Результат интеллектуальной деятельности: Способ диагностики заболеваний щитовидной железы у кошек

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к ветеринарной эндокринологии домашних животных, и предназначено для диагностики и оценки эффективности лечения различных заболеваний щитовидной железы кошек разных пород и возрастов.

Сущностью изобретения является определение концентрации тиреоидных гормонов кошек определенных пород и возрастов. Оценка концентрации гормонов и расчет показателей осуществляется иммуноферментным (ИФА) методом. Результатом исследования стало создание референсных показателей тиреотропного гормона, тироксина общего, тироксина свободного, трийодтиронина общего, трийодтиронна свободного, адренокортикотропного гормона, кортизола у кошек определенных пород и возрастов. Установленные нормативные значения позволяют с высокой вероятностью поставить точный диагноз кошкам особых пород и возрастов с патологиями щитовидной железы.

Заболевания эндокринной системы у мелких домашних животных изучены крайне мало, несмотря на их частую встречаемость. К патологиям желез внутренней секреции у кошек относится тиреотоксикоз и гипотиреоз.

Тиреотоксикоз представляет собой заболевание, обусловленное усиленной выработкой и секрецией гормонов щитовидной железы, а, именно повышением содержания в крови тироксина и трийодтиронина. У человека, хотя и редко, данное заболевание является следствием нарушения функции гипоталамуса и гипофиза. Так же теоретически, причиной тиреотоксикоза может быть и активная деструкция щитовидной железы, сопровождающаяся выделением в кровь большого количества тиреоидных гормонов. Тиреотоксикоз у кошек же практически всегда связан с автономной гиперфункцией щитовидной железы, то есть обусловлен первичным патологическим процессом в одной или обоих долях щитовидной железы.

Гипотиреоз - стойкое снижение тиреоидных гормонов в крови, провидящее к различным метаболическим нарушениям. Различают первичный, вторичный и третичный гипотиреоз. Первичный гипотиреоз характеризуется различными патологиями непосредственно в самой щитовидной железы. К ним относятся: лимфоцитарный тиреоидит, идиопатическая атрофия щитовидной железы, опухоли щитовидной железы, гиперплазия фолликулярных клеток щитовидной железы. Вторичный развивается при нарушениях функционирования гипофиза, когда происходит изменение выработки тиреотропного гормона. А именно при дефектах развития гипофиза, кистах гипофиза, гипоплазии гипофиза, деструкции гипофиза, различных опухолях. Третичная форма гипотиреоза напрямую связана с синтезом тиролиберина и обнаруживается при его недостаточной секреции в связи с врожденными и приобретенными дефектами развития гипоталамуса.

Тиреотоксикоз встречается у кошек разного возраста, но чаще всего в возрасте 13 лет. Среди кошек старше 8 лет он является самой распространенной эндокринной патологией, а у животных моложе 4 лет развивается крайне редко. Кошки с тиреотоксикозом моложе 8 лет составляют менее 5%. Частота заболевания не зависит ни от породы, ни от пола, хотя у сиамских кошек риск развития тиреотоксикоза может быть ниже. В исследовании Фелдмена Э. (Фелдмен Э., Нельсон Р. Эндокринология и репродукция собак и кошек. - М.:Софион. - 2008. - 1256 с.) сообщалось о повышенном риске данной патологии у домашних кошек персидских пород, содержащихся на консервированном корме и подвергающихся действию противоблошных средств, инсектицидов и гербицидов. Пилов Α.X. (Пилов А.Х. Морфологическая и функциональная характеристика щитовидной железы домашних животных / А.Х. Пилов; Кабардино-Балкарская государственная сельскохозяйственная академия. - // Вестник РАСХН. - 2003. - №3. - С. 62-63.) показал, что у кошек двух генетически близких пород сиамских и гималайских, болезнь развивается реже чем у животных других пород.

Гипотиреоз у кошек встречается не так часто. Первичный гипотиреоз наблюдается крайне редко, вторичная и третичная форма описана единичными случаями, и только ятрогенный гипотиреоз хорошо известен. Ятрогенный форма гипотиреоза обнаруживается после лечения гипертиреоза и встречается гораздо чаще, чем приобретенная форма. Наблюдается гипотиреоз у кошек в зрелом возрасте, начиная с 10 лет.

