Результат интеллектуальной деятельности: Набор для комплексной диагностики эндопаразитов животных методом копроскопии

Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии и может быть применено для диагностики внутренних паразитозов животных путем выявления яиц и личинок гельминтов, ооцист и цист паразитических простейших и определения их количества в фекалиях в производственных целях и научных исследованиях, а также для выявления яиц и имаго членистоногих и элементов, имитирующих внутренних паразитов.

В лабораторной практике диагностика паразитозов основана на выявлении яиц и личинок гельминтов, ооцист и цист простейших в фекалиях, легочной слизи и реже дуоденальном содержимом и является в настоящее время единственным средством подтверждения диагноза.

Наиболее широко для диагностики кишечных и легочных паразитозов на практике применяют метод нативного мазка (Като-Миура, 1962) и метод последовательных промываний, которые являются недостаточно информативными в отношении выявления яиц гельминтов, ооцист и цист простейших.

Используемые флотационные методы (Фюллеборна, 1920; Калантарян, 1938; Котельникова-Хренова, 1973) более эффективны по части выявления яиц гельминтов, ооцист и цист простейших, но подготовка проб фекалий для исследований занимает большее время. Следует отметить, что комбинированные методы диагностики паразитозов являются еще более эффективными с точки зрения выявления возбудителей, но и более громоздкими и затратными. Наиболее часто из комбинированных методов применяют метод Дарлинга (1911) для диагностики нематодозов и простейших, заметно реже Вишняускаса (1965) для диагностики фасциолеза. Для диагностики зоонозного гельминтоза описторхоза плотоядных животных предложены методы Горячева (1949) и Котельникова-Вареничева (1992), которые в условиях ветеринарных лабораторий используются заметно реже, поскольку являются более инвазивными (громоздкими и затратными) и их чаще применяют в научных лабораториях. Существующие одноразовые системы пробоподготовки с добавлением эфира (этилацетата) и формалина не обеспечивают желаемую эффективность по части выявления яиц гельминтов и ооцист паразитических простейших.

Определенный интерес для диагностики зоонозных паразитозов-трихинеллез, эхинококкоз, токсокароз, токсоплазмоз, представляют иммунологические (серологические) методы, которые достаточно чувствительны, но специфичность желает лучшего и их целесообразно использовать только как дополнительные к другим паразитологическим методам.

Все чаще за последние годы стали применять для диагностики паразитозоонозов молекулярно-биологические методы (ПЦР, ПЦР-РВ), которые обладают высокой чувствительностью и специфичностью с возможностью дифференциальной видовой диагностики. Однако при всем уважении достоинств этих методов диагностики они пока недоступны широким кругам, поскольку нужно специальное оборудование и их чаще используют в научных целях.

В задачу наших исследований входило разработать набор для комплексной диагностики эндопаразитозов животных методом копроскопии. Предлагаемый набор может применяться для диагностики описторхоза, клонорхоза, фасциолеза, дикроцелиоза, метагонимоза, нанофиетоза, дифиллоботриоза, гименолепидоза, тениозов, дипилидиоза, аскаридоза, токсокарозов, трихоцефалеза, эзофагостомоза, анкилостомидозов, стронгилоидоза, трихостронгилеза, кишечных протозоозов - токсоплазмоз, лямблиоз, криптоспоридиоз, изоспороз, эймериоз, балантидиоз в фекалиях и парагонимоза, легочного капилляриоза (томинксоз), пентостомоза, личиночных форм нематод в носолегочной мокроте.

Принцип использования набора (способа) основан на концентрировании яиц и личинок гельминтов, ооцист и цист паразитических простейших методом двойного центрифугирования - седиментация и флотация комбинированным насыщенным раствором сульфата магния и нитрата натрия.

Набор представляет собой набор для одноразового применения (рис.), который состоит из: двух пластиковых пробирок с герметичной резьбой под замок фильтр (1 и 2); замка-фильтра (3) с двусторонней резьбой для пробирок и двумя сетками разного диаметра для пробирки 1 диаметром 500 мкм (4) и пробирки 2 диаметром 150 мкм (5); ложки-мешалки (6); флакона с комбинированным раствором (7) сульфата магния и нитрата натрия (плотность 1,34); пластиковой петли (8) диаметром 7 мм; предметного (9) и двух покровных стекол (10), инструкции по применению и коробки размером 10×12 см с этикеткой описания набора.

Предлагаемый набор выполнен в двух вариантах: пробирки на 20 мл для крупных животных и пробирки на 10 мл для мелких животных.

