Результат интеллектуальной деятельности: Средство для лечения ишемии сосудов головного мозга

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и может быть использовано для лечения ишемического повреждения мозга.

Одним из известных препаратов, улучшающих кровоснабжение мозга, является кавинтон [Машковский М.Д. // Лекарственные средства, 15 издание, Москва, Новая Волна, 2005, 407-408]. Его лечебное действие является однонаправленным и заключается в расширении сосудов головного мозга. Положительным эффектом кавинтона, как избирательного церебрального вазодилататора у больных с цереброваскулярными расстройствами, является активация гликолиза мозговой ткани [Чуканова Е.И. // Кавинтон в комплексном лечении пациентов с хронической цереброваскулярной недостаточностью. Ж. неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2009. Т. 109. №9. С. 35-39].

Однако этого эффекта недостаточно для улучшения кровоснабжения мозга. Известно, что ишемия мозговой ткани приводит к резкому ухудшению не только кровоснабжения, но и трофики ткани - накоплению окисленных продуктов обмена веществ, что в свою очередь инактивирует мембраносвязанные ферменты (супероксиддисмутазу и каталазу) и приводит к дальнейшему расстройству обмена веществ. Для предотвращения этих последствий необходимо восстановление механизмов антиоксидантной защиты мозга.

Еще одним известным препаратом для лечения больных ишемией является антиоксидантный препарат эмоксипин (6-метил-2-этилпиридин-3-ол), действие которого было изучено на моделях экспериментального ишемического инсульта [28]. Эмоксипин оказался эффективным при терапии острого нарушения мозгового кровообращения (ОНМК), вызванного окклюзией сонных артерий крыс. Он достоверно снижал смертность животных, уменьшал тяжесть локальной и общемозговой неврологической симптоматики, увеличивал латентный период развития выраженных клинических проявлений. Высокая терапевтическая эффективность эмоксипина в эксперименте на крысах обусловлена ингибированием свободно-радикального окисления мембранных липидов, что обеспечивает снижение уровня продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) [Агафонова И.Г. и др. Сравнительный анализ изменения мозгового кровообращения у крыс с индуцированным острым нарушением мозгового кровообращения методом магнитно-резонансной томографии // Тихоокеанский медицинский журнал. 2012. №1. С. 104-107]. Эмоксипин не оказывает влияния на образовавшиеся тромбы во время ишемии.

Известен препарат гистохром®, разработанный в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН (ТИБОХ), используемый для лечения ишемической болезни сердца и ограничения зоны некроза при инфаркте миокарда [RU 2137472 С1, 20.09.1999], воспалительных заболеваний сетчатки и роговицы глаза [RU 2134107 С1, 10.08.1999], а также для лечения геморрагического инсульта [RU 2266737 С1, 27.12.2005]. Он представляет собой лекарственную форму индивидуального вещества - природного хиноидного пигмента морских беспозвоночных эхинохрома А (2,3,5,6,8-пентагидрокси-7-этил-1,4-нафтохинона, номер государственной регистрации Р №002362/01-2003) [RU 1833544 С].

Эффективность гистохрома при геморрагическом инсульте была изучена в клинике у больных с кровоизлиянием в головной мозг, развившимся вследствие артериальной гипертензии. Препарат назначался ежедневно на протяжении пяти дней для введения по 5 мл 1% раствора гистохрома внутривенно. Характер инсульта верифицировался методом магнитно - резонансной томографии (МРТ). Согласно данным МРТ были выявлены размеры гематомы и смещение срединных структур мозга. Положительный терапевтический эффект после применения гистохрома был отмечен у неврологических больных через две недели после терапии.

Однако гистохром достаточно лабилен на воздухе; его субстанция характеризуется низкой растворимостью в воде и физиологическом растворе.

С целью поиска веществ, свободных от вышеуказанных недостатков, в ТИБОХ был синтезирован ряд полигидрокси-1,4-нафтохинонов и, в частности, 5,6,8-тригидрокси-2,3-диглутатионил-7-этил-1,4-нафтохинон формулы (1), обозначенный (GluNAZ) [SU 1822549 A3, 20.08.1996; Anufriev V.Ph., Novikov V.L., et. al. // Synthesis of some hydroxynaphthazarins and their cardioprotective effects under ischemia-reperfusion in vivo. Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. Vol.8. No. 6. P. 587-592].

