×
02.10.2019
219.017.d008

Результат интеллектуальной деятельности: Способ выявления РНК возбудителя вируса артериита у лошадей

Вид РИД

Изобретение

Аннотация: Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ выявления РНК возбудителя вируса артериита у лошадей, включающий выделение РНК из биологического материала инфицированных особей сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контролей образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией - Threshold, согласно изобретению для выделения РНК используют биологический материал животных по выбору: в виде выделений из носа, глаз, фекалий, крови, спермы и фрагментов внутренних органов и тканей, взятых от лошадей, инфицированных возбудителем вируса артериита (Equine arteritis virus), при этом для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×10 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома возбудителя вируса артериита лошадей (Equine arteritis virus) и фрагмент генома бактериофага MS2, взятых в соотношении 1:1, FAM/Green для специфического сигнала; Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции – отрицательный. Изобретение позволяет расширить функциональные возможности и провести достоверную диагностику заболевания. 3 ил., 4 табл.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики вирусных и инфекционных заболеваний у животных, в частности к методам выявления ДНК возбудителя вируса артериита у лошадей.

Вирусный артериит лошадей (Arteriitis viralis equorum, Equine viral arteritis) - контагиозное заболевание, характеризующееся некрозами стенки кровеносных сосудов, катаральным воспалением органов дыхания и пищеварения у жеребят, абортами у кобыл и нарушением воспроизводительной функции у жеребцов.

Известно, что диагноз на вирусный артериит устанавливают на основании эпизоотологических, клинических данных и, в случае гибели животных, патоморфологических исследований. Лабораторные методы диагностики включают выделение вируса в культуре клеток, ретроспективные серологические исследования. Для выделения вируса используют культуры клеток лошади, перевиваемых линии ВНК-21, Веро и др. Идентификацию вируса проводят в реакции нейтрализации со специфической сывороткой. Альтернативными (вспомогательными) методами лабораторных исследований являются РСК, ИФА. Полимеразная цепная реакция для диагностики вирусного артериита лошадей, находится на стадии изучения. http://www.liveanimal.ru/loshadi/veterinariya/zaraznye-zabolevaniya/infektsionnye-zabolevaniya/virusnyi-arteriit-loshadej

Также известен способ выявления инфекций методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени (патент РФ №2460803, C12Q 1/68, 2014 г. - прототип), включающий выделение РНК из биологического материала инфицированных особей сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контролей образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией -Threshold.

Недостатком прототипа является отсутствие возможности получения достоверной диагностики вируса артериита у лошадей.

Техническим результатом является получение достоверной диагностики заболевания и расширение функциональных возможностей.

Технический результат достигается тем, что в способе выявления РНК возбудителя вируса артериита у лошадей, включающем выделение РНК из биологического материала инфицированных особей сорбционным методом, синтез кДНК на матрице РНК путем постановки одноэтапной с добавлением внутреннего и положительного контролей образцов мультиплексной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с проведением 45 циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома вирусного возбудителя олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченного зонда и контрольных образцов, измерение накопления флуоресцентного сигнала по каналам соответствующих флуоресцентных красителей и интерпретацию результатов на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией - Threshold, согласно изобретению для выделения РНК используют биологический материал лошадей по выбору: в виде выделений из носа, глаз, фекалий, крови, спермы и фрагментов внутренних органов и тканей взятые от лошадей инфицированных возбудителем вируса артериита (Equine arteritis virus), при этом для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома возбудителя вируса артериита лошадей (Equine arteritis virus) и фрагмент генома бактериофага MS2 взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:

при этом накопление флуоресцентного сигнала измеряют по каналам: FAM/Green для специфического сигнала; Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считают положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.

