МОНОТЕРПЕНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ХАЛЬКОНА ИЛИ ДИГИДРОХАЛЬКОНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ДЕПИГМЕНТИРУЮЩИХ АГЕНТОВ

Настоящее изобретение относится к применению для уменьшения пигментации монотерпеновых производных халкона или дигидрохалкона формулы (I) и содержащих их растительных экстрактов в составе косметических или дерматологических композиций.

Тригидроксихалконы описаны с точки зрения их активности по уменьшению пигментации. Особенно важное значение для этой активности имеет положение OH-групп. 2′,4′,6′-Тригидроксихалкон (II) демонстрирует значение IC₅₀ в отношении тирозиназы (монофенолоксидазной активности тирозиназы грибов), равное 120 мкМⁱ.

Примечательно и неожиданно, авторам изобретения удалось показать, что дополнительное внесение заместителя в виде терпеновой или терпинеоловой группы (формула I) существенно усиливает эту активность. Молекула этого типа очень редко обнаруживается в растениях. К настоящему моменту в литературных источниках было описано только три существующих в природе соединения, представленных общей формулой (I): линдератин (III), линдерахалкон (IV) и метиллиндератин (V).

Они были выделены из:

- Piper aduncumⁱⁱ, листья, Piperaceae: (-)-метиллиндератин,

- Piper hostmannianum var. Berbicenseⁱⁱⁱ, листья (Piperaceae): (-)-метиллиндератин,

- Lindera umbellata var. membranacea^iv,v и lancea^vi, листья^vii или Kopa^viii, Lauraceae: (+)-линдератин, линдерахалкон^ix, метиллиндератин

- Mitrella kentii, кора ствола, Annonaceae: (-)-линдератин^x

Соединение с очень похожей структурой, гимнохалкон (VI), или альфа-терпинеол-пиноцембрин-халкон, впервые было выделено авторами изобретения из надземных частей Helichrysum gymnocephalum (DC) Humbert.

Авторы изобретения также впервые выделили линдератин из листьев Piper aduncum.

С точки зрения описанных биологических активностей (-)-линдератин демонстрировал цитотоксичность в отношении линии раковых клеток (легкого)^x. (-)-Метиллиндератин, в свою очередь, обладает антиплазмодиальной активностьюⁱⁱⁱ.

Ни одно из указанных выше соединений не описывалось с точки зрения их активности по уменьшению пигментации.

Таким образом, первой целью изобретения является раскрытие экстракта Helichrysum gymnocephalum (DC) Humbert, обогащенного одной или несколькими молекулами следующей формулы (I):

где

- одинарная связь или двойная связь;

R1=Н или СН₃; и

R2=Н или ОН,

в качестве средства для уменьшения пигментации.

Предпочтительно, R1=Н.

Предпочтительно, является двойной связью, R1=Н и R2=Н или ОН, или является одинарной связью, R1=Н или СН₃ и R2=Н.

Более предпочтительно, является одинарной связью, R1=Н и R2=Н, т.е., экстракт по изобретению обогащен линдератином.

Более предпочтительно, является двойной связью, R1=Н и R2=ОН, т.е., экстракт по изобретению обогащен гимнохалконом. Такой экстракт, в частности, полезен благодаря тому, что, как неожиданно выяснили авторы изобретения, гимнохалкон сохраняет стабильность при нахождении в этом экстракте. Действительно, в данном случае не наблюдается циклизация халконов до флаванона при добавлении гидроксильной группы в положение 1,4 карбонильной группы по механизму реакции Михаэля, которая является причиной нестабильности халконов.

Такая циклизация наблюдается в очищенном гимнохалконе. Таким образом, гимнохалкон предпочтительно будет применяться в форме экстракта Helichrysum gymnocephalum.

