×
25.08.2017
217.015.bf8d

Способ количественной цитохимической оценки хромаффинной реакции эритроцитов крыс при общем охлаждении организма

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к медицине, а именно к количественной гистохимической оценке адаптации организма к воздействию низкой температуры окружающей среды. Для этого устанавливают холодовую анестезию у экспериментального животного путем количественной цитохимической оценки хромаффинной реакции эритроцитов крыс при общем охлаждении организма. Способ включает охлаждение крыс, забор у них крови из легочной вены после ее флеботомии в воротах левого легкого. Изготавливают мазок крови на предметном стекле, окрашивают сначала 5% спиртовым раствором ализарина красного С, затем 5% раствором бихроматом калия. Под микроскопом подсчитывают количество различно окрашенных эритроцитов в группе от 300 клеток. После этого рассчитывают средний цитохимический коэффициент СЦК по формуле: в которой 1 балл - эритроциты не окрашены; 2 балла - гранулярная окраска периферии эритроцита, центральная часть клетки не окрашена; 3 балла - эритроциты целиком гранулярно окрашены. И при СЦК менее 2,4 устанавливают эффективную холодовую анестезию. Способ обеспечивает объективизацию оценки холодовой анестезии у животного, что позволяет проводить вивисекцию без использования наркосодержащих фармакологических средств. 1 пр., 1 табл.
Реферат Свернуть Развернуть

Изобретение относиться к медицине, а именно к количественной гистохимической оценке адаптации организма к воздействию низкой температуры окружающей среды.

Известно, что ионы кальция участвуют в медиации процессов нейрогуморальной регуляции при экспериментальной гипотермии и анестезии холодом. Поэтому оценка снижения содержания в клетках организма концентрации катионов кальция и кальций-связывающих белков является одним из специфических и уже классических критериев развития экспериментальной гипотермии у ряда животных (крысы) /1. К.П. Иванов, Н.К. Арокина, И.Л. Потехина. Стимуляция физиологических функций у крыс при глубокой гипотермии без отогревания с помощью введения в желудочки мозга ЭДТА // Российский физиологический журнал. - 2005. - Т. 91, №3. - С. 286-292; 2. Г.С. Федоров, Н.К. Арокина. Развитие гипотермии у крыс при повышении [Ca2+] в крови // Российский физиологический журнал. - 2007. - Т. 93, №10. - С. 1171-1180/.

Гистохимическое окрашивание органов с помощью ализарина красного C (ETON-alizarin) является методом выявления кальция в клетках и тканях /3. Victor G. Springer and G. David Johnson Use and Advantages of Ethanol Solution of Alizarin Red S Dye for Staining Bone in Fishes // Copeia, Vol. 2000, № 1, pp. 300-301)/.

Гистохимическая окраска легочных клеток ализарином красным C подтверждает специфичность выявления катионов кальция и натрия в легких с помощью гистохимической реакции с антимонатом /3. Патент RU (11) 2013145543, Целуйко С.С., Зиновьев С.В., Решодько Д.П., Попов С.В. Способ дополнительного электронноплотного контрастирования нуклеиновых кислот в ядре и цитоплазме при гистохимическом выявлении катионов натрия в ультраструктурах клеток и тканей/.

Известно, что хромаффинная реакция - это гистохимический способ выявления биогенных аминов в клетках, который осуществляется при окрашивании бихроматом калия /4. Г. Гайер Электронная гистохимия. - М. Мир. 1974. - 488 с./.

Известен также способ цитологического окрашивания ализарином красным С мазков периферической крови у крыс. В известном способе продукт цитохимической реакции обнаруживается в лейкоцитах и эритроцитах. В случае дополнительного окрашивания мазков периферической крови в растворе бихромата калия (K2Cr2O7), этот метод является одним из подходов к оценке хромаффинной реакции в эритроцитах. /5. Зиновьев С.В. Гистохимическая характеристика клеток периферической крови при коррекции дигидрокверцетином общего переохлаждения организма в течение 10 дней // Материалы V Съезда врачей-пульмонологов Сибири и Дальнего Востока / под общ. ред. чл.-корр. РАМН В.П. Колосова. Благовещенск, 2013. - 180-163. 192 с./.