Новизна заявляемого технического решения заключается в том, что для получения достоверной диагностики вируса артериита лошадей используют две последовательные реакции: обратной транскрипции вирусной РНК для получения кДНК и полимеразной цепной реакции для амплификации фрагмента полученной кДНК матрицы. Обе реакции проводятся последовательно в одной ПЦР-пробирке (one-tube) с использованием специфичных для участка генома артериита олигонуклеотидных праймеров, флуоресцентно-меченного зонда и разных видов контроля для которых используют различные формы материала бактериофага MS2: суспензия и фрагмент генома со специфическими к нему праймерами и зондом. Такая постановка ОТ-ПЦР в реальном времени сокращает и упрощает процедуру анализа, снижает риск контаминации и возможность ошибки при переносе кДНК в другую пробирку для ПЦР. Кроме того, детекция продуктов амплификации осуществляется с использованием принципа выщепления флуоресцентной метки на 5' конце олигонуклеотидного зонда.

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».

Заявляемый способ рекомендовано использовать в ветеринарной вирусологии, а именно к средствам диагностики возбудителя вируса артериита лошадей, что соответствует критерию «промышленная применимость».

Сущность изобретения поясняется чертежом, где представлены скриншоты графиков и таблицы, на фиг. 1 - представлен канал FAM /Green - для тестирования наличия ДНК возбудителя вируса артериита у лошадей; на фиг. 2 представлен канал Cy5/Red - для тестирования сигнала внутреннего контрольного образца (ВКО), на рис. 3 - таблица количественных данных для Cycling A.Green (Equine arteritis virus) и A.Red (ВКО).

Способ выявления РНК возбудителя вируса артериита у лошадей осуществляется следующим образом

Для исследования с целью выделения РНК используют биологический материал животных по выбору: в виде выделений из носа, глаз, фекалий, крови, спермы и фрагментов внутренних органов и тканей взятые от лошадей инфицированных возбудителем вируса артериита (Equine arteritis virus). Для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×10 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома возбудителя вируса артериита лошадей (Equine arteritis virus) и фрагмент генома бактериофага MS2 взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:

Затем измеряют накопление флуоресцентного сигнала по каналам: FAM/Green для специфического сигнала; Cy5/Red для сигнала внутреннего контроля и интерпретируют результаты на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией (Threshold). Если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считается положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.

Использование для разных видов контроля различные формы материала бактериофага MS2: суспензии и фрагмента генома со специфическими к нему праймерами и зондом обусловлено тем, что это позволяет контролировать корректное прохождение реакции в каждой пробирки, а также контролируется этап выделения РНК из образцов.

Выбор последовательности и расчет первичной структуры олигонуклеотидных праймеров и зондов.

Вирус артериита входит в семейство Arteriviridae, род Arierivirus. Вирионы размером около 60 нм, сферической формы. Тип симметрии кубический, некоторые из них имеют хвостоподобные выступы. Состоят из нуклеокапсида и липидсодержащей суперкапсидной оболочки клеточного происхождения, на поверхности которой имеются выступы длиной 12-15 нм. Геном представлен 10 фрагментами 2-нитевой РНК, Белковый капсид его состоит из 7 структурных белков (36-120 кД).

Праймеры высокоспецифичны к коротким консервативным участкам гена ORF5 (Equine arteritis virus strain SER-1 large envelope protein (ORF5) gene, partial cds, код доступа KX645659.1, участок между 70 и 390) и не комплементарны каким-либо участкам геномов других вирусов. Праймеры были спроектированы с использованием Primer Express Software v3.0 (Applied Biosystems) и исследованы с использованием BLAST, чтобы подтвердить их специфичность. Для детекции продуктов амплификации был подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд EAVP (комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров EAVF и EAVR). Зонд был помечен красителем FAM. Для гашения самопроизвольной флуоресценции на 3'-конце олигонуклеотидного зонда прикреплен гаситель BHQ-1.

Используя программу "Oligo 6.0" описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР.

С помощью программы «Oligo 6.0» проанализирована нуклеотидная последовательность бактериофага MS2 (Enterobacteria phage MS2 isolate ST4, complete genome. ACCESSION EF204940). Бактериофаг MS2 содержит однонитевую позитивно ориентрованную РНК размером 3569 оснований. В результате анализа внутри гена белка `созревания` (maturation protein) выбран участок между 200 и 350 нуклеотидами, содержащий уникальные нуклеотиные последовательности, рассчитаны первичные структуры олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих выбранный участок генома. Для детекции продуктов амплификации подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд MS2P, комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров MS2F и MS2R. Используя программу «Oligo 6.0» описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР.

