×
13.02.2018
218.016.24cd

Флуоресцентный способ прогнозирования эффективности химиотерапии у детей, больных острым лимфобластным лейкозом, путем определения концентраций аденозинтрифосфата в митохондриях

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине и касается флуоресцентного способа прогнозирования эффективности химиотерапии у детей, больных острым лимфобластным лейкозом, путем определения концентраций аденозинтрифосфата в митохондриях, при котором производят забор крови до и после химиотерапии, выделяют флуоресцентный макро-биомаркер эффективности химиотерапии, где макро-биомаркером является концентрация аденозинтрифосфата в митохондриях клеток крови, которую определяют автоматизировано, с помощью лазерного конфокального микроскопа, путем регистрации интенсивности флуоресценции макро-биомаркера. Изобретение обеспечивает осуществление оценки эффективности химиотерапии, в частности возникновения гепатотоксических эффектов и лекарственной резистентности при проведении химиотерапии у пациентов-детей с острым лимфобластным лейкозом. 1 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к области биофизики, а именно к медицинской физике, и описывает способ прогнозирования эффективности химиотерапии у детей, больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), в частности, прогнозирования рисков возникновения лекарственной резистентности при проведении химиотерапии у пациентов с ОЛЛ с помощью исследования свойств биологических жидкостей физическими методами. Способ включает в себя определение и оценку количественных уровней концентрации аденозинтрифосфата (АТФ), в клетках крови, методом лазерной конфокальной микроскопии, после получения курса химиотерапии пациентом. Изобретение может быть использовано в онкологии, в клинической лабораторной практике для индивидуального прогнозирования эффективности химиотерапии при лечении острых лимфобластных лейкозов у детей.

Известно изобретение «Способ прогнозирования эффективности химиотерапии у больных со злокачественными новообразованиями эпителиальных тканей» (патент РФ №2542505, 2013 г., G01N 33/49), содержащее сходный с используемым в заявляемом способе принцип выбора молекулярных маркеров химиочувствительности новообразований.

Недостатком этого способа является то, что с его помощью не представляется возможным производить работу с флуоресцентными маркерами, а именно обеспечивать их использование для определения концентраций АТФ в митохондриях клеток крови, что позволит производить оценку степени гепатотоксических эффектов и степени лекарственной резистентности, необходимых для индивидуализации химиотерапии (и ее эффективности) у пациентов.

За прототип изобретения выбран способ прогнозирования эффективности химиотерапии у больных со злокачественными опухолями эпителиальных тканей, включающий в себя исследование крови до и после лечения с количественным определением содержания CD50+ антигена (Алясова А.В. Клинико-неврологические и клинико-иммунологические характеристики рака молочной железы: Автореф. дис. д.м.н., Иваново, 2004, 43 с.).

Описанный в прототипе способ осуществляется следующим образом: иммунофенотипирование мононуклеарных клеток периферической крови проводят с помощью метода непрямой иммунофлуоресценции. Для выделения мононуклеарных клеток периферической крови гепаринизированную кровь, разведенную на 1/3 средой 199, наслаивают на градиент фиколл-верографина (9 объемов крови на 3 объема градиента) и центрифугируют при 1700 об/мин в течение 40 минут при 20°С. Мононуклеарные клетки собирают из интерфазы, а затем трижды отмывают средой 199. При этом центрифугируют в течение 20 минут при 1200 об/мин.

На обезжиренное предметное стекло, предварительно покрытое парафилмом фирмы American Can Company, имеющим круглые перфорации диаметром 7 мм, наносят по 20-50 мкл поли-L-лизина Serva в концентрации 50 мкг/мл. Предметное стекло помещают на 30 минут в термостат при температуре 37°С. Затем его отмывают физиологическим раствором, забуференным 0,01 молярным фосфатным буфером рН 7,4. Суспензию клеток в концентрации 2-106 кл/мл наносят по 40 мкл в лунки на предметное стекло. Предметное стекло выдерживают 30 минут при 37°С во влажной камере. Затем не прикрепившиеся к стеклу клетки отсасывают пипеткой и наносят в лунки раствор моноклональных антител (МКА) объемом 40 мкл. В контрольных образцах клетки обрабатывают физиологическим раствором взамен МКА.

