Результат интеллектуальной деятельности: СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЦИДИВОВ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ГЛИОМ

Изобретение относится к медицине, к биологическим исследованиям в нейрохирургии и онкологии, и может быть использовано для прогнозирования рецидивов злокачественных глиом.

Злокачественные глиомы составляют около 60% от всех первичных опухолей центральной нервной системы и в последние десятилетия во всем мире и России наблюдается рост заболеваемости опухолями головного мозга (ОГМ). Современная тактика лечения нейроонкологических больных определяется на основании гистологического и иммуногистохимического исследований, определяющих прогноз и химиочувствительность глиальных опухолей, однако эти показатели далеко не всегда полностью характеризуют гистобиологическую агрессивность опухолей, несмотря на верифицированность некоторых гистобиологических маркеров глиальных опухолей (см. К.А. Колотов, О.В. Машковцев, Б.Н. Бейн «Иммуно гистохимические особенности глиальных опухолей головного мозга», «Медициинский альманах» №4 (23), сентябрь 2012 г, С. 66-69).

Также, уже изучены мутации в гене IDH1(R132H), активность гена MGMT, экспрессия мРНК генов MGMT, ERCC1, PDGFR-α, VEGF, ТОР2А. Установлено отсутствие генетической гетерогенности в опухоли при определении мутаций в генах IDH1/2. Доказано, что гены MGMT и ERCC1 являются предиктивными маркерами и позволяют прогнозировать объективный ответ на терапию темозоломидом и препаратами платины, а следовательно - увеличение безрецидивного периода (см. Matsko, M.V. А case of exceptionally long progression-free survival after radiation and chemotherapy in the patient with glioblastoma with very low MGMT expression / M.V. Matsko, D.E. Matsko, E.N. Imyanitov // Virchows Arch. - 2014. -Suppl. 465. - S. 255; см. Matsko, M.V. Expression of some genes in adult supratentorial primitive neuroectodermal tumors / D.E. Matsko, M.V. Matsko, E.N. Imyanitov // Virchows Arch. - 2014. - Suppl. 465. - S.324; см. Мацко, М.В. Значимый регресс глиобластомы с низкой экспрессией гена MGMT при химиолучевой терапии / М.В. Мацко, Е.И. Лучин, А.Г. Иевлева // Вопр. Онкол. - 2011. - №2. - С. 245-249; см. Мацко, М.В. Молекулярная генетика нейроэпителиальных опухолей в свете новой классификации опухолей ЦНС ВОЗ (2016) / М.В. Мацко, Д.Е. Мацко, В.М. Моисеенко // Злокачественные опухоли - 2016 - Т. 21 - №4, спец. выпуск 1 - С. 297-298).

Но, несмотря на имеющиеся достижения, отсутствие эффективного способа прогнозирования рецидивов глиальных опухолей, появление рецидивов глиальных опухолей с увеличением степени злокачественности и устойчивостью к комплексному лечению побудили продолжать поиск способа прогнозирования рецидивов глиальных опухолей.

Авторами проведен поиск способов прогнозирования рецидивов злокачественных глиом по научной медицинской и патентной литературе.

Так в изобретении «Способ диагностики и мониторирования течения церебральных глиом» (см. Патент на изобретение RU 2656182 С1, опубл. 31.05.2018, Бюл. №16), включающий определение уровней экспрессии генов микроРНК, отличающийся тем, что определяют уровни экспрессии генов микроРНК-21, -128 и -342 в слюне и при повышении экспрессии гена микроРНК-21 и снижении экспрессии генов микроРНК-128 и -342 по сравнению с референтными значениями диагностируют церебральную глиому, причем степень изменения экспрессии генов по сравнению с референтными значениями соответствует степени прогрессии глиомы. Использование заявленного изобретения позволяет проводить комплексную оценку состояния патологического процесса при церебральных глиомах, включающую диагностику, активность, чувствительность к химиопрепаратам, мониторирование пациентов на фоне проводимой терапии и оценку эффекта от оперативного вмешательства, неинвазивными средствами, однако прогнозировать быстрые рецидивы или их отсрочку данным способом проблематично.

Известно изобретение «Способ прогнозирования развития направленности патологического процесса у больных с опухолями головного мозга» (см. Патент на изобретение RU №2433410 С2, опубл. 10.11.2011, Бюл. №31), согласно которому в первые сутки после операции в ликворе определяют активность протеиназы широкой субстратной специфичности - плазмина. При повышении показателя до 0,200 КЕ/мл прогнозируют развитие рецидива опухоли в течение 4-5 месяцев после операции, а при активности плазмина выше 0,200 КЕ/мл прогнозируют безрецидивное течение послеоперационного периода в течение двух лет.Способ позволяет на ранних этапах после операции определить сроки продолженного роста злокачественной опухоли головного мозга. Однако, по активности плазмина судить о возможном рецидиве глиальных опухолей головного мозга не представляется возможным.

