×
11.03.2020
220.018.0ade

СПОСОБ ОКРАШИВАНИЯ НЕРВНОЙ КЛЕТКИ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к способу окрашивания нервной клетки. Способ окрашивания нервной клетки включает обработку срезов раствором красителя, обезвоживание и заключение в бальзам, при этом срезы толщиной от 12 до 20 мкм окрашивают от 8 до 14 мин в термостате при температуре 22±0,5°С в свежеприготовленном 0,2-0,5% растворе амидола, по завершении окрашивания срезы последовательно ополаскиваются по 30 сек в двух порциях дистиллированной воды. Предложенный способ является эффективным для окрашивания нервных клеток. 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл., 1 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть применено в гистологических исследованиях головного и спинного мозга.

Известные способы окрашивания ткани (аналоги) для гистологических исследований основаны на применении различных красителей, которыми обрабатывают срезы [2, 3, 5]. Показательным примером может служить способ Ниссля, применяемый для окрашивания нервной ткани. Указанный способ включает перекрашивание срезов, фиксированных в спирте, основным анилиновым красителем с последующей отмывкой избытка красителя спиртом. При этом составные части клетки сильнее удерживают краситель, чем масса волокон, которая дифференцируется быстрее. В результате интенсивно окрашенный клеточный материал резко выделяется на бесцветном фоне. В окраске клетки участвуют ядерные структуры и вещества, находящиеся в цитоплазме, – тигроидные глыбки, глыбки Ниссля или вещество Ниссля [5, 6. 7, 8].

Существенными недостатками известных способов-аналогов являются: низкая сопоставимость получаемых результатов при сравнении опытной и контрольных групп, а также препаратов, изготовленных в разное время, в разных лабораториях и не одним и тем же лаборантом. Это связано с тем, что дифференцирование проводится «на глаз». Другим недостатком является сложность и длительность процесса окрашивания (до 48 часов).

Известен Способ окрашивания нервной клетки [4], включающий обработку срезов 0,2% забуференным раствором крезилового фиолетового прочного с рН 3,8 в течении 25 с последующим дифференцированием после заключения срезов в бальзам в лучах ультра-фиолетового облучения, например ртутно-кварцевой горелки ПРК-2, в течении 30-45 мин при удалении препаратов от горелки на расстоянии до 1 метра. Время облучение препаратов зависело от толщины среза, чем тоньше срез, тем меньше экспозиция облучения препарата.

Недостатком способа является эмпирический подход к реализации способа, что затрудняет сопоставления результатов в разных фазах эксперимента. Кроме этого нет единого критерия для выполнения окраски в разных лабораториях.

Близким по техническому решению является способ окрашивания нервной ткани, предложенный И.В. Викторовым (1969) [3]. Этот способ включает окраску срезов 10-15 мин в 0,05%-0,2% забуференном растворе крезилового фиолетового прочного с pH 3,6-3,8, отмывание красителя в подкисленном 96° спирте или в растворе спирта и крепкого аммиака и заключение срезов в бальзам.

Описанный способ основан на свойстве базофильного вещества нервных клеток избирательно адсорбировать краситель при определенном значении pH красящего раствора [7, 8].

Недостатком способа является необходимость дифференцировать срезы мозговой ткани «на глаз», что снижает качество окраски и сопоставимость получаемых результатов. Существенным недостатком также является вымывание красителя из клетки в процессе дифференцирования. В результате клетки, содержащие малое количество базофильного вещества, полностью обесцвечиваются. При неполном удалении дифференцирующего раствора снижается срок хранения (долговечность) окрашенных препаратов, которые быстро обесцвечиваются. Способ требует затраты времени как на приготовления красителя, так и на само окрашивание среза.

Техническим результатом настоящего изобретения явилось улучшение качества окраски нервной клетки, интенсификация и ускорение процесса окрашивания, стандартизация процессов при реализации способа.

Поставленная цель достигается тем, что для окрашивания нервной клетки в качестве красителя применяют предварительно нагретый в термостате до температуры 22±0,5°С 0,2-05% водный раствор амидола (солянокислый 2,4-диаминофенол), в который погружают после депарафинизации срезы на предметных стеклах, которые предварительно подогревают в термостате при температуре 22±0,5°С. Оптимальная толщина срезов под окрашивания амидолом от 12 до 20 мкм. Окрашивания срезов осуществляют в термостате при температуре 22±0,5°С в течении от 8 до 14 мин в зависимости от концентрации раствора красителя и толщины среза (табл. 1 и 2).