Фармакологические исследования показали, что эти соединения обладают свойством протектора миокарда при его ишемии и реперфузии, в частности, GluNAZ сокращает зону инфаркта миокарда до 50%. Эффект GluNAZ и других производных нафтазарина в одних и тех же экспериментальных условиях сравнивался с верапамилом (блокатором кальциевых каналов) и нитроглицерином (кардиопротекторным средством). Было установлено, что соединение GluNAZ увеличивает продолжительность жизни животных после индуцированной ишемии миокарда, улучшает неврологический статус животных и поисково - исследовательскую активность животных.

Указание на его противоишемические свойства, проявляемые при воздействии на сосуды головного мозга, подверженные ишемическому повреждению, в доступной патентной и научно-технической литературе не обнаружено.

Задача изобретения - расширение арсенала средств для лечения головного мозга от ишемического повреждения при острых нарушениях мозгового кровообращения.

Поставленная задача решена применением 5,6,8-тригидрокси-2,3-диглутатионил-7-этил-1,4-нафтохинона в качестве средства для лечения сосудов головного мозга от ишемического повреждения при острых нарушениях мозгового кровообращения.

GluNAZ нормализует механизм антиоксидантной защиты ткани мозга при ишемии и гипоксии. Его противоишемическое действие обусловлено антигипоксическим и антиагрегантным эффектом, увеличением кровоснабжения мозга. Изобретение может быть использовано для лечения ишемического повреждения мозга.

Новое применение GluNAZ в качестве средства для лечения головного мозга от ишемических повреждений при острых нарушениях мозгового кровообращения не вытекает из уровня техники в данной области и не очевидно для специалиста.

Соединение GluNAZ получено, как описано в SU 1822549 A3, 20.08.1996 (пример 6).

Исследование противоишемического действия GluNAZ на сосуды головного мозга

Авторами проведено сравнительное изучение терапевтического действия заявляемого средства - GluNAZ и препарата гистохром®, который применяется для лечения геморрагического инсульта.

Изучение противоишемического эффекта GluNAZ проводили на крысах линии Вистар. С этой целью были выполнены следующие исследования.

Тестирование животных перед экспериментом

Для определения устойчивости к эмоциональному стрессу все животные за неделю до операции были протестированы в тесте «Открытое поле» и на основании полученных результатов разделены на три группы: 1 - устойчивые, 2 - предрасположенные к стрессу, 3 - средние (промежуточные) [Агафонова И.Г., Колосова Н.Г. и др. // Влияние гистохрома на состояние сосудов головного мозга и поисково-исследовательскую активность преждевременно стареющих крыс OXYS. Магнитно-резонансная томография в диагностике хронической ишемии. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2007. Т. 143. Вып. 4. С. 446-450]. Для эксперимента были отобраны животные, предрасположенные к эмоциональному стрессу.

Модель острого нарушения мозгового кровообращения (ОНМК)

В исследование были включены 72 крысы-самки линии Вистар в возрасте 8 месяцев и массой 200-220 г. Животные были размещены по 2 особи в клетке, находились в стандартных условиях содержания в виварии при естественном световом режиме и свободном доступе к воде и пище.

Индукцию ОНМК вызывали окклюзией левой средней мозговой артерии (лСМА) у предварительно обездвиженных крыс внутрибрюшинной инъекцией раствора рометара (xylazinum, SPORA, Prague) в концентрации 5,5 мг/кг и раствора реланиума в концентрации 37 мг/кг. Крысам была наложена постоянная лигатура на левую среднюю мозговую артерию согласно [Агафонова И.Г., Котельников В.Н. и др. // Сравнительное изучение влияния гистохрома и мексидола на структурно-функциональные характеристики мозга преждевременно стареющих крыс OXYS методом МРТ. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2010. Т. 150. Вып. 12. С. 686-691].

В левой средней мозговой артерии, после наложения постоянной лигатуры, был сделан прокол иглой для удаления крови из артерии, а затем в артерию снова была введена собранная из проколотой артерии кровь крысы. В качестве контроля использовали ложно оперированных животных.

После индукции ишемии у животных был определен каскад ишемических повреждений. После окклюзии лСМА в контрольной группе отмечалось до 40% падения животных в первые сутки после операции. Из выживших животных были сформированы контрольная и экспериментальные группы по 12 голов в каждой. В таблице 1 приведены данные о количестве выживших животных после терапии.