Вновь инкубируют стекла при 37°С во влажной камере в течение 30 минут, после чего отмывают их в пяти порциях физиологического раствора с фосфатным буфером рН 7,4. На отмытые клетки наслаивают по 40 мкл ФИТЦ-меченных фрагментов козьих антител против мышиных иммуноглобулинов производства НПК Препарат и стекла инкубируют на льду во влажной камере в течение 30 минут. Затем стекла промывают в пяти порциях физиологического раствора с фосфатным буфером рН 7,4, заливают 50%-ным глицерином в физиологическом растворе и препарат закрывают предметными стеклами. Просмотр препаратов проводят с помощью люминесцентного микроскопа ЛЮМАМ-И2. Учитывают свечение при увеличении объектива × 40-100, окуляра × 2,5-10. Люминесценцию клеточной поверхности регистрируют визуально. В препарате просчитывали 200-300 клеток. Учитывают общее количество клеток и антиген-положительных клеток. Затем подсчитывают относительное содержание антиген-положительных клеток.

В результате проведенных исследований было показано, что изменение содержания CD50+ клеток является устойчивым признаком, позволяющим прогнозировать исход заболевания. Снижение уровня этой популяции по окончании лечения не менее чем в 1,2-1,6 раза, по сравнению с ее содержанием перед 1 курсом ПХТ, особенно на фоне угнетения иммунологической реактивности, свидетельствует о неэффективности проводимой терапии, возможности развития рецидива заболевания в ближайшие 4-5 месяцев или прогрессирования процесса на фоне введения цитостатиков. Напротив, в случаях повышения в процессе лечения исходно сниженного количества CD50+ клеток отмечалось развитие стойкой ремиссии болезни.

Несовершенство этого способа заключается в недостаточной его автоматизации, а именно, в осуществлении ручным способом подсчета клеток и антиген-положительных клеток, что может приводить к ошибкам в интерпретации результатов эксперимента. Другим недостатком способа является невозможность непосредственного мониторинга рисков возникновения гепатотоксичности и лекарственной резистентности у пациентов.

Задачей предлагаемого изобретения является создание флуоресцентного способа прогнозирования эффективности химиотерапии у больных с острыми лимфобластными лейкозами, обладающего высокой степенью автоматизации ключевых этапов эксперимента, а также обеспечение возможности непосредственного мониторинга рисков возникновения гепатотоксичности и лекарственной резистентности у пациентов.

Поставленная задача решается тем, что во флуоресцентном способе прогнозирования эффективности химиотерапии у детей, больных острым лимфобластным лейкозом, путем определения концентраций аденозинтрифосфата в митохондриях, при котором производят забор крови до и после химиотерапии, выделяют флуоресцентный макро-биомаркер эффективности химиотерапии, согласно изобретению макро-биомаркером является концентрация аденозинтрифосфата в митохондриях клеток крови, которую определяют автоматизировано, с помощью лазерного конфокального микроскопа, путем регистрации интенсивности флуоресценции макро-биомаркера для непосредственного мониторинга рисков возникновения гепатотоксичности и лекарственной резистентности у пациентов.

Заявленный способ основан на использовании определения концентрации АТФ методом лазерной конфокальной микроскопии, который начинается с обработки образца после формирования кровяного сгустка (не ранее чем через 30 минут и не более 3 часов после забора крови). Для максимального разделения сыворотки и клеточного осадка используется режим центрифугирования 2000 об/мин в течение 10 минут при комнатной температуре.

Сыворотка отбирается по 1 мл в криовиалы объемом (1,0-2,0) мл. Пробы хранятся в штативах с крышками, при -80°С до выполнения анализа. При заданном температурном режиме хранения количество жизнеспособных мононуклеарных клеток превышает 25 млн.

При выполнении анализа образцы размораживаются при комнатной температуре. В ламинарном шкафу, при помощи 0,5 мл и 1-мл механических пипеток периферической крови образцы переносятся в маркированные пробирки типа Фалькон объемом 10 мл.

