Результат интеллектуальной деятельности: Средство для лечения ран и ожогов

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается средств животного происхождения, стимулирующих репарационные процессы кожной ткани в результате термического поражения и обладающих комплексными противовоспалительным, регенерирующим и антиоксидантным эффектами, и может применяться в медицине и ветеринарии.

Ожоги являются одним из широко распространенных поражений кожи, и ежегодно в РФ 420-450 тыс. пострадавших обращаются за медицинской помощью. При этом 70% из них могут проходить лечение в амбулаторных условиях, поскольку имеют незначительные по площади поверхностные ожоги [1-3].

Выбор методов, средств и тактики лечения пациентов с ожогами остаются актуальной проблемой современной комбустиологии и постоянно совершенствуются [4, 5].

Анализ фармацевтического рынка противоожоговых лекарственных препаратов для наружного применения РФ показал, что на российском фармацевтическом рынке зарегистрировано более 50 наименований действующих веществ (МНН) и более 80 торговых наименований дерматологических препаратов различной формы выпуска (мази, растворы, кремы, аэрозоли, порошки, пасты, гели и т.д.) и состава (компоненты растительного, животного, минерального и синтетического происхождения) [6]. Несмотря на такое обилие противоожоговых средств проблема получения новых препаратов остается актуальной.

Исследования последних лет направлены на получение средств на основе коллагена и оценку возможности их использования для производства лекарственных и косметических средств [7-9].

Такие средства служат биопластическим материалом и матрицей для формирования собственной соединительной ткани [10, 11].

Основными достоинствами коллагеновых средств являются биоразлагаемость, биосовместимость, слабая антигенность, способность образовывать комплексы с лекарственными препаратами и стимулировать регенерацию [12, 13].

Известен коллагенсодержащий продукт широкого медицинского и косметического назначения «Кололень» и способ его получения. Данный продукт представляет собой гелеобразную массу, в состав которой входит коллаген с ММ 2,0-20 кДа (75-80%), рН продукта 2,5-3,5 [14].

Однако недостатком данного продукта является низкое значение рН (возможно иссушение кожи, рН нормальной кожи 5,2-5,7) и для экстрагирования коллагена используется агрессивный компонент - уксусная кислота.

Известен гидролизат коллагена, применяемый для улучшения здоровья кожи, волос и/или ногтей человека, получаемый ферментативным гидролизом при воздействии эндопептидаз и молекулярным весом менее 3500 Да. Данный продукт может быть использован перорально (как биологически активная добавка), так и для местного применения (в качестве компонент кремов, мазей, лосьонов и шампуней) [15].

Недостатком известного аналога является то, что для его получения используются эндопротеазы с различной специфичностью, не менее 2-х типов. Применение нескольких типов эндопептидаз для получения препарата пептидов усложняет его реализацию в промышленном масштабе и ограничивает область применения.

Известен гидролизат коллагена для применения в качестве биологически активной добавки, полученный ферментативным гидролизом (нейтральной эндопротеазы из Bacillus subtilis) костного желатина типа В, состоящий из пептидов, имеющих молекулярный вес от 1500 до 13500Да, средний молекулярный вес которых находится в пределах от 4500 до 6000 Да [16].

Данный гидролизат коллагена обладает высоким стимулирующим действием для предотвращения и/или лечения остеопороза, но недостатком этого продукта является узкая направленность, а для его получения используется ферментативный метод.

Известен пептидный препарат из коллагена для регенерации тканей кожи, способ его получения и применения. Препарат состоит из фракции активных пептидов с ММ от 3600-10000 Да, который может быть использован для регенерации кожи животных и человека [17].

Недостатком известного аналога является то, что для получения гидролизата применяется ферментный препарат (эндопептидаза, например, трипсин).

Известен продукт получения полностью гидролизованного коллагена для получения высокоочищенной смеси из 15 свободных аминокислот. Известное изобретение относится к пищевой промышленности (для перорального применения) и медицине (лечение опорно-двигательного аппарата, косметология), а полученный продукт содержит 92% свободных аминокислот и 5% короткоцепочечных пептидов [18].

Недостатком известного аналога является то, что для его получения используются агрессивные компоненты в высоких концентрациях - 16-17%) соляная кислота, 2Н щелочь, а процесс получения очень трудоемкий.

Известно бактерицидное противоожоговое биодеградируемое средство на основе фармацевтической композиции коллагена (90,0-97,0%) с лактоферрином (3,0-10,0%) для аппликативного применения. При получении готового средства применяется длительная сублимационная сушка (в течение 24 часов), а также возможно помещение готового продукта в пары формальдегида, а затем выдерживание в вакуум-камере (в течение 24 часов) [19].

Недостатком известного средства является трудоемкость получения и стоимость средства.