Оценка поведенческих реакций животных

По мере нарастания симптомов нарушения мозгового кровообращения, вызванного механической окклюзией лСМА, отмечено нарастание у животных когнитивных расстройств. Задержка латентного периода выхода оперированных животных в центр исследуемого пространства через 24 ч после операции составила 21-30 мин по сравнению с интактным контролем (1-2 мин). Через 48 ч после операции время латентного периода сократилось до 18-21 мин. Через 72 ч время латентного периода сократилось до 17-20 мин. Через неделю латентный период существенно сократился, приблизившись к 7-12 мин. Через три недели латентный период восстанавливался до нормы 1-3 мин.

После терапии эффект исследуемых веществ в течение первых 48 ч статистически не отличался. Время латентного периода составляло: через 24 часа - 21-24 мин для обоих препаратов гистохром/GluNAZ; через 48 часов 13-16/11-14 мин, соответственно; через 72 часа 12-16/7-10 мин; через неделю 9-12/3-7 мин; через три недели 7-12/3-6 мин. В промежутках животные не тестировались, что исключало фактор тренировки.

На фиг. 1 представлены результаты исследования поведенческой реакции крыс после ОНМК. Выход животного в центр поля.

Оценка неврологических нарушений

Оценку неврологических нарушений проводили по шестибальной шкале Menzes. Она состоит из следующих позиций: 6 - отказ вытянуть левую переднюю лапу полностью; 5 - неустойчивое кружение налево; 4 - постоянное кружение налево; 3 - падение налево; 2 - никакого движения; 1 - отсутствие спонтанных движений; 0 - подавленный уровень сознания. Оценку симптомов по шкале проводили за сутки до операции, и после через 6, 12, 24, 48 и 72 ч, затем 7, 14 и 21 суток. У контрольных животных после операции отмечен подавленный уровень сознания. Около 40% животных в контроле погибли, у остальных крыс неврологический статус восстанавливался медленно. Через 48 ч крысы начинали двигаться с падением и кружением налево. Через 72 ч начинали двигаться с неустойчивым движением налево. Животные экспериментальных групп после терапии препаратами восстанавливались быстрее и уже через 48 ч начинали двигаться с неустойчивым движением налево.

На фиг. 2 представлены результаты исследования неврологического статуса животных после терапии.

Острая токсичность

Для определения токсичности использовали лабораторных белых беспородных мышей. Острую токсичность препаратов оценивали по формуле Кербера:

LD₅₀=LD₁₀₀-Σ(z×d)/m;

где ЛД₅₀ - показатель гибели 50% животных; ЛД₁₀₀ - показатель гибели всех животных; z - половина суммы числа животных, павших от двух последних доз; d - интервал между каждыми двумя последними дозами; m - число животных на каждую дозу [Бойд У. Основы иммунологии, (под ред. Гурвич А.Е.) М.: Мир. 1969. 647 С.]. В результате тестирования препаратов была установлена доза 50%-ной гибели животных: LD₅₀ гистохрома >30 мг/кг; LD₅₀ GluNAZ>1480 мг/кг.

Терапия

Курсовое лечение исследуемыми препаратами проводили согласно инструкциям к применению 1% гистохрома, как препаратом сравнения. Раствор 1% гистохрома вводили внутривенно в дозе 1 мг/кг, пятикратно, в течение 5 дней, через неделю и через две недели повторяли схему. GluNAZ вводили в той же дозе и по той же схеме, за одним исключением - однократную дозу делили пополам и вводили два раза в сутки. Первую инъекцию препаратов начинали через 15 мин после операции. Следующую инъекцию делали через сутки. Ложнооперированным животным вводили физиологический раствор в эквивалентной дозе по схеме, идентичной введению препаратов.

Измерение артериального давления

Уровень артериального давления (систолического и диастолического, САД/ДАД) измеряли у спящих крыс, чтобы избежать излишнего элемента волнения. Введение исследуемых веществ интактным крысам не вызывал резкого изменения артериального давления, после операции резкого снижения артериального давления также не отмечалось. Результаты представлены в таблице 2.

Электрокардиография

На протяжении всего эксперимента вели мониторинг ЭКГ, частоту сердечных сокращений (ЧСС), а также контролировали температуру и дыхание животных во время и после операции. Для этого была использована приставка к томографу «Animal Physiological Monitoring and Gating System», предназначенная для мониторинга ЭКГ, ЧСС, дыхания и температуры тела животных. Данные ЭКГ снимали у наркотизированных животных. Работу сердечной мышцы регистрировали во II втором отведении.