Авторы изобретения показали, что такой экстракт Helichrysum gymnocephalum по изобретению, в частности, полезен благодаря его активности по уменьшению пигментации. Авторы изобретения также показали, что такая активность, в частности, является специфической для вида Helichrysum gymnocephalum, так как экстракты, полученные в тех же условиях из Helichrysum arenarium, Helichrysum cordifolium и Helichrysum stoechias, несмотря на то, что все они богаты флаваноидами и халконами, не демонстрируют какой-либо ингибирующей активности в отношении синтеза меланина в меланоцитах мыши В16.

Предпочтительно, экстракт по изобретению содержит одну или несколько молекул формулы I в количестве от 0,1 до 30 г, предпочтительно - от 0,1 до 10 г, наиболее предпочтительно - от 0,1 до 5 г, на 100 г сухого вещества экстракта.

Предпочтительно, экстракт по изобретению получен из надземных частей Helichrysum gymnocephalum (DC) Humbert (Asteraceae, синоним: Stenocline gymnocephala). Он получен из этого растения в соответствии с традиционными этапами, хорошо известными специалистам в данной области.

Надземные части Helichrysum gymnocephalum (DC) Humbert могут быть собраны на 5 различных стадиях роста растения: фазе вегетативного роста, фазе подготовки к цветению, фазе начала цветения, фазе цветения, фазе плодоношения. Предпочтительно, экстракт по изобретению получают из надземных частей Helichrysum gymnocephalum (DC) Humbert в фазе плодоношения, предпочтительно - в конце периода плодоношения.

Предпочтительно, высушенное растение измельчают перед экстрагированием с применением органического растворителя, который может являться сложным эфиром (этил ацетатом, изопропилацетатом), спиртом (метанолом, этанолом, пропанолом, изопропанолом, бутанолом), кетоном (метилэтилкетоном, диметилкетоном, метилизобутилкетоном), галогенированным углеводородом (хлороформом, дихлорметаном), водой или смесью этих растворителей в любой пропорции, обеспечивающей смешивание.

Экстрагирование проводят при соотношении растительный материал:растворитель от примерно 1:1 до примерно 1:20 и в случае необходимости процесс повторяют 2-3 раза. Температура растворителя для экстрагирования может находиться в диапазоне от комнатной температуры до выше комнатной температуры, вплоть до температуры кипения применяемого растворителя. Время контакта растения с растворителем находится в диапазоне от примерно 30 мин. до примерно 72 ч.

После этого производят разделение твердого вещества и жидкости, при этом растение отделяют от растворителя, например, с применением фильтрации или центрифугирования.

Полученный фильтрат можно подвергнуть одному из следующих этапов:

- непосредственно высушить путем полного выпаривания растворителя с получением конечного экстракта;

- хранить в жидком виде в растворителе для экстрагирования, если он пригоден для предполагаемого применения. В таком случае его можно в большей или меньшей степени сконцентрировать с помощью этапа выпаривания;

- сконцентрировать. Этот этап концентрирования целевого соединения может быть осуществлен способами, известными специалистам в данной области, такими как экстрагирование между двумя жидкими фазами с применением 2 несмешивающихся растворителей, абсорбция на носителе, таком как кремнезем, ионообменная смола и т.п.

Экстракт, полученный в результате экстрагирования, разделения твердого вещества и жидкости с последующим высушиванием, включает массовое содержание соединения (или соединений) формулы I, составляющее от 0,1 до 30 г, предпочтительно - от 0,1 до 10 г, наиболее предпочтительно - от 0,1 до 5 г на 100 г сухого вещества экстракта. Если экстракт сохраняют в растворе, содержание сухого вещества в жидком экстракте составляет от 0,1 до 80 г на 100 мл.

Еще одна цель изобретения относится к способу получения экстракта по изобретению.

Еще одна цель изобретения относится к применению для косметических целей экстракта растительного происхождения, обогащенного одной или несколькими молекулами следующей формулы (I), или применению для косметических целей молекулы следующей формулы (I):

где

- одинарная связь или двойная связь;

R1=Н или СН₃; и

R2=Н или ОН,

в качестве средства для уменьшения пигментации.

Предпочтительно, чтобы R1=Н.

