Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОФИЛЬНОГО КОМПЛЕКСА НА ОСНОВЕ ФЛАВОНОЛИГНАНОВ И ФОСФОЛИПИДОВ

Изобретение относится к области фармакологии и медицины, конкретно к способу получения гидрофильного комплекса на основе флавонолигнанов и фосфолипидов, характеризующегося высокой гидрофильностью, улучшенной биодоступностью по сравнению со свободными биофлафоноидами и другими веществами фенольной природы.

В широко распространенное среди лекарственных растений семейство флавоноидов входит обширный собирательный класс полифенолов. Флавоноидные соединения подразделяются на основные группы флавонов, флавонолов, флаванонов, флаванонолов, катехинов и антоцианов. Флавоноиды обладают широким спектром биологической и антиоксидантной активности. В настоящее время хорошо изучены и задокументированы такие фармакологические свойства флавоноидов, как антиоксидантная, периферическая, вазодилаторная активности, вазопротекторная активность (влияние на хрупкость и проницаемость капилляров), противовоспалительное, антиспазмолитическое, антигистаминное и противоопухолевое действия.

Несмотря на многообещающие перспективы клинического применения флавоноидов, их терапевтическая эффективность часто оказывается недостаточной при местном и пероральном применении. При пероральном применении наблюдается слабая абсорбция флавоноидов в кишечнике, обусловленная бактериальной деградацией и формированием не всасывающихся в кишечнике комплексов флавоноидов с другими веществами пищеварительного тракта. Поскольку флавоноиды практически нерастворимы в воде, их парентеральное применение также оказывается затруднительным. Для целей практической медицины несомненную актуальность приобретает поиск новых способов получения гидрофильных (водорастворимых) комплексов флавоноидов с фосфолипидами.

В прошлом делались попытки добиться молекулярного изменения флавонолигнанов путем обработки или взаимодействия их с подходящими химическими агентами и перевести их в производные с улучшенной водорастворимостью и повышенной скоростью высвобождения. К производным, образованным таким образом, относятся, например, аддукты, комплексные соединения, сложные эфиры. Недостатком таких производных является то, что рассматриваемый в отдельном случае флавонолигнан связан с химическим соединением, которое может физиологически действовать как чужеродное вещество и вызывать возможно нежелательные побочные реакции или ухудшать активность флавонолигнана.

Известен способ, заключающийся в получении водоспиртового раствора фармацевтически приемлемых веществ-носителей и смачивателей, суспендируют в этом растворе флавонолигнан и полученную смесь нагревают до температуры кипения для получения прозрачного раствора (пат. РФ 2157225). Затем полученный прозрачный раствор концентрируют для образования сопреципитата, фильтруют и полученный сопреципитат сушат под вакуумом. Недостатком способа является то, что образующийся в результате сопреципитат тем не менее не является водорастворимым препаратом и, соответственно, может применяться только для перорального применения.

Наиболее близким техническим решением является способ получения комплексов флавонолигнанов с фосфолипидами, заключающийся во взаимодействии 0,3-2 молей фосфолипидов и 1 моль флаволигнана, например силибинина или силимарина в апротонных органических растворителях, таких как диоксан или ацетон, из которых комплекс может быть выделен преципитацией, лиофилизацией или распылительной сушкой (пат ЕР 0209037). Комплексы получают с пониженной диэлектрической константой. Комплексы растворимы в хлороформе, этиловом спирте.

Таким образом, авторами приведенных выше работ частично решена задача повышения биодоступности флавоноидов, однако проблема повышения растворимости флаволигнанов в водных растворах с целью создания инъекционных форм остается нерешенной.

Изобретательской задачей является создание способа получения гидрофильного комплексного препарата с повышенной биодоступностью, который может быть использован для парентерального введения и обладает более высокой терапевтической активностью.

Изобретательская задача решается тем, что предлагается способ получения гидрофильного комплекса на основе флавонолигнанов и фосфолипидов, заключающийся в их взаимодействии в органической среде с последующей сушкой полученной смеси путем лиофилизации или распылительной сушки. При этом предварительно готовят водную дисперсию фосфолипидов концентрации 0,5-10 вес.%, содержащую фармацевтически приемлемый сахарид в концентрации 2-10 вес.%, затем осуществляют инжекцию в полученную дисперсию смеси флавонолигнанов и фосфолипида, взятых при соотношении от 10:0,1 до 10:1, в подходящем органическом растворителе.

