Способ диагностики риска злокачественного роста

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано в качестве экспресс-теста для выявления риска злокачественной опухоли.

Известно, что в организме здоровых людей число раковых (мутированных) клеток составляет около 0,5 млн, в стадии предрака это число колеблется от 0,5 млн до 0,5 трлн, у больных наблюдается более 1 трлн раковых клеток. То есть среди здоровых людей, у каждого из которых условно имеется по 0,5 млн раковых клеток, есть такие, в организме которых в силу ряда причин может проявляться активность мутированных клеток с недостаточным иммунным ответом для их подавления.

Известен способ диагностики злокачественных новообразований при исследовании сыворотки крови методом краевой дегидратации биологической жидкости, при котором на доклинической стадии злокачественного роста выявляют анизотропные сферолиты с единичными мелкими разноцветными включениями в центральной его части, а при ранней стадии злокачественного роста - с выраженными цветными включениями (Патент РФ 2235323, МПК G01N 33/48, опубл. 2004).

Однако данный способ не позволяет определить риск развития злокачественного образования, чтобы провести прицельную профилактику заболевания.

Известен также способ отбора лиц для выявления злокачественных новообразований (Патент РФ 2042133, G01N 33/48, опубл. 1995). При этом способе исследуется биологический материал с выделением из него культур эшерихиа и стрептококка, которые инкубируются в присутствии клеток опухоли L929, готовятся окрашенные мазки, микроскопируются с расчетом диагностического индекса целых клеток, и при индексе 50-60% отбирают больных в группу риска. Техническим результатом способа является расширение возможности первичного отбора лиц для ранней диагностики злокачественных новообразований.

Однако данный способ не позволяет осуществить прогноз вероятности заболевания у лиц без явных признаков опухолевого процесса.

Наиболее близким является способ определения степени риска злокачественного роста (Патент РФ 2413941, G01N 33/48, опубл. 2011), включающий получение сыворотки крови, высушивание в течение 7-10 суток отобранной из нее капли под покровным стеклом при комнатной температуре и влажности 55-60%, микроскопию в поляризованном свете, выявление в морфологической картине мелких сферолитов. Способ позволяет определить слабую, умеренную или высокую степень риска злокачественного роста.

Недостатком этого способа является длительный срок ожидания результата - в течение 7-10 суток.

В связи с этим задачей изобретения являлся поиск более ранних признаков риска злокачественного роста с возможностью получения быстрого по времени результата исследования (не более 2 суток) с момента получения крови обследуемого.

Для решения поставленной задачи получают сыворотку крови, высушивают отобранную из нее каплю под покровным стеклом при комнатной температуре и влажности 55-60%, проводят микроскопию препаратов в поляризованном свете с целью выявления в них мелких сферолитов. Новым является то, что исследование проводят по меньшей мере 10 проб сыворотки крови, при этом перед высушиванием под покровным стеклом пробы дополнительно выдерживают на открытом воздухе при комнатной температуре в течение 12-15 минут, а под покровным стеклом пробы высушивают в течение 1-2 суток, и при выявлении хотя бы в одной пробе по меньшей мере одного мелкого сферолита с наличием секторов липидно-белковых образований с поперечной волнистой структурой, прерываемой кристаллическим включением, диагностируют риск злокачественного роста.

В предлагаемом способе исходят из понятия, что жидкокристаллические структуры крови систем «белок - липид», организующие клеточные мембраны, все структурные элементы клеток, включая ядро и ядрышко, ответственные за построение РНК и ДНК, дадут отклик в виде искажения их структуропостроения при недостаточности иммунного ответа на мутированные клетки в организме. Для получения наиболее полной информации о жидкокристаллических структурах эту информацию «сгущают». Так, предварительное кратковременное высушивание образца сыворотки крови в форме капли в течение 12-15 минут позволяет сформировать на поверхности капли тончайшую белково-липидную пленку, которая накрывается покровным стеклом, и уже через 1-2 суток система «белок - липид» переходит в кристаллическое состояние и становится видимой при микроскопии в поляризованном свете.

Эмпирическим путем было выявлено, что минимальным, граничным, статистически достоверным показателем риска злокачественного роста является одна, из десяти, положительная проба сыворотки крови (с выявлением по меньшей мере одного мелкого сферолита с наличием секторов липидно-белковых образований с поперечной волнистой структурой, прерываемой кристаллическим включением). Следовательно, выявление хотя бы в одной пробе вышеуказанных признаков свидетельствует о необходимости динамического наблюдения за пациентом и контроля риска злокачественного роста.