Пример конкретного осуществления способа выявления РНК возбудителя вируса артериита у лошадей.

Для исследования используют следующий материал:

- Соскобы со слизистых конъюнктивы глаз и ротоглотки берут сухими ватными зондами;

- Фекалии весом 5 г отбирают в стерильный пластиковый контейнер;

- Сперму, отбирают в пластиковую микропробирку объемом 1,5 мл

- Для получения сыворотки забирают кровь в пробирку без антикоагулянта;

- Фрагменты внутренних органов и ткани (трахея, легкие, селезенка, мозг, воздухоносные мешки, кишечник, лимфоузлы) помещают в стерильный контейнер.

Соскобы со слизистых конъюнктивы и ротоглотки в физиологическом растворе исследуют без предварительной подготовки.

Сперму разводят физиологическим раствором 1:3, тщательно перемешивают на вортексе. Для экстракции используют аликвоту 0,1 мл суспензии.

Для получения сыворотки пробирки с кровью (без антикоагулянта) отстаивают при комнатной температуре в течение 30 минут до полного образования сгустка. Затем центрифугируют при 600-1600 g (3000 об./мин на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, Германия) в течение 10 минут при комнатной температуре. Сыворотку переносят отдельными наконечниками с фильтром в стерильные пробирки объемом 1,5 мл.

Из тканей и органов вырезают небольшие кусочки до 1 г весом. Растирают пробы в отдельных фарфоровых ступках или гомогенизируют на автоматических гомогенизаторах. Затем готовят 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе или фосфатном буфере. Суспензию переносят в пробирку объемом 1,5 мл и центрифугируют при 9000 об./мин на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, в течение 1 мин. Аликвоту надосадочной жидкости (0,1 мл) используют для экстракции РНК.

Из фекалий (1-5 г) готовят 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе. Взвесь фекалий декантируют в течении 5-10 минут. Отбирают 1 мл надосадочной жидкости и переносят в чистую пробирку 1,5 мл, центрифугируют при 5000 об./мин на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, в течение 5 мин. Экстракцию РНК из осветленного экстракта фекалий проводят по возможности, сразу. При необходимости хранения замораживают.

Анализ проводят с помощью набора реагентов «ПЦР-АРТЕРИИТ-ФАКТОР» методом ОТ-ПЦР РВ:

Набор состоит из комплекта реагентов для проведения мультиплексной ОТ-ПЦР РВ (Комплект №1) и контрольных образцов (Комплект №2).

Набор выпускается в двух вариантах:

1) Для анализа 55 образцов (включая контрольные образцы)

2) Для анализа 110 образцов (включая контрольные образцы).

Состав набора приведен в Таблицах 1 и 2.

*Возможна легкая опалесценция

Наборы используют в соответствии с инструкцией по применению набора реагентов «ПЦР-АРТЕРИИТ-ФАКТОР» для выявления РНК вируса артериита лошадей (Equine arteritis virus) в биологическом материале от животных методом совмещенной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (ОТ ПЦР РВ), ТУ 21.10.60-126-51062356-2017 (для диагностики in vitro) http://www. vetfaktor.ru/.

В набор не входят реактивы для экстракции НК. Выделение РНК может проводиться, например, с помощью наборов на основе сорбционного метода, в состав которых входит силика или микроцентрифужные колонки, наборов на основе фенол-хлороформной экстракции и т.п. Рекомендуется использовать набор «ДНК/РНК-С-ФАКТОР» либо аналогичный.

Анализ состоит из трех этапов:

- экстракция НК (на этом этапе дополнительно используют реактивы для экстракции, например набор «ДНК/РНК-С-ФАКТОР»);

- проведение реакции ОТ-ПЦР РВ;

- учет результатов анализа.

