Результат интеллектуальной деятельности: Средство для лечения коров с гипофункцией яичников

Изобретение относится к ветеринарии и позволяет лечить гипофункцию яичников у коров.

Известно средство лечения гипофункции яичников с помощью тканевой терапии. В.Д. Кочарян, Г.С. Чижова, М.А. Никитина (2012) [4] предлагают тканевой препарат, изготовленный из последа здоровых коров по методу В.П. Филатова, который вводят животным по определенной схеме, в которую входят вододисперсный витамин нитамин и гормональный препарат просольвин. Схема лечения: в 1-й и 4-й день вводят вододисперсный витамин нитамин в дозе 0,25 мл на 10 кг живой массы; 2-й и 5-й день - тканевой препарат в дозе 20 мл подкожно; 3-й и 6-й день - гормональный препарат просольвин в дозе 2 мл внутримышечно. Тканевой препарат в комплексе с другими лекарственными веществами благотворно влияет на обмен веществ, стимулирует функциональную деятельность, повышает устойчивость организма и эффективно корректирует половую цикличность. Авторы утверждают, что тканевая терапия полезна при любой форме гипофункциональной недостаточности яичников у коров и рекомендуют применять на производстве для лечения данной патологии.

Достоинством данного способа и средства лечения гипофункции является низкая себестоимость применяемого тканевого препарата и возможность изготовления его в условиях сельскохозяйственного предприятия. Недостатком является невозможность полной стерильности, очистки препарата от вирусов и бактерий.

В.И. Бородыня и Ю.И. Вычерова (2013) [2] определяли эффективность комплексного лечения коров с применением в его составе препарата Анфлурон. Анфлурон - стерильный изотонический водный раствор белков. Применяют как иммуномодулятор общего действия при лечении многих патологий, где необходима действенная активация клеточного и гуморального иммунитета. Животным к схеме лечения, включающей прозерин, сурфагон, тривит, ректальный массаж матки и яичников, добавляют препарат Анфлурон, который вводят внутримышечно в дозе 2 мл в течение трех дней, через неделю введение данного препарата повторяют. Результаты эффективности лечения коров с гипофункцией яичников с применением в составе комплексного лечения препарата Анфлурон оказались выше, чем в контрольной группе на 50%.

Достоинством данного средства является его высокая терапевтическая эффективность. Недостатком средства является возможное развитие анафилактических реакций.

Анзоров В.А. и Эльдаров Б.А. (2009) [1] предлагают применять Фоллимаг для восстановления половой цикличности при гипофункции яичников у коров. Больным животным после многократных ректальных исследований, в течение 5 дней внутримышечно вводят 2,5%-ный раствор прогестерона в дозе 60 мг, суммарная доза составляет 300 мг. Через 168 часов после начала схемы лечения животным однократно внутримышечно вводят эстрофан в дозе 3 мл. В это же время коровам опытной группы внутримышечно вводят Фоллимаг в дозе 1000 ИЕ, приход в охоту учитывают в течение 5 дней. После контрольных осеменений стельными за два цикла оказались 79,5% коров. Таким образом, авторы для восстановления половой цикличности рекомендуют применять Фоллимаг в дозе 1000 ИЕ в комплексе с 3 мл эстрофана на фоне предварительной гестагенизации, что позволяет привести в охоту 91,6% коров с результативностью осеменения после первой охоты 45,4%.

Достоинством данного средства лечения является его высокая эффективность. Недостатком способа служит возможное образование фолликулярных кист при применении препарата Фоллимаг.

В.Н. Бочкарев и др. (2008) [3] изучали терапевтическую эффективность комплексного гомеопатического ветеринарного препарата Овариовит, в состав которого входят: Pulsatilla D8, Aquilegia D4, Aristolochia D4, Damiana D4, Aurum jodatum D6, Sepia D10, Calcium carbonicum D6, натрия хлорид и вода для инъекций. Коровам с гипофункцией яичников применяют Овариовит по следующей схеме: внутримышечно в дозе 5 мл двукратно с интервалом 14 дней и проводят ректальный массаж матки и яичников. Стадия возбуждения проявилась у 63,6% животных, оплодотворяемость возросла до 63,6%, при 74 днях бесплодия. Препарат оказал положительное влияние на биохимические и иммунологические показатели крови коров.