На фиг. 3 (а-в) представлена ЭКГ крыс до и после индукции острого нарушения мозгового кровообращения по ишемическому типу: а) ЭКГ интактного животного до операции, сердечный ритм в норме; б) состояние тахикардии через 15 мин после операции; в) состояние брадикардии через 1 ч после операции. Через неделю после терапии обоими препаратами ЭКГ и ЧСС стабилизировались до нормы контрольного животного.

Томография и ангиография

Томография головного мозга и ангиография сосудов были выполнены на томографе для экспериментальных исследований «PharmaScan US 70/16» (Bruker) с напряженностью магнитного поля 7.0 Тесла, частотой процессора 300 MHz и катушкой типа BGA 09Р. Используемые протоколы томографии: Turbo spin echo sequence для получения T₁ - взвешенных изображений (T₁-ВИ) и Т₂ - взвешенных изображений (Т₂-ВИ). Используемые протоколы ангиографии: 3 - Dimensional Time of Flight (3D-TOF) ангиография и 2D-TOF flow compensation, PC angiography, Head_Angio.

Перед сканированием животных обездвиживали внутрибрюшинной инъекцией раствора рометара (xylazinum, SPORA, Prague) в концентрации 5,5 мг/кг и раствора реланиума в концентрации 37 мг/кг. Первое сканирование животного проводили до операции, второе сразу после операции.

Трехмерное изображение сосудистого бассейна получали в трехмерном изображении FLASH_3D со следующими параметрами: TR/TE=15.0/2.2; угол наклона 20; поле изображения 4,0/4,0/4,0; эффективная толщина среза 40 мм; перекрытие 40,0 мм; матрица 256/192/192 элементов; одно усреднение сигнала, время сканирования 14 мин. С помощью программного обеспечения томографа была выполнена МIР - реконструкция сосудов (Maximal Intensity Projection) для выявления вазомоторной реакции с использованием пакета ROI (Region of Instrument), предназначенного для обсчета данных. Оценку сосудистого бассейна выполняли после МIР - реконструкции. Диаметр сосудов церебрального бассейна крыс в течение эксперимента измеряли с использованием двух точек устанавливаемых МРТ - курсором: первой - на границе адвентиция / медия латеральной стенки артерии, второй - на границе медия / адвентиция медиальной стенки до и после операции.

На фиг. 4 представлена ангиография ГМ крысы линии Вистар через 15 мин после окклюзии лСМА, где верифицировано отсутствие кровенаполнения артерий средней мозговой артерии после индукции ОНМК. В зоне левого полушария регистрируется потеря сигнала от артерий, а в зоне правого полушария происходит усиление интенсивности сигнала от артерий неповрежденного полушария.

Дальнейший мониторинг артериального кровенаполнения показывает, что постепенно, в течение двух недель происходит перераспределение кровенаполнения по свободным от окклюзии артериям. В контрольной группе животных после операции интенсивность сигнала от артерий неповрежденного полушария интенсивно увеличивалась в течение трех суток, затем начинала снижаться. При оперативной терапии исследуемыми веществами, в интервале терапевтического окна, интенсивность сигнала от артерий левого полушария постепенно увеличивалась в среднем до 24% по сравнению с контролем. Это говорит о восстановлении кровоснабжения мелких артерий после ишемии. Интенсивность сигнала от артерий правого полушария также менялась. У контрольных животных после операции она была увеличена почти до 20% и в течение трех суток постепенно снижалась. Это говорит о перераспределении кровенаполнения мелких артерий. Изменение размеров мозговых артерий (в мм) после окклюзии представлено в таблице 3.

Статистический анализ

Результаты обрабатывали по правилам вариационной статистики с использованием пакета программы MS Office Excel 2003 и пакетом программ STATISTICA 5.5. Достоверность различий между группами вычисляли t-критерием Стьюдента с определением средней арифметической (М) и ее стандартной ошибки (m). Достоверным считали значение при р<0,05. Количество измерений размера сосудов было выполнено программным обеспечением томографа и составило до 90 измерений на каждую крысу (таблицы 2, 3).

