×
25.06.2018
218.016.6680

ПЕПТИД, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к биологически активным пептидам, и может быть использовано в медицине. На основе антимикробного пептида тахиплезина из гемоцитов мечехвоста, представителя семейства бета-шпилечных АМП, получен пептид Tach1[Ile11Asp]. Изобретение позволяет расширить ассортимент пептидных соединений, обладающих противоопухолевой активностью и низкой токсичностью в отношении нормальных клеток человека. 4 ил., 1 табл., 5 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медицине. Онкологические заболевания являются одной из основных причин человеческой смертности в современном мире. Классические методы лечения рака - хирургия, химиотерапия, лучевая и гормональная терапия - не приводят к ремиссии в более чем половине случаев. Кроме того, серьезную угрозу для тех, кто успешно прошел курс лечения, представляют рецидивы опухолеобразования. Существенными недостатками химиотерапевтического подхода являются развитие резистентности опухолевых клеток, а также токсичность многих антираковых препаратов для здоровых клеток. Действие традиционных препаратов-цитостатиков направлено на подавление роста быстро делящихся клеток. Однако вследствие того, что высокая скорость деления характерна не только для клеток опухолей, но и для некоторых нормальных клеток, например, клеток эпителиальных тканей и красного костного мозга, цитостатическая терапия сопровождается такими побочными эффектами, как иммуносупрессия, анемия, алопеция, воспаление слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта, а также создает риск малигнизации здоровых клеток. В свете вышесказанного актуальной является проблема разработки противоопухолевых препаратов селективного действия, не вызывающих формирования резистентности со стороны клеток-мишеней.

Среди кандидатов на роль противоопухолевых средств нового поколения рассматриваются белки и пептиды системы врожденного иммунитета человека и животных [Zasloff М. Antimicrobial peptides of multicellular organisms // Nature. 2002. Vol. 415, №6870. P. 389-395]. Антимикробные пептиды (АМП) -природные соединения, обладающие широким спектром биологической активности. Для целого ряда АМП в экспериментах in vitro и in vivo показано наличие выраженного противоопухолевого действия за счет способности селективно воздействовать на цитоплазматическую мембрану и мембрану митохондрий раковых клеток, вызывая некротическую или апоптотическую гибель клетки.

Селективность действия катионных АМП определяется рядом физиологических особенностей раковых клеток. В норме внешняя поверхность мембран клеток млекопитающих образована цвиттерионными фосфолипидами - фосфатидилэланоламином, фосфатидилхолином и сфингомиелином, однако для опухолевых клеток характерен иной состав мембран. Цитоплазматическая мембрана трансформированных клеток приобретает выраженный отрицательный заряд из-за высокого содержания фосфатидилсерина, гликопротеинов и гликолипидов, обогащенных сиаловыми кислотами, а также протеогликанов, обогащенных сульфатом гепарина [Hoskin D.W., Ramamoorthy A. Studies on anticancer activities of antimicrobial peptides // Biochim. Biophys. Acta. 2008. Vol. 1778, №2. P. 357-375.]. Потеря асимметрии в распределении липидов была продемонстрирована на примере многих типов опухолевых линий клеток, что позволяет рассматривать данное явление как ключевой маркер онкогенеза. Для многих АМП показана цитотоксическая активность в отношении различных типов опухолевых клеток, однако, при этом лишь некоторые пептиды имеют выраженное избирательное токсическое действие в отношении клеток рака, в то время как другие повреждают как опухолевые, так и нормальные клетки.