Достоинством данного метода является его лечебная эффективность и реализация продукции после применения препарата без ограничений.

Недостатком данного метода является высокая цена гомеопатического препарата.

Известно средство лечения и активизации функции яичников у коров при гипофункции, основанное на применении фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки (ФСЦС) [5].

Фолликулостимулирующая цитотоксическая сыворотка дозируется в зависимости от живой массы коров из расчета 0,5 см³ нативной сыворотки на 100 кг массы тела. Сыворотку коровам вводят на 15-17 дни после отела двукратно, подкожно, интервал между введениями составляет 3-5 дней, яловым и перегуливающим коровам сроки введения не ограничены.

ФСЦС в стимулирующей дозе обладает выраженным иммунокоррегирующим воздействием на показатели неспецифической резистентности организма коров: стимулирует гемопоэз, мобилизует клеточные и гуморальные звенья защиты иммунитета, регулирует взаимоотношения гормонов половых желез (эстрадиол, прогестерон) и гонадотропинов (ФСГ, ЛГ).

Использование фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки с целью стимуляции репродуктивной функции бесплодных коров позволяет повысить оплодотворяемость до 76,4% (в контроле 48,2%). Возобновление половых циклов у бесплодных коров после введения препарата наступает у коров: с продолжительностью бесплодия 1-30 дней на 20-22 сутки; 31-60 дней на 25-30 сутки; 91 и более дней на 38-45 сутки.

Достоинством данного средства является низкая стоимость и высокий результат от применения.

Данное средство, наиболее близкие по технической сущности и выбранное за прототип, обладают следующим недостатком: для эффективного действия фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки необходимо определить иммунный статус поголовья и профилактировать невоспалительные поражения печени - гепатозы, особенно перед отелом и сразу после него, и в зависимости от него корректировать дозу фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки.

Целью изобретения является разработка средства лечения коров при гипофункции яичников, позволяющего осуществлять терапию гипофункции яичников, модулировать функцию органов иммунной системы и профилактировать гепатозы. Поставленная цель достигается тем, что дополнительно к фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотке добавляется антиспленотоксическая сыворотка и антигепатотоксическая сыворотка, в 1 мл препарата содержится от 0,9 до 1,15 титровочных единиц фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки, антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента. Предлагаемые компоненты усиливают действие фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки и повышают естественную резистентность организма, что очень важно при гипофункции яичников.

Средство для лечения гипофункции яичников у коров представляет собой прозрачную слегка желтоватую жидкость с незначительным осадком, легко разбивающимся при встряхивании. Препарат должен быть стерильным, нетоксичным и апирогенным.

Срок годности препарата при хранении в температуре +5 - +7°С - 2 года.

Средство для лечения коров при гипофункции яичников получают следующим образом:

1. Получение антигена из фолликулов. Фолликулярные ткани яичников, используемые в качестве антигена для иммунизации продуцентов берут от свежеубитых и только от здоровых нетелей и коров. Полученные яичники помещают в стерильную емкость и доставляют к месту обработки не менее чем в течение 2-3-х часов, поместив емкость в морозильную камеру холодильника, а при невозможности в лед. В стерильных условиях бокса яичники с фолликулами тщательно очищают от механических примесей, плотной соединительной ткани и жира, 4-6 раз промывают 10-кратным объемом физиологического раствора, после чего отделяют созревшие фолликулы. Отобранные и отмытые от крови фолликулы измельчают в гомогенизаторе с 0,85%-ным раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугируют 9-10 минут при 2500-3000 об/мин и в качестве антигена используют надосадочную жидкость. Антиген осветляют пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 7000-8000 об/мин в течение 9-10 минут. Хранят антиген в замороженном состоянии.

2. Получение антигена из печени. Для приготовления антигена из печени используют печень здоровых коров. Кусочки печени 4-6 раз отмывают от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчают, растирают в ступке со стеклом и разводят 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугируют 9-10 минут при 2500-3000 об/мин и в качестве антигена используют надосадочную жидкость. Антиген осветляют пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 7000-8000 об/мин в течение 9-10 минут. Хранят антиген в замороженном состоянии.