Предпочтительно, является двойной связью, R1=Н и R2=Н или ОН, или является одинарной связью, R1=Н или СН₃ и R2=Н.

Более предпочтительно, является двойной связью, R1=Н и R2=ОН, т.е., изобретение относится к применению для косметических целей экстракта растительного происхождения, обогащенного гимнохалконом; или к применению для косметических целей молекулы гимнохалкона.

Более предпочтительно, является одинарной связью, R1=Н и R2=Н, т.е., изобретение относится к применению для косметических целей экстракта растительного происхождения, обогащенного линдератином; или к применению для косметических целей молекулы линдератина.

Наиболее предпочтительно, изобретение относится к применению для косметических целей экстракта растительного происхождения, который содержит одну или несколько молекул формулы I в количестве от 0,1 до 30 г, предпочтительно - от 0,1 до 10 г, наиболее предпочтительно - от 0,1 до 5 г, на 100 г сухого вещества экстракта.

Указанный экстракт, содержащий одну или несколько молекул формулы (I), предпочтительно является экстрактом по изобретению или экстрактом растений, принадлежащих к роду Helichrysum, Piper, Lindera или Mitrella, включая: Piper hostmannianum, Piper hispidum, Piper aduncum, Lindera aggregata, Lindera umbellata, Lindera glauca, Mitrella mesnyi, Mitrella kentii.

Наиболее предпочтительно, линдератин и метиллиндератин будут применяться в косметических препаратах по изобретению в чистом виде, такими, какими они синтезируются, так как они стабильны в таком виде.

С другой стороны, преимущественно в случае применения для косметических целей гимнохалкона, более предпочтительным будет применение для косметических целей экстракта Helichrysum gymnocephalum, обогащенного гимнохалконом, так как он более стабилен в составе экстракта, чем в чистом виде.

Предпочтительно, применение для косметических целей по изобретению предназначено для отбеливания и/или осветления кожи и/или щетины и/или волос, уменьшения интенсивности и/или удаления старческих пигментных пятен с кожи или уменьшения интенсивности и/или удаления коричневых пигментных пятен, которые могут быть вызваны действием УФ или хлоазмой.

Молекулы формулы (I) и/или содержащие их растительные экстракты, действующие как средство для уменьшения пигментации, также показали хорошую способность контролировать и/или ингибировать выработку меланинов, которые ответственны за пигментацию, и тем самым продемонстрировали пользу для устранения пигментации в случае некоторых неэстетичных пигментных пятен, вызванных повышенной пигментацией эпидермиса, главным образом - старческих пигментных пятен на коже.

Молекула формулы (I) по настоящему изобретению может быть получена с применением химического или биохимического синтеза или из растительного экстракта.

Предпочтительно, молекула формулы (I) выбрана из группы, состоящей из: гимнохалкона (формула VI), где - двойная связь, R1=Н и R2=ОН,

- линдератина (формула III), где - одинарная связь, R1=Н и R2=Н,

- линдерахалкона (формула IV), где - двойная связь, R1=Н и R2=Н,

- метиллиндератина (формула V), где - одинарная связь, R1=СН₃ и R2=Н.

В том случае, если молекула является гимнохалконом, растительным источником предпочтительно будет Helichrysum gymnocephalum (DC) Humbert; и более предпочтительно - надземные части Helichrysum gymnocephalum (DC) Humbert, и еще более предпочтительно - надземные части Helichrysum gymnocephalum (DC) Humbert, собранные в фазе плодоношения.

В том случае, если молекула является линдератином, она будет предпочтительно получена с применением химического синтеза.

В том случае, если молекула является линдератином растительного происхождения, растительным источником будет предпочтительно Lindera umbellata var. membranacea и lancea; и более предпочтительно - их листья или кора.

Еще одна цель изобретения относится к косметической или дерматологической композиции, содержащей в качестве активного вещества экстракт растительного происхождения, обогащенный одной или несколькими молекулами следующей формулы (I), или одну или несколько молекул следующей формулы (I):

где

- одинарная связь или двойная связь;

R1=Н или СН₃; и

R2=Н или ОН.

