Результат интеллектуальной деятельности: Способ выявления предраковых изменений в молочной железе

Изобретение относится к медицине.

Известны способы выявления патологических изменений в молочной железе, к которым относятся:

1. Тонкоигольная биопсия, заключающаяся во взятии пункции из различных участков молочной железы и изучении клеточного состава пунктата. Результат цитологического исследования во многом зависит от того, каким образом и из каких участков молочной железы был взят материал и как он обработан. Тонкоигольная биопсия только в 30-54% случаев дает объективный результат, связанный с вышеуказанными факторами. Таким образом, в 46-70% случаев тонкоигольная биопсия не показательна (Jebsen P.W., Hagmar В.М., Nesland J.M. Metaplastic breast carcinoma. A diagnostic problem in fine needle aspiration biopsy // Acta Cytol. 1991. Vol. 35. P. 396-401). Кроме того, тонкоигольная биопсия вызывает микротравму, которая приводит к ускорению опухолевого роста, если есть опухоль (Збицкая М.А. Роль биопсии в прогрессии рака молочной железы / М.А. Збицкая // Здоровье человека как основа национальной безопасности: материалы Сибирского конгресса. - Красноярск, 2006. - С. 311-313).

2. Тканевая биопсия заключается в заборе образца ткани из молочной железы при подозрении на опухоль. Вырезается небольшой кусочек для более детального исследования. После тщательного анализа врач-патоморфолог делает вывод о доброкачественности или злокачественности опухоли (Семиглазов В.Ф. Хирургическое лечение рака молочной железы, история и современность. Практическая онкология. 2002. Т. 3. №.1. С. 21-28; Семиглазов В.Ф. Семиглазов В.В. Скрининг рака молочной железы. Практическая онкология. 2010. Т. 11. № 2. С. 60-65). Этот способ является травматичным и технически сложным, а взятие кусочка ткани опухоли, особенно повторно, активирует опухолевую прогрессию и может явиться причиной метастазирования (Збицкая М.А. Влияние биопсий опухоли на прогрессирование процесса у больных раком молочной железы / М.А. Збицкая, Уральский медицинский журнал - 2007. - № 2. - С. 67-70).

3. При подозрении на опухолевую патологию молочной железы наиболее часто используют определение в крови или плазме ракового эмбрионального антигена (РЭА), который представляет собой гликопротеин с молекулярной массой 180 кДа. Повышенную концентрацию РЭА в сыворотке крови выявляют у 30-50% больных раком молочной железы (Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики. - М., ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 800 с.), т.е. этот показатель не является достаточно чувствительным (прототип).

Однако все перечисленные выше способы не позволяют выявить предраковые изменения в молочной железе, к которым относят склерозирующий аденоз, внутрипротоковый, внутридольковые пролифераты, радиальный рубец (Патологическая анатомия Национальное руководство/ гл. редактор М.А. Пальцев, Л.В. Кактурский, О.В. Зайратьянц. - М., ГЭОТАР Медиа, 2011 - 1264 с.).

Раскрытие изобретения

Предлагаемый способ выявления предраковых изменений в молочной железе характеризуется тем, что определяют концентрацию интерлейкина 8 (ИЛ-8) в супернатанте пробы клеток крови пациента, инкубированных с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без РЭА, после чего вычисляют индекс влияния (ИВ) раково-эмбрионального антигена (ИВ РЭА) на продукцию ИЛ-8 (ИВ РЭА ИЛ-8) по формуле: ИВ РЭА ИЛ-8 = А/Б, где А - уровень продукции цитокина под влиянием РЭА, Б - уровень спонтанной продукции цитокина, и при величине ИВ РЭА ИЛ-8, не превышающей 14, выявляют предраковые изменений в молочной железе (склерозирующий аденоз или пролиферат молочной железы).

Предлагаемое изобретение дает возможность выявлять предраковые изменения в молочной железе, основываясь на определении цитокинпродуцирующей функции иммунокомпетентных клеток крови при влиянии на них раково-эмбрионального антигена (РЭА). Способ позволяет своевременно выявить предраковые изменения и начать адекватное лечение.

