнообразия. Поэтому первостепенное значение приобретает разработка экспериментальных методов оперативной оценки биологических эффектов на индивидуальном и популяционно-ценотическом уровнях (Лукьяненко, В.И. Комплексный физиолого-биохимический мониторинг природных популяций рыб и качества водной среды // 8-я науч. конф. по экол. физиол. и биохимии рыб. Тез. докл. - Петрозаводск: Кар. науч. центр РАН. Ин-тбиол., 1992. - Т. 1. - С. 192-195).

Биотестирование дает возможность быстрого получения интегральной оценки токсичности, что делает весьма привлекательным его применение при скрининговых исследованиях (Дятлов, С.Е. Роль и место биотестирования в комплексном мониторинге морской среды / С.Е. Дятлов // Экология моря. - 2000. - №5. - С. 83-87). Однако оценка токсичности далеко не в полной мере отражает опасные, особенно токсикогенетические, последствия загрязнения природных объектов, т.к. известно, что наибольшую опасность для здоровья настоящего и будущих поколений представляют соединения, обладающие способностью вызывать отдаленные эффекты: мутагены и канцерогены. Показано, что рекомендуемое существующими нормативами определение токсичности не может заменить оценку генотоксичности в специальных тестах, поскольку между этими показателями не существует прямой корреляции. Поэтому изучение суммарной мутагенной активности представляет собой наиболее перспективный подход к выявлению реального мутагенного потенциала сточных вод (Saffiotti, V. Evolution of mixed exposure to carcinogens and correlation of in vivo and in vitro systems // Environm.Health Perspect. - 1983. - V.47. - P. 319-324).

Уровень техники. Известен способ определения токсичности окружающей среды, включающий исследование тест-объекта в контрольной и опытной пробах с последующей оценкой токсичности по изменению физиологических параметров. В качестве тест-объекта используют эмбрионы и личинки морских ежей в морской воде, к которым добавляют исследуемые пробы окружающей среды в виде почвы, или воздуха, или речной и питьевой воды, или пресноводных донных отложений, или отдельных физических и химических компонентов, или их сочетаний, а оценку токсичности проводят по летальности и количеству аномалий развития эмбрионов и личинок по сравнению с контрольной пробой (Патент №2057337 Российская Федерация, МПК G01N 33/18. Способ определения токсичности окружающей среды: №5006444/13: заявл. 24.09.1991: опубл. 27.03.1996 / Грищенко A.M., Грищенко С.А. - 13 с.). Однако данный способ не позволяет проанализировать действие мутагенов и канцерогенов на генетический аппарат живых организмов, определить характер их влияния и возможные последствия для генетического здоровья.

Известна статистическая методика обобщающей характеристики динамики качества питьевой воды неоднородной территории, включающей районы с разным уровнем доли нестандартных проб по химическим и микробиологическим показателям (Инновационная статистическая методика оценки качества питьевого водоснабжения как инструмент системы управления рисками здоровью населения / М.А. Позднякова, И.В. Федотова, Д.А. Липшиц, Т.А. Королева // Медицинский альманах. - 2011. - №3(16) апрель. - С. 37-39). Проводился расчет средних темпов роста доли (%) нестандартных проб по районам, затем районы распределялись на группы с положительной (неизменной) и отрицательной динамикой качества воды и анализировались общие тенденции в изменении качества воды на основе расчета относительных величин структуры и координации по предложенной авторами формуле. Недостатком метода является использование материально затратного физико-химического анализа воды, а предложенный статистический подход можно применить только к гигиенической оценке качества питьевой воды, что не дает в полной мере возможность определить риск развития онкологических заболеваний и опасность для генетического здоровья.

Корреляционный метод использовался в рамках факторного анализа элементного состава объектов экосистемы Ладожского озера, питьевой воды с водозабором из Ладожского озера и биопроб детского населения г. Приозерска (Танюхина, О.Н. Санитарно-экологическая оценка воздействия тяжелых металлов на здоровье населения в зоне питьевого водоснабжения из Ладожского озера / О.Н. Танюхина, Е.К. Ланге, Л.Е. Колесников [и др.] // Амурский медицинский журнал. - 2014. - №3(7). - С. 40-42). Определялась корреляционная связь между концентрацией в питьевой воде и биопробах детей таких жизненно важных элементов как калий, кальций, магний, кобальт, марганец, хром, молибден, медь, а также между содержанием меди, марганца и натрия в воде озера и питьевой воде. Однако с помощью данного корреляционного метода невозможно определить влияние концентрации определенных элементов на генетический аппарат живых организмов.

