Способ диагностики молекулярных фенотипов остеоартрита

Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике, ревматологии, ортопедии и травматологии, а именно к количественному исследованию концентрации биологических молекул в венозной крови и оценку их соотношений.

Известен способ диагностики остеоартрита и других заболеваний соединительной ткани, включающий определение методом вестерн блоттинга уровней фрагментов расщепления белка альфа-1 и цепи коллагена IX в крови и синовиальной жидкости. В результате получают концентрации, по величине которых судят о наличии заболевания соединительной ткани, в частности остеоартрита (заявка №2009136441).

Однако известный способ является дорогостоящим, имеет низкую специфичность для диагностики остеоартрита, так как используется, в общем, для заболеваний соединительной ткани, сектор которых широк, не предназначен для диагностики фенотипов остеоартрита.

Известен способ дифференциальной диагностики остеоартрита и ревматоидного артрита, включающий измерение концентрации пептида цепи С1 белка 2 промежуточного слоя хряща. В результате получают концентрации пептида цепи C1 белка 2 промежуточного слоя хряща, по высокому уровню которого судят о наличии остеоартрита (патент №2603484).

Однако известный способ имеет низкую специфичность для диагностики остеоартрита, так как оценивает только хрящевые изменения, не учитывает ремоделирование костной ткани, не предназначен для диагностики фенотипов остеоартрита.

В качестве прототипа выбран способ диагностики артрита и остеоартрита, основанный определении в слюне, по меньшей мере, трех диагностических агентов, выбранных из группы, состоящей из гамма-интерферона, индуцированного интерфероном протеина-10, интерлейкина-2 и совокупного протеина слюны. При определении повышенных концентраций указанных молекул диагностируют остеоартрит. (патент №2603484).

Однако известный способ связан с определением биологических молекул в слюне, состава которой в значительной степени отличается от состава крови, не учитывает соотношения концентраций молекул, не предназначен для диагностики фенотипов остеоартрита.

Задачей настоящего изобретения является лабораторное исследование концентраций в венозной крови методом иммуноферментного анализа фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 и интерлейкина 1 для определения фенотипа сотеоартрита.

Представленная задача решается тем, что в способе диагностики фенотипов остеоартрита, включающем лабораторное исследование концентраций в венозной крови методом иммуноферментного анализа фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 и интерлейкина 1, отличающийся тем, что в случае повышения концентрации только фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 диагностируют оксидативный фенотип остеоартрита, при повышении концентрации только интерлейкина 1 диагностируют воспалительный фенотип остеоартрита, при одновременном повышении или нормальных показателях фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 и интерлейкина 1 диагностируют смешанный воспалительно-оксидативный фенотип остеоартрита.

Целесообразно для определения повышения концентрации фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 и интерлейкина 1 использовать референсный интервал нормальных значений, определенный производителем реактивов для иммуноферментного анализа, повышение концентрации считать выше 99-го перцентиля рефренного интервала.

Способ осуществляют следующим образом.

Производят забор венозной крови в пробирку, которую затем помещают в центрифугу и центрифугируют в течение 5 минут со скоростью 1000 оборотов в минуту. Отбирают полученную плазму крови любым известным способом и помещают в пробирку для хранения типа Эппендорф. Полученную таким образом плазму венозной крови изучают с помощью иммуноферментного анализа любым известным способом. Для определения концентраций фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 и интерлейкина 1 используют готовые коммерческие наборы реактивов. Анализ проводят в соответствии с инструкцией производителя.

При определении концентрации фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 выше 99-го перцентиля рефренсного интервала и нормальной концентрации интерлейкина 1 определяют оксидативный фенотип остеоартрита.

При определении концентрации интерлейкина 1 выше 99-го перцентиля рефренсного интервала и нормальной концентрации фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 и интерлейкина 1 определяют воспалительный фенотип остеоартрита.

При определении концентраций фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 и интерлейкина 1 в пределах или выше 99-го перцентиля рефренсного интервала определяют смешанный фенотип остеоартрита.

Клинические пример выполнения способа.

Пример 1.

Пациентка А., 56 лет с жалобами на боль механического ритма правом коленном суставе.

Клиническое и рентгенологическое обследование позволило установить диагноз остеоартрита правого коленного сустава. Для выбора тактики лечения пациентки решено определить молекулярный фенотип заболевания. Для этого произведен забор крови из кубитальной вены с помощью вакуумной системы в пробирку. После центрифугирования и получения плазмы крови, выполнен твердофазовый иммуноферментный анализ с использованием коммерческих наборов для определения фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 и. Получены результаты: концентрация фактора индуцированного оксидативным стрессом 1-4,16 нг/мл (норма: 0,56-1,85 нг/мл), интерлейкина 1-1,02 пг/мл (норма: 0,00-5,00 пг/мл). Учитывая повышенную концентрацию фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 и нормальную концентрацию интерлейкина 1, определен оксидативный фенотип остеоартрита. Пациентке назначена соответствующая патогенетическая терапия.

Пример 2.

Пациент Б., 64 года с жалобами на боль механического ритма в области левого коленного сустава.

Клиническое и рентгенологическое обследование позволило установить диагноз остеоартрита левого коленного сустава. Для выбора тактики лечения пациенту решено определить молекулярный фенотип заболевания. Для этого произведен забор крови из кубитальной вены с помощью вакуумной системы в пробирку. После центрифугирования и получения плазмы крови, выполнен твердофазовый иммуноферментный анализ с использованием коммерческих наборов для определения фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 и. Получены результаты: концентрация фактора индуцированного оксидативным стрессом 1 - 0,98 нг/мл (норма: 0,56-1,85 нг/мл), интерлейкина 1 - 10,69 пг/мл (норма: 0,00-5,00 пг/мл). Учитывая повышенную концентрацию интерлейкина 1 и нормальную концентрацию фактора индуцированного оксидативным стрессом, определен воспалительный фенотип остеоартрита. Пациентку назначена соответствующая патогенетическая терапия.

Источники информации:

1. Патент РФ RU 2603484 С2, 2016 (прототип).

2. Заявка РФ RU 2009136441 А, 2011.