Способ нормализации активности каталазы нейтрофилов у новорожденных телят с дефицитом железа

Изобретение относится к биологии и ветеринарии.

Аналогов заявляемого способа не существует.

В литературе имеются рекомендации по назначению ферроглюкина для коррекции железодефицитной анемии (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. Под ред. В.М. Данилевского. М.: Агропромиздат, 1991. - 576 с.). В качестве эффективных стимуляторов жизнедеятельности растущего организма в современной ветеринарии применяется крезацин - производное ароксиалкилкарбоновых кислот. Он представляет собой белый кристаллический порошок, хорошо растворимый в воде, со слабым специфическим запахом, сладковато-горьковатого вкуса. Крезацин проявляет эффективное стимулирующее действие на живые организмы, повышает выживаемость животных в неблагоприятных и экстремальных условиях, стимулируя или нормализуя жизненные процессы (Байматов В.Н., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы. Ветеринария, 2006, №11, с. 49-51). В литературе имеются рекомендации по назначению гамавита для оптимизации роста и улучшения обменных процессов (Деева А.В., Салахова З.А., Лобова Т.П. и др. Повышение сохранности и продуктивности поросят при использовании фоспренила и гамавита // Ветеринария. - 2006. - №4. - С. 13-15).

Однако никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из ферроглюкина, крезацина и гамавита, не применялся у новорожденных телят с дефицитом железа с целью нормализации активности каталазы в нейтрофилах.

Целью изобретения является устранение нарушений активности каталазы нейтрофилов у новорожденных телят с дефицитом железа.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для коррекции активности каталазы нейтрофилов новорожденным телятам с дефицитом железа назначается ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, включив его в схему выпаивания на 4 суток, и гамавит внутримышечно один раз в сутки утром 0,05 мл/кг на 4 суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Способ позволяет нормализовать активность каталазы нейтрофилов у новорожденных телят с дефицитом железа на следующие сутки после завершения коррекции, переводя ее на уровень, соответствующий таковому для здоровых новорожденных телят. У пролеченных таким образом животных в последующем отмечается стабильно нормальное состояние активности каталазы нейтрофилов, что позволяет у новорожденных телят с дефицитом железа понижать агрегационную активность нейтрофилов, тем самым способствуя стойкой оптимизации микроциркуляции и минимизации риска тромботических осложнений, увеличивая привесы, ускоряя рост и развитие животных и снижая падеж.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом. После взятия крови ведется выделение из нее нейтрофилов. Суть выделения заключается в том, что 2 мл цельной гепаринизированной (10-15 Ед/мл гепарина) крови смешивается для снижения ее вязкости с 3 мл стерильного физиологического раствора. Смесь наслаивается на двойной градиент плотности стерильных растворов фиколла-верографина. Плотность верхнего слоя градиента составляет 1,075-1,077, а нижнего - 1,093-1,095. Объем каждого градиента равняется 2 мл. Через 40 минут центрифугирования при 1500 об/мин на границе между градиентами появляется кольцо клеток, состоящее из гранулоцитов на 98-100%. Эритроциты при этом осаждаются на дно пробирки. Кольцо нейтрофильных гранулоцитов аккуратно собирают, переносят в стерильные центрифужные пробирки, трижды отмывают от градиента стерильным физиологическим раствором хлорида натрия центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 минут. Полученная клеточная суспензия используется в дальнейшем для исследования активности каталазы нейтрофилов. Концентрация нейтрофилов в суспензии подсчитывается с помощью камеры Горяинова.

Последующая оценка активности каталазы в отмытых и ресуспендированных нейтрофилах осуществляется следующим способом. Принцип метода состоит в том, что каталаза разрушает субстрат Н₂О₂, а оставшуюся неразрушенной часть перекиси водорода измеряют с помощью молибдата натрия. Как известно для молибдена характерно образование при взаимодействии с перекисью водорода перекисных соединений состава Na₂MoO₆, которые имеют желтую окраску. Интенсивность окраски образующихся перекисных соединений молибдена зависит от количества перекиси водорода в растворе, т.е. от активности каталазы в пробе.

Реагенты.

(1) 0,3% водный раствор перекиси водорода (1 мл концентрированного раствора перекиси водорода доводят дистиллированной водой до 100 мл).

(2) 4% водный раствор молибдата натрия.

В приведенной ниже таблице содержится описание методики.

