4-(4-Ацетоксибензоиламино)бутаноилглицин, обладающий церебропротекторным действием при ишемии головного мозга

Изобретение относится к новым производным 4-гидроксибензамида-4-(4-ацетоксибензоиламино)бутаноилглицина и его применению как церебропротективного средства.

Известно большое количество церебропротекторных средств и способов терапии и профилактики поражений головного мозга [Машковский М.Д. Лекарственные средства: 15-е изд. - М.: ОО «Изд-во Новая Волна», 2008. - 1206 с.]. Недостатком данных средств является зачастую их невысокая эффективность [Алексеева Г.В., Гурвич A.M., Семченко В.В. Постреанимационная энцефалопатия (патогенез, клиника, профилактика и лечение). - Омск; Омская областная типография, 2003. - 152 с.]. Задачей, решаемой настоящим изобретением, является расширение арсенала высокоэффективных церебропротекторных средств. Сущность изобретения заключается в синтезе 4-(4-ацетоксибензоиламино)бутаноилглицина формулы

и использовании его в качестве церебропротекторного средства.

Пример 1. Синтез 4-(4-ацетоксибензоиламино)бутаноилглицина. К 20 ммоль 4-[(4-ацетоксибензоил)амино]бутановой кислоты (RU 2495866) в 50 мл безводного бензола прибавляют 60 ммоль оксалил хлорида и 0.2 мл N,N-диметилформамида. Смесь кипятят в течение 1 часа. Выпавший после охлаждения смеси до комнатной температуры осадок хлорангидрида отфильтровывают, промывают холодным гексаном и высушивают. Целевой 4-[(4-гидроксибензоил)амино]бутаноил хлорид выделяют в виде белого кристаллического твердого вещества (4.59 г, 81%), т. пл. 137-139°C. Содержание активного хлора: вычислено, %: Cl 12.50; найдено, %: 12.51.

Затем в реактор, снабженный мешалкой, помещают 25 мл воды, 19 ммоль глицина и 45 ммоль NaOH. К этой смеси добавляют при перемешивании и охлаждении 19 ммоль хлорангидрида 4-(4-ацетоксибензоил)аминобутановой кислоты, контролируя pH среды (pH>7). Полученную реакционную смесь перемешивают еще 3 часа, подкисляют HCl. Образовавшийся осадок отфильтровывают, перекристаллизовывают из этанола и высушивают. Получают целевой продукт - 4-(4-ацетоксибензоиламино)бутаноилглицин - в виде белого кристаллического вещества (75%) с т. пл. 218-221°C.

{4-[(4-Ацетоксибензоил)амино]бутаноил} глицин. R_f 0.41 (хлороформ-этилацетат 1:3). Спектр ЯМР ¹H (ДМСО-d₆), δ, м.д.: 8.39 с (1H, -СООН), 8.06 с (1H, -NH-), 7.87-7.80 м (2H, Ph, J 7.8 Гц), 7.25-7.18 м (2H, Ph, J 8.2 Гц), 6.89 с (1H, -NH-) 4.01 д (2H, -СН₂-, J 5 Гц), 3.21 д (2H, -CH₂-, J 6.2 Гц), 2.30-2.20 м (5H, -CH₂-, -CH₃, J 6.8 Гц), 1.89-1.75 м (2H, -CH₂-, J 7 Гц).

Пример 2. Церебропротекторное действие вещества при ишемии головного мозга, вызванной необратимой двусторонней окклюзией общих сонных артерий у крыс

Исследование выполнено на белых беспородных крысах-самках 180-200 г, 3,5-4-месячного возраста, доставленных из питомника ФГУП ПЛЖ «Рапполово» (д. Рапполово, Ленинградская область). После прохождения 14-дневного карантинного режима все животные содержались с учетом правил, принятых Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986).

В качестве модели ишемии головного мозга была выбрана одномоментная двусторонняя окклюзия общих сонных артерий (ОСА) у наркотизированных (хлоралгидратом 400 мг/кг внутрибрюшинно) крыс [Мирзоян Р.С. Методические рекомендации по доклиническому изучению лекарственных средств для лечения нарушений мозгового кровообращения и мигрени // Руководство по доклиническому изучению лекарственных средств / Под. ред. А.Н. Миронова Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.]. В ходе выполнения операции у ложнооперированных животных (ЛО) манипуляции были ограничены этапом доступа к общим сонным артериям. У контрольных животных, которым вводили 0,9% NaCl, и опытных групп, получавших патентуемое соединение в дозе 36 мг/кг или пирацетам в дозе 800 мг/кг, после введения лигатур под обе сонные артерии они одномоментно затягивались, рана послойно ушивалась. Патентуемое соединение, пирацетам и 0,9% NaCl вводили однократно за 30 минут до операции и далее в течение 3-х дней, начиная с третьего часа после операции, 1 раз в сутки.

О церебропротекторном действии соединения судили по увеличению выживаемости животных после двусторонней ОСА и уменьшению у них выраженности неврологического дефицита по шкале McGraw в модификации И.В. Ганнушкиной (суммарный балл), когнитивных нарушений в тестах «Условная реакция пассивного избегания» (УРПИ) и «Экстраполяционного избавления» (ТЭИ). Обработку данных проводили с помощью пакета программ MicrosoftExcel и Prism 5 (GraphPadSoftwareInc., США). Статистически значимыми расценивались различия при р<0,05.

По результатам эксперимента было выявлено, что перевязка ОСА вызвала гибель большинства животных группы контроль-ишемия (60%), которые получали 0,9% NaCl (таблица 1). Введение патентуемого соединения в дозе 36 мг/кг приводило к значительному снижению количества погибших (выживаемость животных в данной группе была на 30% выше по сравнению с группой контроля).

По результатам оценки суммарного балла по шкале McGraw установлено, что у животных контрольной группы неврологический дефицит был наиболее выражен (6,7±1,4 балла через 72 часа после окклюзии ОСА), тогда как у крыс, получавших патентуемое соединение, он был наименьшим и составил 3,8±1,37 балла, что на 43% ниже, чем у контрольных животных (таблица 2).

В тестах УРПИ и ТЭИ у выживших через 72 часа после перевязки ОСА животных, получавших патентуемое соединение, латентный период захода в темный отсек составил 180 с (ни одно животное не выходило за пределы светлого отсека), при этом время, затраченное на решение задачи экстраполяции, в тесте ТЭИ было наименьшим, что свидетельствует о сохранении памятного следа (таблица 2).

Таким образом, учитывая, что на фоне применения патентуемого соединения - 4-(4-ацетоксибензоиламино)бутаноилглицин - увеличивается выживаемость животных с ишемией головного мозга, вызванной перевязкой ОСА, снижается выраженность неврологических нарушений, в том числе когнитивного дефицита, заявленное соединение может найти применение при создании новых лекарственных средств для лечения нарушений мозгового кровообращения ишемического генеза.

Примечание: N - количество животных в группе; ЛО - ложнооперированные животные; * - различия достоверны по сравнению с ЛО группой (р<0,05); ^∧ - различия достоверны по сравнению с группой контроль-ишемия; (р<0,05, Хи - квадрат).

Примечание: ЛП захода в ТО в УРПИ - латентный период (с) захода животных в темный отсек в УРПИ; КЗ в УРПИ - количество заходов одного животного в темный отсек в УРПИ; ЛП подныривания в ТЭИ - латентный период (с) подныривания в ТЭИ; ЛО - ложнооперированные животные; * - различия достоверны в сравнении с ЛО (р<0,05); ^∧ - различия достоверны по сравнению с контрольной группой (р<0,05).