×
26.08.2017
217.015.ddd1

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПНЕВМОКОККОВЫХ ГИПЕРИММУННЫХ СЫВОРОТОК

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения пневмококковых гипериммунных сывороток. Для этого проводят гипериммунизацию кроликов антигеном, представляющим собой инактивированный формалином антиген плазмидосодержащего штамма пневмококка. Иммунизацию вакциной проводят в ушную вену, причем иммунизацию кроликов указанным антигеном проводят с интервалом между каждой инъекцией, затем у продуцента определяют иммуногенные свойства, забирают кровь с последующим отделением и консервированием полученной сыворотки. Для получения вакцины одной серии используют 16-часовую культуру, выращенную на полусинтетической питательной среде, клетки которой отделяют центрифугированием. Осадок ресуспендируют в физиологическом растворе и инактивируют прогреванием, затем клетки отмывают физиологическим раствором, содержащим 0,25% формалина, и готовят микробную взвесь, соответствующую 4×10 мкр.кл./мл, причем микробные клетки пневмококков перед иммунизацией еще раз отмывают. Иммунизацию вакциной проводят 3 раза в неделю в течение 4-х недель: первая неделя в дозах 1×10 мкр.кл./мл, вторая - 5×10 мкр.кл./мл, третья - 1×10 мкр.кл./мл и четвертая - 2×10 мкр.кл./мл, на пятой неделе берут кровь, получают сыворотку и проверяют ее активность в реакции агглютинации (РА), титр которой должен быть в пределах 1:3200-1:6400. Использование данного способа позволяет повысить специфическую активность сывороток за счет использования в приготовлении вакцин из микробных клеток каждого из серотипов пневмококка и схемы иммунизации кроликов. 2 пр., 1 табл.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относится к медицинской иммунологии и может найти применение для производства высокоактивных, специфичных гипериммунных сывороток [A61K 39/40, C07K 16/12].

Известен патент RU 2203090 на Способ получения диагностической сыворотки с агглютининами к вирулентным иерсиниям (СВИ) путем гипериммунизации кроликов плазмидосодержащим (pYV+) штаммом Yersinia enterocolitica серовара ОЗ и последующей адсорбции бесплазмидными (pYV-) вариантами иерсинии, отличающийся тем, что для иммунизации кроликов антиген вводят внутривенно по схеме: 0,09-0,11 мл трехкратно с интервалом 2-3 дня и через 7-8 дней - еще 2 введения с интервалом 2-3 дня, а в качестве адсорбентов используют микробные массы референтных штаммов ГИСК 189 и ГИСК 207.

Недостатком решения является толерантность к КПС; кроме того, требуется этап адсорбции сывороток. Использование фенола может разрушать внутреннюю оболочку вен кролика и вызывать их тромбоз, что ограничивает время и количество полученной сыворотки.

В отличие от этого решения в заявленном изобретении сыворотку можно получать длительно, повторяя схему иммунизации. В нашем случае цель достигается иммунизацией целыми микробными клетками, отмытыми от излишков полисахарида, чтобы избежать возникновения толерантности к КПС; кроме того, отсутствует этап адсорбции сывороток, что упрощает схему.

Известен патент RU 2135210 на Способ получения диагностической сыворотки, включающий многократную иммунизацию животных-продуцентов авирулентным антигенным материалом в совокупности с иммуномодуляторами, забор крови и отделение сыворотки, отличающийся тем, что в качестве иммуномодуляторов используют тималин и циклофосфан, иммунизацию осуществляют пятикратно, антигенный материал вводят внутривенно, иммуномодулятор тималин - внутримышечно одновременно с инъекцией антигена, при этом циклофосфан вводят однократно с третьей инъекцией.

Недостатком решения является использование иммуномодуляторов и иммуносупрессоров, что усложняет и удорожает получение сывороток. Кроме того, использование иммуномодулятора и иммуносупрессора "истощает" иммунную систему, что ведет к отбраковке кроликов-продуцентов.

В заявленном изобретении предложена иммунизация целыми микробными клетками. Вводимая вакцина позволяет получать специфичные, высокоактивные сыворотки, без использования иммуномодуляторов и иммуносупрессоров.