Из известного уровня техники известны различные способы диагностики заболеваний щитовидной железы у кошек.

Известен способ для диагностики и мониторинга гипертиреоза у животных семейства кошачьих, основанный на измерении уровня экспрессии генов в биологическом образце [RU 2593952 С2, C12Q 1/68 (2006.01), 10.08.2016 г.]. Данный способ не предназначен для определения гормональной активности кошек в зависимости от породы и возраста, а базируется на исследовании экспрессии биомаркеров в биологическом образце.

Известны способы диагностики гипертиреоза у животных-компаньонов, которые включают определение уровня нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид натрий-йодного симпортера в биологическом образце кошки с SEQ ID NO и сравнение уровня нуклеиновой кислоты с референсным уровнем указанной нуклеиновой кислоты, определенным у контрольных кошек без гипертиреоза. [RU 2612901 С2, C12Q 1/68 (2006.01), C07K 14/705 (2006.01), 13.03.2017 г.]. Недостатком данного способа является труднодоступность оборудования для его осуществления, а также его высокая стоимость.

Задачей изобретения является разработка легкодоступного способа диагностики заболеваний щитовидной железы кошек в зависимости от породы и возраста на основе референсных показателей тиреоидных гормонов.

Технической задачей заявленного в качестве изобретения способа диагностики заболеваний щитовидной железы у кошек на основе референсных показателей тиреоидных гормонов является прежде всего установление новых диагностических критериев состояния щитовидной железы в соответствии с определенной породой и возрастом животных.

Техническим результатом разработанного способа диагностики заболеваний щитовидной железы у кошек на основе референсных показателей тиреоидных гормонов является повышение вероятности постановки точного диагноза у кошек особых пород и возрастов с патологиями щитовидной железы.

Поставленная техническая задача и названный технический результат достигаются заявленным в качестве изобретения способа диагностики заболеваний щитовидной железы у кошек на основе референсных показателей тиреоидных гормонов, включающем исследование в сыворотке крови концентрации тироксина общего, тироксина свободного, трийодтиронина общего, трийодтиронина свободного, адренокортикотрпоного горомна, кортизола с помощью иммуноферментного анализа. В ИФА используются рекомбинантные фрагменты галактозидазы Е. Coli, которые сами по себе неактивны, но при спонтанной комбинации образуют активный фермент.Тиреоидные и кортикостероидные гормоны ковалентно связаны с одним из фрагментов, поэтому моноклональные антитела к ним препятствуют образованию фермента. Присутствующие у кошек в сыворотке крови гормоны конкурируют со связанными с фрагментом гормонами за связь с антителами, принимая их на себя, и тем самым способствуют образованию активного фермента. Поэтому количество образующегося активного фермента прямо пропорционально концентрации гормонов в сыворотке и определяется по степени гидролиза нитрофенил-галактопиранозида. На результаты, получаемы методом ИФА, не влияют гемолиз и повышенный уровень липидов в сыворотке.

Для иллюстрации осуществления заявленного в качестве изобретения способа диагностики заболеваний щитовидной железы у кошек на основе референсных показателей тиреоидных гормонов проводилось исследование в три этапа:

1 этап: определить концентрацию тиреоидных и кортикостероидных гормонов кошек разных пород;

2 этап: определить концентрацию тиреоидных и кортикостериондых кошек разных возрастов;

3 этап: провести статистическую обработку полученных значений с вычислением средних арифметических показателей, их среднестатистических ошибок, лимитов и критерия достоверности.

На первом этапе было обследовано 20 кошек в возрасте 3 лет таких пород как: персидская, абиссинская, сиамская и беспородистая. Каждая группа состояла из пяти кошек одной породы. На втором этапе изучали 20 кошек в возрасте от 1 года до 14 лет следующих пород: персидская, абиссинская, сиамская. Во всех группах присутствовало по одной кошке каждой породы и беспородистая. Группы отличались возрастом животных.