Экстракцию (выделение) нуклеиновых кислот (НК) из исследуемых проб проводят следующим образом.

Отбирают необходимое количество одноразовых пробирок объемом 1,5 мл, включая отрицательный контроль выделения. Вносят во все пробирки, включая пробирку для отрицательного контрольного образца (ОКО), по 10 мкл внутреннего контрольного образца (ВКО EAV) в качестве которого используют суспензию бактериофага MS2 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца (ПКО EAV) используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома возбудителя вируса артериита лошадей (Equine arteritis virus) и фрагмент генома бактериофага MS2 взятых в соотношении 1:1, со следующими нуклеотидными последовательностями:

Выделяют НК из анализируемых и контрольных образцов согласно инструкции производителя набора для выделения НК.

Для подготовка образцов к проведению ПНР Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, объем РНК-пробы - 10 мкл.

Успешное прохождение реакции контролируют использованием компонентов из комплектов 1 и 2 набора ПКО EAV, ВКО EAV и РНК Буфер.

В отдельной пробирке смешать компоненты набора из расчета на каждую реакцию: 10 мкл ПЦР БУФЕР EAV 5 мкл ПЦР СМЕСЬ EAV 0,75 мкл RT PCR ENZ

Перемешивают смесь на вортексе и сбрасывают капли кратковременным центрифугированием. Отбирают необходимое количество пробирок для амплификации НК исследуемых и контрольных проб и вносят в них по 15 мкл приготовленной реакционной смеси.

Используя наконечники с фильтром в подготовленные пробирки вносят:

а) в пробирку отрицательного контроля ПЦР (К-) 10 мкл РНК буфера;

б) в ряд пробирок для исследуемых проб - в каждую вносят по 10 мкл НК соответствующей пробы;

в) в пробирку с положительным контролем ПЦР (К+) вносят 10 мкл ПКO ЕАV.

Далее проводят ПЦР РВ с флуоресцентной детекцией с помощью прибора - амплификатора типа «Rotor-Gene Q» при следующих режимах представленных в таблице 3.

Помещают подготовленные для проведения ПЦР пробирки в ячейки амплификатора, программируют прибор согласно инструкции производителя и осуществляют интерпретацию результатов анализа

Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в соответствии с инструкцией производителя к прибору. Учет результатов ОТ-ПЦР РВ проводится по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла «Ct» для исследуемого образца).

Результат считается достоверным в случае корректного прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и экстракции НК в соответствии с таблицей 4.

Появление любого значения Ct в таблице результатов для отрицательного контроля этапа экстракции ВК- на канале Fam/Green и для отрицательного контроля этапа ПЦР К- на любом из каналов свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты анализа по всем пробам считаются недействительными. Требуется повторить анализ всех проб, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации.

Образцы, для которых по каналу Cy5/Red значение Ct отсутствует или превышает 35 цикл (при этом по каналу Fam/Green отсутствует значение Ct) требуют повторного проведения исследования (рис. 2, 3). Задержка в значениях пороговых циклов для исследуемых образцов на канале Cy5/Red указывает на присутствие ингибиторов в пробе(ах) или на ошибки при постановке реакции ОТ-ПЦР РВ. Требуется провести исследование, начиная с этапа экстракции НК.

Образец считается положительным, РНК вируса артериита лошадей присутствует, если наблюдается экспоненциальный рост сигнала на канале Fam/Green, при этом значения Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (см. Табл. 3, рис. 1,3). Если для исследуемого образца по каналу Fam/Green значение Ct определяется позднее 37 цикла при корректном прохождении положительных и отрицательных контролей - он считается спорным и исследуется повторно с этапа выделения НК. Если при повторной постановке наблюдается схожий результат (Ct на канале Fam/Green более 37), требуется повторное взятие материала от того же животного для проведения ПЦР-исследования и (или) использование альтернативных методов диагностики.