Наиболее близкими аналогами заявляемого изобретения являются ранее открытые антимикробные пептиды из гемоцитов мечехвоста, представители семейства бета-шпилечных АМП [Nakamura Т. et al. Tachyplesin, a class of antimicrobial peptide from the hemocytes of the horseshoe crab (Tachypleus tridentatus). Isolation and chemical structure // J. Biol. Chem. 1988. Vol.263, №32. P. 16709-16713], в частности тахиплезин-1 (SEQ ID No. 4). Пептиды этой группы обладают стабилизированной дисульфидными связями β-шпилечной структурой, что обуславливает их высокую устойчивость к гидролизу под действием протеолитических ферментов. Несмотря на выраженную мембранотропную активность, в том числе в отношении нормальных клеток млекопитающих, противоопухолевые свойства тахиплезинов связаны не только с вызываемыми ими процессами апоптоза раковых клеток. Тахиплезин способен выступать в качестве связующего звена между гиалуроновыми кислотами на поверхности клеток карциномы простаты и Clq компонентом системы комплемента. Такое взаимодействие приводит к активации классического каскада системы комплемента [Chen J. Tachyplesin activates the classic complement pathway to kill tumor cells // Cancer Res. 2005. Vol. 65, №11. P. 4614-4622]. Благодаря способности одновременно подавлять неоваскуляризацию при развитии опухоли и вызывать апоптоз раковых клеток, тахиплезин показал высокую эффективность при лечении меланомы у мышей [Hoskin D.W., Ramamoorthy A. Studies on anticancer activities of antimicrobial peptides // Biochim. Biophys. Acta. 2008. Vol. 1778, №2. P. 357-375.]. Способность пептида подавлять пролиферацию опухолевых клеток была показана на примере гепатомы и аденокарциномы человека [Shi S.-L. et al. Effects of tachyplesin and n-sodium butyrate on proliferation and gene expression of human gastric adenocarcinoma cell line BGC-823 // World J. Gastroenterol. WJG. 2006. Vol. 12, №11. P. 1694-1698]. Недостатком природных тахиплезинов как химиотерапевтических агентов является низкая селективность противоопухолевого действия вследствие высокой токсичности в отношении нормальных клеточных линий [Kuzmin D.V. et al. Comparative in vitro study on cytotoxicity of recombinant β-hairpin peptides // Chem Biol Drug Des. 2017. DOI: 10.1111/cbdd.13081]. Так, тахиплезин-1 вызывает лизис 50% эритроцитов (НС50) и гибель 50% астроцитов (IC50) в концентрации менее 100 мкМ (см. Таблицу).

Изобретение решает задачу расширения ассортимента химических веществ, обладающих селективным противоопухолевым действием. Заявляемый пептид имеет аминокислотную последовательность SEQ ID No. 1. Заявляемый пептид состоит из 17 аминокислотных остатков, содержит две дисульфидные связи и не имеет иных посттрансляционных модификаций. Заявляемый пептид проявляет выраженную активность в отношении опухолевых клеточных линий (IC50<30 мкМ). Заявляемый пептид характеризуется низкими показателями гемолитического эффекта (НС50>400 мкМ) и цитотоксичности в отношении нормальных клеток человека, например, астроцитов (IC50>100 мкМ). Техническим результатом изобретения является выраженная противоопухолевая активность заявляемого пептида. Биосинтез заявляемого пептида не требует осуществления ферментативных посттрансляционных модификаций, что делает предпочтительным его биотехнологическое получение в бактериальной системе. Заявляемый пептид может быть получен путем гетерологической экспрессии в клетках Escherichia coli, а также с помощью химического синтеза.

Изобретение иллюстрируют графические материалы:

Фиг. 1. Физическая карта плазмидного вектора для экспрессии пептида Tach1[Ile11Asp]: Bg1ll, XhoI - сайты рестрикции с указанием координат; pBR322 origin - участок инициации репликации плазмиды; AmpR - ген устойчивости к β-лактамным антибиотикам; Т7 promoter - промотор транскрипции; Т7 terminator - терминатор транскрипции; operator - сайт связывания -репрессора; RBS -сайт связывания рибосомы; His8-TrxL-Tach1[Ile11Asp] - последовательность, кодирующая гибридный белок, содержащий целевой пептид.

Фиг. 2. Электрофоретический анализ продукта экспрессии рекомбинантного гена, кодирующего Tach1[Ile11Asp] Tach1[Ile11Asp]. 1 - стандарт М.м.; 2 - суммарный клеточный лизат, содержащий гибридный белок His8-TrxL-Tach1[Ile11Asp] (молекулярная масса гибридного белка - 15,7 кДа - отмечена стрелкой).

Фиг. 3. Хроматограмма очистки рекомбинантного пептида Tach1[Ile11Asp] (SEQ ID No. 1) методом обращенно-фазовой ВЭЖХ. Пик, соответствующий целевому пептиду, отмечен звездочкой.

Фиг. 4. МАЛДИ масс-спектр пептида Tach1[Ile11Asp] (SEQ ID No. 1), полученного генно-инженерным способом.

Таблица. Цитотоксическое действие рекомбинантных пептидов Tach1 и Tach1 [Hell Asp].

Изобретение иллюстрируют примеры.

Пример 1.