Известен способ оценки развития неинфекционных и онкологических заболеваний у населения, использующего воду из хозяйственно-питьевого водоснабжения. На первом этапе проводился анализ воды на соответствие гигиеническим нормативам по санитарно-химическим показателям. На втором устанавливали связь между повышенным или недостаточным содержанием микроэлементов и уровнем заболеваемости в определенных районах в соответствии с имеющимися данными в научных публикациях (Аликберов, М.А. О риске здоровью населения при потреблении воды из источников хозяйственно-питьевого водоснабжения в республике Дагестан / М.Х. Аликберов // Фундаментальные и прикладные аспекты анализа риска здоровью населения: Материалы всероссийской научно-практической интернет-конференции молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора; под редакцией А.Ю. Поповой, Н.В. Зайцевой. - Пермь: Пермский национальный исследовательский политехнический университет, 2017. - С. 14-19). Определяли корреляционную связь между содержанием химического элемента в питьевой воде и заболеваемостью по новообразованиям. Недостатком данного метода является то, что выявление такой связи затрагивает только определенные элементы, а химический анализ используемой воды на все химические вещества, способствующие развитию злокачественных новообразований, представляется достаточно трудоемким и материально затратным. Кроме того, с точки зрения определения потенциального риска для генетического здоровья населения вода предоставляет собой опасность в конкретный краткосрочный момент, что не позволяет ее использовать для составления прогнозов развития патологий в будущем.

Для выявления риска развития злокачественных новообразований, а также патологии со стороны системы крови, желудочно-кишечного тракта, почек, печени и других органов и систем использовался способ расчета и анализа риска по органолептическим и санитарно-химическим показателям и оценка канцерогенных и неканцерогенных эффектов (Оценка риска здоровью населения горнорудных территорий Башкортостана, связанного с качеством питьевого водоснабжения / Р.А. Сулейманов, А.Б. Бакиров, Т.К. Валеев [и др.] // Анализ риска здоровью. - 2016. - №4. - С. 64-71). Производился отбор воды, анализ уровня жесткости, содержания тяжелых металлов, техногенных примесей, природных неорганических солей, сульфатов, нитратов. По формуле рассчитывался канцерогенный и неканцерогенный риск для населения, связанный с повышенным содержанием определенных загрязняющих веществ. Однако все результаты исследования и рекомендации основывались на непосредственном загрязнении и использования воды, которая является текучей субстанцией и не отражает в полной мере загрязнение водоема на данной территории, что не выявляет реальную потенциальную опасность для генетического здоровья населения.

Прототип. Наиболее близким к прогнозированию генетического здоровья населения при определении качества воды из источников питьевого и хозяйственно-питьевого водоснабжения является способ генотоксической оценки питьевой воды, включающий ана-телофазный метод, химический анализ воды и метод расчета относительного риска (RR), показатели которого использовались для сравнения данных цитогенетического анализа и статистическими данными онкозаболеваемости населения. Определялись цитогенетические эффекты, на основании которых предлагалась 4-балльная система, учитывающая одновременно ряд цитогенетических показателей (частоту хромосомных аберраций, митотический индекс и соотношение фазных индексов). Далее цитогенетические показатели сопоставлялись с данными об онкозаболеваемости населения. (Генотоксикологическая оценка питьевой воды и некоторые показатели заболеваемости населения Северо-Казахстанской области / Ларикова Н.В., Бабошкина С.В., Лиходумова И.Н. [и др.] // Экологическая генетика. - 2012. - Т.Х. - №4. - С. 40-48). Недостатком данного метода можно считать то, что он является тест-специфичным. Определялся только один тип мутаций, что не позволяет выявить мутагенный эффект в полной мере. Кроме того не учитывались генотоксические свойства воды, предназначенной для хозяйственного использования, которая может содержать мутагены и канцерогены, вторично экстрагированные из донных отложений.

