Способ исследования повышения антибиотикочувствительности патогенной и условно-патогенной микрофлоры in vitro молочнокислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов Propionobacterium freundenreichii shermanii Ac-103

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в лабораторной работе при изучении антибиотикочувствительности микроорганизмов.

Известен «Препарат для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта "ТоксиБиоВит"» (патент РФ №2475254, кл. A61K 35/74 от 13.12.2011) и способ его применения, включающий введение в организм веществ, тормозящих развитие патогенной микрофлоры, стимулирующих ферментную активность и антиоксидантную защиту, а также обладающих широким спектром микроэлементов и стимулирующих развитие полезных микроорганизмов, а именно метаболитов микроорганизмов Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Halobacterium halobium, иммобилизованных на активном носителе, представляющем собой смесь глауконита с клеточными оболочками пивных дрожжей Saccharomyces cerevisiae.

К недостаткам известного способа является отсутствие данных по росту антибиотикочувствительности к конкретному виду антибактериального вещества, а также отсутствие данных по росту показателей зон задержки роста тест-культуры до и после контакта с испытуемым супернатантом (надосадочная жидкость) культуры пробиотика.

Ближайшим техническим решением к данному изобретению, принятым за прототип, является способ оценки антибиотикочувствительности микроорганизмов, описанный в методических указаниях «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» (МУК №4.2.1890-04, 2004 г.), способ включает выращивание культуры тест-штамма микроорганизма на мясопептонном бульоне (МПБ) в течение 18-20 ч при Т=37,0±0,5°С, с последующим инкубированием на мясопептонном агаре (МПА) с дисками, пропитанными различными видами антибактериальных препаратов в течение 18-20 ч при Т=37,0±0,5°С.

Задача изобретения - расширение арсенала способов повышения антибиотикочувствительности микроорганизмов in vitro. Технический результат изобретения состоит в реализации этого назначения.

Решение задачи состоит в том, что способ повышения антибиотикочувствительности условно-патогенной микрофлоры in vitro молочнокислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов Propionobacterium freundenreichii shermanii Ас-103, включает использование молочнокислой кормовой добавки, содержащей культуру микроорганизмов Propionobacterium freundenreichii shermanii Ас-103 полученного в разные сроки культивирования в 1, 10, 20, 30 день. Согласно изобретению, к 0,5 мл мясо-пептонного бульона (МПБ) добавляют 0,5 мл супернатанта пробиотика, после чего вносят 0,5 мл МПБ суточной культуры условно-патогенной микрофлоры, полученный раствор инкубируют 18-24 ч при Т=37,0±0,5°С, после чего проводят определение антибиотикочувствительности микроорганизмов на мясо-пептонном агаре (МПА) с 24 видами антибактериальных препаратов дискодиффузионным методом.

Пример 1. Анализ изменения зоны задержки роста микроорганизмов при определении антибиотикочувствительности после контакта с супернатантом пробиотической культуры разных сроков культивирования показал разную чувствительность у исследуемых представителей условно-патогенной микрофлоры. Так, наибольший рост антибиотикочувствительности микроорганизмов отмечается после культивирования с десяти и тридцати дневными культурами (табл. 1).

Р<0,05

Рост антибиотикочувствительности Е. cloaceae 200, St. albus АТСС 25923, S. enteritidis 182, E.coli ATCC 25222, Pr. vulgaris 192, Kl. pneumonia 71 после контакта с Propionobacterium freundenreichii shermanii Ac-103 первого дня культивирования составил от 11,4 до 62,5%, десятого дня - от 20,7 до 96%, двадцатого дня от 34 до 44,2% и тридцатого дня от 53,1 до 77,7% соответственно.

Наибольшее увеличение антибиотикочувствительности (на 96%) отмечено у Е. cloaceae 200 после контакта с десятидневной молочно-кислой кормовой добавкой, содержащей культуру микроорганизмов Propionobacterium freundenreichii shermanii Ас-103.

Пример 2. Установлено, что на протяжении всего эксперимента, супернатант Propionobacterium freundenreichii shermanii Ac-103 разного срока культивирования, вызывает устойчивый рост количества антибактериальных препаратов, к которым чувствительны изучаемые штаммы условно-патогенной микрофлоры. Кроме того, увеличение срока инкубирования пробиотика совпадает со снижением количества малочувствительных препаратов у штаммов условно-патогенной микрофлоры (табл. 2).

Примечание: количество препаратов, к которым микрофлора устойчива - У, малочувствительна - М, чувствительна - Ч.