Таблица 1

Время окрашивания срезов толщиной 12 мкм в свежеприготовленном растворе амидола в зависимости от концентрации раствора

Концентрация раствора амидола (%) 0,2 0,3 0,4 0,5
Время окрашивания (мин) 14 12 10 8

Таблица 2

Время окрашивания срезов в свежеприготовленном 0,5% растворе амидола

Толщина среза (мкм) 12 14 18 20
Время окрашивания (мин) 8 10 12 14

После окрашивания срезы последовательно ополаскиваются в двух стаканах с дистиллированной водой по 30 сек в каждом.

Способ может быть реализован при концентрации раствора амидола от 0,6% до 1,5% и более процентов. При использовании раствора амидола более 0,5% сокращается время, но микроструктуры прорабатываются чрезвычайно грубо и сливаются в сплошное темное пятно. Лучшая проработка микроструктур была получена при применении 0,2-0,5% раствора амидола. Амидол способен окрашивать и другие биологические ткани (мышцы, соединительную ткань, железистую ткань, ткани паренхиматозных органов и т. п.). Существующие способы окрашивания этих тканей не однозначны в трактовке состояния микроструктур, поэтому при разработке способа за основу взят способ окрашивания нервной клетки.

Пример применения предложенного способа

Амидол хорошо растворим в воде. Для приготовления окрашивающего раствора берут навеску амидола и растворяют ее в дистилляте.

Пример. Объект исследования – мозжечок кошки. Фиксация 10% раствором нейтрального формалина [1]. Заливка блока в парафин. Делают срезы толщиной 12 мкм и наклеивают их на предметное стекло. После депарафинизации среза предметные стекла помещают в термостат на 2-3 мин при температуре 22±0,5°С. Затем предметные стекла погружают в емкость с 0,2% раствор амидола, причем раствор амидола в емкости был предварительно нагрет в термостате до температуры 22±0,5°С. Окрашивание срезов осуществляется в течении 8 мин в термостате при температуре 22±0,5°С. Окрашенные срезы последовательно ополаскиваются в двух стаканах с дистиллированной водой по 30 сек в каждом. Затем просветляют и заключают в бальзам по общепринятой методике [8].

Результаты окрашивания: на препарате (фиг. 1) помимо хорошо проработанных микроструктур цитоплазмы клеток Пуркинье видны структуры ядра. Базофильное вещество нервных клеток насыщено красителем. На микрофотографии отчетливо видно, что нервные клетки имеют неодинаковую плотность окраски базофильного вещества, что может быть истолковано как различное функциональное состояние нервной клетки в момент забора материала на исследование.

Положительный эффект:

1. Сокращено время и упрощен процесс приготовления красителя;

2. Сокращено время окрашивания срезов;

3. Не требует дифференцировки, что исключает появление артефактов;

4. Обеспечивает сопоставимость результатов исследования при сравнении препаратов контрольной группы с опытными, а также изготовленных в разных лабораториях, разное время и разными исследователями;

5. Выявляются помимо ядрышек и другие структуры ядра;

6. Имеется возможность применения методик количественного определения функционального состояния клетки по интенсивности окрашивания цитоплазматических и ядерных структур [9];

7. Созданы условия для экспресс-диагностики материалов биопсии;

9. Создана предпосылка для автоматизации процесса окрашивания с применением робототехники.

Литература

1. Абакаров М.Х., Виноградов А.А. Способ перфузионной фиксации головного мозга у экспериментального животного (авт. св. №1636719) // Открытия и изобретения. – 1991. –№ 11.

2. Автандилов Г.Г. Новые методы и техника гистологических исследований. – Нальчик, 1960. – 103 с.

1. Викторов И.В. Окраска нервной ткани забуференным раствором крезилового фиолетового прочного // Современные методы морфологических исследований. – М., 1969. – С. 7-10.

2. Декларационный патент UA 55584 А, G01N1/30, G01N33/48, A61B5/04, опубл. 05.04.2003 бюл. 4.

3. Дьердь Кисели. Практическая микротехника и гистохимия. – Будапешт, 1982. – С.45-51.

4. Лилли Р. Патологическая техника и практическая гистохимия. – М.: Мир, 1969. – 646 с.

5. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники (5-е изд.). – М.: Искусство, 1969. – С. 118, 150, 181, 188.

6. Ромейс Б. Микроскопическая техника. - М.: Иностранная литература, 1953. – 718 с.

7. Тихомиров Ю.Т. Определение объема капиллярной сети шишковидной железы человека методом фотометрии // Архив АГЭ. – 1970. – Т. 59. – №11. – С. 98 – 102.