3. Получение антигена из селезенки. Для приготовления антигена из селезенки используют селезенку здоровых коров. Кусочки селезенки 4-6 раз отмывают от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчают, растирают в ступке со стеклом и разводят 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугируют 9-10 минут при 2500-3000 об/мин и в качестве антигена используют надосадочную жидкость. Антиген осветляют пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 7000-8000 об/мин в течение 9-10 минут. Хранят антиген в замороженном состоянии.

4. Выбор животных-доноров. Для приготовления средства для лечения гипофункции яичников у коров в качестве доноров пригодны следующие виды: лошади, кролики, крупный и мелкий рогатый скот. Доноры должны быть свободны от инфекционных заболеваний и пройти карантинирование.

5. Получение фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки. Фолликулостимулирующую цитотоксическую сыворотку получают путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводят подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки; второе введение - через 6-8 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки; третье введение проводят через такой же срок, как и второе, - внутривенно и подкожно в выше перечисленные точки. Через 6-8 дней после третьего введения антигена делают пробный забор крови и определяют титр полученной фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводят забор крови. Полученную кровь помещают в термостат на 29-30 минут при 36-37°С, затем в стерильных условиях отделяют сгусток от стенок и оставляют пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывают и консервируют фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.

6. Получение антигепатотоксической сыворотки. Антигепатотоксическую сыворотку получают путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводят подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки; второе введение - через 6-8 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки; третье введение проводят через такой же срок, как и второе, - внутривенно и подкожно в выше перечисленные точки. Через 6-8 дней после третьего введения антигена делают пробный забор крови и определяют титр полученной антигепатотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводят забор крови. Полученную кровь помещают в термостат на 29-30 минут при 36-37°С, затем в стерильных условиях отделяют сгусток от стенок и оставляют пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывают и консервируют фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.

7. Получение антиспленотоксической сыворотки. Антиспленотоксическую сыворотку получают путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводят подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки; второе введение - через 6-8 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки; третье введение проводят через такой же срок, как и второе, - внутривенно и подкожно в перечисленные выше точки. Через 6-8 дней после третьего введения антигена делают пробный забор крови и определяют титр полученной антиспленотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводят забор крови. Полученную кровь помещают в термостат на 29-30 минут при 36-37°С, затем в стерильных условиях отделяют сгусток от стенок и оставляют пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывают и консервируют фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.

8. Получение средства для лечения гипофункции яичников у коров. Для получения средства для лечения гипофункции яичников у коров фолликулостимулирующую цитотоксическую сыворотку, антигепатотоксическую, антиспленотоксическую сыворотки смешивают со стерильным физиологическим раствором, консервированным фенолом до 0,5%-ной концентрации с таким расчетом, чтобы в 1,0 мл его содержалось по 0,9-1,15 титровочных единиц фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки, антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента.

Сравнительный анализ заявленного препарата со средством, выбранным за прототип, показал, что средство для лечения гипофункции у коров обладает новизной и следующими отличительными признаками:

- дополнительно включает антиспленотоксическую и антигепатотоксическую сыворотки в количестве 0,9-1,15 титровочных единиц по реакции связывания комплемента, а фолликулостимулирующая цитотоксическая сыворотка используется с активностью 0,9-1,15 титровочных единиц по реакции связывания комплемента.

Наличие существенных отличий от прототипа обеспечивает соответствие заявляемого технического решения критерию «новизна». Из уровня техники неизвестны такие биологически-активные препараты, содержащие одновременно в 1,0 мл по 0,9-1,15 титровочных единиц фолликулостимулирующей цитотоксической, антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента. Изобретение имеет изобретательский уровень, так как она неизвестно из уровня техники.

Проведенные испытания средства для лечения гипофункции яичников у коров подтверждают его преимущества перед препаратом-прототипом. Это указывает на то, что изобретение соответствует условию патентоспособности - промышленно применимо.

Пример выполнения. Схема получения средства для лечения гипофункции яичников у коров.

