×
02.04.2020
220.018.12c4

Результат интеллектуальной деятельности: Способ получения каллусной культуры змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph.) в условиях in vitro

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения каллусной культуры клеток дикорастущего растения змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph.) в условиях in vitro, включающий стерилизацию семян змееголовника раствором 3% перекиси водорода в течение 5 минут, 80% этиловым спиртом в течение 1 мин, трехкратное ополаскивание в стерильной дистиллированной воде, помещение стерильных семян на твердую питательную среду без гормонов следующего состава, мг/л: NHNO- 33000, KNO- 38000, CaCl×2HO - 8800, MgSO×7HO - 7400, KHPO - 3400, KI - 166, НВО - 1240, MnSO×4HO - 4460, ZnSO×7HO - 1720, NaMoO×2HO - 50, CuSO×5HO - 5, CoCl×6HO - 5, FeSO×7HO - 5560, Na-ЭДТА - 7460, мезоинозит - 100, никотиновая кислота - 100, пиридоксин - 100, тиамин - 100, сахароза - 2500, вода - 1000 мл, агар - 7000. Далее, полученные из проростков листовые экспланты помещают в питательную среду следующего состава, мг/л: NHNO - 33000, KNO - 38000, CaCl×2HO - 8800, MgSO×7HO - 7400, KHPO - 3400, KI - 166, НВО - 1240, MnSO×4HO - 4460, ZnSO×7HO - 1720, NaMoO×2HO - 50, CuSO×5HO - 5, CoCl×6HO - 5, FeSO×7HO - 5560, Na-ЭДТА - 7460, мезоинозит - 100, никотиновая кислота - 100, пиридоксин - 100, тиамин - 100, сахароза - 3000, гидролизат казеина - 500, кинетин - 1, 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота - 1, вода - 1000 мл, агар - 12000. При этом культивирование растений проводят в темноте, при температуре 26±1°С, влажности помещения 70±5%, цикл субкультивирования составляет 4 недели. Изобретение позволяет получить каллусную культуру змееголовника дланевидного в условиях in vitro (Dracocephalum palmatum Steph.), которая может быть использована в качестве источника флавоноидов терапевтического действия. 3 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии растений и может быть использовано в фармацевтической промышленности для получения сырья, содержащего ценные биологически активные соединения (флавоноиды, фенольные соединения), а также при введении в культуру in vitro других представителей лекарственных растений, получение которых затруднено из-за высокого содержания в своем составе летучих эфирных соединений.

Змееголовник дланевидный Dracocephalum palmatum Steph.– растение семейства Lamiaceae, многолетнее вечнозеленое растение с ползучими побегами, образует очень плотную дернину. Листья и побеги опушены. Цветоносы приподнимаются над дерниной на 10-15 см. Цветки фиолетовые в мутовках. Семена созревают в июле. Зимует с зелеными листьями. Встречается в северо-восточных районах Якутии. Растет на сухих каменисто-щебнистых склонах, скалах, в каменистых тундрах, гонных степях (см. Данилова Н.С., Борисова С.З., Иванова Н.С. Декоративные растения Якутии: Атлас-определитель. – М.: ЗАО «Фитон+», 2012. – 248 с).

Известно, что на основе химических и спектральных работ из частей змееголовника дланевидного было выделено 23 соединения (фенилпропаноиды, кумарины, флавоноиды и тритерпены), среди которых впервые в роду Dracocephalum было обнаружено восемь соединений: сальвианоловая кислота B, кафтаровая кислота, цихоровая кислота, умбеллиферон, эскулетин, апигенин-7-O-β-D-глюкуронопиранозид, изорхоифолин и лютеолин-4'-O-β-D-глюкопиранозид (см. Olennikov DN, Chirikova NK, Okhlopkova ZM, Zulfugarov IS. Chemical composition and antioxidant activity of Tánara Ótó (Dracocephalum palmatum Stephan), a medicinal plant used by the North-Yakutian nomads. Molecules.2013 Nov 14;18(11):14105-21.). 

Змееголовник дланевидный используют в тибетской медицине, якутской народной медицине, настой из надземной части и цветков применяют при язвенной болезни желудка, а в Средней Азии - при сердечной недостаточности, астении, болезнях желудка и как потогонное средство.

Известен способ получения каллусной культуры представителя семейства Lamiaceaе шлемника андрахновидного (Scutellaria andrachnoides) (см. ЕА №020503, кл. C12N 5/04, A01H 4/00, опубл. 28.11.2014), включающий получение штамма культуры корня растения шлемника андрахновидного (Scutellaria andrachnoides), интенсивно растущего в условиях in vitro на безгормональных питательных средах, сохраняющего способность к синтезу фенольных соединений, характерных для корней целого растения, и обладающего генетической и биохимической стабильностью.