Предпочтительно, R1=Н. Предпочтительно, - двойная связь, R1=Н и R2=Н или ОН, или - одинарная связь, R1=Н или СН₃ и R2=Н.

Более предпочтительно, является двойной связью, R1=Н и R2=ОН, т.е., изобретение относится к косметической или дерматологической композиции, содержащей в качестве активного вещества экстракт растительного происхождения, обогащенный гимнохалконом, или молекулу гимнохалкона.

Более предпочтительно, является одинарной связью, R1=Н и R2=Н, т.е., изобретение относится к косметической или дерматологической композиции, содержащей в качестве активного вещества экстракт растительного происхождения, обогащенный линдератином, или молекулу линдератина.

Наиболее предпочтительно, изобретение относится к косметической или дерматологической композиции по изобретению, которая содержит в качестве активного вещества экстракт растительного происхождения, содержащий одну или несколько молекул формулы I в количестве от 0,1 до 30 г, предпочтительно - от 0,1 до 10 г, наиболее предпочтительно - от 0,1 до 5 г, на 100 г сухого вещества экстракта.

Предпочтительно, указанный экстракт является экстрактом по изобретению или экстрактом растений, принадлежащих к роду Helichrysum, Piper, Lindera или Mitrella, включая: Piper hostmannianum, Piper hispidum, Piper aduncum, Lindera aggregata, Lindera umbellata, Lindera glauca, Mitrella mesnyi, Mitrella kentii.

Еще одна цель изобретения относится к дерматологической композиции по изобретению для применения в качестве лекарства.

Еще одна цель изобретения относится к дерматологической композиции по изобретению для применения с целью уменьшения пигментации кожи и/или щетины и/или волос.

Еще одна цель изобретения относится к дерматологической композиции по изобретению для применения при лечении повышенной пигментации кожи.

Предпочтительно, косметическую композицию по изобретению применяют для уменьшения интенсивности и/или удаления и/или профилактики появления пигментных пятен на коже.

Предпочтительно, косметическую композицию по изобретению применяют для отбеливания и/или осветления кожи и/или щетины и/или волос.

Таким образом, применение молекулы формулы I и/или растительного экстракта, содержащего такую молекулу, по настоящему изобретению позволяет выравнивать тон кожи, что характеризуется однородным, более светлым, более прозрачным, более белым тоном кожи. Это приводит к тому, что повышается степень белизны тона кожи.

Предпочтительно, косметическую композицию по изобретению применяют для выравнивания тона кожи.

Преимущества, полученные при применении композиции по настоящему изобретению, в частности, полезны для чувствительной кожи, независимо от ее природы (сухая, нормальная или жирная), и, в частности, для чувствительной кожи, для которой характерна матовость и потеря белизны.

Предпочтительно, косметическую композицию по изобретению применяют в отношении чувствительной кожи.

Применение молекул формулы (I) и/или растительных экстрактов, содержащих такие молекулы, по настоящему изобретению полезно для:

- уменьшения интенсивности и/или удаления пигментных пятен, таких как пигментные пятна, вызванные провоспалительным стрессом, например, вызванных УФ-облучением коричневых пигментных пятен, или для уменьшения интенсивности и/или удаления хлоазмы;

- снижения интенсивности и/или ингибирования выработки меланинов, которые ответственны за пигментацию.

Косметические и/или дерматологические композиции по изобретению могут включать, помимо активного вещества (или активных веществ), физиологически приемлемую среду, т.е., среду, которая совместима с нанесением на кожу и/или волосистую часть головы, слизистые мембраны, волосы, щетину и/или в глаза.

Предпочтительно, косметическая или дерматологическая композиция по настоящему изобретению содержит в качестве активного вещества количество молекулы формулы (I), составляющее от 10 мг до 5 г, и более предпочтительно - от 100 мг до 1 г на 100 г указанной композиции.

