Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ УСКОРЕНИЯ ЗАЖИВЛЕНИЯ КОЖНЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной медицине и может быть использовано для лечения ран (повреждений) кожи различной этиологии, в том числе, возникших после ожогов.

Актуальность заявляемого способа определяется тем, что одним из современных направлений в поиске ускоренной регенерации кожи служит использование сплавов металлов. Взаимодействие между материалом и биологической средой может происходить по двум направлениям. Одно из них - это воздействие материала на биологические ткани, второе - воздействие биологических тканей на материал. Биологически совместимым называется материал, который не обладает отрицательным действием на живые ткани и не деградирует от их обратного действия. В этом плане приоритетными являются материалы, вызывающие минимальную и щадящую реакцию окружающих с ними тканей [Унижаева А.Ю., Мартынчик С.А. Медико-экономическая оценка затрат и качества стационарной помощи при ожоговой травме // Электронный научный журнал "Социальные аспекты здоровья населения". 2013 .URL: http://vestnik.mednet.ru/content/view/447/30/lan g,ru/ (дата обращения: 24.01.2013)].

Известен способ лечения кожной раны [Патент РФ №2315608, А61Р 17/02 А61K 35/74, опубл. 27.01.2008] в котором используют водный раствор рибомунила в дозе 0,001±0,0005 мг. Препарат вводят внутрикожно не менее чем в 4-5 точек вокруг кожной раны ежедневно в течение трех-пяти дней. Способ обеспечивает ускорение темпов заживления кожной раны и формирование более нежного соединительнотканного рубца.

Известен способ лечения длительно незаживающих гнойных кожных ран и язв [Патент РФ №2558518, А61Р 17/02 опубл. 10.08.2015] лечение длительно незаживающих гнойных кожных ран и язв осуществляют путем наложения на их поверхность цинковой пасты и порошка фибрина, полученного из сгустка крови домашней свиньи, при этом сухой порошок фибрина перемешивают с цинковой пастой в соотношении 1:5 за 25-30 мин до наложения.

Известны фармацевтические композиции и способы ускорения заживления ран [Патент РФ №2358753, А61K 38/00 опубл. 20.06.2009] в которых заявлено применение средства, выбранного из адипокина или модулятора адипоцитов для приготовления фармацевтической композиции, адаптированной для местного применения, для индукции или ускорения процесса заживления кожной раны.

Техническая проблема, на решение которой направлено заявляемое изобретение, - стимулирование регенерации клеток кожи, ускорение заживления кожных повреждений за счет повышения пролиферативной активности клеток кожи под воздействием супернатанта сплава никелида титана.

Техническая проблема решается за счет того, что способ ускорения заживления повреждений кожи характеризуется тем, что на поврежденную поверхность кожи воздействовали супернатантом никелида титана путем местного нанесения 1 раз в день в течение 28 дней.

Способ ускорения заживления кожных повреждений осуществляется следующим образом.

В эксперименте были использованы 140 сирийских хомяков-самцов (Syrian golden hamster) 5-6-месячного возраста с массой тела 90-120 г. Эксперименты на животных выполнялись с соблюдением «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (приказ Министерства Высшего и среднего специального образования СССР от 13 ноября 1984 г. №742). Животные разделены на 2 группы: 1 группа из 70 животных - контрольная, в которой изучалась спонтанная регенерация повреждения без лечения, 2 группа из 70 животных - опытная. В условиях севоранового наркоза, на спинке выбривали шерсть бытовым станком. С целью улучшения растяжимости кожного покрова и более точного нанесения ожоговой раны, подкожно вводили 1 мл физиологического раствора NaCl. Для нанесения ожога использовали электропаяльник «Союз ПС2005-100», нагретый до 230°C. Воздействие на кожу оказывалось в течение 3 секунд, что вызывало ожог II-IIIа степеней. Ожоговые поверхности в обеих группах имели эллипсовидную форму. Рану обрабатывали супернатантом никелида-титана, данный раствор готовился из расчета 10,0 г порошка никелида-титана, разработанного Томским НИИ медицинских материалов и сплавов на 1 л стерильной воды. Дисперсную систему получали методом ультразвукового диспергирования с последующей выдержкой до стабилизации турбидности. Каждые сутки осуществлялось наблюдение за раной. Обработка, измерение площади раневой поверхности проводились на 0, 1, 3, 7, 14, 21 и 28 сут от начала эксперимента, затем осуществлялся расчет площади раны до полного заживления.

Оценивался рост, масса животных. Расчет площади поверхности тела производился при помощи стандартной медицинской формулы вычисления площади поверхности тела:

где А - рост животного, В - масса животного.

Для получения объективных показателей заживления ран вторичным натяжением использовали широко распространенный в клинической практике планиметрический метод Л.Н. Поповой, основанный на регистрации скорости уменьшения раневой поверхности во времени. На рану накладывают пластинку простерилизованного в автоклаве целлофана и на ней чернилами обрисовывают контур раны. Затем целлофан с нанесенным контуром укладывали на миллиметровую бумагу и путем подсчета квадратных миллиметров внутри контура определяли площадь раны. Для измерения площади поверхностного дефекта кожи использовали формулу, предложенную Ф.Я. Божиновой:

где: n - количество полных ячеек размером 2×2 мм²; k - количество неполных ячеек размером 2×2 мм²; С - площадь одной ячейки размером 2×2 мм².