Задача изобретения - разработка эффективного способа прогнозирования степени риска развития онкологических заболеваний населения, использующего воду открытых водоемов и водотоков для хозяйственно-питьевого водоснабжения.

Новизна изобретения

Впервые в процессе выявления степени загрязнения водных объектов генотоксикантами предлагается комплексная оценка генотоксической активности воды для прогнозирования потенциального риска развития онкологических заболеваний, как одного из последствий нарушения генетического здоровья у населения, использующего воду открытых водоемов и водотоков хозяйственно-питьевого назначения. В основе определения генотоксичности лежит выявление мутагенного и митотоксического эффектов, проявляющихся при воздействии водной вытяжки донных отложений водоемов и водотоков на биологические тест-объекты. В качестве показателя возможного потенциального риска развития онкологических заболеваний предлагается суммарный индекс генотоксической активности (СИГА) - интегральный показатель, представленный как сумма выраженности митотоксической активности (ВМТА) и суммарного индекса мутагенной активности (СИМА).

Существенные отличия

Предложенный способ за короткий период времени и с помощью минимального набора оборудования позволяет выявить широкий спектр различных типов мутаций (генных мутаций, хромосомных аберраций и доминантных летальных: генных, геномных и хромосомных мутаций), анализ которых проводится с использованием небольшого количества показателей: суммарного индекса мутагенной активности, выраженности митотоксической активности и суммарного индекса генотоксической активности. Это позволяет определить широкий спектр мутагенов, аккумулированных в донных отложениях открытых водоемов и водотоков, используемых для хозяйственно-питьевого водоснабжения. Так как донные отложения являются источником вторичного загрязнения, то их использование в качестве объекта исследования при осуществлении способа, позволяет получить наиболее полную информацию о состоянии источника водоснабжения и качестве воды в нем. Выявление мутагенов широкого спектра и характера действия дает представление о различных нарушениях в генетическом аппарате человека и населения в целом в районе исследования и, как следствие, о потенциальных возможностях развитии злокачественных новообразований. Установление связи между показателями генотоксичности и уровнем онкозаболеваемости населения не требует применения сложных математических формул и расчетов.

Технический результат

Разработка простого в применении, быстрого и эффективного способа прогнозирования степени риска развития онкологических заболеваний населения, использующего воду открытых водоемов и водотоков для хозяйственно-питьевого водоснабжения, позволяющего выявить наличие аккумулированных в донных отложениях генотоксикантов, установить различный характер их действия на генетический аппарат живых организмов, выявить связи между генотоксическими свойствами водной вытяжки донных отложений и уровнем онкозаболеваемости населения.

Раскрытие сущности изобретения.

Для достижения технического результата и предлагается данный способ, включающий отбор проб донных отложений водоемов и водотоков, установление уровня мутагенной и митотоксической активности водной вытяжки донных отложений и определение по суммарному индексу генотоксической активности (СИГА) степени генотоксического загрязнения, при этом суммарный индекс генотоксической активности рассчитывают как сумма величин суммарного индекса мутагенной активности (СИМА), проявляющейся при действии водной вытяжки донных отложений на Allium сера, Chlorella vulgaris и Drosophila melanogaster, и выраженности митотоксической активности (ВМТА), вызванной увеличением длительности метафазы митоза, и при СИГА, равном 7 и более, судят о потенциальном риске развития онкологических заболеваний для населения.

Использование водной вытяжки донных отложений обусловлено тремя основными причинами. Во-первых, донные отложения являются носителями данных о движении потоков веществ в экосистеме, о геохимических, климатических, экологических условиях, существовавших в самом водоеме и на водосборе, о современном экологическом состоянии воздушной и водной сред. Во-вторых, донные отложения являются более стабильной субстанцией водоемов и водотоков, в отличие от мобильной водной компоненты, а потому зеркально отражают состояние водного источника именно в данной среде обитания человека. В-третьих, поступающие из окружающей среды загрязняющие вещества в донных отложениях аккумулируются и являются потенциальными источниками вторичного загрязнения. Все сказанное и определило выбор данного объекта при проведении оценки состояния водоема, как источника токсикантов с потенциальным мутагенным и онкогенным эффектом.