Известен способ получения продуктов растворения коллагена, включающий измельчение и промывку коллагенсодержащего сырья, его щелочно-солевую обработку, солевую промывку сульфатом натрия, нейтрализацию, повторную промывку продукта и его растворение в кислотном агенте. При растворении в качестве кислотного агента используют кисломолочную композицию, обладающую величиной титруемой кислотности 250-300°Т, концентрацией молочной кислоты не менее 25-30 г/дм 3 и активной реакцией среды рН не более 4,0, при этом обработку проводят при температуре (24±2)°С, ЖК=1 и переменном механическом воздействии, продолжительности растворения в течение 11-13 суток. По данному способу описан продукт растворения коллагена, обладающий характеристиками, представленными в таблице 1 [20].

Недостатками известного средства является то, что оно может быть использовано для получения продуктов растворения коллагена на основе отходов кожевенного производства и некондиционного кожевенного сырья, но оно не предназначено для коррекции ожоговых поражений кожи, индуцированных термическими воздействиями.

Известен способ получения биоактивного коллагенового продукта включающий отмоку коллагенсодержащего сырья, щелочно-солевую обработку, солевую промывку сульфатом натрия, нейтрализацию, повторную промывку продукта в чистой воде, механическое измельчение, растворение в кислотном агенте. При растворении в качестве кислотного агента используют кисломолочную композицию и комбинированную сыворотку в соотношении 1:1, обладающего величиной титруемой кислотности 270-310°Т и активной реакцией среды до 4,0, причем обработку проводят при температуре 36±2°С, продолжительность растворения составляет 4-6 суток [21].

Задачей настоящего изобретения является расширение арсенала доступных в экономическом плане и удобных для практического применения средств на основе коллагена, имеющего универсальный состав и характеристики, позволяющие использовать его в качестве мазевого средства.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является достижение комплексного противовоспалительного, антиоксидантного, регенерирующего действия на рану, способствующее ее ранозаживлению в короткие сроки.

Технический результат достигается тем, что средство для лечения ран и ожогов, согласно изобретения, представляет собой гелеобразную массу белого цвета с приятным кисломолочным запахом с рН 4,0-5,0, в состав которого входит коллаген с ММ 300,0-366,0 Кда и имеет показатели: вязкости - 2375,0-2625,0 сПз; плотности - 1,036-1,256 г/м³, массовой доли белка - 6,68-7,08%, обладающее противовоспалительными, ранозаживляющими и антиоксидантными свойствами.

Технический результат достигается также благодаря тому, что средство для лечения ран и ожогов изготовлено с возможностью использования для регенерации тканей кожи человека и животных.

Заявляемое техническое решение является неочевидным, так как при анализе идентифицированных источников информации не выявлены иные препараты средств с признаками, совпадающими с отличительными преимущественными признаками предлагаемого изобретения, и не установлена известность влияния отличительных признаков на указанный технический результат.

Отличительной особенностью предлагаемого средства для лечения ран и ожогов является быстрое ранозаживление, обусловленное высоким комплексным противовоспалительным, ранозаживляющим и антиоксидантным действием.

Авторами проведен поиск по патентной документации, литературным источникам и не выявлен наиболее близкий аналог для предлагаемого средства для лечения ран и ожогов.

По заявляемому изобретению «Средство для лечения ран и ожогов» экспериментально были проведены исследования по получению коллагенового средства по известному изобретению [21].

Для изучения свойств полученного коллагенового средства были выработаны три партии. Характеристика полученного коллагенового средства приведена в таблице 2.

Полученные основные характеристики коллагенового средства в предлагаемом изобретении «Средство для лечения ран и ожогов» и заявленные в формуле изобретения: рН 4,0-5,0; ММ 300,0-366,0 Кда; вязкость - 2375,0-2625,0 сПз; плотность - 1,036-1,256 г/м³; массовая доля белка - 6,68-7,08% являются оптимальными для обеспечения технического результата.

Исследованные показатели определяли методами, указанными ниже.

Определение динамической вязкости проводили с использованием вискозиметра Брукфильда [22]. Определение плотности проводили с использованием ареометра [23]. Определение рН осуществляли потенциометрическим методом [24]. Массовую долю сухого вещества и массовую долю влаги определяли путем высушивания в сушильном шкафу [25]. Массовую долю жировых веществ определяли экстракцией органическими растворителями [26]. Определение массовой доли белка проводили по методу Кьельдаля [27]. Для определения молекулярной массы полученных биополимеров использовали уравнение Марка-Хаувинка (1), основанного на изменении величины характеристической вязкости, определяемой, экстраполяцией значений приведенной вязкости к концентрации, равной нулю [28]. Поэтому для нахождения молекулярной массы определяли вязкость водных растворов ПРК с различными концентрациями [29].