Конструирование плазмидного вектора pET-Trx-Tach1[Ile11Asp]

Нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2, содержащую промотор транскрипции T7 РНК-полимеразы, оператор, участок связывания рибосомы и участок, кодирующий гибридный полипептид (последовательно связанные гистидиновый октамер, тиоредоксин с заменой M37L, сайт расщепления бромцианом и Tach1[Ile11Asp]), получают химико-ферментативным синтезом с помощью ПЦР. Олигонуклеотиды, используемые в ПЦР, синтезируют твердофазным фосфорамидитным методом с наращиванием олигонуклеотидной цепи в направлении от 3'-конца к 5'-концу с помощью защищенных фосфорамидитов - 5'-диметокситритил-N-ацил-2'-дезоксинуклеозид-3'-О-(β-цианэтилдиизопропиламино)-фосфитов, активированных тетразолом.

Фрагмент ДНК, кодирующий белок-носитель тиоредоксин (M37L), получают методом ПЦР-амплификации и направленного мутагенеза с помощью ген-специфических праймеров, используя в качестве исходной матрицы плазмиду рЕТ32а(+), содержащую ген тиоредоксина. Фрагмент ДНК, кодирующий пептид Tach1[Ile11Asp], получают путем медленного отжига 3'-концов двух праймеров (прямой праймер: GCA GAT СТС ATA TGA ААТ GGT GCT ТТС GTG TGT GTT АСС GCG GTG AT; обратный праймер: GCG ААТ ТСТ ТАА CGA CAG CGA CGA TAG САА ТСА CCG CGG ТАА САС АС), кодирующих, соответственно, N- и С-концевые области пептида, с последующей достройкой до двухцепочечной структуры с помощью фрагмента Кленова ДНК-полимеразы I Е. coli. В ходе дизайна праймеров используют кодоны, предпочтительные для экспрессии в Е. coli. Остальные, участки последовательности pET-Trx-Tach1[Ile11Asp] получают путем последовательного отжига и элонгации взаимно перекрывающихся олигонуклеотидов, а также отжига, элонгации и амплификации промежуточных продуктов синтеза. На завершающей стадии синтеза последовательность амплифицируют с помощью праймеров, несущих на 5'-концах сайты узнавания рестриктаз Bg1II и XhoI. Продукт амплификации гидролизуют указанными рестриктазами, очищают электрофорезом в 1% агарозном геле, полосу ДНК величиной -550 п.н. выделяют из геля с помощью колонки с силикагелем и лигируют с фрагментом ДНК размером 3,5 тыс.п.н., полученным в результате обработки плазмиды рЕТ-20b(+) рестриктазами Bg1II и XhoI. В результате лигазной реакции получают кольцевую ковалентно замкнутую ДНК размером 4054 п.н. (Фиг. 1). Продуктами лигазной реакции трансформируют компетентные клетки Е. coli DH10B, приготовленные с помощью 0,1 М хлорида кальция. После трансформации суспензию бактерий смешивают с питательной средой LB, растят 1 ч при 37°С и высевают на чашки Петри с LB-агаром, содержащим 100 мкг/мл ампициллина.

Первичный отбор клонов, содержащих нужную плазмиду, осуществляют методом «ПЦР с клонов» с использованием праймеров на плазмидный остов и вставку. Отобранные клоны подращивают в жидкой питательной среде и выделяют плазмидную ДНК, которую анализируют на наличие вставки с помощью рестрикционного анализа. Окончательное строение плазмид, содержащих требуемый фрагмент, подтверждают определением нуклеотидной последовательности с помощью секвенирования по Сэнгеру. По данным секвенирования отбирают плазмиду со вставкой, нуклеотидная последовательность которой полностью соответствует запланированной (SEQ ID No. 2).

Пример 2.

Получение рекомбинантного пептида

Проводят трансформацию компетентных клеток Е. coli BL21(DE3), приготовленных с помощью 0,1 М хлорида кальция, плазмидным вектором, сборка которого описана в примере 1. После трансформации суспензию бактерий смешивают с питательной средой LB, растят 1 ч при 37°С и высевают на чашки Петри с LB-агаром, содержащим 100 мкг/мл ампициллина и 0,02 М глюкозы. Чашки инкубируют при 37°С в течение 18 ч.