Недостаток предложенного способа заключается в том, что в нем не описан количественный подход к оценке обнаруженной цитохимической реакции в эритроцитах крыс на мазках крови.

В отличие от известного способа /5/, заявленный способ осуществляется после флеботомии легочной вены левого легкого, после чего изготавливается мазок крови. Количественная цитохимическая оценка хромаффинной реакции в эритроцитах выявляется после окраски ализарином красным С.

Задача изобретения заключается в создании способа, позволяющего объективизировать особенности количественной цитохимической оценки хромаффинной реакции эритроцитов крови крыс во время холодовой пробы.

Существо способа заключается в том, что животное подвергается экспериментальному воздействию общего охлаждения организма, а после экспериментального воздействия изучается цитохимический профиль мазков крови, полученный во время флеботомии легочной вены левого легкого, окрашенных раствором ализарина красного С и затем раствором бихромата калия.

Способ осуществляется следующим образом.

Сразу (не более чем через 30 секунд) после вивисекции производиться вскрытие грудной клетки крыс. В операционной ране производится осмотр ворот левого легкого.

Из левой легочной вены крыс берут кровь, необходимую для цитохимического исследования. Это делается с помощью флеботомии-венесекции левой легочной вены. Для этого с помощью хирургического зажима пережимается просвет легочной вены. Левое легкое приподнимается и помещается на предметное стекло, которое вводят в грудную клетку. Затем скальпелем рассекается просвет левой легочной вены, который расположен ближе к воротам левого легкого. Капля крови, поступившая из вен легкого, наносится на предметное стекло, после чего изготавливается цитологический мазок.

Мазки крови на предметных и покровных стеклах высушиваются на воздухе.

Окрашивание мазков крови ализариновым красным С производится в 5% спиртовом растворе (96% р-р этанола) ализаринового красного С. Минуя этап фиксации, мазки крови помещают в стеклянный стаканчик, заполненный 5% спиртовым раствором ализаринового красного С. Окраска и фиксация мазков крови проводится при комнатной температуре на протяжении 5 минут (время определяется эмпирически).

После окрашивания мазки крови быстро (5-10 секунд) ополаскиваются в дистиллированной воде, затем быстро ополаскиваются в 5% р-ре бихромата калия (5-10 секунд), потом быстро, но тщательно промываются в дистиллированной воде (от 5 до 30 секунд), затем мазки крови сушатся на воздухе.

Контроль исследования.

1. После высушивания мазков, их необходимо на 5 минут поместить в пары аммиака, (после чего краситель становится ярко-красным). Затем производится микроскопирование мазков крови.

2. В качестве контроля используется фиксация мазков в парах формалина, которая производится перед окрашиванием. Нами установлено, что формалин блокирует хромаффинную реакцию в эритроцитах, которая отмечается при окрашивании ализарином красным С и бихроматом мазков периферической крови.

3. Установлено, что добавление 3% р-ра динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (C10H14N2Na2O8) в кровь во время изготовления мазка на предметном стекле, так же блокирует окрашивание ализарином красным С и бихроматом мазков периферической крови.

После окрашивания, под иммерсионным объективом ×100, производится микроскопия окрашенного мазка крови крыс. Оценка цитохимической реакции происходит по балам:

1 балл - эритроциты не окрашены;

2 балла - выявляется гранулярная окраска периферии (тора) эритроцита, центральная часть клетки не окрашена;

3 балла - эритроциты целиком гранулярно окрашены.