Так же известно изобретение «Способ определения ангиогенеза глиомы» (см. Патент на изобретение RU №2203620 С1, опубл. 10.05.2003, Бюл. №13), в котором проводят томографические исследования головного мозга с последующей рентгенометрией опухоли и всего очага патологических изменений в четырех направлениях на срезах, выполненных в сагиттальной и горизонтальной плоскостях. Определяют коэффициент активности К ангиогенеза по соотношению средних значений диаметра опухоли D_p.о и диаметра очага патологических изменений D_cp.п. При К≤0,8 ангиогенез в глиоме считают активным, при К≥0,8 ангиогенез в глиоме определяют как неактивный. Способ позволяет повысить точность определения. Однако, на ангиогенез влияет множество факторов, например, низкий уровень экспрессии генов, которые отвечают за неоангиогенез тимидин-фосфорилаза, PDGFR-α, VEGF, ERCC1, MGMT, βIII-тубулин, топоизомераза 2-альфа и так далее, но их исследование длительно по времени и достаточно дорогостоящее, разработать поэтому решено разработать более бюджетный и быстрый способ.

Существует изобретение «Способ прогнозирования рецидива злокачественного опухолевого заболевания» (см. Патент на изобретение RU 2620306 С2, опубл. 24.05.2017, Бюл. №15) применение которого позволяет получить заключение о вероятности рецидива злокачественных опухолей у онкобольных после проведенного лечения на основании оценки кожной иммунологической реакции гиперчувствительности замедленного типа в ответ на введение опухолеассоциированных антигенов (ОАА). Согласно этому способу у пациента определяют степень выраженности кожной иммунологической реакции гиперчувствительности замедленного типа. Пациенту внутрикожно вводят опухолеассоциированные антигены с последующим измерением размеров гиперемии (покраснения)кожи в миллиметрах. Измерение производят в установленное контрольное время после внутрикожного введения опухолеассоциированных антигенов. Отсутствие гиперемии кожи или размер гиперемии кожи меньше установленной контрольной величины указывает на высокий риск рецидива онкозаболевания. Размер гиперемии кожи свыше установленной контрольной величины указывает на низкий риск рецидива онкозаболевания. Указанный технический результат обеспечивается также и тем, что способ используется в комбинации с дополнительными диагностическими методами исследования пациента (клиническими, лабораторно-инструментальными и др.), например оценкой психоэмоционального состояния, лабораторных показателей крови и др. для повышения точности прогнозирования рецидива злокачественных опухолей. Однако комплекс рутинных методов не является специфичным для прогнозирования рецидивов злокачественных глиом.

Существует «Способ прогнозирования рецидива солидных опухолей» (см. Патент на изобретение RU 2184971, опубл. 10.07.2002, Бюл. №19), при котором не реже 1 раза в месяц в крови исследуют процентное содержание общих Т-лимфоцитов и при превышении верхнего предела среднестатистического значения его нормы прогнозируют начало рецидива опухоли. Однако изменения общих Т-лимфоцитов характерно для многих патологических состояний: аутоиммунных и системных заболеваний, хронических патологических процессов, нарушений эндокринного характера, инфекционных заболеваний и так далее, что доказывает отсутствие специфичности данного показателя для прогнозирования рецидивов злокачественных глиом.

Техническим результатом изобретения является разработка способа прогнозирования рецидивов глиальных опухолей.

Технический результат достигается тем, что исследуют взятый интраоперационно фрагмент удаленной опухоли, в котором с использованием моно- и поликлональных антител к коннексинам - 36, 43 определяют уровень экспрессии коннексинов - 36, 43 и при негативной экспрессии коннексинов - 36, 43 прогнозируют рецидивирование злокачественных глиом в первые 5 месяцев после удаления опухоли, а при позитивной экспрессии коннексинов - 36, 43 прогнозируют безрецидивное течение заболевания.

Для понимания сути изобретения приводим фигуры.

На Фиг. 1 изображена негативная экспрессия коннексина - 36. ИГХ-реакция. х200.

На Фиг. 2. изображена негативная экспрессия коннексина-43 на большем протяжении клеток опухоли. ИГХ-реакция. х200.