1. Получение антигена из фолликулов. Фолликулярные ткани яичников, используемые в качестве антигена для иммунизации продуцентов брали от свежезабитых здоровых нетелей и коров. Полученные яичники помещали в стерильную емкость и доставляли к месту обработки не менее чем в течение 2-3-х часов, поместив емкость в морозильную камеру холодильника (при невозможности в лед). В стерильных условиях бокса яичники с фолликулами тщательно очищали от механических примесей, плотной соединительной ткани и жира, 6 раз промывали 10-кратным объемом физиологического раствора, после чего отделяли созревшие фолликулы. Отобранные и отмытые от крови фолликулы измельчали в гомогенизаторе с 0,85%-ным раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугировали 10 минут при 3000 об/мин и в качестве антигена использовали надосадочную жидкость. Антиген осветляли пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 8000 об/мин в течение 10 минут. Хранили антиген в замороженном состоянии.

2. Получение антигена из печени. Для приготовления антигена из печени использовали печень здоровых коров. Кусочки печени 6 раз отмывали от крови 10-кратным объемом изотонического раствор натрия хлорида. Кусочки измельчали, растирали в ступке со стеклом и разводили 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугировали 10 минут при 3000 об/мин и в качестве антигена использовали надосадочную жидкость. Антиген осветляли пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 8000 об/мин в течение 10 минут. Хранили антиген в замороженном состоянии.

3. Получение антигена из селезенки. Для приготовления антигена из селезенки использовали селезенку здоровых коров. Кусочки селезенки 6 раз отмывали от крови 10-кратным объемом изотонического раствора натрия хлорида. Кусочки измельчали, растирали в ступке со стеклом и разводили 0,85% раствором натрия хлорида до 10%-ной концентрации. Полученную суспензию центрифугировали 10 минут при 3000 об/мин и в качестве антигена использовали надосадочную жидкость. Антиген осветляли пятикратным замораживанием и оттаиванием с последующим центрифугированием при 8000 об/мин в течение 10 минут. Хранили антиген в замороженном состоянии.

4. Выбор животных-доноров. В качестве донора использовали здоровых кроликов, прошедших карантинирование.

5. Получение фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки. Фолликулостимулирующую цитотоксическую сыворотку получали путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводили подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки; второе введение - через 8 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки; третье введение проводили через такой же срок, как и второе, - внутривенно и подкожно в выше перечисленные точки. Через 8 дней после третьего введения антигена делали пробный забор крови и определяли титр полученной фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводили забор крови. Полученную кровь помещали в термостат на 30 минут при 37°С, затем в стерильных условиях отделяли сгусток от стенок и оставляли пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывали и консервировали фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.

6. Получение антигепатотоксической сыворотки. Антигепатотоксическую сыворотку получали путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводили подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки; второе введение - через 8 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки; третье введение проводили через такой же срок, как и второе, - внутривенно и подкожно в выше перечисленные точки. Через 8 дней после третьего введения антигена делали пробный забор крови и определяли титр полученной антигепатотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводили забор крови. Полученную кровь помещали в термостат на 30 минут при 37°С, затем в стерильных условиях отделяли сгусток от стенок и оставляли пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывали и консервировали фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.

7. Получение антиспленотоксической сыворотки. Антиспленотоксическую сыворотку получали путем гипериммунизации доноров по схеме: первое введение антигена проводили подкожно в области левой лопатки и правой подколенной ямки; второе введение - через 8 дней - подкожно в области правой лопатки и левой подколенной ямки; третье введение проводили через такой же срок, как и второе, - внутривенно и подкожно в перечисленные выше точки. Через 8 дней после третьего введения антигена делали пробный забор крови и определяли титр полученной антиспленотоксической сыворотки в реакции связывания комплемента. При наличии титра не менее 1:160-1:200 проводили забор крови. Полученную кровь помещали в термостат на 30 минут при 37°С, затем в стерильных условиях отделяли сгусток от стенок и оставляли пробирку в холодильнике для лучшей ретракции сгустка до следующего дня. Образовавшуюся сыворотку отсасывали и консервировали фенолом до 0,5%-ной концентрации вещества в сыворотке.