Проба разводится стерильным 0,2 молярным фосфатно-солевым буфером (ФСБ) из расчета 5:1. Уровень рН доводится до 7,8. Образцы центрифугируются на скорости 4000 оборотов в минуту в течение 10 минут при температуре 4°С. Аккуратно удаляется жидкая фаза пипеткой и добавляется 5 мл ФСБ к осадку. Пипеткой объемом 1 мл, осадок разводится в ФСБ и доливается буфер до 5 мл, далее смесь перемешивается. Далее следует дважды повторить процедуру отмывки (центрифугирование образца, удаление жидкой фазы, добавление буфера) при указанных параметрах.

Для выделения митохондрий необходимо выполнить следующую последовательность действий:

1) Выделить МНК на феколе клетки для культивирования, затем произвести лизис эритроцитов в течение 15 минут в пропорции 1 к 10 в натрий-фосфатном буфере PBS, затем произвести одну отмывку клеток, для чего произвести центрифугирование в течение 10 мин со скоростью 1500 оборотов в минуту.

2) Произвести окрашивание митотрекером красным (MitoTracker Red 580). Использовать на 10 мл - 40 мкл красителя, далее инкубировать 20 минут при 37 градусах в CO2 инкубаторе, после инкубации произвести центрифугирование и 1 отмывку в PBS в течение 10 мин на скорости 1500 оборотов в минуту.

3) Произвести выделение митохондрий, для чего осадок МНК суспендировать в гипотонической среде (10 MMTrisHCl, рН 7,6) в течение 7 мин; осмотический шок останавливать добавлением 0,25 М сахарозы. Суспензию центрифугировать 10 мин при 600 об/мин, супернатант сохранить, а осадок вторично подвергнуть осмотическому шоку и снова центрифугировать. Супернатанты объединить и центрифугировать 20 мин при 12000 об/мин для осаждения митохондрий. Осадок митохондрий суспендировать в среде, содержащей 0,25 М сахарозу, 2 мМ ЭДТА, KCl 10 мМ, MgCl2, 1 мМ цистеин 0,05%, рН 7,4.

4) Произвести инкубацию с клетками (1,2,3 сутки), для чего использовать 500 мл суспензии митохондрий на 3 мл культивируемой среды (1 млн клеток на 1 мл). Далее лизировать образцы (суспензии митохондрий) в течение двух часов при температуре - 80°С. Пробу (суспензии митохондрий) разморозить при комнатной температуре, добавить до 5 мл ФСБ и центрифугировать на скорости 4000 об/мин в течение 4 минут при комнатной температуре. Удалить жидкую фазу пипеткой. Для количественного определения АТФ в клетках использовать ATPBioluminescentAssayKit (BAK). Пипеткой добавить в лунки 96-и луночного плоскодонного культурального планшета ТРР по 0,1 мл исследуемого образца, маркировать лунки планшета. Согласно инструкции производителя BAK подготовить люминицентный реагент, и в объеме 0,1 мл смешать с образцом в лунке. Для каждой серии эксперимента приготовить контрольный образец (смесь стандарта АТФ из BAK и ATPAssayMix из BAK в пропорции 1:1 объемом 0,1 мкл), а также образцы калибровочных кривых согласно инструкции BAK.

После подготовительных процедур используется 96-и луночный плоскодонный культуральный планшет ТРР. Механической пипеткой подготовленные образцы помещаются в лунки планшета в объеме 0,1 мл, и делается отметка соответствия об их размещении в лабораторном журнале. Согласно инструкции BAK готовится люминесцентный реагент, который в объеме 0,1 мл смешивается с образцом в лунке. Для каждой серии эксперимента подготавливается контрольный образец (смесь стандарта АТФ из BAK и ATPAssayMix из BAK в пропорции 1:1 объемом 0,1 мкл), а также образцы для построения калибровочной кривой, согласно инструкции BAK. Далее значение интенсивности люминесценции регистрируется с помощью детектора конфокального микроскопа. Детекция проводится в спектре свечения люцеферина желтого (в видимом диапазоне ~ 500-700 нм) с ожидаемым максимумом около 536 нм. Для анализа каждой лунки данные снимаются в нескольких точках. Для построения калибровочной кривой используются стандарты в разной степени разведения и без него. После построения калибровочных кривых берутся пробы пациентов с тяжелыми клиническими проявлениями НПР, где проводятся измерения степени интенсивности люминесценции АТФ с помощью лазерного конфокального микроскопа. На основании полученных спектральных данных о пиковой средней величине интенсивности рассчитывалась концентрация АТФ (мг/мл) по формуле:

