СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ МЫШЕЧНОЙ СТАДИИ ТРИХИНЕЛЛЁЗА

Изобретение относится к ветеринарной и медицинской гельминтологии и может быть использовано для иммунопрофилактики мышечной стадии трихинеллеза.

Trihinella spiralis - возбудитель трихинеллеза относится к числу наиболее патогенных социально опасных гельминтов. Вызываемое этим паразитом заболевание имеет большое распространение в различных зонах земного шара, представляет серьезную угрозу для здоровья человека и является актуальной проблемой для ветеринарной медицины. Большое влияние трихинеллеза на экономику и здоровье населения признаны Комитетом Экспертов ВОЗ. За последние годы отмечено широкое распространение трихинеллеза также в России, что связано с возросшей миграцией населения, развалом устоявшихся экономических отношений, а также в связи с ухудшением социальной жизни и снижения санитарно-эпидемиологического контроля.

По мнению исследователей с каждым годом отмечается увеличение числа случаев заболевания людей трихинеллезом. Инвазия становится важной проблемой ветеринарии и здравоохранения, требует немедленной организации методов борьбы и профилактики. Степень отрицательного влияния этой инвазии на здоровье зараженных людей трудно оценить. При высоком уровне инвазии возможно наступление летального исхода.

Такая ситуация выдвигает проблему разработки мер профилактики и лечения этого опасного гельминтозооноза в качестве одного из приоритетных направлений гельминтологической науки.

В борьбе с мышечной стадией трихинеллеза наиболее приемлемыми и осуществимыми являются два пути: химиотерапия и вакцинопрофилактика.

Проведение химиотерапии всегда сопровождается большими дозами химических препаратов и ограниченным периодом их применения - до организации мигрировавших в мышцы личинок.

К способам профилактики мышечной стадии трихинеллеза относится использование специфических и неспецифических стимуляторов иммунной системы, позволяющих повысить резистентность животных и человека к заражению Trihinella spiralis и вызвать гибель популяции паразита.

Так, согласно данным Martinez-Gomez F. et all (5) введение внутрь Lactobacillus casei в течение 6 недель вызывает полную защиту против заражения трихинеллами, но только при небольших дозах личинок.

Защита от трихинеллеза достигалась также путем введения рекомбинантного белка (rTs-Adsp) (3). При иммунизации мышей линии BALB/c этим белком в сочетании с адъювантом наблюдали снижение количества личинок трихинелл в мышцах при проверочном заражении на 46,5% по отношению к контрольной группе.

По данным Li X. et all (4) применение рекомбинантного белка TspSP - 1,3 Т. spiralis в качестве вакцинирующего препарата вызывает сокращение в мышцах массы личинок у 39% мышей по отношению к контрольной группе.

Наиболее близким к заявляемому техническому решению является способ, описанный Bautista-Garfias CR. et al (2), с использованием трех иммуностимулирующих препаратов: полного адъюванта Фрейнда (Freund′s complete adjuvant) (FCA), Конканавалина A (Concanavalin A) (Con A) и препарата Equimune (E1) и фосфатного буфера (PBS). Значительное снижение количества личинок трихинелл регистрировали в группах мышей, получавших Con A и E1 (соответственно 76% и 93,3%), в сравнении с контрольной группой, не получавшей иммуностимулирующего препарата. Адъювант Фрейнда оказался неэффективным.

Учитывая серьезную опасность трихинеллеза для здоровья людей, значительные экономические потери в отрасли животноводства важной задачей ветеринарной медицины является контроль и борьба с этой инвазией. Наиболее перспективным средством борьбы на данный момент против этого гельминтоза является использование неспецифических иммуностимуляторов и специфических иммунопрофилактических средств.

Исходя из этого проведена работа по разработке способа профилактики мышечной стадии трихинеллеза на белых мышах и крысах линии Wistar с использованием активного неспецифического иммуностимулирующего препарата нового поколения - полиоксидония. Группой авторов детально изучался механизм действия полиоксидония на все звенья иммунной системы. Установлено, что этот препарат оказывает активирующее действие на неспецифическую резистентность организма, фагоцитоз, гуморальный и клеточный иммунитет (1). В условиях in vivo полиоксидоний обладает выраженной способностью стимулировать гуморальный иммунный ответ. При введении совместно с низкими дозами антигена полиоксидоний усиливает антителообразование в 5-10 раз по сравнению с животными, получавшими только один антиген. Важно отметить, что такое усиление можно наблюдать у старых мышей, у которых иммунный ответ по сравнению с молодыми животными существенно снижен. Полиоксидоний восстанавливает иммунный ответ на Т-зависимый антиген (эритроциты барана) у мышей линии C57B 1/6, с генетически детерминированным пониженным ответом на этот антиген, а также у так называемых B-мышей, в организме которых практически отсутствуют T-клетки. Таким образом, полиоксидоний обладает способностью приводить в движение все факторы неспецифической и специфической защиты организма от чужеродных агентов антигенной природы, и это движение распространяется естественным путем, так как это происходит при развитии иммунного ответа в организме (1). Задачей предлагаемого изобретения является создание способа профилактики трихинеллеза, обеспечивающего развитие защитной иммунной реакции, предохраняющей в значительной степени от последующего заражения.

