Способ нормализации активности супероксиддисмутазы эритроцитов у новорожденных телят с дефицитом железа

Изобретение относится к биологии и ветеринарии.

Аналогов заявляемого способа не существует.

В литературе имеются рекомендации по назначению ферроглюкина для коррекции железодефицитной анемии (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. Под ред. В.М. Данилевского. М.: «Агропромиздат», 1991. - 576 с.). В качестве эффективных стимуляторов жизнедеятельности растущего организма в современной ветеринарии применяется крезацин -производное ароксиалкилкарбоновых кислот. Он представляет собой белый кристаллический порошок, хорошо растворимый в воде, со слабым специфическим запахом, сладковато-горьковатого вкуса. Крезацин проявляет эффективное стимулирующее действие на живые организмы, повышает выживаемость животных в неблагоприятных и экстремальных условиях, стимулируя или нормализуя жизненные процессы (Байматов В.Н., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы. Ветеринария, 2006, №11, с. 49-51). В литературе имеются рекомендации по назначению гамавита для оптимизации роста и улучшения обменных процессов (Деева А.В., Салахова З.А., Лобова Т.П. и др. Повышение сохранности и продуктивности поросят при использовании фоспренила и гамавита // Ветеринария. - 2006. - №4. - С. 13-15.).

Однако, никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из ферроглюкина, крезацина и гамавита, не применялся у новорожденных телят с дефицитом железа с целью нормализации активности суперрксиддисмутазы (СОД) эритроцитов.

Целью изобретения является устранение нарушений активности СОД эритроцитов у новорожденных телят с дефицитом железа.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для коррекции активности СОД эритроцитов новорожденным телятам с дефицитом железа назначается ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, включив его в схему выпаивания на 4 суток и гамавит внутримышечно один раз в сутки утром 0,05 мл/кг на 4 суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Способ позволяет нормализовать активность СОД эритроцитов у новорожденных телят с дефицитом железа на следующие сутки после завершения коррекции, переводя ее на уровень соответствующий таковому для здоровых новорожденных телят. У пролеченных таким образом животных в последующем отмечается стабильно нормальное состояние активности СОД эритроцитов, что позволяет у новорожденных телят с дефицитом железа понижать агрегацию и цитоархитектонические изменения эритроцитов, тем самым способствуя стойкой оптимизации микроциркуляции и минимизации риска тромботических осложнений, увеличивая привесы, ускоряя рост и развитие животных и снижая падеж.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Кровь берут из вены в количестве 5,0 мл через толстую иглу самотеком в пробирку. В качестве консерванта используют 5% раствор трилона-Б из расчета 0,5 мл консерванта на 5,0 мл цельной крови. Для выделения эритроцитов взятую кровь из вены центрифугируют 10 мин. при 3000 об./мин. Из пробирки удаляется вся плазма и слой лейкоцитов и тромбоцитов. Эритроциты ресуспепдируются стандартным фосфатным буфером в соотношении 1:4 с последующим центрифугированием в течение 10 мин. при 3000 об./мин., что позволяет отмыть их от остатков плазмы при удалении надосадочной жидкости. Затем супернатант удаляют, а к осадку вновь добавляют физиологический раствор на трилоне Б в соотношении 1:1. Весь процесс выделения и отмывания эритроцитов проводят при комнатной температуре. В каждом конкретном случае концентрация эритроцитов подсчитывается с помощью камеры Горяинова.

Принцип определения активности СОД основан на восстановлении нитротетразолия супероксидными радикалами, которые образуются при реакции между феназинметасульфатом и восстановленной формой никотинамиддинуклеотида (NAD⋅H). Образование нитроформазана, продукта восстановления нитротетразолия, блокируется наличием в пробе СОД. Это позволяет по количеству нитроформазана оценить активность СОД. В данном анализе используются следующие реагенты:

1) 0,15 М фосфатный буфер (рН 7,8) (4,48 г Na₂HPO₄, 0,25 г KН₂РO₄ растворенный в 500 мл дистиллированной воды).

2) инкубационная смесь 37 мг ЭДТА-Nа₂, 330 мг нитротетразолия голубого, 55 мг феназинметасульфата смешивали с 300 мл фосфатного буфера, оставляли стоять на ночь и утром фильтровали.

3) раствор NAD⋅Н (152 мг NAD-H растворяли в 10 мл трис-ЭДТА-буфера).