Бактериологической петлей переносят выросшие колонии в 10 мл жидкой среды LB, содержащей 100 мкг/мл ампициллина, растят в течение 18 ч на термостатируемой качалке со скоростью вращения 220 об⋅мин-1 при температуре 37°С. Полученную культуру засевают в жидкую питательную среду LB, содержащую 0,02 М глюкозы, 100 мкг/мл ампициллина, 1 мМ MgSO4, при этом начальная OD600 составляет 0,05. Индукцию биосинтеза гибридного белка осуществляют путем добавления изопропилтио-β-D-галактопиранозида (IPTG) к культуре клеток с оптической плотностью 1,0 до конечной концентрации 0,2 мМ. Культуру растят в течение 6 ч при температуре 32°С на термостатируемой качалке со скоростью вращения 220 об⋅мин-1. Контроль уровня экспрессии гибридного белка осуществляют методом денатурирующего SDS-электрофореза в полиакриламидном геле. Уровень экспрессии гибридного белка His8-TrxL-Tach1[Ile11Asp] при постановке эксперимента по приведенной методике составляет не менее 30%. Расчетная молекулярная масса гибридного белка (SEQ ID No. 3) составляет 15,7 кДа (Фиг. 2).

После экспрессии клетки осаждают центрифугированием, ресуспендируют в фосфатном буфере (рН 7.8) с добавлением 6М гуанидин гидрохлорида и 20 мМ имидазола при помощи стеклянного гомогенизатора Поттера и разрушают путем ультразвуковой обработки. Лизат клеток центрифугируют при 25000 g в течение 40 мин. Все работы по получению осветленного лизата проводят при температуре 4°С. Очистку гибридного белка, содержащего в качестве аффинной метки октагистидиновую последовательность, осуществляют с помощью металлохелатной хроматографии на препаративной колонке с Ni-NTA агарозой в денатурирующих условиях. Элюцию проводят повышением концентрации имидазола в буфере до 0,5 М. Собранную после очистки с помощью металлохелатной хроматографии фракцию, содержащую гибридный белок, титруют концентрированной соляной кислотой до значения рН 1,0, после чего добавляют равную массу бромциана (1 г бромциана на 1 г белка) и выдерживают при температуре 25°С в защищенном от света месте в течение 18 ч. Реакцию останавливают добавлением пятикратного объема деионизированной воды, после чего упаривают образцы на вакуумной центрифуге до исходного объема раствора и титруют до нейтральных значений рН. Финальную стадию очистки пептида проводят методом обращенно-фазовой ВЭЖХ (ОФ-ВЭЖХ) на колонке Reprosil-Pur C18-AQ в системе водных буферов, содержащих ацетонитрил и 0,1% ТФУ. Разделение происходит в линейном градиенте ацетонитрила от 5% до 80% за 60 мин. Выход полипептидов детектируют по изменению оптического поглощения при длине волны 214 нм (Фиг. 3). Концентрацию водного раствора очищенного пептида Tach1[Ile11Asp] определяют методом спектрофотометрии по поглощению при 280 нм и расчета на основе коэффициентов экстинкции.

Пример 3.

Определение молекулярной массы пептида

Соответствие относительной молекулярной массы полученного рекомбинантного пептида расчетному значению, а также его химическую чистоту оценивают с помощью масс-спектрометрического анализа на приборе Reflex III (Bruker Daltonics), оснащенном УФ-лазером с длиной волны 336 нм, с регистрацией положительных ионов в рефлекторном режиме. В качестве матрицы используют 2,5-дигидроксибензойную кислоту в смеси, содержащей 20% ацетонитрил и 0,1% трифторуксусную кислоту. Пик с m/z 2266,3 (Фиг. 4) соответствует молекулярному иону пептида Tach1[Ile11Asp] (SEQ ID No. 1) (расчетная средняя молекулярная масса 2266,7), что свидетельствует об образовании двух дисульфидных связей. По аналогичной схеме анализируют пептид Tach1.

Пример 4.

Тестирование гемолитической активности пептида

Для тестирования гемолитической активности пептида используют свежевыделенные человеческие эритроциты. Для предотвращения свертывания к цельной крови добавляют цитратный буфер. Кровь центрифугируют в растворе фиколла и урографина плотностью 1,077 г/мл в течение 15 мин при 1500 об⋅мин-1. Фракцию эритроцитов отбирают со дна и трижды промывают двадцатью объемами изотонического натрий-фосфатного буфера (рН 7,4), последовательно осаждая эритроциты путем центрифугирования при 2000 об⋅мин-1 в течение 10 мин. После отмывки готовят 8% суспензию эритроцитов в изотоническом натрий-фосфатном буфере.