Поставленная задача решается тем, что животным вводят внутримышечно иммуностимулирующий препарат полиоксидоний двукратно с интервалом 52 часа. Количественный расчет препарата проводят по массе животного, исходя из экспериментально подобранной дозы 0,2 мг/кг.

Непосредственно перед введением препарат разводили в 0,9% растворе хлористого натрия для удобства дозирования. Проверочное заражение мышей, получивших иммуностимулирующий препарат, и контрольных животных инвазивным материалом Trihinella spiralis проводили через 48 часов после последнего введения иммуностимулятора.

Доза препарата для мышей составила 0,004 мг/животное, для крыс - 0,02 мг/животное.

Технический результат заявленного изобретения заключается в разработке способа, обладающего высоким защитным эффектом против мышечной стадии трихинеллеза.

Примеры конкретного исполнения

Пример 1. Протективные свойства заявленного способа оценивали при экспериментальном трихинеллезе на белых беспородных мышах.

Исследования провели на 20 беспородных белых мышах, массой 20 г, распределенных на 2 группы по 10 животных в каждой (таблица 1).

Первой группе мышей был введен внутримышечно двукратно с интервалом 52 часа иммуностимулирующий препарат полиоксидоний в дозе 0,2 мг/кг по массе (0,004 мг/мышь в объеме 0,2 мл стерильного физиологического раствора).

Контрольная группа получала внутримышечно по 0,2 мл стерильного физиологического раствора двукратно с интервалом 52 часа.

По истечении 48 часов после последнего введения препарата мышей заразили личинками Т. spiralis в дозе 80±5,0 личинок/мышь. Убой подопытных мышей и оценку протективного действия испытуемого иммуностимулирующего препарата проводили с 45-го дня инвазии. Результаты эксперимента, представленные в таблице 1, показали, что мыши первой группы, получившие иммуностимулирующий препарат полиоксидоний, оказались наименее подвержены инвазии, у них в мышечной ткани было обнаружено в среднем - 332,1±9,8 личинок трихинелл.

Мыши контрольной группы были все заражены с высокой интенсивностью инвазии. У мышей этой группы обнаружено в среднем по 4485±182,5 личинок трихинелл/животное. Таким образом эффективность защиты составила 92,6%.

Пример 2. Протективные свойства иммуностимулирующего препарата полиоксидоний оценивали также на 14 белых крысах линии Wistar массой 100 г, распределенных на 2 группы по 7 животных в каждой. Первая группа получила по 0,2 мг/кг массы (по 0,02 мг препарата на животное в объеме 0,4 мл стерильного физиологического раствора) внутримышечно двукратно с интервалом 52 часа. Контрольная группа крыс получила в те же сроки внутримышечно стерильный физиологический раствор в объеме 0,4 мл/животное. По истечении 48 часов после последнего введения препарата крыс опытной и контрольной группы заразили личинками Т. spiralis в дозе 140 личинок/животное. Убой крыс и оценку протективного действия иммуностимулирующего препарата полиоксидоний проводили с 45-го дня инвазии. Результаты эксперимента представлены в таблице 2. Крысы первой группы, получившие иммуностимулирующий препарат полиоксидоний, оказались наименее подвержены инвазии, у них в мышечной ткани было обнаружено в среднем 637,1±17,5, а у крыс контрольной группы - 6500,6±210,8 личинок Т. spiralis/крысу. Таким образом, защитная эффективность составила 90,2%.

Источники информации, принимаемые во внимание при составлении заявки

1. Пинегин Б.В., Некрасов А.В., Хаитов P.M. //Иммуномодулятор полиоксидоний: механизмы действия и аспекты клинического применения.//Цитокины и воспаление. 2004, №3.

2. Bautista-Garfias CR1, Zeron-Bravo F, de la Jara-Alcocer F, Flores-Castro R.// Effect of three immunostimulants on the resistance against Trichinella spiralis infection in mice. (preliminary report).//Arch Med Res. 1995 Spring; 26(1):91-3.

3. Feng S1, Wu X, Wang X, Bai X, Shi H, Tang B, Liu X, Song Y, Boireau P, Wang F, Zhao Y, Liu M.// Vaccination of mice with an antigenic serine protease-like protein elicits a protective immune response against Trichinella spiralis infection.//J Parasitol. 2013 Jun; 99(3):426-32. doi: 10.1645/12-46.1. Epub 2012 Dec 19.

4. Li X1, Yao JP, Pan AH, Liu W, Hu XC, Wu ZD, Zhou XW.// An antigenic recombinant serine protease from Trichinella spiralis induces protective immunity in BALB/c mice.// Parasitol Res. 2013 Sep; 112(9):3229-38. doi: 10.1007/s00436-013-3500-6. Epub 2013 Jul 5.

5. Martinez-Gomez F1, Fuentes-Castro BE, Bautista-Garfias CR.// The intraperitoneal inoculation of Lactobacillus casei in mice induces total protection against Trichinella spiralis infection at low challenge doses.// Parasitol Res. 2011 Dec; 109(6):1609-17. doi: 10.1007/s00436-011-2432-2. Epub 2011 May 4.