Предпочтительно, косметическая или дерматологическая композиция по настоящему изобретению содержит в качестве активного вещества количество растительного экстракта по изобретению, составляющее от 0,1 мг до 10 г, и более предпочтительно - от 1 г до 5 г на 100 г указанной композиции.

Косметическая и/или дерматологическая композиция по настоящему изобретению может, предпочтительно, выпускаться в любой из лекарственных форм, обычно применяемых в области косметологии и дерматологии для местного или перорального применения.

Предпочтительно, местная форма может, в частности, выпускаться в виде:

- возможно, гелеобразного водного или водно-спиртового раствора;

- возможно, двухфазной дисперсии типа лосьона;

- эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле или гетерогенной эмульсии;

- водного геля;

и может выпускаться в форме сыворотки, крема, геля, мази, молочка, лосьона, пасты или пены. Она также может применяться в виде аэрозоля или твердого вещества, включая, например, пену или карандаш.

Одним из преимуществ настоящего изобретения является то, что композиции по изобретению демонстрируют хорошую переносимость кожей, даже в случае чувствительной кожи, независимо от ее природы (сухая, нормальная или жирная).

Эта композиция также может выпускаться в виде лекарственной формы для перорального применения, такой как таблетка, капсула, порошок для приготовления суспензий для питья.

Композиция также может содержать любые компоненты, стандартно применяемые для предполагаемого применения. Сюда относятся вода, растворители, минеральные вещества, животные и/или растительные масла, воски, пигменты, химические или минеральные фильтры, антиоксиданты, наполнители, поверхностно-активные вещества, стабилизаторы, консерванты, ароматизаторы и окрашивающие вещества.

Композиция также может сочетать активное вещество для уменьшения пигментации по изобретению с другими веществами для уменьшения пигментации, хорошо известными специалистам в данной области, включая: производные витамина С, производные резорцина, в частности, 4-n-бутилрезорцин или 4-(1-фенилэтил)-бензен-1,3-диол, гидрохинон, арбутин, койевую кислоту и их производные, производные токоферола.

Выбор и/или количество одного или нескольких ингредиентов также будет определяться специфическими потребностями кожи и/или щетины и/или волос, к которым будет применяться композиция, а также свойствами и стабильностью, которые необходимы для композиции по настоящему изобретению.

Еще одна цель изобретения относится к косметическому способу отбеливания и/или осветления кожи и/или щетины и/или волос, включающему нанесение на кожу и/или щетину и/или волосы косметической композиции по изобретению.

Еще одна цель изобретения относится к косметическому способу уменьшения интенсивности и/или удаления и/или профилактики появления пигментных пятен на коже, включающему нанесение на кожу косметической композиции по изобретению.

Еще одна цель изобретения относится к молекуле следующей формулы (VI):

Ее предпочтительно получают химическим или биохимическим синтезом или из растительного экстракта.

Для лучшего понимания изобретения приведены следующие далее неограничивающие примеры, которые представляют собой специфические варианты воплощения косметических и/или дерматологических композиций по изобретению.

Пример 1: Получение экстракта из надземных частей Helichrysum gymnocephalum

Провели экстрагирование (в 2 повторах) 5 кг высушенных надземных частей с применением 35 л и 25 л 95% этанола с обратным холодильником. Объединенные фильтраты сконцентрировали и высушили. Полученный экстракт, представлявший собой коричневую пасту, содержал 0,28 г гимнохалкона на 100 г сухого вещества.

Пример 2: Получение линдератина химическим синтезом

Линдератин получали в результате двухэтапного синтеза в соответствии со схемой реакции, приведенной ниже и описанной в литературных источниках^xv,xvi:

Синтез молекулы (VII) осуществляли конденсацией флороглюцина (2,4,6-тригидроксибензола) с гидроциннамонитрилом в присутствии ZnCl₂ и HCl (газообр.) в безводном диэтиловом эфире.

После этого получали линдератин конденсацией α-фелландрена, который можно приобрести в компании Sigma Aldrich (95%), и молекулы (VII) в присутствии пара-толуолсульфокислоты в безводном бензоле.