Для теста в 96-луночном планшете готовят серии двойных разведений исследуемого пептида от 400 до 6,25 мкМ (в пересчете на конечную концентрацию) объемом 50 мкл. После этого к раствору пептида добавляют по 50 мкл 8% суспензии эритроцитов. Планшет инкубируют в течение 1,5 ч при 37°С и перемешивании 1000 об⋅мин-1. После инкубации планшеты центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об⋅мин-1 для осаждения интактных эритроцитов. Далее аликвоты супернатанта переносят в другой планшет для измерения количества свободного гемоглобина. Определение количества гемоглобина в растворе осуществляют по поглощению раствора при 405 нм. В качестве отрицательного контроля (K-) используют супернатант, полученный после центрифугирования эритроцитов, инкубировавшихся в растворе натрий-фосфатного буфера без добавления пептидов. В качестве положительного контроля (K+) используют супернатант, полученный после центрифугирования эритроцитов, инкубировавшихся в 0,1% водном растворе неионогенного детергента Triton X-100, вызывающего их полный лизис. Эксперименты проводят дважды с кровью одного и того же человека в трехкратной повторности. Процент гемолиза рассчитывают по формуле:

Полученные данные о гемолитической активности представлены в Таблице. В отличие от пептида дикого типа Tach1 (SEQ ID No. 4), пептид Tach1[Ile11Asp] (SEQ ID No. 1) не обладает выраженной гемолитической активностью при концентрациях до 400 мкМ, используемых при тестировании.

Пример 5.

Тестирование цитотоксического действия пептида

Тестирование цитотоксического действия пептида в отношении астроцитов и опухолевых клеточных линий проводят с помощью МТТ-теста. Методика основана на способности дегидрогеназ живых клеток восстанавливать 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолий бромид (МТТ-реагент) до нерастворимого в воде фиолетового кристаллического формазана. Клеточные линии (нормальные астроциты человека (NHA), эпидермоидная карцинома кожи человека (А431), трансформированные клетки эмбриональной почки человека (НЕК293Т)) высаживают в 96-луночные планшеты (по 10000 клеток в каждую лунку) и растят в среде DMEM/F-12 в течение 24 ч при 37°С в СО2-инкубаторе (5% СО2 в воздухе). Далее культуральную жидкость заменяют свежей средой, в которой предварительно растворяют тестируемый пептид. После инкубации в течение 48 ч в приведенных выше условиях в каждую лунку добавляют по 20 мкл раствора МТТ в забуференном физиологическом растворе (5 г/л), после чего продолжают инкубацию в течение 4 ч. Аккуратно удаляют среду, добавляют в лунки по 100 мкл смеси диметилсульфоксида и этилового спирта (1:1) для растворения кристаллов формазана и измеряют оптическую плотность растворов при 570 нм с помощью планшетного спектрофотометра. Долю живых клеток определяют по формуле:

,

где «K-» - фоновое поглощение лунки с растворителем. Эксперименты проводят дважды в трехкратной повторности. С помощью математической модели нелинейной регрессии строят графики сглаживающих кривых для экспериментальных значений выживаемости клеток. С использованием уравнений полученных кривых и программного обеспечения GraphPad PRISM 6.0 рассчитывают значения IC50. Полученные данные о цитотоксической активности представлены в Таблице. Пептид Tach1[Ile11Asp] (SEQ ID No. 1) обладает выраженной селективностью в отношении опухолевых клеточных линий по сравнению с пептидом Tach1 (SEQ ID No. 4).

Перечень аминокислотных и нуклеотидных последовательностей

SEQ ID No. 1

SEQ ID No. 2

SEQ ID No. 3

SEQ ID No. 4

* - данные НС50 и IC50 приведены как средние значения с учетом стандартного отклонения

Пептид, обладающий противоопухолевой активностью, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID No. 1.
ПЕПТИД, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ
ПЕПТИД, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ
ПЕПТИД, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ
ПЕПТИД, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ
ПЕПТИД, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 111 items.
20.02.2013
№216.012.26f9

Полипептид из морской анемоны heteractis crispa, обладающий анальгетическим действием

Изобретение относится к области биохимии, а именно к биологически активным полипептидам, обладающим анальгетическим действием. Предложен полипептид π-AnmTX Her 1b-1, обладающий анальгетическим действием и имеющий следующую аминокислотную последовательность:...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002475497
Дата охранного документа: 20.02.2013
10.09.2013
№216.012.66bf