Подсчет цитохимической реакции ведется на 300 клетках. Во время исследования подсчитывается количество эритроцитарных клеток с различной выраженностью реакции. После чего по формуле рассчитывают средний цитохимический коэффициент - СЦК:

Пример использования.

Объектом исследования являлись белые крысы (Вистар) - самцы, в возрасте 4 месяца, весом 300-350 грамм.

Были созданы 5 групп экспериментальных животных.

1 гр. - интактные животные находились в помещении при температуре +25°C и 30% влажности воздуха.

Остальные группы животных подвергали экспериментальному воздействию холодом при - 15°C, в течение 3 часов в климатокамере Fentron (Германия), а именно: 2 гр. подвергалась экспериментальному воздействию 1 день; 3 гр. подвергалась экспериментальному воздействию 5 дней; 5 гр. подвергалась экспериментальному воздействию 10 дней. В каждой группе было по 10 животных.

Вивисекция животных осуществлялась путем цервикальной дислокации. Сразу (не более чем через 30 секунд) после вивисекции, производилось вскрытие грудной клетки крыс. Во время эксперимента производился осмотр ворот левого легкого. При исследовании ворот левого легкого крыс отмечается, что при общем охлаждении крыс развивается гиперемия легочных вен. В результате чего в воротах левого легкого обнаруживается полнокровие каудальной и краниальной легочных вен, которые после слияния с общей левой легочной веной впадают в левое предсердие. Критерием гиперемии являлось то, что краниальная легочная вена набухала и становилась доступной наблюдению без вооруженного глаза в воротах левого легкого. После этого делалась флеботомия (венесекция) левой легочной вены. Для этого с помощью зажима нейрохирургического типа «Москит» пережимался просвет легочной вены. Легкое приподымалось и укладывалось на предметное стекло, которое вводят в грудную клетку. Затем скальпелем рассекался просвет левой легочной вены, который расположен ближе к воротам левого легкого. Капля крови, поступившая из вен легкого, наносилась на предметное стекло, после чего изготавливался цитологический мазок. Затем производилось цитохимическое окрашивание мазков крови изложенным в изобретении способом.

Результаты цитохимического исследования мазков периферической крови крыс, которые отражают механизм экспериментального воздействия на организм, отражены в таблице 1.

Полученные данные говорят о том, что в ходе эксперимента развивается компенсированная гипотермия организма, и анестезия холодом у крыс. Это позволяет проводить вивисекцию и цитохимическое исследование крыс без использования нарко-препаратов.

Способ позволяет провести математический расчет СЦК хромаффинной реакции эритроцитов. При значении СЦК менее 2,4 прогнозируется кальций зависимый адренергический механизм медиации процессов нейрогуморальной регуляции ответа организма, во время формирования анестезии холодом при экспериментальной гипотермии.

Это указывает на позитивное решение способов вивисекции экспериментальных животных анестезией холодом.

Поэтому техническим результатом изобретения является то, что он подтверждает эффективность анестезии животных холодом, что позволяет проводить вивисекцию экспериментальных животных путем цервикальной дислокации без использования дорогостоящих наркосодержащих фармакологических средств.


Способ количественной цитохимической оценки хромаффинной реакции эритроцитов крыс при общем охлаждении организма
Способ количественной цитохимической оценки хромаффинной реакции эритроцитов крыс при общем охлаждении организма
Источник поступления информации: Роспатент

Showing 1-10 of 63 items.
20.08.2013
№216.012.61a9

Способ цитологического исследования базального трахеобронхиального секрета у здоровых лиц при коррекции антиоксидантами воздействия низкой температуры окружающей среды на организм

Изобретение относится к области медицины и биологии, в частности к пульмонологии, и касается способа морфологического и физиологического исследования ультраструктурных характеристик суспензий клеток при воздействии на организм здоровых людей антиоксидантов. Способ осуществляется с помощью...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002490633
Дата охранного документа: 20.08.2013
10.09.2013
№216.012.6687