СПОСОБ ОКРАШИВАНИЯ НЕРВНОЙ КЛЕТКИ
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 58 items.
29.12.2017
№217.015.f2e2

Способ диагностики эпилепсии на основе комплекса физиологических показателей методом логит регрессионного анализа

Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии. Определяют показатели частоты альфа-колебаний электроэнцефалограммы (ЭЭГ), межпиковой амплитуды когнитивного вызванного потенциала P300, средней частоты тэппинг-тестА, среднего квадратичного отклонения вариабельности...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002637298
Дата охранного документа: 01.12.2017
29.12.2017
№217.015.f315

Способ определения особенностей течения эпилепсии на основе физиологических показателей методом логит-регрессионного анализа

Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии. Определяют показатели: частоты альфа-колебаний и кросскорреляционной функции электроэнцефалограммы, межпиковой амплитуды N75P100 зрительного вызванного потенциала, межпиковой амплитуды N2P3 когнитивного вызванного потенциала Р300,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002637297
Дата охранного документа: 01.12.2017
04.04.2018
№218.016.303f

Способ закрытия дефекта в кости

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии, травматологии и ортопедии, и может быть использовано при лечении остеомиелита с дефектом кости. Способ закрытия дефекта кости в эксперименте включает измельчение коралла семейства «Асrороrа» до размеров фрагментов от 98...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002644828
Дата охранного документа: 14.02.2018
04.04.2018
№218.016.3084

Способ ушивания апоневроза после лапаротомии

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии. Укрепляющие швы накладывают через 5 см по линии разреза апоневроза. При наложении укрепляющего шва первый вкол делают, отступя 1 см от линии разреза апоневроза параллельно последнему с выколом через 1 см. Затем в косом направлении в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002644846
Дата охранного документа: 14.02.2018
04.04.2018
№218.016.3128

Способ прогнозирования результативности моделируемой когнитивной деятельности на основе комплекса физиологических показателей и логит регрессионного анализа

Изобретение относится к области медицины, а именно к физиологии и гигиене труда. Регистрируют электрофизиологические показатели и определяют: мощность тета-колебаний ЭЭГ в отведении F3 в мкВ/с, частоту кросскорреляционной функции ЭЭГ в отведении F3-F4, межпиковую амплитуду N2P3 когнитивного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002644847
Дата охранного документа: 14.02.2018
10.05.2018
№218.016.419f

Средство для снижения функциональной активности и экспрессии гликопротеина-р

Изобретение относится к фармакологии и медицине, а именно к неврологии и онкологии. Предложено применение афобазола (5-этокси-2-[2-(морфолино)этилтио]бензилимидазола дигидрохлорида) в качестве средства для снижения функциональной активности и экспрессии гликопротеина-Р. Техническим результатом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002649134
Дата охранного документа: 29.03.2018
10.05.2018
№218.016.46ff

Способ получения функционального комбинированного оттиска у больных с постоперационными дефектами верхней челюсти

Изобретение относится к области медицины, а именно к ортопедической стоматологии, и предназначено для использования при получении функционального комбинированного оттиска у больных с послеоперационными дефектами верхней челюсти. Осуществляют припасовку индивидуальной ложки в полости рта,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002650588
Дата охранного документа: 16.04.2018
10.05.2018
№218.016.4fc2

Способ скрининга на тромбофилии у пациенток с привычным невынашиванием беременности

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для оптимизации выявления тромбофилии у женщин с рецидивирующими репродуктивными потерями. Проводят скрининг для выявления тромбофилии у пациенток с привычным невынашиванием беременности. При этом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002652894
Дата охранного документа: 03.05.2018
29.05.2018
№218.016.53cf

Способ комбинированной ненатяжной герниопластики при средних, больших и гигантских послеоперационных вентральных грыжах

Изобретение относится к медицине, а именно к абдоминальной хирургии. Формируют комбинированный слой путем сшивания париетальной брюшины с краем большого сальника одиночными швами. Поверх сформированного комбинированного слоя одиночными швами фиксируют сетчатый эндопротез толщиной 0,5-0,6 мм,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002653816
Дата охранного документа: 14.05.2018
29.05.2018
№218.016.59af

Применение 2-r-2-r-3,4-дигидро-1,3,4-бензотиадиазепин-5(2н)-она в качестве вещества, обладающего антиоксидантной активностью

Изобретение относится к области фармацевтической и биологической химии. Предложено применение 2-R-2-R3,4-дигидро-1,3,4-бензотиадиазепин-5(2Н)-она в качестве вещества, обладающего антиоксидантной активностью. 2-R-2-R-3,4-дигидро-1,3,4-бензотиадиазепин-5(2Н)-оны были испытаны на антиоксидантную...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002655298
Дата охранного документа: 24.05.2018
Showing 1-10 of 23 items.
10.06.2014
№216.012.d133