Лигнан, обладающий анальгетическим действием

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к биологически активному соединению, обладающему анальгетическим действием. Лигнан, обладающий анальгетическим действием, структура которого описывается как...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491950
Дата охранного документа: 10.09.2013
10.03.2014
№216.012.a94e

Способ включения квантовых точек методом соосаждения в пористые частицы карбоната кальция

Изобретение может быть использовано в биологических и медицинских исследованиях. Пористые частицы карбоната кальция формируют в результате реакции CaCl+2NaHCO→CaCO↓+2NaCl+2H, причем водный раствор квантовых точек, модифицированных избыточным количеством меркаптоуксусной кислоты, имеющей...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002509057
Дата охранного документа: 10.03.2014
27.05.2014
№216.012.cb0c

Флуоресцентный зонд и тест-система для определения активности фосфолипазы а2

Настоящее изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к созданию тест-систем на основе флуоресцентных зондов, которые могут быть использованы в качестве субстратов для фосфолипаз А1 и А2. Зонд с наименованием...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517746
Дата охранного документа: 27.05.2014
10.06.2014
№216.012.ccfe

Способ определения неспецифической устойчивости патогенных микроогранизмов к антибиотикам на основании измерения каталитической активности фосфодиэстераз, расщепляющих циклический дигуанозинмонофосфат

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой способ определения неспецифической устойчивости патогенных микроорганизмов к антибиотикам и факта присутствия бактериальных биопленок на основании измерения каталитической активности фосфодиэстераз, расщепляющих циклический...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002518249
Дата охранного документа: 10.06.2014
20.07.2014
№216.012.decd

Способ длительного хранения in vitro растений осины

Изобретение относится к области биотехнологии растений. Изобретение представляет собой способ хранения растений осины в условиях in vitro, включающий культивирование микропобегов осины на питательной среде WPM с добавлением сахарозы 10-20 г/л, агар-агара 9 г/л и витаминов MS 1 мл/л, сорбитола...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522823
Дата охранного документа: 20.07.2014
27.08.2014
№216.012.efa8

Рекомбинантные плазмидные днк, кодирующие гибридные полипептиды со свойствами красного флуоресцентного белка mcherry, для продуцирования гибридных флуоресцентных белков в escherichia coli

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой рекомбинантные плазмидные ДНК, кодирующие гибридные полипептиды со свойствами красного флуоресцентного белка mCherry. Рекомбинантная плазмидная ДНК pChFN3 кодирует гибридный белок ChFN3, который имеет свойства красного флуоресцентного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002527171
Дата охранного документа: 27.08.2014
10.09.2014
№216.012.f3d8

Способ оценки чувствительности клеток рака легкого к доксорубицину на основании уровней экспрессии маркерных генов и набор для его осуществления

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ оценки чувствительности клеток рака легкого к доксорубицину (IC50), а также набор для осуществления данного способа. Способ основан на сравнении уровней экспрессии маркерных генов АВСС1, ERCC1, FTL, GSTP1, МТ2А, RRM1, TUBB3 в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002528247
Дата охранного документа: 10.09.2014
10.11.2014
№216.013.0489

Способ формирования многофункциональных микросистем

Изобретение относится к области химии высокомолекулярных соединений, в частности к способам получения полимерных носителей путем химической модификации исходных полимерных микросфер на основе сополимера акролеина-стирола, полученных безэмульгаторной радикальной полимеризацией. Способ включает...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002532559
Дата охранного документа: 10.11.2014
10.04.2015
№216.013.3eea

Способ выявления белков в разных типах клеток млекопитающих и человека с помощью флуоресцеин-5-изотиоцианата на микроскопическом уровне

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для анализа локализации и содержания белкового компонента в клетках млекопитающих с различным уровнем синтетических процессов. Предлагается способ выявления внутриклеточных белков с помощью флуоресцеин-5-изотиоционата (ФИТЦ) в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002547594
Дата охранного документа: 10.04.2015
Showing 1-10 of 15 items.
27.12.2013
№216.012.8ed6

Способ получения водорастворимого бактерицидного препарата

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к бактерицидным препаратам с лизоцимной активностью. Смешивают водные растворы нитрата серебра и лизоцима в заданном соотношении с получением восстановленного металлического серебра. Восстановленное металлическое серебро...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002502259
Дата охранного документа: 27.12.2013
10.01.2015
№216.013.1c78