Томография

Через сутки после операции у крыс начали появляться гиперинтенсивные зоны в области коры головного мозга. На фиг. 5 (1-16) продемонстрированы участки головного мозга на Т₂-ВИ. Для количественной оценки зоны повреждения, вызванного ишемией, мозг сканировали в трех направлениях: фронтальной, сагиттальной и аксиальной плоскостях. Для получения Т₂-взвешенных изображений (Т₂-ВИ) использовали импульсную последовательность Head_Turbo_RARE_T₂ со следующими параметрами: матрица 256×256, толщина среза 1 мм, площадь обзора 4.0×4.0 см², TR/TE - 2500/33.0 мсек. Для получения T₁-взвешенных изображений (T₁-ВИ) использовали импульсную последовательность Head Turbo RARE T₁: матрица 256×192, толщина среза 1 мм, площадь обзора 4.0×4.0 см², TR/TE - 1300/9.0 мсек с использованием программного обеспечения томографа ParaVision 3.0.2. Сканирование животных проводили до операции (контроль) и через 15 мин после операции. Далее мониторинг велся через 1, 2, 3, 6, 12, 24, 48 и 72 ч; затем - через 7, 14 и 21 суток [Агафонова И.Г., Колосова Н.Г. и др. Влияние гистохрома на состояние сосудов головного мозга и поисково-исследовательскую активность преждевременно стареющих крыс OXYS. Магнитно-резонансная томография в диагностике хронической ишемии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2007. Т. 143. Вып. 4. С. 446-450].

На фиг. 5 показаны изображения ГМ до операции (1-8) и после операции (9-16). На изображениях (12-14) - полукругом обведен участок мозга, где прослеживаются зоны точечного ишемического повреждения в виде гиперинтенсивных точек на Т₂-ВИ по сравнению с контролем (3-5). Зона отека, вызванная ишемией, наблюдалась в левом полушарии. Через 24 ч после ишемии на Т₂-ВИ определялась зона повышенного сигнала за счет развития цитотоксического отека. По результатам морфометрического анализа показано, что поврежденное полушарие деформировано, и его объем увеличивался на 11-14% по сравнению с контралатеральным полушарием за счет субарахноидального пространства и сдавливания желудочков. К концу недели у оперированных крыс объем деформированного полушария уменьшался, не достигая первоначального на 3-6%. Объем отека контрольных оперированных крыс верифицировался уже через сутки на Т₂-ВИ и через неделю достигал 39±4,3% от всего объема полушария, (Р<0,05).

Полученные данные показывают, что на разработанной модели ишемии мозга экспериментальных животных, основной очаг поражения развивается в первые сутки после начала ишемии. При этом у контрольных оперированных животных очаг продолжал увеличиваться за счет зоны пенумбры. У леченых животных зона цитотоксического отека не увеличивалась.

Локализация очагов повреждения полностью совпадала с гипотетическими зонами мозга, ответственными за иннервацию конечностей животных. Степень ответа поврежденной лапы (контралатеральной поврежденному полушарию) снижалась постепенно в течение двух недель и к концу этого периода почти приближалась к норме до 92±2,6%, (р<0,05).

У леченых крыс процесс восстановления поврежденной зоны мозга происходил быстрее, к концу первой недели степень ответа составляла 87±5,4%, (Р<0,05). При этом через две недели восстанавливался вес животных (контрольных и леченых) со 186,5±5,2 г после операций почти до первоначального 226,2±3,3 (по сравнению с интактными - 241±2,1).

В течение «терапевтического окна» - отрезка времени, равного 3-6 ч, проводили терапию исследуемыми препаратами. Длительность существования «ишемической полутени» индивидуальна для каждого животного. У более гиперактивных крыс (предрасположенных к стрессу) этот эффект наблюдался быстрее, по сравнению с крысами более пассивного статуса, поэтому в эксперименте оценивали крыс, предрасположенных к стрессу. Формирование очага ишемии у контрольных оперированных животных увеличивалось в течение недели. У леченых животных зона отека после ишемии была меньших размеров (таблица 2).

При окклюзии лСМА происходит целый каскад повреждений, в частности агрегация тромбоцитов и увеличение вязкости крови, что приводит к образованию микротромбов. Повреждение эндотелиального слоя сосудистой стенки также ведет к патологическим последствиям, а именно возможна гиперплазия интимы или атеросклеротическое поражение медии. При снижении кровотока происходит изменение функции эндотелия (выделение оксида азота, вызывающего дилатацию сосуда) [Agafonova I.G., Kotel’nikov V.N., Eichoff U. // Applied Magnetic Resonance. 2014. Vol. 45. No 5. Р. 527-536].