Осуществление изобретения.

На первом этапе отбираются пробы донных отложений с горизонта 0-10 см дночерпателем, готовится водная вытяжка донных отложений и осуществляются эксперименты по определению мутагенной активности по общепринятой методике (Прохорова, И.М. Генетическая токсикология: лабраторный практикум / И.М. Прохорова, М.И. Ковалева, А.Н. Фомичева; Яросл. гос. ун-т. - Ярославль: ЯрГУ, 2005. - 132 с).

На втором этапе рассчитывается частота видимых (генных) мутаций у хлореллы Chlorella vulgaris, хромосомных аберраций в меристематической ткани проростков корешков лука Allium сера и доминантных летальных (генных, геномных и хромосомных) мутаций у дрозофилы Drosophila melanogaster по общепринятой методике. Частота каждого вида мутаций соотносится с баллами выраженности мутагенной активности (ВМА) по методике Ковалевой М.И., Прохоровой И.М. Все баллы суммируются для получения суммарного индекса мутагенной активности (СИМА) (Прохорова, И.М. Генотоксический мониторинг экологического состояния верхней Волги / И.М. Прохорова, М.И. Ковалева // Научные аспекты экологических проблем России. М: Наука, 2002. - с. 355-362).

На третьем этапе рассчитывается величина метафазного индекса (МИ) в клетках меристематической ткани проростков корешков лука Allium сера по общепринятой формуле. Данный показатель необходимо учитывать для полного и достоверного определения риска развития патологий в генетическом аппарате. Это обусловлено тем, что патологические митозы, приводящие к возникновению групп мутирующих клеток, согласно мутационной гипотезе рака, являются одним из механизмов канцерогенеза. В ряде случаев при раке и предраковых гиперплазиях наблюдается увеличение митотической активности с характерной задержкой митоза на стадии метафазы. Величина метафазного индекса соотносится с баллами выраженности митотоксической активности (ВМТА) (Фомичева, А.Н. Мониторинг мутагенного загрязнения малых рек / А.Н. Фомичева, И.М. Прохорова // Водные ресурсы. - 2005. - Т.32. - №3. - С. 347-351).

На четвертом этапе рассчитывается суммарный индекс генотоксической активности (СИГА) по формуле:

где СИГА - суммарный индекс генотоксической активности;

СИМА - суммарный индекс мутагенной активности;

ВМТА - выраженность митотоксической активности.

На пятом этапе полученный показатель показатель СИГА сравнивается с уровнем онкозаболеваемости населения использующего воду из открытых водоемов для хозяйственно-питьевого водоснабжения. При СИГА, равном 7 и более, судят о потенциальном риске развития онкологических заболеваний населения.

Для иллюстрации осуществления заявленного способа используется следующий пример:

Пример 1. На первом этапе на реках Блява, Сакмара и Урал были обозначены станции отбора проб с учетом сферы влияния промышленных центров.

На втором этапе определили, что донные отложения участка реки, находящегося в отдалении от антропогенного влияния и в верховьях не проявили мутагенного эффекта (табл.1) при действии водной вытяжкой ни в одном из тестов. Данная станция расположена вдали от промышленных предприятий и источников сельскохозяйственного загрязнения. Грунт представлен в основном крупным камнем и щебнем, река характеризуется хорошей проточностью, скорость течения р. Урал в верховье максимальная из всех исследуемых станций. Максимальный мутагенный эффект был зарегистрирован на р. Блява в черте г. Медногорск (ниже Медногорского медно-серного комбината). Частота хромосомных аберраций у Allium сера при действии водной вытяжки донных отложений составила 14,06±0,9*% при контроле 4,45±0,2% (при р≤0,5), частота видимых мутаций Ch. vulgaris 3,11±0,24*% при контроле 0,93±0,18% (при р≤0,05), а показатель доминантных летальных мутаций у Dr. melanogaster превысил контроль в 2,3 раза (20,97±2,68*% при р≤0,05). В итоге СИМА (5 баллов) был отмечен как максимальный среди всех исследуемых проб (табл.3). Мутагенная активность также была определена и в пробах донных отложений, отобранных в реках Сакмара (г.Кувандык) и Урал (г.Оренбург). СИМА в данных районах составил 4 балла (табл.3). Таким образом, в донных отложениях рек Блява, Сакмара и Урал на исследованных участках содержался весь спектр мутагенов: прямого действия мутагены, вызывающие мутации в генеративных клетках и промутагены, индуцирующие все виды мутаций в клетках живых организмов.