Фосфолипиды выбраны из группы: фосфолипиды из бычьего или свиного мозга, или кожи, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, содержащие одинаковые или различные ацильные группы, яичный лецитин.

В качестве флавонолигнанов используют вещества фенольной природы, выбранные из группы: 5,6,7,4'-тетраоксифлавон, 5,6,7-триоксифлавон, g-схизандрин, апигенин, астрагалин, ауреузидин, виснагин, виснадин, гесперидин, гиперозид, дезоксисхизандрин, дигидросамидин, дигидросилибин, изоликвиритигенин, изорамнитин, инокостерон, кверцетин, кверцитрин, квинквелозид, келлин, кемпферол, лептозидин, ликвиритигенин, лютеолин, мирицетин, нарингенин, пиранокумарин, розавин, рутин, салидрозид, силидианин, силибинин, силикристин, скополетин, сульфуретин, схизандрин, схизандрол, тилирозид, трицин, умбеллиферон, 6-метокси-7,8-диоксикумарин, фурокумарин, экдистерон, энтеграстероны, 6,7-диоксикумарин и их производные.

Предлагаемый способ позволяет получить гидрофильный препарат, который может быть высушен методом лиофилизации или распылительной сушки и при добавлении водных растворов образовывать стабильные дисперсии микровезикул, которые могут быть использованы для получения инъекционных или инфузионных лекарственных форм.

Таким образом, по актуальности и новизне изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Пример 1 (сравнительный). Получение комплексного препарата, содержащего силимарин и соевый фосфатидилхолин.

К раствору, содержащему 5 г силимарина в 100 мл ацетона, добавляли 8 г соевого фосфатидилхолина, перемешивали, смесь упаривали под вакуумом до объема 30 мл, затем вливали при перемешивании в 300 мл лигроина. Отстаивали несколько часов. Полученный преципитат отделяли фильтрованием, промывали лигроином и сушили под вакуумом при 40°С. Получали 11,1 г комплекса в виде порошка. Полученный комплекс растворим в хлороформе, этиловом эфире, растворим в воде частично.

Пример 2. Получение гидрофильного комплексного препарата, содержащего силимарин и яичный лецитин.

Сухой яичный лецитин (8 вес.%) суспендировали в интенсивно перемешиваемом водном растворе сахарозы (3 вес.%). Затем в полученный раствор из шприца с тонкой иглой впрыскивали раствор силимарина в ацетоне, содержащий яичный лецитин. Массовое соотношение силимарин/лецитин составило (10:0,3). После охлаждения препарат лиофилизировали и хранили при +4°С.

Полученные экспериментальные данные сведены в таблицу 1

В примере 3 использовали в качестве флавонолигнана кверцетин, а в качестве фосфолипида фосфатидилхолин, в примере 4 - лептозидин и фосфолипиды из свиного мозга, в примере 5 - 5,6,7,4'-тетраоксифлавон и фосфолипиды из кожи, в примере 6 - рутин и фосфатидилсерин, в примере 7 - кверцитрин и фосфатидилхолин, в примере 8 - трицин и фосфадилэтаноламин, содержащий одинаковые или различные ацильные группы, пример 9 - виснагин и яичный лецитин.

Кроме того, в эксперименте в качестве флавонолигнанов использовали вещества фенольной природы, выбранные из группы: 5,6,7-триоксифлавон, g-схизандрин, апигенин, астрагалин, ауреузидин, виснадин, гесперидин, гиперозид, дезоксисхизандрин, дигидросамидин, дигидросилибин, изоликвиритигенин, изорамнитин, инокостерон, квинквелозид, келлин, кемпферол, ликвиритигенин, лютеолин, мирицетин, нарингенин, пиранокумарин, розавин, салидрозид, силидианин, силибинин, силикристин, скополетин, сульфуретин, схизандрин, схизандрол, тилирозид, умбеллиферон, 6-метокси-7,8-диоксикумарин, фурокумарин, экдистерон, энтеграстероны, 6,7-диоксикумарин и их производные.

В качестве фармацевтически приемлемого сахарида использовали сахарозу, маннозу, мальтозу, глюкозу, фруктозу, галактозу, манит, сорбит.