Полученный в результате линдератин во был идентичен всех отношениях природному продукту, описанному в литературных источниках^xvi.

Пример 3: Получение гимнохалкона из надземных частей Helichrysum gymnocephalum

Надземные части высушили и измельчили перед экстрагированием с применением этилацетата. Этот экстракт фракционировали на колонке кремнезема со средним давлением, элюируя гептаном, дихлорметаном и ацетоном, в результате после проведения анализа с помощью ТСХ и объединения идентичных фракций были получены 11 фракций. Затем активную фракцию 8 фракционировали на колонке кремнезема с привитыми полимерами С-18 с помощью градиента ацетонитрил / вода +0,1% уксусная кислота, в результате был выделен гимнохалкон формулы VI (0,02% выход при расчете на сухие части растения).

Структурные данные:

Анализ масс-спектрометрией с электроспрей ионизацией в режиме положительных ионов дал аддукт [M+Na]⁺=431,3 и [2M+Na]⁺=839,4. В режиме отрицательных ионов был обнаружен [М-Н]^-=407,3. Таким образом, масса соединения составляла 408 г/моль. При тандемной масс-спектрометрии (МС/МС) высвобождался фрагмент 152, соответствующий α-терпинеолу (или p-мент-1-ен-8-олу).

Одно- и двумерный ЯМР-анализ протонов и атомов углерода позволил идентифицировать структуру в относительной конфигурации, соединения, имеющего эмпирическую формулу С₂₅Н₂₈О₅.

ЯМР-профиль был характерным для 2′,4′,6′-тригидроксихалкона (II), за исключением положения 3'. Он также был очень похож на профиль линдерахалкона (IV)^IX, за исключением положений 8", 9" и 10", которые были в большей степени демаскированы благодаря присутствию гидроксильной функциональной группы в положении 8".

Пример 4: Получение метиллиндератина из листьев Piper aduncum Листья высушили и измельчили перед проведением экстрагирования с помощью 96% этанола (1:10, мас./об.) путем мацерации при комнатной температуре в течение 15 ч в темноте. Этот экстракт (выход 17%) фракционировали на колонке кремнезема со средним давлением, элюируя гептаном, этилацетатом и метанолом, в результате после проведения анализа с помощью ТСХ и объединения идентичных фракций была получена 21 фракция. Фракции 3 и 4 далее фракционировали с помощью полупрепаративной ВЭЖХ на колонке кремнезема с ковалентно привитыми полимерами С-18 и градиента ацетонитрил/вода; в результате был выделен метиллиндератин формулы V (13% выход в пересчете на экстракт, 2,2% - на сухое растение).

Данные ЯМР и масс-спектрометрии соответствовали данным, приведенным для метиллиндератина в литературных источникахⁱⁱ.

ПРИМЕРЫ КОСМЕТИЧЕСКИХ КОМПОЗИЦИЙ

Пример 1: Сыворотка для уменьшения пигментации

Пример 2: Отбеливающий крем

Фармакологические испытания: ингибирование синтеза меланина

Меланоциты - это имеющие форму звезды клетки, которые содержатся в небольшой пропорции в базальном слое эпидермиса. Их основной функцией является обеспечение меланогенеза, процесса, в ходе которого синтезируется меланин для специализированных органелл, называемых меланосомами, которые затем транспортируются и распределяются в соседние кератиноциты через дендритные отростки. Этот контакт с кератиноцитами обусловливает пигментацию кожи, защитный механизм эпидермиса против мутагенного влияния ультрафиолетовых лучей. Каждый меланоцит образует связи примерно с тридцатью шестью кератиноцитами, формируя таким образом «эпидермально-меланиновую единицу».

Меланогенез состоит из серии ферментативных и спонтанных реакций, предшественником в которых выступает тирозин. В этом процессе участвуют три основных фермента: тирозиназа и родственные тирозиназе белки 1 и 2 (TRP 1 и 2)^xi.