Где Inexp - интенсивность свечения образца, Inst - интенсивность свечения стандарта, [АТФ]st - концентрация АТФ в стандарте бралась равной 0.1 мг/мл

По результатам подсчитанной концентрации АТФ делается прогностический вывод об эффективности проводимой химиотерапии посредством взятия нормы концентрации АТФ для здоровой функционирующей клетки (1,04±0.14 мг/мл), при которой осуществляется лекарственный транспорт и не наблюдается риска развития гепатотоксических эффектов в данный момент терапии. Концентрация АТФ в клетке более (0,8±0,112) сигнализирует о наступлении апоптоза клетки. Потери АТФ в клетке более 70% (0,312±0,042) сигнализируют о некрозе клеток.

Таким образом, в заявляемом способе, включающем исследование крови до и после лечения, определяют и используют значение концентрации макро-биологического маркера - АТФ в митохондриях клеток крови пациентов, что позволяет произвести прогноз риска возникновения гепатотоксичности и лекарственной резистентности пациентов, оценив, таким образом, эффективность проводимой химиотерапии в нужный момент времени.

Флуоресцентный способ прогнозирования эффективности химиотерапии у детей, больных острым лимфобластным лейкозом, путем определения концентраций аденозинтрифосфата в митохондриях, при котором производят забор крови до и после химиотерапии, выделяют флуоресцентный макро-биомаркер эффективности химиотерапии, где макро-биомаркером является концентрация аденозинтрифосфата в митохондриях клеток крови, которую определяют автоматизировано, с помощью лазерного конфокального микроскопа, путем регистрации интенсивности флуоресценции макро-биомаркера, где концентрация АТФ, равная (1,04±0,14 мг/мл), соответствует здоровой функционирующей клетке, при которой осуществляется лекарственный транспорт и не наблюдается риска развития гепатотоксических эффектов в данный момент терапии; концентрация АТФ в клетке более (0,8±0,112 мг/мл) сигнализирует о наступлении апоптоза клетки; потеря АТФ в клетке более 70% (0,312±0,042 мг/мл) сигнализирует о некрозе клеток; что позволяет провести прогноз риска возникновения гепатотоксичности и лекарственной резистентности пациентов, оценив, таким образом, эффективность проводимой химиотерапии в нужный момент времени.
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 48 items.
25.08.2017
№217.015.c59d

Комплекс микросейсмического контроля разработки континентальных и шельфовых месторождений углеводородов на основе площадных систем наблюдения и суперкомпьютерных методов обработки информации

Изобретение относится к геофизическим методам исследования процессов разработки месторождений углеводородов, в частности к комплексам микросейсмического контроля разработки континентальных и шельфовых месторождений углеводородов, содержащим, по крайней мере, один телеметрический сейсмический...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002618485
Дата охранного документа: 03.05.2017
25.08.2017
№217.015.ca3c

Способ определения концентрации адсорбатов наночастиц серебра на поверхности нанопористого кремнезема

Изобретение относится к области нанотехнологий, а также может быть использовано в биологии, медицине, гетерогенном катализе. Способ определения концентрации адсорбатов наночастиц (НЧ) серебра на поверхности нанопористого кремнезема включает приготовление раствора исследуемого вещества,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002620169
Дата охранного документа: 23.05.2017
19.01.2018
№218.016.0286

Способ защиты стали от коррозии и наводороживания органическими соединениями в средах, содержащих сульфатредуцирующие бактерии