Данное исследование концентрации тиреоидных и кортикостероидных гормонов проводилось на кошках частных владельцев в ветеринарной клинике Фауна. У всех животных было схожее кормлении и содержание. Кошки находились постоянно в домашних условиях, воду и корм получали в соответствии с физиологическими потребностями. Перед взятием крови животным осуществляли тщательную диагностику их состояния, чтобы исключить больных кошек. Гормоны исследовали в общей и свободной форме. Свободная форма гормонов является наиболее важной в диагностике, так как именно она характеризует функциональную активность эндокринных желез. Общая форма связана с белками плазмы крови и не оказывает особого влияния на метаболические процессы. Тироксин и трийодтиронин вырабатываются клетками щитовидной железы. Кроме этого трийодтиронин конвертируется из тироксина в периферических клетках под воздействием селен-зависимой монодейодиназы. Тироксин в этом случае выступает предшественником трийодтиронина. В самой же железе трийодтиронин синтезируется в качестве продукта распада аминокислоты тирозина. Реакция происходит в белке тиреоглобулине, когда ионы йода прикрепляются к остаткам тирозина при участии йодид-пероксидазы. Тироксин синтезируется только в щитовидной железе, является наименее активным по сравнению с трийодтиронином, но более значимым в диагностике из-за большей концентрации в сыворотке крови. Тиреоидные гормоны продуцируются под влиянием гипоталамо-гипофизарной оси. Тиреотропный гормон, секретируемый гипофизом, стимулирует щитовидную железу на выработку тироксина и трийодтиронина. С помощью механизма обратной отрицательной связи при достаточной концентрации гормонов в крови, синтез тиролиберина и тиреотропина прекращается, тем самым уменьшая продукцию тироксина и трийодтиронина щитовидной железой. При патологиях щитовидной железы эта связь нарушается и тироксин и трийодтиронин вырабатываются в независимости от контроля гипоталамо-гипофозарной оси. Поэтому, чтобы поставить точный диагноз, важно знать, как референсные показатели тироксина и трийодтиронина так и нормативные значения тиреотропного гормона.

По результатам исследования нами установлено, что функциональное состояние щитовидной железы у кошек таких пород, как: персидская, абиссинская, сиамская и беспородистая, характеризуется следующими пределами показателей:

общий тироксин 22,9-33,2 нмоль/л;

свободный тироксин 29,8-36,7 пмоль/л;

общий трийодтиронин 1,19-1,33 нмоль/л;

свободный трийодтиронин 1,34-1,62 пг/мл;

тиреотропный гормон 0,64-0,82 нг/мл.4

Концентрация тиреоидных гормонов в сыворотке крови у здоровых кошек возрастных групп: от 5 месяцев до 14 лет имеет следующие границы:

общий тироксин 18,39-38,11 нмоль/л; свободный тироксин 16,7-46,62 пмоль/л; общий трийодтиронин 1,00-1,55 нмоль/л; свободный трийодтиронин 1,08-1,93 пг/мл; тиреотропный гормон 0,37-1,01 нг/мл.

Получение значения мы подвергли математической обработке с вычислением средних арифметических (М), их среднестатистических ошибок (ш) и критерия достоверности (р); цифровые данные оценивали с применением критерия Стьюдента. Различия считали достоверными при р<0,05.

Таблица 1

Референсные значения гормонов щитовидной железы кошек разных пород

*-р<0,05, **-р<0,01 - разница статистически достоверна в сравнении с беспородной группой.

Таблица 2

Референсные значения гормонов щитовидной железы кошек разных

возпастов

* - р<0,05; ** - р<0,01 - разница статистически достоверна в сравнении с показателем группы №2.

Полученные показатели позволяют оценить функциональное состояние щитовидной железы у кошек в зависимости от породы и возраста. Данные значения способствуют диагностике гипотиреоза и тиреотоксикоза в клинической практике ветеринарного врача. При гипотиреозе уровень гормонов находится ниже вышеуказанных параметров, а при тиреотоксикозе он выходит за пределы верхних границ.

Источники информации

1. Фелдмен Э., Нельсон Р. Эндокринология и репродукция собак и кошек. - М.:Софион. - 2008. - 1256 с.

2. Пилов А.Х. Морфологическая и функциональная характеристика щитовидной железы домашних животных / А.Х. Пилов; Кабардино-Балкарская государственная сельскохозяйственная академия. - // Вестник РАСХН. - 2003. - №3. - С. 62-63.

3. RU 2593952 С2, C12Q 1/68 (2006.01), 10.08.2016 г.

4. RU 2612901 С2, C12Q 1/68 (2006.01), C07K 14/705 (2006.01), 13.03.2017 г.