Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПЕРВИЧНОГО СКЛЕРОЗИРУЮЩЕГО ХОЛАНГИТА

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано как способ моделирования первичного склерозирующего холангита.

Известен способ моделирования цирроза печени путем введения химических веществ лабораторному животному, согласно которому в желудок вводят два раза в неделю в течение месяца 50%-ный раствор совтола-1 на оливковом масле из расчета 0,25 мл на 100 г массы тела и 10%-ный раствор этанола вместо воды для питья (Патент РФ №2197018 МКИ 6 G09B 23/28, 2000). Данный способ принят за аналог.

Известен также способ математического моделирования первичного склерозирующего холангита, включающий воздействие на паренхиму и желчные протоки, в котором в ответ на внутривенное введение желчи в организм отмечали изменения плотности паренхимы и желчных протоков в 12 точках модели (2 - Jonas E., Slezak P., Miller N. Imaging-based dynamic liver testing-a computerized simulation. Hepatogastroenterology. 2000 Jul-Aug; 47(34):967-72.). Данный способ принят за прототип. Однако точность компьютерного моделирования первичного склерозирующего холангита данным способом ограничена.

Целью изобретения является повышение точности моделирования первичного склерозирующего холангита на организме животного.

Технический результат достигается тем, что вводят пикрилсульфоновую кислоту в просвет проксимального отдела слепой кишки крысы в дозе 0,07-0,15 мг/кг и в сигмовидную кишку 0,02-0,05 мг/кг с интервалом между введениями 45-60 мин.

Способ реализуется следующим образом.

Крысам породы Вистар весом 200-225 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза (40-60 мг/кг) в просвет проксимального отдела слепой кишки в дозе 0,07-0,15 мг/кг и в сигмовидную кишку вводят 0,02-0,05 мг/кг вводили пикрилсульфоновую кислоту. Интервал между введениями составляет 45-60 мин.

Спустя 1-1,5 мес отмечается потеря массы тела, рецидивирующее повышение температуры, кожный зуд, шерсть теряет блеск, становится более редкой, на коже видны следы расчесов. Наблюдается повышение частоты стула с присоединением крови.

После формирования первичного склерозирующего холангита выполняли биопсию печени.

Было проведено по 3 биопсии у каждого экспериментального животного с последующим приготовлением 3 гистологических срезов из каждого биоптата. Верифицированы изменения, характерные для первичного склерозирующего холангита: склерозирование и облитерация внутри- и внепеченочных желчных протоков тяжами соединительной ткани по типу «луковой шелухи» Гнойной деструкции эпителия желчных протоков не наблюдается. Отмечается стадийность развития ПСХ. На I стадии обнаруживаются отек в перипортальном поле, умеренные воспалительные инфильтраты и рыхлые волокна соединительной ткани. При прогрессировании заболевания концентрически расположенные волокна соединительной ткани уплотняются, сдавливают желчные протоки, приводя к деструкции эпителия. Перипортальные поля инфильтрируются мононуклеарными клетками, появляются отдельные участки ступенчатых некрозов. Из интерлейкинов в ткани печени обнаруживаются преимущественно ФНО-β. в меньшей степени - ФНО-α и совсем в небольшом количестве - ИФН-γ. Отмечается пролиферация желчных протоков, которая менее выражена, чем при ПБЦ. В отличие от ПБЦ, воспалительная деструкция желчных протоков при ПСХ отсутствует или же очень незначительна.

Гистологические изменения во II стадии ПСХ сходны с таковыми в I стадии заболевания, однако компрессия и разрушение желчных протоков более выражены, а волокна соединительной ткани проникают в печеночные дольки.

В III и IV стадии образуются соединительнотканные «мостики» фиброза, формируется цирроз печени с нарушением структуры печеночных долек и появлением узлов-регенератов различной величины. Желчные протоки в конечной стадии ПСХ полностью облитерированы, и лишь участки циркулярно расположенных соединительнотканных волокон указывают на местонахождение желчных протоков

Следовательно, при введении пикрилсульфоновой кислоты в заявляемых режимах получена модель первичного склерозирующего холангита.

Уже к концу 6 недели сформировывались ступенчатые некрозы, облитерация желчных протоков, на месте которых циркулярно расположены соединительнотканные волокна.

Способ подтверждается следующими примерами.

Пример 1.

Крысе породы Вистар весом 200 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза (40 мг/кг) проведена срединная лапаротомия и в просвет проксимального отдела слепой кишки с помощью шприца вводили пикрилсульфоновую кислоту в дозе 0,07 мг/кг. Спустя 45 мин в сигмовидную кишку также вводили пикрилсульфоновую кислоту в дозе 0,02 мг/кг.

Спустя 1 мес отмечали потерю массы тела, рецидивирующее повышение температуры, кожный зуд, шерсть теряет блеск, становится более редкой, на коже видны следы расчесов. Наблюдается повышение частоты стула с присоединением крови.