На третьем этапе с помощью подсчета метафазного индекса выявили задержку митоза на стадии метафазы в клетках меристемы корешков лука А. сера при воздействии водной вытяжки донных отложений, отобранных на р. Блява, в черте г. Медногорск, р. Сакмара в черте г. Кувандык, р. Урал в черте г. Оренбург и в районе с. Красногор Саракташского района (табл.2). При этом наибольший митотоксический эффект был зарегистрирован в Саракташском районе. Величина метафазного индекса составила 31,29±1,25*%, (р≤0,5) при контроле 19,49±0,48*% (табл.2). Вероятно неблагополучная генотоксическая ситуация в данном районе вызвана в большей степени не присутствием мутагенов в донных отложениях р. Урал, а аккумулированием генотоксикантов, воздействовавших на митотический аппарат клетки. Его повреждение или полная дезорганизация приводит к прекращению движения всех хромосом в метакинезе (прометафазе) и в анафазе, что еще раз подтверждает необходимость анализа нарушений фаз митоза, в частности увеличения метафазного индекса.

На четвертом этапе рассчитали СИГА, как сумму показателя выраженности митотоксической активности и суммарного индекса мутагенной активности водной вытяжки донных отложений. Наибольшее загрязнение генотоксикантами было зарегистрировано в г. Медногорск, Кувандык, Оренбург и в Саракташском районе, где показатели СИГА составили соответственно 8,5; 7,0; 7,1; и 7,2 баллов (табл.3).

На пятом этапе и полученную величину сравнили с уровнем онкозаболеваемости населения данных городов, использующего воду рек Блява, Сакмара и Урал для хозяйственно-питьевого водоснабжения (табл.3). Самые высокие показатели онкозаболеваемости, превышающие среднеобластной среднемноголетний показатель, характерны для г. Медногорска (470,0 на 100 тыс.), Кувандыка (457,3 на 100 тыс.), Оренбурга (454,7 на 100 тыс.) и Саракташского района (430,4 на 100 тыс.). Именно для этих районов величина СИГА составила 7 и более (табл.3), что характеризует их как районы с повышенной нагрузкой на генетический аппарат населения, и, как следствие, имеющие риск развития онкологических заболеваний.

Таким образом, наличие различных видов мутаций при воздействии водной вытяжки донных отложений данных участков рек совместно с задержкой митоза на стадии метафазы в клетках меристематической ткани лука свидетельствуют о повышенном риске развития злокачественных новообразований у населения, использующего воду данных водоемов и водотоков для хозяйственно-питьевого назначения. Комплексное исследование донных отложений с использованием растительных и животных организмов позволяет регистрировать мутагены прямого действия, вызывающие генные мутации, а также промутагены, приобретающие мутагенную активность в результате метаболизма в растительных и животных организмах и приводящие к геномным и хромосомным мутациям.

Заявляемый способ предназначен для применения в работе природоохранных организаций, лабораторий очистных сооружений и лабораторий станций, контролирующих водозаборы для отбора воды из открытых водоемов, водотоков или подрусловых вод в целях питьевого и хозяйственно-питьевого водоснабжения и может быть внедрен в экологический мониторинг качества питьевой воды.

Итак, с помощью трех биологических тест-объектов и двух методов определения мутагенной и митотоксической активности возможно достаточно быстро получить комплексную оценку генотоксической активности донных отложений водоемов и водотоков хозяйственно-питьевого назначения. Предложенный нами суммарный индекс генотоксической активности как сумма величин суммарного индекса мутагенной активности и индекса выраженности митотоксической активности достаточно информативен для выявления патологий митоза и наследственного аппарата в клетках организма (генетических, геномных и хромосомных мутаций), т.е. дает более полную оценку биологического эффекта действия присутствующих генотоксикантов на наследственный аппарат человека, т.е. на генетическом уровне. Их определение не требует материальных затрат и большого количества времени, а результаты являются важным критерием при прогнозировании повышения риска развития онкологических заболеваний в регионе исследования как одного из последствий нарушений генетического здоровья населения.