Авторами в открытых источниках технические решения по получению каллусной культуры клеток змееголовника дланевидного не выявлено.

Задачей настоящего изобретения является получение каллусной культуры клеток змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph.) в условиях in vitro.

Для решения поставленной задачи способ получения каллусной культуры клеток дикорастущего растения змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph.) в условиях in vitro включает стерилизацию семян змееголовника раствором перекиси водорода (3% раствор) в течение 5 минут, этиловым спиртом (80% раствор) в течение 1 мин, трехкратное ополаскивание в стерильной дистиллированной воде, помещение стерильных семян на твердую питательную среду без гормонов следующего состава, в мг/л: NH4NO3 - 33000, KNO3 - 38000, CaCl2×2H2O - 8800, MgSO4×7H2O - 7400, KH2PO4 - 3400, KI - 166, Н3ВО3 - 1240, MnSO4×4H2O - 4460, ZnSO4×7H2O - 1720, Na2MoO4×2H2O - 50, CuSO4×5H2O - 5, CoCl2×6H2O - 5, FeSO4×7H2O - 5560, Na-ЭДТА - 7460, мезоинозит - 100, никотиновая кислота - 100, пиридоксин - 100, тиамин - 100, сахароза - 2500, вода - 1000 мл, агар - 7000. Далее, полученные из проростков листовые экспланты помещают в питательную среду следующего состава, в мг/л: NH4NO3 - 33000, KNO3 - 38000, CaCl2×2H2O - 8800, MgSO4×7H2O - 7400, KH2PO4 - 3400, KI - 166, Н3ВО3 - 1240, MnSO4×4H2O - 4460, ZnSO4×7H2O - 1720, Na2MoO4×2H2O - 50, CuSO4×5H2O - 5, CoCl2×6H2O - 5, FeSO4×7H2O - 5560, Na-ЭДТА - 7460, мезоинозит - 100, никотиновая кислота - 100, пиридоксин - 100, тиамин - 100, сахароза - 3000, гидролизат казеина - 500, кинетин - 1, 2,4-Дихлорфеноксиуксусная кислота - 1, вода - 1000 мл, агар - 12000. При этом культивирование растений проводят в темноте, при температуре 26±1°С, влажности помещения 70±5%, цикл субкультивирования составляет 4 недели.

Анализ признаков заявленного решения свидетельствует о соответствии заявленного решения критерию «новизна», каллусная культура змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph.) впервые получена в условиях in vitro.

Совокупность существенных признаков обеспечивает решение заявленной технической задачи, а именно, получение каллусной культуры змееголовника дланевидного(Dracocephalum palmatum Steph.).

Предлагаемое решение состоит в том, что за основу взяты стерильные свежие проростки, культивируемые в контролируемых условиях климатической камеры из семян интактного растения, фитомасса которого собрана во время стационарно-маршрутных работ на территории Оймяконского нагорья в Республике Саха (Якутия), известного как «Полюс холода – Оймякон», в фенофазах «конец цветения, начало плодоношения».

При этом отобранные семена стерилизовали раствором 3 % перекиси водорода в течение 5 минут, после чего, вторично 80 % спиртом в течение 1 мин. После стерилизации материал трехкратно ополаскивали стерильной дистиллированной водой. Стерилизованные семена помещали на твердую питательную среду без гормонов. Культивирование проростков проводили до третьего-пятого настоящих листьев в течение трех недель.

Питательная среда Мурасиге-Скуга для культивирования свежих проростков растения содержит компоненты в количественном соотношении, представленном в таблице 1.

Из полученного проростка получали листовые экспланты, которые помещали в питательную среду с дополнительным добавлением гидролизата казеина, кинетина, 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты. При этом выявлено, что наиболее интенсивное каллусообразование получается при концентрации фитогормонов кинетин 1 мг/л, 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты 1 мг/л.

После образования каллусной ткани проводили его отделение и рассадку в культуральные сосуды (чашки Петри, конически колбы на 100 и 250 мл) со свежей питательной средой, того же состава.

Питательная среда Мурасиге-Скуга для получения каллусной ткани содержит компоненты в количественном соотношении, представленном в таблице 2.

Культивирование проводили в темноте, при 26±1°С, влажности помещения 70±5%, в чашках Петри с диаметром 90 мм. При этом цикл субкультивирования составлял 4 недели. При пересеве использовали ¼ каллусной культуры.