Предлагаемый способ является более чувствительным и специфичным по сравнению с прототипом. На обследованных группах пациентов предлагаемый способ показал 100%-ю чувствительность и 100%-ю специфичность.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Цельную кровь, взятую из вены пациента в количестве 1 мл, помещают в стерильный флакон с 4 мл среды (стерильная питательная среда DMEM), содержащей гепарин 2,5 МЕ/мл и гентамицин 100 мкг/мл. Аккуратно перемешивают содержимое флакона, затем из него в стерильных условиях забирают 0,980 мл разбавленной крови и помещают ее в стерильный флакон, содержащий 0,020 мл РЭА (Canceroembryonic Antigen Human Colon Adenocarcinoma Cell Line) производства Calbiochem, Германия, то есть концентрация РЭА составляет 2 мкг/мл. Содержимое флакона аккуратно перемешивают и помещают в термостат при 37°С на 24 часа. Параллельно в тех же условиях инкубируют клетки крови в той же питательной среде без РЭА (для определения спонтанной продукции цитокинов). В течение первого часа инкубации содержимое флаконов аккуратно перемешивают 1 раз. После инкубации путем центрифугирования при 3000 об./мин в течение 10 минут осаждают клетки крови и отбирают супернатант из пробы клеток, инкубированных с РЭА (продукция под влиянием РЭА) и из пробы клеток, инкубированных без РЭА (спонтанная продукция), в которых с помощью твердофазного иммуноферментного анализа определяют концентрацию ИЛ-8. ИВ РЭА ИЛ-8 высчитывают по формуле: ИВ РЭА = А/Б, где А - уровень продукции цитокина под влиянием РЭА, Б - уровень спонтанной продукции цитокина. ИВ РЭА ИЛ-8 выражают в условных единицах.

Определение ИВ РЭА ИЛ-8 проводили у 18 пациентов, у И из которых была выявлена доброкачественная опухоль - фиброаденома (ФАМ), у 7 - предраковые изменения (у шести - склерозирующий аденоз и у одного - внутрипротоковый пролиферат).

Статистический анализ полученных данных проводили по критерию Манна-Уитни, определяли медиану (Me), квартили (Q_1; Q₃) и достоверность различия р.

У 11 пациентов с фиброаденомой Me = 58,14 (Q₁=27,14; Q₃=91,39). У всех женщин этой группы ИВ РЭА ИЛ-8 был выше 14,00 условных единиц.

У 7 женщин со склерозирующим аденозом и внутрипротоковым пролифератом, относящимся к предраковым изменениям, Me = 8,66 (Q₁=2,22; Q₃=11,60). У всех женщин этой группы ИВ РЭА ИЛ-8 был ниже 14,00 условных единиц. Достоверность различий ИВ РЭА ИЛ-8 между группами женщин с ФАМ и с предраковыми изменениями (склерозирующим аденозом и внутрипротоковым пролифератом) составила р=0,0001, что отражает высокую степень различия показателей этих групп.

У пациентов с фиброаденомой ИВ РЭА ИЛ-8 находился в диапазоне 18,68-112,87 условных единиц, у пациентов с предраковыми изменениями (со склерозирующим аденозом и внутрипротоковым пролифератом) - в диапазоне 2,03-13,83 условных единиц.

Наличие предраковых изменений и доброкачественной опухоли молочной железы контролировали путем тщательного патогистологического исследования биоптатов.

Таким образом, согласно предлагаемому изобретению в 100% случаев выявляются предраковые изменения - склерозирующий аденоз и внутрипротоковый пролиферат.

Клинические примеры

1. Больная Б-а, 47 лет. Заключение патологоанатома: склерозирующий аденоз молочной железы. ИВ РЭА ИЛ-8 - 6,59 условных единиц.

2. Больная П-а, 54 года. Заключение патологоанатома: склерозирующий аденоз молочной железы. ИВ РЭА ИЛ-8 - 2,03 условных единиц.

3. Больная П-а, 46 лет. Заключение патологоанатома: внутрипротоковый пролиферат молочной железы. ИВ РЭА ИЛ-8 - 11,60 условных единиц.

4. Больная К-о, 57 лет. Заключение патологоанатома: фиброаденома молочной железы. ИВ РЭА ИЛ-8 - 27,14 условных единиц.