Известно, что некоторые экзогенные молекулы подавляют меланогенез. Гидрохинон ингибирует синтез меланина, предоставляя субстрат для тирозинкиназы и тем самым отвлекая на себя ее активность^xii. Так же действует и арбутин, который содержит гидрохинон. Койевая кислота снижает активность тирозиназы, ингибируя индуцируемую УФ-излучением повышенную пигментацию^xiii. Витамин С ингибирует тирозиназу, но также проявляет себя как сильный восстанавливающий агент, предотвращая окислительное изменение цвета меланина. Витамин А снижает уровень экспрессии тирозиназы и TRP-2^xiv.

Авторы изобретения разработали тест для измерения уровня синтеза меланина с применением колориметрического анализа в линии клеток меланомы мыши B16-F10. Такой анализ позволяет испытывать эффективность активных веществ в отношении уменьшения пигментации.

Дополнительные экспериментальные данные

Получение экстракта из надземных частей Piper aduncum

Провели экстрагирование 5 кг листьев Piper aduncum с применением 35 л и 50 л 95% этанола с обратным холодильником, при комнатной температуре. Объединенные фильтраты сконцентрировали и высушили. Полученный экстракт (выход 17%) представлял собой зеленую пасту.

Фармакологические испытания: ингибирование синтеза меланина

ⁱ Bioorganic & Medicinal Chemistry 13, 2005, 433-441.

ⁱⁱ Orjala J. et al. New monoterpene-substituted dihydrochalcones from Piper aduncum. Helv. Chem. Acta 1993, 76, 1481-1488.

ⁱⁱⁱ Portet B. et al., Activity-guided isolation of antiplasmodial dihydrochalcones and flavanones from Piper hostmannianum var. berbicense. Phytochemistry 2007, 68, 1312-1320.

^iv Ichino K. et al., Revised structures of Linderatone and methyllinderatone. Heterocycles 1990, 31, 549-553.

^v Ichino K. et al., Studies on the flavonoid components of Lindera umbellata THUNB. Var. membranacea (maxim.) momiyama Chem Pharm Bull 1989 37, 944-947.

^vi Ichino K. et al., A new flavanone, neolinderatone, from Lindera umbellata thunb. Var. Lancea momiyama. Chem Pharm Bull 1989, 37, 1426-1427.

^vii Ichino K. et al., Two novel flavonoids from the leaves of Lindera umbellata var. Lancea and L. umbellata. Tetrahedron 1988, 44, 3251-3260.

^viii Shimomura H. et al., A chalcone derivative from the bark of Lindera umbellata. Phytochemistry 1988, 27, 3937-3939.

^ix Ichino K., Two flavonoids from two Lindera umbellata varieties. Phytochemistry 1989, 28, 955-956.

^x Benosman A. et al., New terpenylated dihydrochalcone derivatives isolated from Mitrella kentii. J. Nat. Prod. 1997, 60, 921-924.

^xi Jimbow, K. et al. Intracellular vesicular trafficking of tyrosinase gene family protein in eu-and pheomelanosome biogenesis. Pigment Cell Res. 2000.; 13 Suppl 8.: 110. - 7. 13 Suppl 8, 110-117.

^xii Curto, E.V. et al. Inhibitors of mammalian melanocyte tyrosinase: in vitro comparisons of alkyl esters of gentisic acid with other putative inhibitors. Biochem. Pharmacol. 1999, 57, 663-672.

^xiii Kuwabara, Y. et al. Topical Application of gamma-Tocopherol Derivative Prevents UV-Induced Skin Pigmentation. Biol. Pharm. Bull. 2006. Jun.; 29. (6.): 1175. - 9. 29, 1175-1179.

^xiv Ortonne, J.P. and Bissett, D.L. (2008) J. Investig. Dermatol. Symp. Proc. 2008. Apr; 13(1):10-4. 13, 10-14.

^xv Kamarul, A. M et al. Tetrahedron 59 (2003), 6113.

^xvi Crombie L, et al. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1988, 1251.