Способ лечения полипоза носа

Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии. В тело полипа вводят 1% раствор эмоксипина в объеме до 1 мл. Разогретым дистальным торцом световода полупроводникового лазера «АТКУС-15» наносят 5-6 коагуляционных скважин в теле и ножке полипа. Способ позволяет повысить...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002491894
Дата охранного документа: 10.09.2013
27.09.2013
№216.012.6e4c

Устройство фарингеальной ловушки базального трахеобронхиального секрета для его использования у людей

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано при морфологическом, физиологическом исследовании ультраструктурных характеристик суспензий клеток трахеобронхиального секрета. Ловушка содержит плоскую рабочую поверхность и рукоятку. Рукоятка ориентирована к плоской рабочей...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002493887
Дата охранного документа: 27.09.2013
27.05.2014
№216.012.c92b

Способ диагностики вирусных гепатитов

Изобретение относится к медицине и, в частности к гематологии, вирусологии и инфекционным заболеваниям и описывает способ диагностики вирусных гепатитов путем определения в пробе крови РНК или ДНК вирусов методом ПЦР, при этом в случае отсутствия РНК или ДНК вирусов в сыворотке, плазме крови...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517265
Дата охранного документа: 27.05.2014
10.06.2014
№216.012.d067

Способ улучшения функциональных результатов низкой резекции прямой кишки

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для улучшения функционального результата низкой резекции прямой кишки у пациентов с раком прямой кишки. Для этого назначают лекарственный препарат «Лавиокард+» внутрь по 1 капсуле 2 раза в день во время еды во...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519122
Дата охранного документа: 10.06.2014
10.07.2014
№216.012.dc74

Способ стимуляции заживления ран различного генеза природным антиоксидантом дигидрокверцетином

(57) Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для стимуляции заживления ран различного генеза. Для этого после очищения раны производят ежедневные перевязки с порошком дигидрокверцитина, который наносят на раневую поверхность при микробной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522214
Дата охранного документа: 10.07.2014
10.07.2014
№216.012.dc78

Способ прогнозирования повышения сердечно-лодыжечного сосудистого индекса жесткости при сочетанном течении хронической обструктивной болезни и ишемической болезни сердца

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования повышения сердечно-лодыжечно сосудистого индекса жесткости у больных хронической обструктивной болезнью легких в сочетании с ишемической болезнью сердца, при котором исследуют исходные значения биомаркеров системного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522218
Дата охранного документа: 10.07.2014
27.07.2014
№216.012.e5d5

Способ диагностики системного амилоидоза у экспериментальных лабораторных животных

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике. Способ диагностики AL-амилоидоза заключается в том, что каплю биологической жидкости с кристаллоиндуктором подвергают клиновидной дегидратации и затем полученную фацию анализируют под микроскопом с использованием...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002524627
Дата охранного документа: 27.07.2014
27.08.2014
№216.012.ee51

Способ предоперационной коррекции дыхательных расстройств у больных колоректальным раком

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для лечения и профилактики дыхательных расстройств у больных колоректальным раком. Предложен способ предоперационной коррекции дыхательных расстройств у больных колоректальным раком с использованием...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002526828
Дата охранного документа: 27.08.2014
27.08.2014
№216.012.efa9

Способ коррекции негативных эффектов низких температур на предстательную железу крыс

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной морфологии, а также к разработке и изучению способов коррекции негативных эффектов низких температур на организм животного в эксперименте. Охлаждение крыс проводят при температуре -15°C по 3 часа в день на протяжении 4-х недель....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002527172
Дата охранного документа: 27.08.2014
Showing 1-10 of 68 items.
27.09.2013
№216.012.6e4c

Устройство фарингеальной ловушки базального трахеобронхиального секрета для его использования у людей