Долю уменьшения площади раны за сутки определяли по формуле (%):

где S - площадь раны при предыдущем измерении; Sn - площадь раны при данном измерении; t - число сут между первым и последующим измерениями.

Скорость заживления раны определяли по формуле М.Г. Маркаряна и Г.Ц. Саркисяна:

где: З - исходная площадь раны; З1 - площадь ее к моменту измерения; n - количество суток.

Для гистологического исследования производили забор кожного лоскута с подлежащей тканью в месте ожога, фиксировали материал в 10% растворе нейтрального формалина, заливка осуществлялась в парафин. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином, по методу Ван-Гизон, Маллори, по Вейгерту на эластин. Пролиферативную активность определяли про помощи ИГХ-исследования с антителами к белку Ki67. Для морфометрии использовали микроскоп Zeiss Axio Image А1 и программу "ВидеоТест-Морфология - 5.1". Статистическую обработку полученных данных производили с использованием программы Statistica 6.0, достоверность результатов оценивали с помощью критерия Стьюдента. Результаты исследования. При визуальном осмотре выявлено, что участок повреждения у животных опытной и контрольной групп в виде коагуляционного некроза формируется в течение первых 5 минут после воздействия высокой температуры и соответствует ожогу II-IIIа степеней (Фиг. 1).

У животных контрольной группы процесс регенерации в которой, проходил спонтанно отмечена следующая динамика раны: плотный струп сохранялся с 3-х по 7-е сутки. При гистологическом исследовании коагуляционный некроз оставался в полном объеме, эпителиальный слой кожи не восстанавливался даже с краев (Фиг. 2)

Очищение раны происходило на 14-21-е сут, полное очищение раны с началом восстановления волос развивалось на 32-35-е сут (Фиг. 3). На всем протяжении восстановительного периода в 30% случаев сохранялись экссудативные воспалительные изменения.

У животных опытной группы при обработке ожоговой поверхности супернатантом никелида-титана к 3-м сутки в зоне поражения образовался плотный струп. При микроскопическом исследовании отмечалось выраженное экссудативное воспаление, характеризующееся полнокровием сосудов, стазом эритроцитов в сосудах капиллярного типа, отеком, воспалительной инфильтрацией преимущественно лимфоцитарного характера (Фиг. 4).

В краях раны наблюдалось усиление регенераторных процессов в многослойном плоском ороговевающем эпителии, проявляющихся увеличением толщины эпителиального пласта (Фиг. 5).

На 7-е сутки отмечалось отставание струпа по краям раневой поверхности с появлением участков грануляций розового цвета. При микроскопическом исследовании выявлено нарастание пролиферирующего эпителия из краев раны на раневую поверхность. Регенерирующий эпителий в виде «языка» подрастал под струп и стелился по обнажающейся раневой поверхности, образованной грануляционной тканью. Рост эпителия происходит синхронно с развитием соединительнотканной основы эпителиального пласта (Фиг. 6).

На 14 сутки происходило очищение раны. При микроскопическом исследовании определялось закрытие раневой поверхности тонким слоем эпидермиса до трех слоев. В дерме молодая грануляционная ткань занимает всю толщу, воспалительная инфильтрация сохраняется. В составе воспалительного инфильтрата выявлялись: лимфоциты, макрофаги, фибробласты, единичные фиброциты (Фиг. 7).

Завершение процесса регенерации кожного покрова развивалось на 21-е сутки эксперимента и характеризовалось полным очищением раны, отсутствием гнойного отделяемого, появлением нежно-розовой кожи, участков роста волос (Фиг. 8). К 28 суткам эксперимента отмечалось полное восстановление волосяного покрова на всей поверхности поражения.

Высокая пролиферативная активность по уровню белка Ki67 структур дермы в зоне повреждения эпидермиса отмечалась с 7-х по 14-е сутки (22,3-48,5%) после получения термотравмы (в контроле с 21-х по 28-е сут). Наиболее высокая пролиферативная активность клеточных элементов наблюдалась в области краевой эпителизации раны (ИП-48,5%).

В ходе эксперимента данные внесенные в разработанную таблицу, позволили оценить и проследить динамику заживления ожоговой поверхности (Табл. 1).

Анализируя полученные результаты, можно достоверно утверждать, что при воздействии супернатанта никелида-титана на раневую поверхность, с 3-х суток эксперимента отмечается выраженная разница в скорости закрытия раневого дефекта. У животных опытной группы уменьшение площади раны развивается значительно быстрее. К концу эксперимента в группе животных с супернатантом никелида-титана, рана зажила полностью, в контрольной группе оставался дефект размером 26 мм (Фиг. 9).

Процент уменьшения площади раны сохраняет более высокий уровень во все сроки эксперимента у животных опытной группы, особенно в первые - третьи сутки и в конце эксперимента (Фиг. 10). Скорость заживления площади раны у животных опытной группы достоверно выше, чем в контроле, особенно в первые - седьмые сутки.

Таким образом, комплексное гистологическое и морфометрическое исследование динамики заживления кожной раны в эксперименте выявило, что использование супернатанта никелида-титана способствует большей скорости развития репаративных процессов и проявляется ускоренной эпителизацией раневого дефекта. Регенерат характеризуется восстановлением не только толщины эпителиального пласта, но и дериватов кожи - волос, сальных и потовых желез.