Наиболее близким по существу и назначению к заявленному способу является способ получения диагностической агглютинирующей сыворотки к патогенным штаммам иерсиний (патент RU 2358764, A61K 39/40 от 20.06.2009 г.). Способ включает гипериммунизацию кроликов антигеном, представляющим собой инактивированный 0,4-0,6% формалином антиген плазмидосодержащего (pYV+) штамма Yersinia enterocolitica My 03R, в ушную краниальную вену. Иммунизацию кроликов указанным антигеном проводят четырехкратно в дозах: 290-310 млн кл./мл, 490-510 млн кл./мл, 0,99-1,1 млрд. кл./мл и 1,9-2,1 млрд. кл./мл, соответственно, с интервалом между каждой инъекцией 6-7 суток. Далее у продуцента определяют иммуногенные свойства, затем забирают кровь с последующим отделением и консервированием полученной сыворотки. Способ обеспечивает получение высококачественной агглютинирующей сыворотки, используемой для диагностики иерсиниоза у животных.

Недостатком прототипа является недостаточно высокая специфическая активность сывороток.

Задачей изобретения является повышение специфической активности диагностических сывороток, упрощение и снижение трудоемкости процесса их получения при высоком выходе целевого продукта.

Техническим результатом заявленного изобретения является повышение качества сывороток.

Указанный технический результат достигается за счет того, что заявлен способ получения пневмококковых гипериммунных сывороток, характеризующийся гипериммунизацией кроликов антигеном, представляющим собой инактивированный формалином антиген плазмидосодержащего штамма пневмококка, иммунизацию вакциной проводят в ушную вену, причем иммунизацию кроликов указанным антигеном проводят с интервалом между каждой инъекцией, затем у продуцента определяют иммуногенные свойства, забирают кровь с последующим отделением и консервированием полученной сыворотки, отличающийся тем, что для получения вакцины одной серии используют 16-часовую культуру, выращенную на полусинтетической питательной среде, клетки которой отделяют центрифугированием, осадок ресуспендируют в физиологическом растворе и инактивируют прогреванием, затем клетки отмывают физиологическим раствором, содержащим 0,25% формалина, и готовят микробную взвесь, соответствующую 4×109 мкр.кл./мл, причем микробные клетки пневмококков перед иммунизацией еще раз отмывают, иммунизацию вакциной проводят 3 раза в неделю в течение 4-х недель: первая неделя в дозах 1×108 мкр.кл./мл, вторая - 5×108 мкр.кл./мл, третья - 1×109 мкр.кл./мл и четвертая - 2×109 мкр.кл./мл, на пятой неделе берут кровь, получают сыворотку и проверяют ее активность в реакции агглютинации (РА), титр которой должен быть в пределах 1:3200-1:6400.

Поскольку иммунизирующая доза, вводимая за неделю, большая и при однократном введении может вызвать гибель животных, необходимо растягивать введение на неделю. В перерыве между иммунизациями происходит частичная элиминация антигена.

Считается, что за неделю после иммунизации происходит формирование антител в необходимом нам количестве.

Технический результат повышения качества сывороток достигается за счет использования изменений в приготовлении вакцин из микробных клеток каждого из серотипов пневмококка и схемы иммунизации кроликов.

Осуществление изобретения

Способ реализуется посредством того, что кроликов-продуцентов иммунизируют инактивированной микробной культурой по приведенной в таблице схеме:

Для получения вакцины одной серии используют 16-часовую культуру, выращенную на полусинтетической питательной среде. Клетки отделяют центрифугированием. Осадок ресуспендируют в физиологическом растворе и инактивируют прогреванием. Клетки отмывают физиологическим раствором, содержащим 0,25% формалина, и готовят микробную взвесь, соответствующую 4×109 мкр.кл./мл. Для стабилизации и интенсивного образования антител ограниченной гетерогенности микробные клетки пневмококков перед иммунизацией еще раз отмывают, во избежание развития толерантности под воздействием свободного полисахарида.