Пересадку проводили каждые 30 дней, таким образом, сохраняя полученную каллусную культуру. В процессе культивирования определяли морфологические, цитологические характеристики, также отбирали для молекулярных исследований и химических анализов.

Описание способа получения каллусной культуры Dracocephalum palmatum Steph. в настоящее время нигде не зарегистрировано.

Полученная каллусная культура характеризуется следующими признаками.

Культуральные признаки: каллусные культуры рыхлые и зернистые, имеют желтовато-серую окраску.

Индекс роста (кратность прироста биомассы за одно субкультивирование) определяют по сырому и сухому весу биомассы. Для определения веса сырой биомассы каллусных культур отделяют от среды культивирования на бумажных фильтрах и взвешивают. Сухую биомассу каллусных культур получают после лиофильной сушки.

При анализе представленных кривых роста следует отметить замедление роста на 20 сутки культивирования, что позволяет использовать 4-недельный цикл выращивания. Ростовые параметры (кроме индекса роста) рассчитывали по сырому весу биомассы. Результаты представлены в таблице 3 и свидетельствуют о наличии стабильных ростовых характеристик.

Таким образом, выявлен способ получения каллусных культур змееголовника дланевидного (Dracocephalum palmatum Steph.) из эксплантов проростков, полученных в лабораторных условиях.

Таблица 1

Состав питательной среды Мурасиге-Скуга для культивирования проростков к получению стерильных эксплантов, в мг/л

Компоненты Содержание
NH4NO3 33000
KNO3 38000
CaCl2x2H2O 8800
MgSO4x7H2O 7400
KH2PO4 3400
KI 166
H3BO3 1240
MnSO4x4H2O 4460
ZnSO4x7H2O 1720
Na2MoO4x2H2O 50
CuSO4x5H2O 5
CoCl2x6H2O 5
FeSO4x7H2O 5560
Na-ЭДТА 7460
Мезоинозит 100
Тиамин 100
Пиридоксин 100
Никотиновая кислота 100
Сахароза 2500
Вода 1000 мл
Агар 7000

Таблица 2

Состав питательной среды Мурасиге-Скуга для получения каллусной культуры клеток

Компоненты Содержание, в мг/л
NH4NO3 33000
KNO3 38000
CaCl2x2H2O 8800
MgSO4x7H2O 7400
KH2PO4 3400
KI 166
H3BO3 1240
MnSO4x4H2O 4460
ZnSO4x7H2O 1720
Na2MoO4x2H2O 50
CuSO4x5H2O 5
CoCl2x6H2O 5
FeSO4x7H2O 5560
Na-ЭДТА 7460
Мезоинозит 100
Гидролизат казеина 500
Тиамин 100
Пиридоксин 100
Никотиновая кислота 100
Сахароза 30000
Кинетин 1
2,4-Д 1
Вода 1000 мл
Агар 12000

Таблица 3

Ростовые параметры каллусных культур змееголовника дланевидного

Показатели Значения, г
Индексы роста по: весу сырой биомассы 0,0867
Удельный рост по весу сырой биомассы, сут -1 0,0043

Источник поступления информации: Роспатент

Showing 11-20 of 56 items.
14.06.2018
№218.016.61bc

Способ определения приведенного термического сопротивления неоднородной ограждающей конструкции в климатической камере

Изобретение относится к строительству, в частности к способу определения приведенного термического сопротивления неоднородных ограждающих конструкций или их фрагментов в климатической камере. Способ определения приведенного термического сопротивления неоднородной ограждающей конструкции в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002657332
Дата охранного документа: 13.06.2018
21.07.2018
№218.016.73ba

Способ доработки глубоких кимберлитовых карьеров

Изобретение относится к горной промышленности и создано применительно к доработке глубоких кимберлитовых карьеров в экстремальных климатических условиях криолитозоны Севера. Техническим результатом является повышение эффективности доработки кимберлитовых карьеров в условиях перехода на освоение...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002661769
Дата охранного документа: 20.07.2018
19.08.2018
№218.016.7d2b

Морозостойкая резиновая смесь уплотнительного назначения

Изобретение относится к производству резинотехнических изделий. Предлагаемая морозостойкая резиновая смесь уплотнительного назначения на основе бутадиен-нитрильного каучука марки БНКС-18, серы, альтакса, оксида цинка, стеариновой кислоты, диафена ФП согласно изобретению дополнительно содержит...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002664405
Дата охранного документа: 17.08.2018
14.09.2018
№218.016.87d6

Способ получения адвентивных корней вздутоплодника сибирского (phlojodicarpus sibiricus (steph.) к.-pol.) в условиях in vitro