На фиг. 1-3 представлены мелкие сферолиты с наличием секторов липидно-белковых образований с поперечной волнистой структурой, прерываемой кристаллическим включением (пример 1).

На фиг. 4 представлен мелкий сферолит без признаков волнистости и без кристаллического агрегата (пример 2).

Осуществление способа показано на конкретных клинических примерах.

Пример 1

Пациентка С., 50 лет. В последнее время постоянно чувствует усталость, подвержена частым острым респираторным вирусным инфекциям. Результаты общего анализа крови, мочи, а также биохимического исследования крови без отклонений от нормы. В связи с наличием онкологических заболеваний в нескольких поколениях родственников сдала кровь для исследования на риск злокачественного роста.

У пациентки была взята кровь из вены, получена сыворотка после отстаивания крови и ее центрифугирования в течение 15 минут при 3000 об/мин. Было приготовлено 10 аналитических ячеек: на предметные стекла наносились 10 капель сыворотки крови в объеме 20 мкл каждая, которые выдерживали в течение 12-15 минут при комнатной температуре, затем каждую каплю накрывали покровным стеклом и высушивали в условиях рабочей комнаты при относительной влажности 55-60% в течение 2 суток. Затем аналитические ячейки микроскопировали в поляризованном свете для выявления мелких сферолитов. Только в двух аналитических ячейках были обнаружены два мелких сферолита: один из них диаметром 280 мкм и другой диаметром 320 мкм, в которых определялись секторы липидно-белковых образований с поперечной волнистой структурой, прерываемой кристаллическим включением (фиг. 1, фиг. 2).

Заключение: выявлены признаки риска злокачественного роста.

Рекомендации: контроль сыворотки крови через каждые шесть месяцев. Соблюдать режим труда и отдыха.

Через 6 месяцев вновь сдала кровь для исследования на риск злокачественного роста. За это время брала отпуск, выезжала на санаторно-курортное лечение. Чувствует себя значительно лучше.

Исследование сыворотки крови по предлагаемому способу в 5 аналитических ячейках не выявило мелких сферолитов. В образцах крови обнаружены физиологические структуры, в подавляющем большинстве - базисный сферолит (фиг. 3).

Заключение: признаки риска злокачественного роста не обнаружены. Продолжать контроль сыворотки крови через каждые шесть месяцев.

Пример 2

Пациентка Н., 62 года. Обратилась с жалобами на общее ухудшение самочувствия, которое ни с чем связать не может, но боится онкологического заболевания. Месяц назад прошла комплексное обследование в стационаре (отделение гастроэнтерологии), но онкологического заболевания не выявлено. Самочувствие так и не улучшилось, а тревога по онкопатологии осталась.

У пациентки была взята кровь, получена сыворотка и приготовлены 10 аналитических ячеек, аналогично описанным в примере 1. Исследование структур сыворотки крови при микроскопии в поляризованном свете по предлагаемому способу позволило выявить всего один мелкий сферолит диаметром 300 мкм с секторами липидно-белковых образований с поперечной волнистой структурой, прерываемой кристаллическим включением (фиг. 4).

Заключение: выявлены признаки риска злокачественного роста. Рекомендации: контроль сыворотки крови через каждые шесть месяцев.

Пациентка больше не обращалась для исследования, но через три года в правой молочной железе самостоятельно обнаружила округлое образование, срочно обратилась в онкологический институт, где ей был поставлен диагноз: рак молочной железы и проведена радикальная мастэктомия.

Нами проведено обследование 47 пациентов (из них 31 женщина в возрасте 35-72 лет; 16 мужчин в возрасте 47-64 лет) с целью выявления у них риска злокачественного роста по предлагаемому способу. У 11 человек (7 женщин в возрасте 47-72 лет и 4 мужчин в возрасте 56-63 лет) был выявлен риск злокачественного роста. Все 47 пациентов были взяты в наблюдение в течение 24 месяцев.

За прошедший период наблюдения диагноз злокачественного роста был поставлен трем пациентам только из группы риска: 1 - рак гортани (мужчина в возрасте 59 лет); 2 - рак молочной железы (женщины в возрасте 62 и 70 лет).

Данный способ позволяет обеспечивать более высокую выживаемость пациентов с онкологической патологией, поскольку осуществляется прицельный контроль за состоянием их организма, и начать эффективное лечение на ранней стадии заболевания.