Если сыворотки при пробном кровопускании содержат большое количество антител, то кровопускания продолжают в течение последующих 2-3 недель, а затем делают 4-недельный перерыв. После этого иммунизацию повторяют, вводя по 2×109 мкр.кл. в мл в первую неделю 3 раза и в следующие 4 недели - 2 раза. Активность сывороток определяют в реакции агглютинации. Титр должен быть 1:3200-1:6400.

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы получения гипериммунных сывороток к штаммам пневмококка, принадлежащим к различным серотипам, аналогично заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизна». Все режимы способа осуществимы в лабораторных и промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

Способ иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1.

Получают гипериммунную сыворотку к штамму пневмококка серотипа 19А следующим образом. 1500 мл 16-часовой культуры центрифугировали. Осадок микробных клеток ресуспендировали в 30 мл физиологического раствора и инактивировали прогреванием при 56°С. Клетки трижды отмывали физиологическим раствором, содержащим 0,25% формалина, и готовили микробную взвесь, соответствующую 4×109 мкр.кл./мл. Перед иммунизацией микробные клетки еще раз отмывали физраствором.

Иммунизацию кроликов вакциной проводили в ушную вену 3 раза в неделю, в течение 4-х недель в дозах 1×108, 5×108, 1×109 и 2×109 мкр.кл./мл. На пятой неделе у кроликов брали кровь, получали сыворотку и проверяли ее активность в РА. Средний титр антител в полученной сыворотке крови к S. pneumoniae серотип 19А в РА составил 1:6400.

Пример 2.

Получают гипериммунную сыворотку к штамму пневмококка серотипа 3 следующим образом. 1000 мл 16-часовой культуры центрифугировали. Осадок микробных клеток ресуспендировали в 20 мл физиологического раствора и инактивировали прогреванием при 56°С. Клетки трижды отмывали физиологическим раствором, содержащим 0,25% формалина, и готовили микробную взвесь, соответствующую 4×109 мкр.кл./мл. Перед иммунизацией микробные клетки еще раз отмывали физраствором.

Иммунизацию кроликов вакциной проводили в ушную вену 3 раза в неделю, в течение 4-х недель в дозах 1×108, 5×108, 1×109 и 2×109 мкр.кл./мл. На пятой неделе у кроликов брали кровь три раза, получали сыворотку и проверяли ее активность в РА. Средний титр антител в полученной сыворотке крови к S. pneumoniae серотип 3 в РА составил 1:3200.

Способ получения пневмококковых гипериммунных сывороток, характеризующийся гипериммунизацией кроликов антигеном, представляющим собой инактивированный формалином антиген плазмидосодержащего штамма пневмококка, иммунизацию вакциной проводят в ушную вену, причем иммунизацию кроликов указанным антигеном проводят с интервалом между каждой инъекцией, затем у продуцента определяют иммуногенные свойства, забирают кровь с последующим отделением и консервированием полученной сыворотки, отличающийся тем, что для получения вакцины одной серии используют 16-часовую культуру, выращенную на полусинтетической питательной среде, клетки которой отделяют центрифугированием, осадок ресуспендируют в физиологическом растворе и инактивируют прогреванием, затем клетки отмывают физиологическим раствором, содержащим 0,25% формалина, и готовят микробную взвесь, соответствующую 4×10 мкр.кл./мл, причем микробные клетки пневмококков перед иммунизацией еще раз отмывают, иммунизацию вакциной проводят 3 раза в неделю в течение 4-х недель: первая неделя в дозах 1×10 мкр.кл./мл, вторая - 5×10 мкр.кл./мл, третья - 1×10 мкр.кл./мл и четвертая - 2×10 мкр.кл./мл, на пятой неделе берут кровь, получают сыворотку и проверяют ее активность в реакции агглютинации (РА), титр которой должен быть в пределах 1:3200-1:6400.
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 19 items.
10.04.2013
№216.012.3371