Технология выполнения подготовки пробы следующая:

Пробы фекалий (или другой материал) массой 1-3 г, в зависимости от вида животного и размера пробирки, помещается в пробирку 1 (с тупым концом) вместе с ложкой-мешалкой, входящей в состав набора для лучшего перемешивания, заливается 8 мл водопроводной воды (16 мл для пробирки на 20 мл) и плотно закручивается замком-фильтром со стороны сетки диаметром 500 мкм для очистки от грубых частиц, далее присоединяется пробирка 2 (конусообразная) к фильтру с сеткой диаметром 150 мкм для фильтрации яиц и личинок гельминтов, ооцист и цист простейших, при этом пробирка 1 (с тупым концом) фиксируется «намертво» для предотвращения ее открытия после первого центрифугирования при этом обе пробирки закручиваются герметично для предотвращения проливания исследуемого материала. Затем пробирка тщательно встряхивается до получения равномерно окрашенной взвеси. В таком виде образец может храниться до 24 часов при температуре 4-8 C°.

Далее пробирка переворачивается и помещается в центрифугу конусообразным концом вниз, центрифугируется при скорости 2000 об/мин в течение 3 минут. После чего, держа пробирку строго вертикально, аккуратно отсоединяется пробирка 1 (с тупым концом) вместе с замком-фильтром, который фиксируется при первом закручивании «намертво», жидкость из пробирки 2 аккуратно сливается, не взбалтывая осадок (рис.), к осадку добавляется 8 мл комбинированного раствора сульфата магния и нитрата натрия (16 мл для пробирки на 20 мл), слегка встряхивается до растворения осадка, далее центрифугируется при скорости 2000 об./мин в течение 3 минут. После этого с помощью петли, входящей в набор, снимаются 2 капли поверхностной пленки раствора и помещаются на предметное стекло, накрываются покровным стеклом и микроскопируют при увеличении 10×10 и 10×40. При некоторых инвазиях, таких как фасциолез, дикроцелиоз, описторхоз, балантидиоз исследуют нижнюю порцию осадка конусного конца пробирки.

Предлагаемое изобретение отличается тем, что рабочие части набора для диагностики эндопаразитозов животных обеспечивают оптимальный объем пробы фекалий для паразитологического анализа от разных животных (3 г от крупных животных - лошади, коровы, олени, овцы, свиньи и 1 г от мелких - собаки, кошки, птица и др.), благодаря чему достигается стандартизация исследуемого материала, а входящий в состав набора комбинированный насыщенный раствор сульфата магния и нитрата натрия позволяет проводить комплексное исследование проб фекалий методом копроскопии путем двойного центрифугирования, чередуя седиментацию и флотацию, что способствует повышению достоверности анализа и выявляемости яиц, личинок, ооцист и цист паразитов.

За счет того, что рабочие части набора для комплексной диагностики эндопаразитозов животных позволяют отбирать пробы фекалий необходимого объема от разных животных, возрастает эффективность выявления яиц и личинок гельминтов, ооцист и цист простейших в исследуемых пробах фекалий и точность определения их количества, что чрезвычайно важно для ветеринарной службы для определения стратегии лечения животных и их оздоровления от паразитов. Это подтверждено результатами проведенных в Московской области исследований на разных видах животных и при разной интенсивности инвазии.

В числе других преимуществ использования набора для диагностики эндопаразитов животных следует отметить уменьшение времени анализа, лучшую визуализацию исследуемых объектов, снижение риска заражения персонала, благодаря отсутствию контакта с пробой, уменьшение количества отходов, образующихся в результате проведения анализа; удобство отбора, транспортировки и хранения проб.

Источники информации

1. Акбаев М.Ш., Василевич Ф.И., Водянов А.А. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. - М., 2008. - 776 с.

2. Котельников Г.А. Диагностика гельминтозов животных. - М.: Колос, 1974. - 240 с.

3. Сафиуллин Р.Т. Копроскопические методы диагностики гельминтозов свиней // Ветеринария. - М., 2001. - №5. - С. 29-32.

4. Сафиуллин Р.Т. Стандарт отрасли. Методы лабораторной диагностики нематодозов свиней // Труды Всеросс. ин-та гельминтол., М., 2001 - Т. 37. - С. 218-237.

5. Сафиуллин Р.Т., Мусатов М.А. Паразитарные болезни пушных зверей, средства и методы их лечения. - М., 2009. - 152 с.