Изобретение относится к области защиты металлов от коррозии, наводороживания и развития сульфатредуцирующих бактерий (СРБ) и может быть использовано в водно-солевых средах, содержащих СРБ. Способ включает введение в коррозионную среду ингибитора-бактерицида, при этом в качестве...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002630149
Дата охранного документа: 05.09.2017
20.01.2018
№218.016.1004

Способ генетического контроля экзоцитоза на основе генетических конструкций для трансфекции клеток астроглии

Изобретение относится к области молекулярной биологии и касается генетической конструкции для осуществления способа генетического контроля экзоцитоза. Представленная конструкция имеет последовательность SEQ ID NO:4 и получена с использованием лентивирусного вектора на основе ВИЧ-1...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002633691
Дата охранного документа: 16.10.2017
20.01.2018
№218.016.1062

Способ молекулярной диагностики митохондриальных патологий на основе технологии пиросеквенирования

Изобретение относится к области медицины и предназначено для выявления патогенных мутаций митохондриальной ДНК. Проводят реакцию просеквенирования с системой, состоящей из прямого праймера, обратного праймера, меченного биотином, и секвенирующего праймера. Всего разработаны четыре системы...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002633752
Дата охранного документа: 17.10.2017
04.04.2018
№218.016.36b8

Экспериментальная установка (стенд) для изучения многофакторной зависимости коэффициента демпфирования сваи при взаимодействии с грунтом

Изобретение относится к области вибрационной техники, а именно к конструкциям свайных фундаментов зданий и сооружений гражданского и промышленного назначения. Экспериментальная установка состоит из лотка, грунтового массива и моделируемой сваи. Вибрируемый на вибростенде металлический лоток с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002646540
Дата охранного документа: 05.03.2018
10.05.2018
№218.016.3c12

Флуоресцентный способ прогнозирования эффективности химиотерапии у детей, больных острым лимфобластным лейкозом

Изобретение относится к области биофизики, а именно к медицинской физики, и описывает способ прогнозирования эффективности химиотерапии у детей, больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), в частности прогнозирования рисков возникновения лекарственной резистентности при проведении химиотерапии...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002647834
Дата охранного документа: 19.03.2018
09.06.2018
№218.016.5c34

Способ ранней генетической диагностики риска развития сахарного диабета 2 типа

Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской генетике, и предназначено для ранней генетической диагностики риска развития сахарного диабета (СД) 2 типа. Осуществляют экстракцию ДНК из периферической крови с последующим проведением полимеразной цепной реакции в режиме...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002655635
Дата охранного документа: 29.05.2018
20.06.2018
№218.016.63d7

Устройство и способ для дистанционной беспроводной диагностики функционального состояния сердечно-сосудистой системы человека на основе двигательной активности и фотоплетизмографии

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к медицинской технике, и может быть использована в функциональной диагностике состояния сердечно-сосудистой системы амбулаторно. Устройство для дистанционной беспроводной диагностики функционального состояния сердечно-сосудистой системы...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002657966
Дата охранного документа: 18.06.2018
29.06.2018
№218.016.68b9

Биотрансплантат для лечения дисплазии суставов и способ его получения

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой биотрансплантат для лечения дисплазии суставов, характеризующийся тем, что он содержит мезенхимальные стволовые клетки (МСК) из аутологичного материала, отличающийся тем, что содержит от 5 млн....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002659204
Дата охранного документа: 28.06.2018
Showing 1-10 of 11 items.
25.08.2017
№217.015.c59d

Комплекс микросейсмического контроля разработки континентальных и шельфовых месторождений углеводородов на основе площадных систем наблюдения и суперкомпьютерных методов обработки информации

Изобретение относится к геофизическим методам исследования процессов разработки месторождений углеводородов, в частности к комплексам микросейсмического контроля разработки континентальных и шельфовых месторождений углеводородов, содержащим, по крайней мере, один телеметрический сейсмический...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002618485
Дата охранного документа: 03.05.2017
25.08.2017
№217.015.ca3c

Способ определения концентрации адсорбатов наночастиц серебра на поверхности нанопористого кремнезема