Биокомпозит для обеспечения восстановительных процессов после повреждения у млекопитающего, способ его получения (варианты) и применения

Предложенная группа изобретений относится к области медицины и ветеринарии. Предложен биокомпозит для обеспечения восстановительных процессов после повреждения у млекопитающего, содержащий носитель, по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту, содержащую гены, кодирующие VEGF и/или SDF-1, и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519326
Дата охранного документа: 10.06.2014
27.08.2014
№216.012.ef46

Кодон-оптимизированная кднк, кодирующая дисферлин человека, генно-инженерная конструкция, рекомбинантный аденовирус и фармацевтическая композиция для лечения дисферлинопатий

Изобретение относится к области биотехнологии и касается кДНК, кодирующей дисферлин человека, генно-инженерной конструкции, в которую клонирована такая кДНК, рекомбинантного аденовируса и фармацевтической композиции. Описанная генно-инженерная конструкция содержит экспрессионный плазмидный...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002527073
Дата охранного документа: 27.08.2014
20.02.2015
№216.013.2ab0

Способ получения фармацевтической композиции для индукции развития кровеносных сосудов в тканях, фармацевтическая композиция, полученная этим способом, и способ лечения ишемии тканей и/или органов человека

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к композициям для индукции развития кровеносных сосудов в тканях, и может быть использовано в медицине. Способ предусматривает трансформацию штамма E. coli TOP10 плазмидой pCMV-VEGF165, культивирование штамма в подходящих для накопления биомассы...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002542385
Дата охранного документа: 20.02.2015
20.07.2015
№216.013.64ee

Кодон-оптимизированные последовательности и фармацевтическая композиция для восстановления кровеносных сосудов

Изобретение относится к области биохимии, в частности к кодон-оптимизированным последовательностям ДНК. Заявлены кодон-оптимизированные кДНК, кодирующие фактор стромальных клеток 1 альфа и сосудистый эндотелиальный фактор роста изоформы 165, а также содержащая их рекомбинантная плазмида....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002557385
Дата охранного документа: 20.07.2015
27.07.2015
№216.013.6875

Кодон-оптимизированная рекомбинантная плазмида, способ стимуляции регенерации периферического нерва, способ лечения поврежденного нерва человека

Изобретение относится к генной инженерии, а также к медицине, а именно к нейрохирургии и травматологии. Описана геннотерапевтическая конструкция, кодирующая эндотелиальный сосудистый фактор роста (VEGF) и фактор роста фибробластов (FGF-2). В основе геннотерапевтической конструкции, кодирующей...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002558294
Дата охранного документа: 27.07.2015
13.01.2017
№217.015.7487

Способ создания персонализированного ген-активированного имплантата для регенерации костной ткани

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены персонализированный ген-активированный имплантат для замещения костных дефектов у млекопитающего и способ его получения, предусматривающий проведение компьютерной томографии области костной пластики, моделирование костного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002597786
Дата охранного документа: 20.09.2016
13.01.2017
№217.015.7851

Геннотерапевтический способ лечения синдрома диабетической стопы

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены применение плазмиды pCMV-VEGF сплайсинг-вариант 165 (Seq#1) для лечения синдрома диабетической стопы и способ лечения синдрома диабетической стопы. Предложенная группа изобретений обеспечивает улучшение результатов лечения...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002599507
Дата охранного документа: 10.10.2016
25.08.2017
№217.015.a9a0

Устройство для введения таблеток под кожу

Изобретение относится к оперативной хирургии и может быть использовано для имплантации таблеток в ткани. Устройство содержит полую иглу со скошенным концом, поршень и свободно установленную на игле наружную трубку. Игла выполнена с глухим концом и имеет открытый вырез для размещения таблеток....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002611931
Дата охранного документа: 01.03.2017
25.08.2017
№217.015.d31a

Устройство для временной остановки кровотечения

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для остановки кровотечений при ранении магистральных сосудов конечностей. Устройство для временной остановки кровотечения включает зажим, фиксатор и стилет. Стилет выполнен с упором на проксимальной части и выступом овальной формы,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002621840
Дата охранного документа: 07.06.2017
26.08.2017
№217.015.d5e6

Способ получения оптимизированного твердого ген-активированного материала, способ получения твердого матрикса носителя, оптимизированный твердый ген-активированный материал для регенерации тканей

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ получения оптимизированного твердого ген-активированного материала, включающего создание матрикса-носителя, связавшего как минимум одну молекулу нуклеиновой кислоты, с последующим размещением на его поверхности еще как минимум одной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002623171
Дата охранного документа: 22.06.2017
+ добавить свой РИД