СПОСОБ АНАЛИЗА И/ИЛИ ОБРАБОТКИ ОПЛОДОТВОРЕННОГО ЯЙЦА

Изобретение относится к способу анализа и/или обработки оплодотворенного яйца.

При изучении патологических процессов различных заболеваний часто требуется проведение медицинских экспериментов с манипуляциями на курином эмбрионе. При этом возникает необходимость использования открытого доступа к эмбриону. Отверстие доступа может достигать диаметра 1,5×2,5 см. Для получения положительного результата при завершении эмбриогенеза и вылуплении птенца, необходимо сохранение гомеостаза яйца, как элемент - воссоздание целостности скорлупы.

Известен способ анализа и/или обработки оплодотворенного яйца (патент РФ на изобретение №2543263, МПК А01К 45/00, опубл. 27.02.2015), включающий в себя этап пункции и/или инъекции вещества в белковый мешок яйца, для чего в скорлупе яйца прокалывают отверстие вблизи острого конца яйца и вводят в указанное отверстие полую иглу. Дистальный конец полой иглы вводят в белковый мешок без прохода иглы через мешки с эмбриональными жидкостями или жизненно важные органы зародыша и выполняют пункцию вещества белкового мешка и/или впрыскивают в белковый мешок обрабатывающее вещество.

В данном способе выполняют маленькое отверстие, не задевая мешки с эмбриональными жидкостями или жизненно важные органы зародыша. Поэтому для сохранения гомеостаза яйца не возникает необходимости воссоздания целостности скорлупы. Для экспериментов, требующих больших размеров отверстия доступа данный способ неприменим.

Наиболее близким к предлагаемому является способ проведения эксперимента на курином эмбрионе (https://studopedia.ru/2_122933_metodi-eksperimentalnogo-zarazheniya-kurinih-embrionov.html) путем заражения эмбриона.

Для заражения эмбриона этим методом его помещают в штатив горизонтально зародышем вверх.

В скорлупе делают два отверстия: одно небольшое над центром воздушной камеры, а другое диаметром 0,2-0,5 см сбоку, со стороны зародыша. Через боковое отверстие на поверхность хорионаллантоисной оболочки наносят инфекционную жидкость и отверстие закрывают кусочком лейкопластыря.

При таком способе возникает проблема вынужденного положения яйца - так как лейкопластырь промокает и возникает риск бактериальной обсемененности закрывающего материала, так как пропитывание происходит белком, который является хорошим субстратом для роста бактериальной флоры. Так же «вынужденное» положение яйца - преимущественно в вертикальном положении - отрицательно влияет на развитие зародыша -формирование уродств. Потеря хориоаллантоисной жидкости вследствие пропитывания лейкопластыря, оказывает отрицательное воздействие на сохранение гомеостаза яйца. Невозможность стерилизации лейкопластыря значительно повышает риск присоединения бактериальной флоры через «окно» доступа. Вследствие наличия клейкого содержимого на поверхности лейкопластыря при контакте с белковой частью яйца, возникает риск его отклеивания.

Задача (технический результат) предлагаемого изобретения заключается в создании способа анализа и/или обработки оплодотворенного яйца, свободного от вышеуказанных недостатков.

Поставленная задача решается тем, что способ обработки и/или анализа оплодотворенного яйца включает размещение яйца горизонтально зародышем вверх, выполнение отверстия в скорлупе сбоку со стороны зародыша, проведение анализа и/или обработки зародыша и закрытие отверстия в скорлупе. Согласно предлагаемому изобретению предварительно по изобразительной информации с использованием методов компьютерной графики формируют трехмерную модель фрагмента скорлупы на 8-15% больше размера будущего отверстия. По трехмерной модели изготавливают форму, в которой из двухкомпонентного силикона для литьевых форм отливают крышку для закрытия будущего отверстия. После выполнения отверстия в скорлупе и проведения анализа и/или обработки зародыша закрывают отверстие в скорлупе путем наложения на отверстие силиконовой крышки и ее разглаживания от отверстия к краям.

В качестве двухкомпонентного силикона может быть использовано высокомолекулярное кремнийорганическое соединение с химической формулой [R₂SiO]_n, где R=органическая этильная группа СН₂-СН₃.

Для удобства проведения манипуляций по изобразительной информации с использованием методов компьютерной графики целесообразно дополнительно формировать трехмерную модель фрагмента скорлупы с противоположной от будущего отверстия стороны. По трехмерной модели в этом случае изготавливают форму, в которой отливают подложку для яйца из полилактида, яйцо устанавливают на подложке, а затем выполняют отверстие в скорлупе сбоку со стороны зародыша, проводят обработку и/или анализ зародыша и закрывают отверстие в скорлупе.

Предлагаемая совокупность признаков заявляемого способа обеспечивает сохранение гомеостаза, позволяет достичь физиологического завершения эмбриогенеза птенца. Применяемый способ позволяет осуществлять длительное наблюдение. Все это полностью исключает риск бактериальной обсемененности при закрытии дефекта доступа (возможность стерилизации силиконовой крышки воздушным методом при 180°С, острым паром в автоклаве при 120-130°С, а так же возможность длительного кипячения в воде). Сохраняется возможность ротирования яйца, исключается потеря хориоаллантоисной жидкости.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. По изобразительной информации с использованием методов компьютерной графики формируют трехмерную модель фрагмента скорлупы на 8-15% больше размера будущего отверстия. По трехмерной модели изготавливают форму, в которой из двухкомпонентного силикона для литьевых форм отливают крышку 1 для закрытия будущего отверстия. В качестве двухкомпонентного силикона может быть использовано высокомолекулярное кремнийорганическое соединение с химической формулой [R₂SiO]_n, где R=органическая этильная группа СН₂-СН₃.

Органическая этильная группа (СН₂-СН₃) в составе данного соединения - двухкомпонентный силикон - обладает нетоксичностью по отношению к биологическим средам с сохранением свойств силикона (инертность), тем самым достигается длительное наблюдение за куриным эмбрионом, без нарушения физиологических свойств хориоаллантоисной жидкости.

Размещают яйцо 2 горизонтально зародышем вверх. Выполняют отверстие в скорлупе сбоку со стороны зародыша, проводят анализ и/или обработку зародыша и закрывают отверстие в скорлупе путем наложения на отверстие силиконовой крышки 1.

По изобразительной информации с использованием методов компьютерной графики дополнительно формируют трехмерную модель фрагмента скорлупы с противоположной от будущего отверстия стороны. По трехмерной модели изготавливают форму, в которой отливают из полилактида подложку 3 для яйца 2. На такой подложке устанавливают яйцо 2, а затем выполняют отверстие в скорлупе сбоку со стороны зародыша, проводят обработку и/или анализ зародыша и закрывают отверстие в скорлупе силиконовой крышкой 1 (см. фиг. 1).

Пример конкретного выполнения

Для реализации поставленной задачи, при выполнении эксперимента, фертильное куриное яйцо обрабатываем 70% спиртом, укладываем на подложку горизонтально, делаем прокол стерильной иглой с вертикальной стороны, далее стерильными хирургическими ножницами делаем отверстие в размере 1,5×1,5 см, отрезанную скорлупу убираем. Также удаляем подскорлуповую оболочку. Выполняем манипуляции на курином эмбрионе. После выполнения манипуляций накладывают стерильную силиконовую крышку на дефект в скорлупе и аккуратно разглаживают от отверстия к краям. Оставляют ну сутки силиконовой крышкой вверх, после - можно ротировать яйцо в соответствии с физиологией развития куриного эмбриона.