В таблице 4 представлены данные изменения интенсивности сигнала (ИС) от поврежденного и неповрежденного полушарий в двух режимах.

Как видно из таблицы 4, ИС на Т₂-ВИ ткани левого полушария (К*) через 24 ч значительно более выражена относительно ткани симметричного правого полушария. Это говорит о нарастании цитотоксического отека после ишемии. Через 72 ч отек продолжал увеличиваться. После терапии гистохромом и GluNAZ через 48 ч на Т₂-ВИ интенсивность сигнала снижена по сравнению с К* на 23-28%, через 72 ч область отека не увеличивалась.

На фиг. 6 (а-б) представлены места локализации цитотоксического отека у крыс после ОНМК. Стрелками указаны гиперинтесивные области двух смежных по вертикали срезов головного мозга животного. В левом полушарии, в области лСМА выявлены изменения, соответствующие острому нарушению кровообращения. Определяется гиперинтенсивная зона MP-сигнала на Т₂-ВИ, соответствующая зоне нарушения мозгового кровообращения по ишемическому типу. У оперированных животных увеличение объема цитотоксического отека отмечено через 24 ч, которое продолжает увеличиваться и через 72 ч. Исследуемые вещества сдерживают увеличение зоны ишемии. Причем эффект GluNAZ проявляется уже через 24 ч, у гистохрома эффект более пролонгированный и отмечен через 48 ч. Основными зонами ишемического повреждения в данной модели является кора, включая сенсомоторную область, и область стриатума.

На фиг. 7 показано морфометрическое измерение патологических зон у крыс после операции с помощью программного обеспечения томографа ROI (Region of Interest). Зеленым цветом выделена зона отека кортикальной зоны через 24 ч. Желтым цветом выделен участок ишемии, который появляется через 72 ч у животных без терапии. Зона отека оперированных контрольных животных продолжает увеличиваться в течение трех суток, как в корковом слое, так и в области стриатума. В таблице 5 представлены данные по изменению объема отека после терапии.

Как видно из таблицы 5, объем отека увеличивался на протяжении трех суток до 34-40% по отношению к среднему объему мозга крыс. У животных после гистохрома зона отека выросла примерно в среднем до 17-19% по отношению к среднему объему головного мозга крыс. Этот объем цитотоксического отека оставался увеличенным на протяжении 72 ч. Затем зона отека постепенно уменьшалась.

GluNAZ также задерживал увеличение зоны отека до 19-21% по отношению к общему-объему головного мозга крыс. Эффективность действия препарата наблюдалась уже через 24-48 ч. Это может свидетельствовать о начале реперфузии и снижении цитотоксического отека в данной зоне патологии. Возможно, оба препарата снижают процессы тромбообразования и восстанавливают мозговое кровообращение в капиллярах и мелких артериях.

Для верификации нарушения и/или восстановления проницаемости гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) использовался контрастный препарат «Магневист» (Schering AG, Германия). Накопление контраста в очаге ишемии связано с повреждением эндотелия капилляров. В течение формирования ишемического повреждения на T₁-ВИ получали сигнал от ткани, который соответствовал локализации повреждения. Используемый контрастный агент снижает время спин-спиновой релаксации, тем самым, усиливая сигнал на T₁-ВИ.

На фиг. 8 (а-б) показана динамика накопления контрастного препарата в зоне отека после индукции ОНМК у крыс. На фиг. 8 (б) стрелками показаны участки повреждения ГЭБ и накопления контраста.

Результаты исследований величины зоны отека во время терапевтического окна показывают, что заявляемое средство проявляет антиоксидантные свойства подобно гистохрому. Однако эффект GluNAZ проявляется быстрее по сравнению с гистохромом. Заявляемое средство на протяжении 24-48 ч снижает зону ишемии на 18% быстрее по сравнению с гистохромом. Низкая токсичность GluNAZ, хорошая растворимость и длительность хранения выгодно отличают заявляемое средство от гистохрома.

По данным ЭКГ и ЧСС инъекция GluNAZ в концентрации, превышающей терапевтическую дозу более чем в 10 раз, не оказывает негативного эффекта на увеличение частоты сердечных сокращений у интактных животных. При исследовании возможных побочных эффектов в экспериментах in vivo (МРТ, МРА) проводили мониторинг состояния всех внутренних органов крыс, особенно сосудов, печени, почек, селезенки. После применения исследуемых веществ никаких побочных эффектов на внутренние органы животных не отмечены.