В условиях нембуталового наркоза выполняли краевую биопсию печени. Проведен тщательный гемостаз. На гистологических срезах верифицированы изменения, характерные для первичного склерозирующего холангита: склерозирование и облитерация внутри- и внепеченочных желчных протоков тяжами соединительной ткани по типу «луковой шелухи». Обнаруживаются отек в перипортальном поле, умеренные воспалительные инфильтраты.

Через 2 недели под нембуталовым наркозом проведена релапаротомия. Проведен забор ткани печени из области ворот и из квадратной доли печени. Отмечается уплотнение соединительной ткани, сдавление желчных протоков с деструкцией эпителия. Перипортальные поля инфильтрированы мононуклеарными клетками, появляются отдельные участки ступенчатых некрозов. В ткани печени обнаруживаются преимущественно ФНО-β, в меньшей степени - ФНО-α.

В отдельных участках печеночной ткани образуются соединительнотканные «мостики» фиброза, формируется цирроз печени с нарушением структуры печеночных долек и появлением узлов-регенератов различной величины. Желчные протоки полностью облитерированы, и лишь участки циркулярно расположенных соединительнотканных волокон указывают на местонахождение желчных протоков

Пример 2.

Крысе породы Вистар весом 225 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза (60 мг/кг) в просвет проксимального отдела слепой кишки через зонд вводили пикрилсульфоновую кислоту в дозе 0,15 мг/кг. Спустя 60 мин в сигмовидную кишку вводили пикрилсульфоновую кислоту в дозе 0,05 мг/кг.

Спустя 1 мес отмечается прогрессирующая потеря массы тела, кожный зуд, шерсть теряет блеск, становится более редкой, на коже видны следы расчесов, выраженное повышение температуры, Наблюдается повышение частоты стула с прожилками крови.

Выполняли краевую биопсию печени, проводили гемостаз гемостатической губкой.

Приготавливали гистологические срезы. Отмечается склерозирование и облитерация внутри- и внепеченочных желчных протоков тяжами соединительной ткани по типу «луковой шелухи» Обнаруживаются отек в перипортальном поле, умеренные воспалительные инфильтраты и рыхлые волокна соединительной ткани.

Через 2 недели под нембуталовым наркозом проведена релапаротомия. Проведен забор ткани печени из области ворот и из квадратной доли печени. Отмечается уплотнение соединительной ткани, сдавление желчных протоков с деструкцией эпителия. Перипортальные поля инфильтрированы мононуклеарными клетками, появляются отдельные участки ступенчатых некрозов. В ткани печени обнаруживаются преимущественно ФНО-β, в меньшей степени - ФНО-α, в небольшом количестве - ИФН-γ.

Пример 3.

Крысе породы Вистар весом 210 г в условиях хирургической стадии нембуталового наркоза (50 мг/кг) проведена срединная лапаротомия и в просвет проксимального отдела слепой кишки через шприц вводили пикрилсульфоновую кислоту в дозе 0.09 мг/кг. Спустя 50 мин в сигмовидную кишку через зонд также вводили пикрилсульфоновую кислоту в дозе 0,04 мг/кг.

Через 1 мес отмечали снижение массы тела, повышение температуры, кожный зуд, шерсть становится более редкой, тусклой, сероватого оттенка, на коже видны следы расчесов. Наблюдается повышение частоты стула с прожилками крови.

В условиях нембуталового наркоза выполняли краевую биопсию печени. Проведен гемостаз. На гистологических срезах отмечаются: склерозирование и облитерация внутри- и внепеченочных желчных протоков тяжами соединительной ткани - изменения, характерные для первичного склерозирующего холангита. Обнаруживаются отек в перипортальном поле, умеренные воспалительные инфильтраты.

Через 2 недели под нембуталовым наркозом проведена релапаротомия. Проведен забор ткани печени из области ворот и из квадратной доли печени. Отмечается сдавление желчных протоков с деструкцией эпителия уплотненной соединительной тканью. В перипортальных полях обнаружены мононуклеарные клетки, появляются отдельные участки ступенчатых некрозов. В ткани печени обнаруживаются преимущественно ФНО-β, в меньшей степени - ФНО-α и ИФН-γ.

В отдельных участках печеночной ткани образуются соединительнотканные «мостики» фиброза, формируется цирроз печени с нарушением структуры печеночных долек и появлением узлов-регенератов различной величины. Желчные протоки полностью облитерированы, и лишь участки циркулярно расположенных соединительнотканных волокон указывают на местонахождение желчных протоков

Следовательно, при введении пикрилсульфоновой кислоты в заявляемых режимах получена модель первичного склерозирующего холангита.

Уже к концу 6 недели сформировывались ступенчатые некрозы, облитерация желчных протоков, на месте которых циркулярно расположены соединительнотканные волокна.

Способ реализован на 25 крысах. Модель ПСХ получена у всех экспериментальных животных.