Источники информации:

1. Аликберов, М.А. О риске здоровью населения при потреблении воды из источников хозяйственно-питьевого водоснабжения в республике Дагестан / М.А. Аликберов // Фундаментальные и прикладные аспекты анализа риска здоровью населения: Материалы всероссийской научно-практической интернет-конференции молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора; под редакцией А.Ю. Поповой, Н.В. Зайцевой. - Пермь: Пермский национальный исследовательский политехнический университет, 2017. - С. 14-19.

2. Алов, И.А. Цитофизиология и патология митоза / И.А. Алов. - М.: Медицина, 1972. - 264 с.

3. Генотоксикологическая оценка питьевой воды и некоторые показатели заболеваемости населения Северо-Казахстанской области / Ларикова Н.В., Бабошкина С.В., Лиходумова И.Н. [и др.] // Экологическая генетика. - 2012. - Т.Х. - №4. - С. 40-48.

4. Дятлов, С.Е. Роль и место биотестирования в комплексном мониторинге морской среды / С.Е. Дятлов // Экология моря. - 2000. - №5. - С. 83-87.

5. Инновационная статистическая методика оценки качества питьевого водоснабжения как инструмент системы управления рисками здоровью населения / М.А. Позднякова, И.В. Федотова, Д.А. Липшиц, Т.А. Королева // Медицинский альманах. - 2011. - №3(16) апрель. - С. 37-39.

6. Лукьяненко, В.И. Комплексный физиолого-биохимический мониторинг природных популяций рыб и качества водной среды // 8-я науч. конф. по экол. физиол. и биохимии рыб. Тез. докл. - Петрозаводск: Кар. науч. центр РАН. Ин-т биол., 1992. - Т. 1. - С. 192-195.

7. Неустроева, М.В. Экологический мониторинг малых рек Красноярского края / М.В. Неустроева, У.В. Деева // Успехи современного естествознания. - 2008. - №7. - С 13.

8. Оценка риска здоровью населения горнорудных территорий Башкортостана, связанного с качеством питьевого водоснабжения / Р.А. Сулейманов, А.Б. Бакиров, Т.К. Валеев [и др.] // Анализ риска здоровью. -2016. - №4. - С 64-71. DOI: 10.21668/health.risk/2016.4.08.

9. Патент №2057337 Российская Федерация, МПК G01N 33/18. Способ определения токсичности окружающей среды: №5006444/13: заявл. 24.09.1991: опубл. 27.03.1996 / Грищенко A.M., Грищенко С.А. - 13 с.

10. Прохорова, И.М. Генотоксический мониторинг экологического состояния верхней Волги / И.М. Прохорова, М.И. Ковалева // Научные аспекты экологических проблем России. М: Наука, 2002. - с. 355-362.

П.Прохорова, И.М. Генетическая токсикология: лабраторный практикум / И.М. Прохорова, М.И. Ковалева, А.Н. Фомичева; Яросл. гос. ун-т. - Ярославль: ЯрГУ, 2005. - 132 с.

12. Танюхина, О.Н. Санитарно-экологическая оценка воздействия тяжелых металлов на здоровье населения в зоне питьевого водоснабжения из Ладожского озера / О.Н. Танюхина, Е.К. Ланге, Л.Е. Колесников [и др.] // Амурский медицинский журнал. - 2014. - №3(7). - С. 40-42.

13. Фомичева, А.Н. Мониторинг мутагенного загрязнения малых рек / А.Н. Фомичева, И.М. Прохорова // Водные ресурсы. - 2005. - Т.32. - №3. - С.347-351.

14. Saffiotti, V. Evolution of mixed exposure to carcinogens and correlation of in vivo and in vitro systems // Environm.Health Perspect. - 1983. - V.47. -P.319-324.