4) трис-ЭДТА-буфер, рН 8,0 (37 мг ЭДТА-Na, 24 мг трис растворяли в 100 мл дистиллированной воды).

Схема определения СОД в суспензии эритроцитов приведена в таблице.

Смешивание проводят при комнатной температуре, измеряя экстинкцию холостой и исследуемой проб при 540 нм на спектрофотометре. Экстинкция холостой пробы составляет около 0,680. Расчет производят по формуле:

где Е _{х. пр} и Е _{исс. пр} - экстинкция соответственно холостой и исследуемой проб. С помощью калибровочной кривой, построенной для стандартных растворов СОД (схема), оценивают активность СОД в пробе на основании рассчитанного процента разрушения перекиси водорода. Активность СОД относят к концентрации эритроцитов (в МЕ/10¹² эритроцитов) в исследуемой взвеси эритроцитов.

На схеме по оси абсцисс отложена активность СОД в МЕ/10¹² эритроцитов, по оси ординат - блокирование восстановления нитротетразолия в %. Нормативные значения активности СОД эритроцитов новорожденных телят составляют 1550,0-1720,0 МЕ/10¹² эритроцитов.

При дефиците железа у новорожденных телят весьма часто происходит понижение активности СОД эритроцитов. При установлении этого новорожденному теленку с дефицитом железа необходимо назначать лечение ферроглюкином по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 4 суток, крезацином 5 мг/кг в сутки, начиная применять его одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, включив его в схему выпаивания на 4 суток и гамавитом внутримышечно один раз в сутки утром 0,05 мл/кг на 4 суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Заявляемый способ был апробирован на более чем 120 новорожденных телятах с дефицитом железа и явлениями анемии с достижением через 4 суток проведенного лечения нормализации у них активности СОД эритроцитов.

Пример 1. У новорожденного теленка №8 с дефицитом железа и анемией было выявлено нарушение эритропоэза за счет снижения уровня содержания железа в его организме (сывороточное железо 12,2 мкмоль/л, сидероциты 1,3%), при количестве гемоглобина у него 78,0 г/л, эритроцитов - 3,5×10¹²/л.

При обследовании у теленка было выявлено ослабление в эритроцитах активности СОД до 1250,0 МЕ/10¹² эритроцитов. Теленку был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, включив его в схему выпаивания на 4 суток и гамавит внутримышечно один раз в сутки утром 0,05 мл/кг на 4 суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Теленок находился под постоянным наблюдением с ежедневным контролем активности СОД эритроцитов.

На следующие сутки после окончания лечения у теленка достигнута нормализация в его крови сывороточного железа 22,5 мкмоль/л, сидероцитов 8,3%, количества гемоглобина 120,0 г/л, эритроцитов - 5,1×10¹²/л при достижении нормализации активности СОД эритроцитов (1620,0 МЕ/10¹² эритроцитов), что обеспечивало ослабление риска активации агрегационных свойств эритроцитов и развития у животных тромбозов в будущем.

Пример 2. У новорожденного теленка №14 с дефицитом железа и анемией было выявлено нарушение эритропоэза за счет снижения уровня содержания железа в его организме (сывороточное железо 12,5 мкмоль/л, сидероциты 1,4%), при количестве гемоглобина у него 84,0 г/л, эритроцитов - 3,5×10¹²/л.

При обследовании у теленка было выявлено ослабление в эритроцитах активности СОД до 1280,0 МЕ/10¹² эритроцитов. Теленку был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, включив его в схему выпаивания на 4 суток и гамавит внутримышечно один раз в сутки утром 0,05 мл/кг на 4 суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Теленок находился под постоянным наблюдением с ежедневным контролем активности СОД эритроцитов.

На следующие сутки после окончания лечения у теленка достигнута нормализация в его крови сывороточного железа 23,9 мкмоль/л, сидероцитов 8,5%, количества гемоглобина 123,0 г/л, эритроцитов - 5,1×10¹²/л при нормализации активности СОД эритроцитов (1700,0 МЕ/10¹² эритроцитов), что обеспечивало ослабление риска активации агрегационных свойств эритроцитов и развития у животных тромбозов в будущем.

Использование предлагаемого способа коррекции активности СОД эритроцитов у новорожденных телят с дефицитом железа в биологии и ветеринарии поможет избежать многих сосудистых осложнений и оптимизировать микроциркуляцию и трофику тканей у животных, оздоровить поголовье, снизить падеж, ускорить рост и развитие телят, увеличить их ежесуточные привесы.