Раствор молибдата добавляют к каждой пробе по отдельности и сразу же после перемешивания реакционной смеси измеряют экстинкцию при 410 нм против дистиллированной воды. Экстинкция холостой пробы около 0,350. Чем больше в пробе каталазы, тем меньше перекиси водорода остается неразрушенной и тем меньше образуется перекисей молибдата. Результат оценивают по степени разрушения перекиси водорода каталазой или степени блокирования образования конечных продуктов перекисей молибдата и выражают в процентах. Расчет проводят по формуле:

,

где Е_{х. пр} и Е_{исс. пр} - экстинкция соответственно холостой и исследуемой проб.

С помощью калибровочной кривой, построенной для стандартных растворов каталазы (схема), оценивают активность каталазы в пробе на основании рассчитанного процента разрушения перекиси водорода. Активность каталазы относят к концентрации нейтрофилов (в МЕ/10⁹ нейтрофилов) в исследуемой взвеси нейтрофилов.

На схеме по оси абсцисс схемы отложена активность каталазы в МЕ/10⁹ нейтрофилов, по оси ординат - блокирование реакции в %. Нормативные значения активности каталазы нейтрофилов новорожденных телят составляют 9000,0-9500,0 МЕ/10⁹ нейтрофилов.

При дефиците железа у новорожденных телят весьма часто происходит понижение активности каталазы нейтрофилов. При установлении этого новорожденному теленку с дефицитом железа необходимо назначать лечение ферроглюкином по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 4 суток, крезацином 5 мг/кг в сутки, начиная применять его одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, включив его в схему выпаивания на 4 суток, и гамавитом внутримышечно один раз в сутки утром 0,05 мл/кг на 4 суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Заявляемый способ был апробирован на более чем 120 новорожденных телятах с дефицитом железа и явлениями анемии с достижением через 4 суток проведенного лечения нормализации у них активности каталазы нейтрофилов.

Пример 1. У новорожденного теленка №7 с дефицитом железа и анемией было выявлено нарушение эритропоэза за счет снижения уровня содержания железа в его организме (сывороточное железо 12,4 мкмоль/л, сидероциты 1,4%), при количестве гемоглобина у него 79,0 г/л, эритроцитов - 3,6×10¹²/л.

При обследовании у теленка было выявлено ослабление в нейтрофилах активности каталазы до 5200,0 МЕ/10⁹ нейтрофилов. Теленку был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, включив его в схему выпаивания на 4 суток, и гамавит внутримышечно один раз в сутки утром 0,05 мл/кг на 4 суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Теленок находился под постоянным наблюдением с ежедневным контролем активности каталазы нейтрофилов.

На следующие сутки после окончания лечения у теленка достигнута нормализация в его крови сывороточного железа 22,4 мкмоль/л, сидероцитов 8,2%, количества гемоглобина 120,0 г/л, эритроцитов - 5,0×10¹²/л при достижении нормализации активности каталазы нейтрофилов (9400,0 МЕ/10⁹ нейтрофилов), что обеспечивало ослабление риска активации агрегационных свойств нейтрофилов и развития у животных тромбозов в будущем.

Пример 2. У новорожденного теленка №12 с дефицитом железа и анемией было выявлено нарушение эритропоэза за счет снижения уровня содержания железа в его организме (сывороточное железо 12,6 мкмоль/л, сидероциты 1,5%), при количестве гемоглобина у него 81,0 г/л, эритроцитов - 3,5×10¹²/л.

При обследовании у теленка было выявлено ослабление в нейтрофилах активности каталазы до 4900,0 МЕ/10⁹ нейтрофилов. Теленку был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 4 суток, крезацин 5 мг/кг в сутки, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина, включив его в схему выпаивания на 4 суток, и гамавит внутримышечно один раз в сутки утром 0,05 мл/кг на 4 суток, начиная одновременно с ферроглюкином и крезацином.

Теленок находился под постоянным наблюдением с ежедневным контролем активности каталазы нейтрофилов.

На следующие сутки после окончания лечения у теленка достигнута нормализация уровня в его крови сывороточного железа 23,6 мкмоль/л, сидероцитов 8,3%, количества гемоглобина 122,0 г/л, эритроцитов - 5,1×10¹²/л при нормализации активности каталазы нейтрофилов (9200,0 МЕ/10⁹ нейтрофилов), что обеспечивало ослабление риска активации агрегационных свойств нейтрофилов и развития у животных тромбозов в будущем.

Использование предлагаемого способа коррекции активности каталазы нейтрофилов у новорожденных телят с дефицитом железа в биологии и ветеринарии поможет избежать многих сосудистых осложнений и оптимизировать микроциркуляцию и трофику тканей у животных, оздоровить поголовье, снизить падеж, ускорить рост и развитие телят, увеличить их ежесуточные привесы.