8. Получение средства для лечения гипофункции яичников у коров. Для получения средства для лечения гипофункции яичников у коров фолликулостимулирующую цитотоксическую сыворотку, антигепатотоксическую, антиспленотоксическую сыворотки смешивали со стерильным физиологическим раствором, консервированным фенолом до 0,5%-ной концентрации с таким расчетом, чтобы в 1,0 мл его содержалось по 1,0 титровочных единиц фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки, антигепатотоксической и антиспленотоксической сывороток по реакции связывания комплемента.

Согласно учению А.А. Богомольца о цитотоксинах оптимальной дозой цитотоксической сыворотки считается 0,2 титровочных единицы на килограмм массы животного. Следовательно, дозой средства для лечения гипофункции яичников у коров является 0,2 мл/кг.

Сравнение эффективности действия средства для лечения гипофункции яичников у коров по отношению к фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотке проводили в опыте на яловых коровах с диагнозом гипофункция яичников.

С этой целью 30 коров разделили по принципу пар-аналогов на две группы по 15 голов в каждой группе. Все животные находились в одинаковых условиях кормления и содержания.

Коровы первой группы служили контролем, им вводили фолликулостимулирующую цитотоксическую сыворотку в дозе 0,5 мл на 100 кг живой массы двукратно с интервалом 5 дней на 15 день после отела.

Коровам второй группы вводили средство для лечения гипофункции яичников в дозе 0,2 мл на 1 кг живой массы однократно.

Наблюдение за животными проводили в течение 3 месяцев, при этом учитывались количество животных, пришедших в охоту, и эффективность искусственного осеменения.

В результате проведенного лечения в контрольной группе пришло в охоту 12 из 15 коров, эффективность их осеменения составила 83,3%. В опытной группе пришло в охоту 14 животных и эффективность их осеменения составила 92,8%.

Средство для лечения гипофункции яичников у коров вводится коровам в дозе 0,18-0,22 мл/кг массы тела подкожно или внутримышечно.

Средство для лечения гипофункции яичников у коров представляет собой прозрачную слегка желтоватую жидкость с незначительным осадком, легко разбивающимся при встряхивании. Срок годности препарата при хранении в температуре +5 - +7°С - 2 года.

Экономическая эффективность от применения средства для лечения гипофункции яичников у коров составила 125 рублей, от применения фолликулостимулирующей цитотоксической сыворотки - 36 рублей.

Список литературы

1. Анзоров, В.А. Эффективность применения фоллимага и сурфагона для восстановления половой цикличности при гипофункции яичников у коров-первотелок. / В.А. Анзоров, Б.А. Эльдаров // Сборник научных трудов Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства. - 2009. - Т. 1. - №1-1. - С. 17-19.

2. Бородыня, В.И. Применение анфлурона в составе комплексного лечения коров при гипофункции яичников. / В.И. Бородыня, Ю.И. Вычерова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2013. - Т. 214. - С. 95-99.

3. Бочкарев, В.Н. Влияние гомеопатического комплекса на организм коров при гипофункции яичника. / В.Н. Бочкарев, И.И. Кузьменков, С.Л. Смирнов, Д.Ю. Тихонов, С.Ю. Бирюков // Ветеринарная патология. - 2008. - №1. - С. 119-120.

4. Кочарян, В.Д. Этиопатогенез, профилактика и лечение гипофункции яичников у коров / В.Д. Кочарян, Г.С. Чижова, М.А. Никитина // Известия Нижневолжского агроуниверситетского комплекса: наука и высшее профессиональное образование. - 2012 - №3. - С. 132-135.

5. Пат. 22149 Респ. Казахстан, МПК А61К 35/16. Способ получения цитотоксической сыворотки для стимуляции репродуктивной функции бесплодных коров. / Н.А. Заманбеков, Н.К. Кобдикова, Е.М. Корабаев, А.А. Байниязов; патентообладатель Н.К. Кобдикова. - №2008/0272.1; заявл. 11.03.2008; опубл. 15.05.2010, Бюл. №1. - 4 с.

6. Пат. 2416430 Рос. Федерация, МПК А61К 39/395, А61Р 1/16. Средство для профилактики гепатоза у свиней. / П.Н. Щербаков, П.В. Бурков, Т.Б. Щербакова; патентообладатель ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины». - №2009145566/15; заявл. 08.12.2009; опубл. 20.04.2011, Бюл. №11. - 10 с.