Источник поступления информации: Роспатент

Showing 131-140 of 465 items.
13.02.2019
№219.016.b9aa

Способ синхронизации вывода цыплят

Изобретение относится к птицеводству, а именно к инкубации яиц сельскохозяйственной птицы. Осуществляют посуточное изменение температуры в инкубаторе на протяжении всего цикла инкубации. Ежесуточно со смещением времени на 45 минут изменяют температуру нагрева инкубатора согласно биологическим...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002679511
Дата охранного документа: 11.02.2019
13.02.2019
№219.016.b9c3

Способ защиты вегетирующих растений подсолнечника от повреждающего действия 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Способ защиты вегетирующих растений подсолнечника от повреждающего действия 2,4-Д предусматривает обработку N-замещенными амидами 5,7-диметил-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин-2-сульфокислоты в количестве 40 г/га через 1 сутки после использования...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002679493
Дата охранного документа: 11.02.2019
14.02.2019
№219.016.ba4d

Устройство для шлифования семян

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Предложено устройство для шлифования семян, содержащее контейнер, смонтированный из соединенных в единую технологическую цепочку двух или более винтовых шлифовальных барабанов, внутренняя поверхность которых покрыта слоем резины, поярусно, жестко...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002679743
Дата охранного документа: 12.02.2019
14.02.2019
№219.016.ba5a

Способ изучения резания стеблей сельскохозяйственных культур

Изобретение относится к области сельскохозяйственного машиностроения. Способ изучения резания стеблей сельскохозяйственных культур включает размещение стеблей в держателях, захват и срез их режущим инструментом, измерение высоты среза. Держатели жестко устанавливают на транспортере в виде...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002679728
Дата охранного документа: 12.02.2019
14.02.2019
№219.016.ba61

Способ получения мороженого функционального назначения

Изобретение относится к получению мороженого. Способ предусматривает приготовление смеси исходных компонентов, фильтрацию, пастеризацию, гомогенизацию, охлаждение, фризерование, фасовку и закаливание мороженого. Перед пастеризацией в смесь исходных компонентов вносят стабилизатор – желатин....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002679731
Дата охранного документа: 12.02.2019
16.02.2019
№219.016.bb2d

Станок подготовки соляного раствора для очистки питьевой воды на водозаборах

Изобретение относится к устройствам для очистки воды и может быть использовано для очистки питьевой воды на водозаборах. Станок подготовки соляного раствора для очистки питьевой воды на водозаборах содержит вращающийся барабан 1 и корпус 8. Барабан 1 выполнен по периметру в виде многозаходной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002680049
Дата охранного документа: 14.02.2019
16.02.2019
№219.016.bb34

Установка для изучения резания стеблей сельскохозяйственных культур

Изобретение относится к области сельскохозяйственного машиностроения и может использоваться для изучения резания стеблей сельскохозяйственных культур. Установка состоит из режущей системы (1), включающей вращающийся режущий элемент в виде шнека (2) и неподвижный нож (4). К торцам витков шнека...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002680005
Дата охранного документа: 14.02.2019
17.02.2019
№219.016.bbda

Тест-система для выявления днк возбудителя лептоспироза (leptospira spp.) у сельскохозяйственных животных

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к лабораторной диагностике возбудителей инфекционных заболеваний, а именно к средствам диагностики инфекции у животных. Описан тест-система для выявления ДНК возбудителя лептоспироза (Leptospira spp.) у сельскохозяйственных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002680094
Дата охранного документа: 15.02.2019
17.02.2019
№219.016.bbde

Средство для лечения уролитиаза у плотоядных

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет собой средство для лечения уролитиаза у плотоядных, содержащее фурагин в количестве 100 мг, дистилированную воду в количестве 100 мл и 3,3 мл 3% раствора гиалуроновой кислоты. Изобретение обеспечивает расширение функциональных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002680087
Дата охранного документа: 15.02.2019
20.02.2019
№219.016.bc19

Автономный асинхронный генератор с полюсопереключаемой двухслойной обмоткой статора на 12/10 полюсов