Пример 3. Специфическая гепатозащитная активность комплексного препарата, включающего силибинин и фосфатидилхолин, полученного заявленным способом.

Исследование специфической гепатозащитной активности препарата проводили на модели острого токсического гепатита у мышей. В экспериментах были использованы белые беспородные мыши в половозрелом возрасте. Водный раствор препарата вводили внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 100 мг/кг по силибинину. В качестве гепатотропного средства использовали парацетамол (модель лекарственного гепатита). Животным вводили препарат впервые за 1 ч до введения парацетамола, а затем еще 5 раз ежедневно. В качестве препарата сравнения использовали простую смесь силибинина и фосфатидилхолина в виде водной суспензии, которую вводили по соответствующей схеме в дозе 100 мг/кг по силибинину. Контрольным животным вводили только парацетамол. Через сутки после последнего введения препаратов животных декапитировали и проводили вскрытие и изучение биохимических показателей крови. Активность аланинаминотрансферазы (АЛАТ) и аспартатаминотрансферазы (АСАТ) определяли по методу Райтмана-Френкеля. Общий белок определяли с помощью биуретового реактива. Относительная масса печени у контрольных животных с гепатитом была увеличена по сравнению со здоровыми интактными животными на 45,6%; у экспериментальных животных этот показатель составлял 23,1% (30,2% при приеме простой смеси). Таким образом, степень выраженности воспалительных процессов у животных, получавших заявленный комплексный препарат, заметно снижалась. Исследование активности трансаминаз в сыворотке крови показало, что у контрольных животных с гепатитом уровни аланинаминотрансферазы (АЛАТ) и аспартатаминотрансферазы (АСАТ) были повышены по сравнению с интактными животными на 432,9% и 211,5%; у мышей, получавших заявляемый комплексный препарат, эти показатели снижались до 208,6% и 52,3% соответственно (267,3% и 76,0% при приеме простой смеси). Уровень общего белка в сыворотке крови больных гепатитом контрольных мышей снижался до 63,2% (100% -у интактных здоровых животных), в то время как применение заявляемого препарата увеличивало этот показатель до 89,7%. При применении простой смеси уровень общего белка составлял лишь 79,1% от такового для здоровых контрольных животных.

Таким образом, применение предлагаемого препарата положительно влияло на дезинтоксикационные функции печени животных с острым лекарственным гепатитом. При этом эффект от комплексного препарата превышал эффект от препарата сравнения (простой смеси силибинина и фосфатидилхолина).

Пример 4. Противоопухолевая активность комплексного препарата, включающего силибинин и фосфатидилсерин, полученного заявленным способом.

Исследование противоопухолевой активности препарата проводили на модели меланомы линии В 16 у мышей С57В 1/6. Для индукции солидных опухолей мышам вводили подкожно клеточную суспензию (2·10⁵ клеток в 0,1 мл физиологического раствора). Экспериментальным животным внутривенно вводили заявляемый комплексный препарат в физиологическом растворе. В качестве препарата сравнения использовали водную суспензию простой смеси, содержащей силибинин и фосфатидилсерин в тех же количествах, вводимую внутрижелудочно через зонд. Препараты вводили один раз в неделю, всего три приема, начиная с 3 дня после прививки опухоли. Каждая экспериментальная группа состояла из шести животных, контрольная - из десяти. Размер солидных опухолей измеряли один раз в 2-3 дня. Объем опухоли вычисляли по формуле где а - короткий, b - длинный диаметр опухоли. Относительный размер опухолей (ОРО) определяли по формуле: где Р_оп - средний размер опухолей в опытной группе, Р_к - средний размер опухолей у контрольных животных. Увеличение продолжительности жизни леченых животных по сравнению с контролем определяли по формуле: где Т - СПЖ леченых животных, дни, С - СПЖ контрольных животных, дни.

Результаты исследования приведены в таблице 2. Как видно из таблицы, противоопухолевый эффект от применения простой смеси был слабовыраженным. В то же время применение заявляемого комплексного препарата оказывало значительный ингибирующий эффект в отношении роста опухолей, а также приводило к существенному увеличению продолжительности жизни животных по сравнению с контролем.

Таким образом, применение комплекса, полученного заявляемым способом, значительно увеличивает их противоопухолевый эффект за счет повышенной биодоступности и применения в виде инъекционной формы.