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано при морфологическом, физиологическом исследовании ультраструктурных характеристик суспензий клеток трахеобронхиального секрета. Ловушка содержит плоскую рабочую поверхность и рукоятку. Рукоятка ориентирована к плоской рабочей...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002493887
Дата охранного документа: 27.09.2013
27.05.2014
№216.012.c92b

Способ диагностики вирусных гепатитов

Изобретение относится к медицине и, в частности к гематологии, вирусологии и инфекционным заболеваниям и описывает способ диагностики вирусных гепатитов путем определения в пробе крови РНК или ДНК вирусов методом ПЦР, при этом в случае отсутствия РНК или ДНК вирусов в сыворотке, плазме крови...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002517265
Дата охранного документа: 27.05.2014
10.06.2014
№216.012.d067

Способ улучшения функциональных результатов низкой резекции прямой кишки

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для улучшения функционального результата низкой резекции прямой кишки у пациентов с раком прямой кишки. Для этого назначают лекарственный препарат «Лавиокард+» внутрь по 1 капсуле 2 раза в день во время еды во...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002519122
Дата охранного документа: 10.06.2014
10.07.2014
№216.012.dc74

Способ стимуляции заживления ран различного генеза природным антиоксидантом дигидрокверцетином

(57) Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для стимуляции заживления ран различного генеза. Для этого после очищения раны производят ежедневные перевязки с порошком дигидрокверцитина, который наносят на раневую поверхность при микробной...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522214
Дата охранного документа: 10.07.2014
10.07.2014
№216.012.dc78

Способ прогнозирования повышения сердечно-лодыжечного сосудистого индекса жесткости при сочетанном течении хронической обструктивной болезни и ишемической болезни сердца

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования повышения сердечно-лодыжечно сосудистого индекса жесткости у больных хронической обструктивной болезнью легких в сочетании с ишемической болезнью сердца, при котором исследуют исходные значения биомаркеров системного...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522218
Дата охранного документа: 10.07.2014
10.07.2014
№216.012.dd23

Способ прогнозирования медико-социальной эффективности комплексного лечения больных артериальной гипертонией

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, и может быть использовано для прогнозирования медико-социальной эффективности комплексного лечения больных артериальной гипертонией (АГ). Определяют прогностические факторы: клинико-лабораторные данные: уровень общего...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002522389
Дата охранного документа: 10.07.2014
20.07.2014
№216.012.e21d

Способ диагностики алекситимии у больных хронической обструктивной болезнью легких, осложненной хроническим легочным сердцем

Изобретение относится к медицине, в частности к пульмонологии, и может быть использовано для выявления алекситимии у больных хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ), осложненной хроническим легочным сердцем. Для этого оценивают клинико-анамнестические данные, определяют показатели...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002523671
Дата охранного документа: 20.07.2014
27.07.2014
№216.012.e5d5

Способ диагностики системного амилоидоза у экспериментальных лабораторных животных

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике. Способ диагностики AL-амилоидоза заключается в том, что каплю биологической жидкости с кристаллоиндуктором подвергают клиновидной дегидратации и затем полученную фацию анализируют под микроскопом с использованием...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002524627
Дата охранного документа: 27.07.2014
27.08.2014
№216.012.ee51

Способ предоперационной коррекции дыхательных расстройств у больных колоректальным раком

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для лечения и профилактики дыхательных расстройств у больных колоректальным раком. Предложен способ предоперационной коррекции дыхательных расстройств у больных колоректальным раком с использованием...
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002526828
Дата охранного документа: 27.08.2014
27.08.2014
№216.012.efa9

Способ коррекции негативных эффектов низких температур на предстательную железу крыс

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной морфологии, а также к разработке и изучению способов коррекции негативных эффектов низких температур на организм животного в эксперименте. Охлаждение крыс проводят при температуре -15°C по 3 часа в день на протяжении 4-х недель....
Тип: Изобретение
Номер охранного документа: 0002527172
Дата охранного документа: 27.08.2014
+ добавить свой РИД