Изобретение относится к асинхронному генератору с полюсопереключаемой двухслойной обмоткой статора на 12/10 полюсов. Обмотка для 72 пазов из катушечных групп с выводами состоит из 1 по 36 катушечных групп с первыми выводами на десять полюсов 37, 38, 39, взятыми соответственно от объединенных...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002680152
Дата охранного документа: 18.02.2019
Showing 131-140 of 291 items.
26.08.2017
№217.015.d4d0

Способ производства функционального корма

Изобретение относится к области сельского хозяйства - кормопроизводству, в частности к способу производства функционального корма. Способ включает промывку зерна тритикале водопроводной водой в течение 4-8 мин. После чего промытое зерно замачивают в анолите с pH 2,4-8,0 ед. и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622257
Дата охранного документа: 13.06.2017
26.08.2017
№217.015.d4da

Способ производства белково-витаминной кормовой добавки

Изобретение относится к области сельского хозяйства кормопроизводству, в частности, к способам производства белково-витаминной кормовой добавки. Способ производства белково-витаминной кормовой добавки включает промывку семян амаранта водопроводной водой в течение 4-8 мин. После чего промытые...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622155
Дата охранного документа: 13.06.2017
26.08.2017
№217.015.d4ff

Способ приготовления витаминного зеленого корма

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Способ приготовления витаминного зеленого корма, включающий замачивание зерна ячменя в электроактивированной воде, проращивание и выгон проростков. Промывку зерна осуществляют водопроводной водой в течение 4-8 мин, после чего промытое зерно...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622250
Дата охранного документа: 13.06.2017
26.08.2017
№217.015.d501

Способ получения белкового витаминного зеленого корма

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к кормопроизводству. Способ получения белково-витаминного зеленого корма включает промывку семян люцерны водопроводной водой в течение 4-8 мин. После этого промытое семя замачивают анолитом с pH 2,4-7,8 и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622153
Дата охранного документа: 13.06.2017
26.08.2017
№217.015.d51a

Способ получения белкового витаминного зеленого корма

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к кормопроизводству. Способ получения белково-витаминного зеленого корма включает промывку семян амаранта водопроводной водой в течение 4-8 мин. После чего промытые семена замачивают анолитом с pH 2,4-7,8 и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622156
Дата охранного документа: 13.06.2017
26.08.2017
№217.015.d51c

Способ получения витаминного зеленого корма

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Способ получения витаминного зеленого корма, включающий замачивание семян рыжика в электроактивированной воде, проращивание и выгон проростков. Промывку семян осуществляют водопроводной водой в течение 4-8 мин, после чего промытое семя...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622144
Дата охранного документа: 13.06.2017
26.08.2017
№217.015.d51f

Способ приготовления функциональной кормовой добавки из зерна тритикале

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к кормопроизводству. Способ приготовления функциональной кормовой добавки из зерна тритикале включает замачивание зерна тритикале в анолите с рН 3,5-10,8 ед. и окислительно-восстановительным потенциалом 375-840 мВ, концентрацией...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622151
Дата охранного документа: 13.06.2017
26.08.2017
№217.015.d532

Способ изготовления функционального корма

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к способу изготовления функционального корма. Способ включает замачивание зерна кукурузы в электроактивированной воде, проращивание и выгон проростков. В качестве зерна используют кукурузу, промывку зерна кукурузы осуществляют...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622255
Дата охранного документа: 13.06.2017
26.08.2017
№217.015.d534

Способ изготовления функционального корма

Изобретение относится к области сельского хозяйства - кормопроизводству. Способ изготовления функционального корма включает промывку семян нута водопроводной водой в течение 4-8 мин. После чего промытые семена замачивают в анолите с рН 2,4-8,0 ед. и окислительно-восстановительным потенциалом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622256
Дата охранного документа: 13.06.2017
26.08.2017
№217.015.d535

Способ производства биологически активной кормовой добавки

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к кормопроизводству. Способ изготовления биологически активной кормовой добавки из зерна фасоли включает промывку зерна фасоли водопроводной водой в течение 4-8 мин. После чего промытое зерно замачивают анолитом с рН 3,0-11,2 ед....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002622253
Дата охранного документа: 13.06.2017
+ добавить свой РИД