Изобретение относится к области нанотехнологий, а также может быть использовано в биологии, медицине, гетерогенном катализе. Способ определения концентрации адсорбатов наночастиц (НЧ) серебра на поверхности нанопористого кремнезема включает приготовление раствора исследуемого вещества,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002620169
Дата охранного документа: 23.05.2017
19.01.2018
№218.016.0286

Способ защиты стали от коррозии и наводороживания органическими соединениями в средах, содержащих сульфатредуцирующие бактерии

Изобретение относится к области защиты металлов от коррозии, наводороживания и развития сульфатредуцирующих бактерий (СРБ) и может быть использовано в водно-солевых средах, содержащих СРБ. Способ включает введение в коррозионную среду ингибитора-бактерицида, при этом в качестве...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002630149
Дата охранного документа: 05.09.2017
20.01.2018
№218.016.1004

Способ генетического контроля экзоцитоза на основе генетических конструкций для трансфекции клеток астроглии

Изобретение относится к области молекулярной биологии и касается генетической конструкции для осуществления способа генетического контроля экзоцитоза. Представленная конструкция имеет последовательность SEQ ID NO:4 и получена с использованием лентивирусного вектора на основе ВИЧ-1...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002633691
Дата охранного документа: 16.10.2017
20.01.2018
№218.016.1062

Способ молекулярной диагностики митохондриальных патологий на основе технологии пиросеквенирования

Изобретение относится к области медицины и предназначено для выявления патогенных мутаций митохондриальной ДНК. Проводят реакцию просеквенирования с системой, состоящей из прямого праймера, обратного праймера, меченного биотином, и секвенирующего праймера. Всего разработаны четыре системы...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002633752
Дата охранного документа: 17.10.2017
04.04.2018
№218.016.36b8

Экспериментальная установка (стенд) для изучения многофакторной зависимости коэффициента демпфирования сваи при взаимодействии с грунтом

Изобретение относится к области вибрационной техники, а именно к конструкциям свайных фундаментов зданий и сооружений гражданского и промышленного назначения. Экспериментальная установка состоит из лотка, грунтового массива и моделируемой сваи. Вибрируемый на вибростенде металлический лоток с...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002646540
Дата охранного документа: 05.03.2018
10.05.2018
№218.016.3c12

Флуоресцентный способ прогнозирования эффективности химиотерапии у детей, больных острым лимфобластным лейкозом

Изобретение относится к области биофизики, а именно к медицинской физики, и описывает способ прогнозирования эффективности химиотерапии у детей, больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), в частности прогнозирования рисков возникновения лекарственной резистентности при проведении химиотерапии...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002647834
Дата охранного документа: 19.03.2018
12.12.2019
№219.017.ec4e

Способ получения усиленного сигнала комбинационного рассеяния света от молекул сывороточного альбумина человека в капле жидкости

Изобретение относится к оптике и биофизике. Cпособ получения усиленного сигнала комбинационного рассеяния света от молекул сывороточного альбумина человека в капле жидкости с помощью плазмонного эффекта, индуцируемого на наночастицах серебра когерентным лазерным излучением, отличается тем, что...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002708546
Дата охранного документа: 09.12.2019
29.04.2020
№220.018.1a5d

Оптический сенсор с плазмонной структурой для определения химических веществ низких концентраций и способ его получения

Изобретение относится к оптике. Способ получения оптического сенсора включает создание многослойной плазмонной структуры, содержащей слой наночастиц. На квадратное, размером 1×1 см, химически очищенное кварцевое стекло (марки КУ-1) наносят, а затем термически высушивают при температуре 60-100°С...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002720075
Дата охранного документа: 23.04.2020
12.04.2023
№223.018.47b8

Способ приготовления клеточных блоков на основе эксфолиативного материала шейки матки и цервикального канала

Изобретение относится к области биологии и медицины, в частности к гистологии и патологической анатомии. Для приготовления клеточных блоков из эксфолиативного материала шейки матки и цервикального канала накапливают клеточный осадок в центрифужной пробирке с помощью центрифугирования первичного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002740431
Дата охранного документа: 14.01.2021
+ добавить свой РИД