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения адвентивных корней вздутоплодника сибирского (Phlojodicarpus sibiricus (Steph.) K.-Pol.) в условиях in vitro, включающий стерилизацию семян вздутоплодника перекисью водорода в течение 5 мин,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002666920
Дата охранного документа: 13.09.2018
15.11.2018
№218.016.9dd4

Способ определения высоты свода твердого неба у детей с дисплазией соединительной ткани

Изобретение относится к медицине, стоматологии и может быть использовано для коррекции зубочелюстных аномалий у детей с дисплазией соединительной ткани (ДСТ), что необходимо при проведении комплексной медико-социальной реабилитации и профилактики ее осложнений. Определяют высоту свода твердого...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002672369
Дата охранного документа: 14.11.2018
23.11.2018
№218.016.9fd3

Способ верификации деструктивного панкреатита

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано в качестве способа дифференциальной диагностики деструктивного панкреатита. Способ включает исследование крови больного, в крови определяют содержание полиненасыщенной жирной кислоты - γ-линоленовой кислоты. При...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002672911
Дата охранного документа: 21.11.2018
29.12.2018
№218.016.ad6a

Способ отработки глубоких карьеров в криолитозоне

Изобретение относится к горнодобывающей промышленности и создано применительно к горнотехническим условиям разработки глубокозалегающих кимберлитовых трубок в экстремальных климатических условиях криолитозоны Севера. Отработку глубоких карьеров ведут при вскрытии горизонтов встречным...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002676352
Дата охранного документа: 28.12.2018
16.01.2019
№219.016.b084

Главная рудничная водоотливная установка

Изобретение относится к области осушения месторождений, а именно к рудничному водоотливу. Главная рудничная водоотливная установка содержит центробежные секционные насосы (1), погружной насос (4) с подставкой для лучшей устойчивости, водосборник (2) главного водоотлива. Водосборник (2) сообщен...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002677026
Дата охранного документа: 15.01.2019
20.03.2019
№219.016.e2fa

Способ изготовления тонкопленочного датчика влажности

Использование: для формирования электропроводящих структур на полимерной пленке. Сущность изобретения заключается в том, что способ изготовления тонкопленочного датчика влажности резистивного типа основан на создании электропроводящих структур на гибкой полимерной пленке, для чего, на...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002682259
Дата охранного документа: 18.03.2019
21.03.2019
№219.016.ebe5

Способ определения целевого пункта при мандибулярной анестезии

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано при проведении мандибулярной анестезии. Для этого на коже лица наружной поверхности ветви нижней челюсти путем пальпации определяют топографию целевого пункта. Целевой пункт располагается на месте пересечения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002682457
Дата охранного документа: 19.03.2019
Showing 1-4 of 4 items.
14.09.2018
№218.016.87d6

Способ получения адвентивных корней вздутоплодника сибирского (phlojodicarpus sibiricus (steph.) к.-pol.) в условиях in vitro

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения адвентивных корней вздутоплодника сибирского (Phlojodicarpus sibiricus (Steph.) K.-Pol.) в условиях in vitro, включающий стерилизацию семян вздутоплодника перекисью водорода в течение 5 мин,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002666920
Дата охранного документа: 13.09.2018
02.04.2020
№220.018.12d1

Способ культивирования каллусной культуры полыни обыкновенной (artemisia vulgaris l.)

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения каллусной культуры дикорастущего растения полыни обыкновенной (Artemisia vulgaris L.) в условиях in vitro, включающий стерилизацию семян полыни растворами перекиси водорода (3% раствор) в течение 10...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002718254
Дата охранного документа: 31.03.2020
20.05.2023
№223.018.66ec

Штамм каллусной культуры клеток растения змееголовник дланевидный (dracocephalum palmatum steph. ex willd.) под обозначением nefu dpalm-1 в условиях in vitro для получения биомассы клеток

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой штамм NEFU Dpalm-1 каллусных культур змееголовника дланевидного (Steph. ex Willd.), полученный в условиях идентифицированный и депонированный во Всероссийской коллекции культивируемых клеток высших растений (ВККК ВР)...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002759637
Дата охранного документа: 16.11.2021
20.05.2023
№223.018.6705

Штамм каллусной культуры клеток растения полынь якутская (artemisia jacutica drobow) под обозначением nefu-ajac-1 в условиях in vitro для получения биомассы клеток

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой штамм NEFU-Ajac-1 каллусной культуры полыни якутской ( Drobow), полученный в условиях in vitro, идентифицирован и депонирован во Всероссийской коллекции культивируемых клеток высших растений (ВККК ВР) при Учреждении...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002757734
Дата охранного документа: 21.10.2021
+ добавить свой РИД