Средство для торможения развития карциономы эрлиха

Изобретение относится к фармакологии и онкологии, в частности к новому противоопухолевому средству. В качестве средства для торможения развития опухолей эпителиального происхождения (карцином) предложено применение бета-этилдифацила. Этилдифацил предлагается вводить в дозах 15-50 мг/кг как...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002538716
Дата охранного документа: 10.01.2015
10.04.2016
№216.015.2f65

Плазмидный вектор pet-his8-trxl-acip1, штамм бактерии escherichia coli bl21(de3)/pet-his8-trxl-acip1 для экспрессии антимикробного пептида аципенсина-1 и способ получения указанного пептида

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантной продукции белков, и может быть использовано для получения антимикробного пептида аципенсина-1 русского осетра Acipenser gueldenstaedtii. Конструируют плазмидный вектор pET-His8-TrxL-Acip1 для экспрессии аципенсина-1 в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002580031
Дата охранного документа: 10.04.2016
20.08.2016
№216.015.4b2e

Бункер зерноуборочного комбайна с пневмовыделителем

Изобретение относится к сельскохозяйственному машиностроению и может быть использовано в зерноуборочных комбайнах. Бункер зерноуборочного комбайна с пневмовыделителем включает корпус с крышкой, внутри которого расположены загрузочное 3 и выгрузное устройства. В боковой стенке корпуса бункера...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002594537
Дата охранного документа: 20.08.2016
25.08.2017
№217.015.c792

Плазмидный вектор pet-ppsltp, штамм бактерии escherichia coli bl21(de3)star/ pet-ppsltp - продуцент пищевого аллергена гороха pis s 3 и способ получения указанного аллергена

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантному получению белков в Escherichia coli, и может быть использовано для получения рекомбинантного пищевого аллергена гороха посевного Pisum sativum. Конструируют плазмидный вектор pET-pPsLTP для экспрессии Pis s 3 в клетках...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002618840
Дата охранного документа: 11.05.2017
25.08.2017
№217.015.c79f

Плазмидный вектор pet-mchbac75na, штамм бактерии eschrichia coli bl21(de3/ pet-mchbac75na для экспрессии антимикробного пептида минибактенецина chbac7.5 nα и способ получения указанного пептида

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к рекомбинантному получению антимикробного пептида минибактенецина ChBac7.5Nα из лейкоцитов козы Capra hircus, который может найти применение в медицинской и ветеринарной практике в качестве антибиотика широкого спектра действия....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002618850
Дата охранного документа: 11.05.2017
26.08.2017
№217.015.dbc0

Бета-шпилечный полипептид, обладающий антимикробной активностью

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к пептидной химии, и может быть использовано в медицине. Получены синтетические пептиды на основе бета-шпилечных полипептидов. Изобретение обеспечивает получение пептидов с высокой антимикробной активностью в отношении грамположительных и...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002624020
Дата охранного документа: 30.06.2017
10.05.2018
№218.016.496a

Аллерген гороха pis s 3 для диагностики и терапии пищевой аллергии и способ его выделения из природного сырья

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой аллерген гороха Pis s 3 - полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID No 1 или последовательность, на 80% идентичную последовательности SEQ ID No 1. Аллерген гороха Pis s 3 - полипептид, имеющий...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002651488
Дата охранного документа: 19.04.2018
10.04.2019
№219.017.08db

Пептидный антибиотик бактериального происхождения латероцин, подавляющий развитие микроскопических водорослей

Описан новый циклодекапептидный антибиотик латероцин, продуцируемый штаммом бактерий Brevibacillus laterosporus ВКПМ В-10531. Латероцин представляет собой белое аморфное твердое вещество, имеющее формулу [cyclo-(L-Val-L-Orn-L-Leu-D-Tyr-L-Pro-L-Phe-D-Phe-L-Asn-L-Asp-L-Met-)] и молекулярную массу...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002430966
Дата охранного документа: 10.10.2011
18.05.2019
№219.017.56c0

Способ получения антимикробного пептида ареницина

Способ по изобретению касается получения пептида ареницина, обладающего антимикробной активностью. Полученный пептид аналогичен пептиду, выделенному из кольчатого червя Arenicola marina, и может найти применение в медицинской и ветеринарной практике в качестве антибиотика широкого спектра...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002316595
Дата охранного документа: 10.02.2008
+ добавить свой РИД