Способ разделения липополисахаридов грамотрицательных бактерий

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа разделения липополисахаридов грамотрицательных бактерий. Способ осуществляют посредством проведения гель-проникающей хроматографии липополисахаридов на колонке с Сефадексом G-200 в водном 0,05 М триэтиламмонийацетатном буфере, рН...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002478712
Дата охранного документа: 10.04.2013
13.01.2017
№217.015.7f1f

Штаммы вида streptococcus pneumoniae (варианты) и способ получения из них протективной белоксодержащей фракции, обладающей внутривидовой иммуногенной активностью

Заявленная группа изобретений относится к области иммунологии. Штаммы вида Streptococcus pneumoniae депонированы в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов III-IV групп патогенности ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России под...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002601158
Дата охранного документа: 27.10.2016
13.01.2017
№217.015.8898

Способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей

Изобретение относится к медицинской иммунологии и микробиологии, а именно к лабораторной диагностике и предназначено для определения совокупной активности антимикробных пептидов (АМП) в клинических образцах слюны, мочи, вагинального и кожного секретов. Для этого образцы термостатируют в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002602298
Дата охранного документа: 20.11.2016
25.08.2017
№217.015.b49c

Способ получения комплексного шигеллезного препарата

Изобретение относится к области медицины и биотехнологии и касается способа получения низкопирогенного комплексного шигеллезного препарата, обладающего протективной активностью против шигеллеза Флекснера 2а и шигеллеза Зонне. Способ включает перемешивание равных весовых количеств...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002614123
Дата охранного документа: 22.03.2017
25.08.2017
№217.015.bfb5

Способ получения амфифильных блок-сополимеров n,n-диметиламиноэтилметакрилата для доставки нуклеиновых кислот в живые клетки

Группа изобретений относится к области химии высокомолекулярных соединений и медицины, а именно к вариантам способа получения псевдоживой радикальной полимеризации амфифильных блок-сополимеров для трансфекции эукариотических клеток, включающих катионный блок –...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002617059
Дата охранного документа: 19.04.2017
29.12.2017
№217.015.f559

Способ получения живой культуральной аттенуированной вакцины для профилактики ветряной оспы

Группа изобретений относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использована для получения моновакцины против ветряной оспы. Способ получения живой культуральной аттенуированной вакцины для профилактики ветряной оспы включает заражение вирусом ветряной оспы штаммом «ОКА»...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002637093
Дата охранного документа: 29.11.2017
08.07.2018
№218.016.6de6

Способ получения специфических антигенных препаратов из клинически значимых дрожжевых грибов

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения специфического белоксодержащего антигенного препарата из клинически значимых дрожжевых грибов. Для этого осуществляют культивирование дрожжей Candida albicans, либо Geotrichum candidum, либо...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002660365
Дата охранного документа: 05.07.2018
19.10.2018
№218.016.9472

Способ доставки наночастиц, предназначенных для транспортировки лекарственных веществ, в головной мозг млекопитающих через гематоэнцефалический барьер

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно к способу неинвазивной доставки наночастиц в головной мозг млекопитающих, включающему следующие этапы: приготовление порошка монокарбида вольфрама или монокарбида ванадия в виде наночастиц с размером от 15 до 60 нм,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002670091
Дата охранного документа: 18.10.2018
25.10.2018
№218.016.95bc

Способ получения аттенуированных штаммов вируса гриппа а - кандидатов в живые гриппозные вакцины

Представленное изобретение относится к способу получения аттенуированных штаммов вируса гриппа А-кандидатов в живые гриппозные вакцины. Способ заключается в том, что в консервативный участок СООН - домена РА-гена эпидемического вирулентного штамма A/WSN/33 вируса гриппа А включают аттенуирующую...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002670514
Дата охранного документа: 23.10.2018
22.01.2019
№219.016.b26d

Рекомбинантная плазмидная днк ppa-oprf-atox-opri, кодирующая синтез гибридного рекомбинантного белка, включающего аминокислотные последовательности белков f и i наружной мембраны и атоксического варианта экзотоксина a pseudomonas aeruginosa, штамм escherichia coli pa-oprf-atox-opri - продуцент гибридного рекомбинантного белка и способ получения указанного белка