На Фиг. 3 изображена позитивная экспрессия коннексина-36 клеток опухоли. ИГХ-реакция, х200.

На Фиг. 4. изображена позитивная экспрессия коннексина-43 клеток опухоли х200.

Способ осуществляется следующим образом.

Пациенту с подтвержденным диагнозом - глиобластома с целью прогноза рецидивирования заболевания проводят иммуногистохимическое исследование коннексинов 36 и 43. При негативной экспрессии коннексинов - 36, 43 прогнозируют высокий риск рецидивирования злокачественных глиом в течение первых пяти месяцев после проведенного удаления опухоли, при позитивной экспрессии коннексинов -36, 43 прогнозируют безрецидивное течение послеоперационного периода. При других значениях экпрессии коннексинов - 36, 43 считают результат не определенным.

Приводим клинические примеры применения способа.

Клинический пример 1.

Больной Ц., 78 лет, поступил в РостГМУ 05.09.2019 с диагнозом: глиальная опухоль левой теменной доли. При поступлении жалобы на общую слабость, некоторое снижение объема движений и силы в правых конечностях, наличие моторной афазии.

Анамнез заболевания: Страдает в течение двух месяцев, когда появились вышеперечисленные жалобы, обратился к врачу.

03.09.19 выполнили МРТ головного мозга, визуализировали объемное образование левой теменной доли, 06.09.19 - операция костнопластическая трепанация в левой теменной области, удаление опухоли головного мозга; г/а - плеоморфная глиобластома с обширными кровоизлияниями. По данным иммуногистохимического исследования от 09.09.09 - глиобластома.

Проведено иммуногистохимическое исследование коннексинов 36 и 43, которое установило, что имелась негативная экспрессия коннексинов-36, 43 на большем протяжении клеток опухоли (ИГХ-реакция с антителами к коннексинам-36,43 х200) (см. Фиг. 1, Фиг. 2).

В Ростовском онкодиспансере проведен курс ДГТ СОД 60 Гр и 4 курса XT темозоламидом из расчета 200 мг/м площади поверхности тела.

06.02.20 на контрольной МРТ головного мозга (спустя 5 месяцев после операции и комплексного лечения) выявлен продолженный рост опухоли. Повторно проведено оперативное лечение, удаление продолженного роста опухоли, г/а - плеоморфная глиобластома с обширными некрозами и кровоизлияниями.

Пациенту в РОД рекомендована адъювантная таргетная химиотерапия (Бевазицумаб) в сочетании с ингибиторами топоизомеразы (Иринотекан), однако, несмотря на все усилия, после второго курса полихимиотерапии спустя 8 дней состояние пациента резко ухудшилось, внезапно развилось угнетение сознания до сопора, по «скорой помощи» доставлен в отделение ОНМК, где выполнена СКТ головного мозга, обнаружено кровоизлияние в опухоль с выраженным дислокационным синдромом пациент загрузился до комы 2, а спустя сутки констатирована смерть.

Клинический пример 2.

Пациент С, 62 лет, поступил в РостГМУ 15.11.2018 с диагнозом: Глиальная опухоль правых теменной и затылочной долей (заднего стыка). При поступлении жалобы на снижение объема движений и силы в левых конечностях, джексоновские эпиприпадки, больше в левой руке.

Оперирован 16.11.18 - костно-пластическая трепанация в правой теменно-затылочной области, удаление опухоли головного мозга. Гистологическое исследование - изоморфноклеточная глиобластома. Проведено иммуногистохимическое исследование коннексинов 36 и 43, которое установило позитивную экспрессию коннексина-36, 43 в клетках злокачественной глиомы. ИГХ-реакция х200 (см. Фиг. 3, Фиг. 4).

В областном онкодиспансере был проведен курс адъювантной ДГТ СОД 60 Гр и многокурсовая химиотерапия темозоламидом из расчета 200 мг/м² площади поверхности тела.

При контрольном МРТ исследовании головного мозга 19.03.2020 признаков опухолевого роста не выявлено, продолжали XT темозоламидом, контрольное МРТ исследование головного мозга 28.08.2020 г. признаков опухолевого роста также не выявлено.

Данным способом был рассчитан прогноз рецидивирования злокачественных глиом 24 пациентам.

Технико-экономическая эффективность способа заключается в том, что исследование взятого интраоперационно фрагмента удаленной опухоли, с использованием моно- и поликлональных антител к коннексинам-36, 43 и определение наличия их экспрессии позволяет прогнозировать рецидивы злокачественных глиом.