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pPA-OPRF-ATOX-OPRI, которая содержит слитые гены, кодирующие белки F и I наружной мембраны Pseudomonas aeruginosa, а также атоксический вариант экзотоксина A Pseudomonas aeruginosa. Их экспрессия находится...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002677790
Дата охранного документа: 21.01.2019
Showing 1-9 of 9 items.
13.01.2017
№217.015.7f1f

Штаммы вида streptococcus pneumoniae (варианты) и способ получения из них протективной белоксодержащей фракции, обладающей внутривидовой иммуногенной активностью

Заявленная группа изобретений относится к области иммунологии. Штаммы вида Streptococcus pneumoniae депонированы в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов III-IV групп патогенности ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России под...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002601158
Дата охранного документа: 27.10.2016
13.01.2017
№217.015.8898

Способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей

Изобретение относится к медицинской иммунологии и микробиологии, а именно к лабораторной диагностике и предназначено для определения совокупной активности антимикробных пептидов (АМП) в клинических образцах слюны, мочи, вагинального и кожного секретов. Для этого образцы термостатируют в...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002602298
Дата охранного документа: 20.11.2016
25.08.2017
№217.015.b49c

Способ получения комплексного шигеллезного препарата

Изобретение относится к области медицины и биотехнологии и касается способа получения низкопирогенного комплексного шигеллезного препарата, обладающего протективной активностью против шигеллеза Флекснера 2а и шигеллеза Зонне. Способ включает перемешивание равных весовых количеств...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002614123
Дата охранного документа: 22.03.2017
25.08.2017
№217.015.bfb5

Способ получения амфифильных блок-сополимеров n,n-диметиламиноэтилметакрилата для доставки нуклеиновых кислот в живые клетки

Группа изобретений относится к области химии высокомолекулярных соединений и медицины, а именно к вариантам способа получения псевдоживой радикальной полимеризации амфифильных блок-сополимеров для трансфекции эукариотических клеток, включающих катионный блок –...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002617059
Дата охранного документа: 19.04.2017
29.12.2017
№217.015.f559

Способ получения живой культуральной аттенуированной вакцины для профилактики ветряной оспы

Группа изобретений относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использована для получения моновакцины против ветряной оспы. Способ получения живой культуральной аттенуированной вакцины для профилактики ветряной оспы включает заражение вирусом ветряной оспы штаммом «ОКА»...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002637093
Дата охранного документа: 29.11.2017
08.07.2018
№218.016.6de6

Способ получения специфических антигенных препаратов из клинически значимых дрожжевых грибов

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения специфического белоксодержащего антигенного препарата из клинически значимых дрожжевых грибов. Для этого осуществляют культивирование дрожжей Candida albicans, либо Geotrichum candidum, либо...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002660365
Дата охранного документа: 05.07.2018
09.06.2019
№219.017.7baf

Способ определения наличия поствакцинального иммунитета к антигенам вакцины "пневмо-23"

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки поствакцинального иммунитета при вакцинации вакциной «Пневмо-23». Сущность изобретения заключается в том, что на твердый носитель с сорбированной вакциной «Пневмо-23», содержащей 23...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002331074
Дата охранного документа: 10.08.2008
10.07.2019
№219.017.ae20

Способ определения антител к капсульному полисахариду haemophilus influenzae типа b

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и касается способа определения антител к капсульному полисахариду Haemophilus influenzae типа b. Сущность изобретения заключается в том, что на твердый носитель с сорбированным на нем высокоочищенным капсульным полисахаридом...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002331075
Дата охранного документа: 10.08.2008
17.07.2019
№219.017.b591

Иммуногенная композиция, включающая синтетические пептиды, повторяющие последовательности v3-петли оболочечного белка gp120 вич1

Изобретение относится к области иммунологии. Предложена иммуногенная композиция, включающая синтетические пептиды, повторяющие последовательность V3-петли консенсусной последовательности группы М и последовательность V3-петли российского изолята RUA022a2 оболочечного белка gp120 ВИЧ1,...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002694576
Дата охранного документа: 16.07.2019
+ добавить свой РИД