где К - константа для данной системы;

α - величина, характеризующая форму макромолекул в растворе.

Для расчетов использовали следующие значения констант, где К=1,34×10^-4, α=0,71. Из уравнения Марка-Хаувинка Куна следует, что логарифм характеристической вязкости является линейной функцией логарифма молекулярной массы (2):

На лабораторных животных было изучено ранозаживляющее действие коллагенового средства, а также определены его противовоспалительные и антиоксидантные свойства. Была доказана эффективность применяемого заявляемого средства в терапии ожоговой раны. Его ежедневные аппликации приводили к нормализации функционального потенциала поврежденной кожи, коррекции деструктивных преобразований в ней, ускорению сроков заживления. Заявленное средство проявляет комплексное противовоспалительное, антиоксидантное и регенерирующее действие на рану, способствуя ее заживлению в короткие сроки.

Предлагаемое изобретение поясняется изображениями, где на фиг. 1, 2, 3 изображены микрофотографические картины кожного покрова белых крыс на 20-ый день после термического ожога; сохраняется небольшая гиперемия с гнойным экссудатом, образование волосяных фолликул:

Фиг. 1 - Контроль: 1-лейкоцитарно-некротический струп, 2-гнойный экссудат, 3-клетки полибласты, 4-сосочки дермы, 5-клетки фибробласты.

Фиг. 2 - Опытная 1: 1-волосяные фолликулы, 2-роговой слой, 3-шиповатый слой, 4-сосочковый слой, 5-шелушение, 6-новая соединительная ткань.

Фиг. 3 - Опытная 2: 1-лейкоцитарно-некротический слой, 2-эпителий волосяных фолликул, 3-сосочковый слой, 4-гнойный экссудат. Окраска по Ван-Гизон (ув.об. 10×10).

Приведенные фигуры 1-3 в описании изобретения поясняют результаты таблиц 3 и 4 примера 1.

Полученное коллагеновое средство применяли в эксперименте в качестве мази на модели термического ожога у экспериментальных животных. Экспериментальные исследования были проведены на 32 белых крысах линии Wistar, обоего пола, массой 180-200 г. Животные были распределены на 4 группы по 8 особей в каждой: 1-я - контрольная (животные после моделирования ожога с «естественным заживлением ран»); 2-я - опытная 1 (животные после моделирования ожога обрабатывались коллагеновым средством); 3-я - опытная 2 - группа сравнения, в которой для обработки ран животных после ожога использовали мазь «Левомеколь» и 4-я - группа интактных животных (норма, без термического ожога). Изучаемые средства наносили на область раны ежедневно, один раз в день, по 0,5 г.

Препарат «Левомеколь» (фармакопейный препарат, производство «Нижфарм», Россия) является комбинированным противомикробным средством для наружного применения, оказывает противовоспалительное действие и стимулирует процессы регенерации. Содержит основные активные вещества, отличные от компонентов заявленного коллагенового средства, а именно: хлорамфеникол и метилурацил [30].

Модель термического ожога воспроизводилась на экспериментальных животных по методу Б.А. Парамонова и соавт. [31]. За день до моделирования ожога на боковой поверхности животного проводили выстригание ножницами видимой накожной части волос (4×4 см). Для воспроизведения модели ожога использовали стеклянную пробирку диаметром 22 мм и длиной 20-25 см, заполненную на 2/3 высоты горячей водой (100°С), с последующим контактом с участком кожи в течение 10 сек. В результате у экспериментальных животных формировался ожог III «а» степени площадью 4-5% от полной поверхности тела.

Все манипуляции с животными были проведены согласно требованиям «Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1986) и в соответствии с Директивой 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского союза по охране животных. Содержание и уход за животными осуществляли в соответствии с ГОСТ 33216-2014.

Для сравнительной оценки эффективности ранозаживления коллагенового средства и «Левомеколя» применяли различные показатели: вульнографию (среднюю площадь ран оценивали на 0, 3, 5, 7, 9 и 13-е сутки эксперимента), гистологический анализ образцов кожной ткани (на 6, 13 и 20 сутки с момента ожога), показатели крови: общее содержание лейкоцитов и суммарную антиоксидантную активность - на 6 и 13-е сутки эксперимента.

Для оценки средней площади ран на них накладывали прозрачный трафарет, переносили раневые контуры и вычисляли их площадь [32]. Для гистологического анализа брали образцы кожной ткани, фиксировали их в 10%-ом растворе формалина и, используя общепринятые методы гистологического анализа, оценивали морфологическое состояние кожной ткани при заживлении [33]. Общее содержание лейкоцитов в крови определяли подсчетом в камере Горяева при разведении образца 3%-ой уксусной кислотой, подкрашенной метиленовым синим [34]. Для определения суммарной антиоксидантной активности сыворотки крови животных использовали амперометрический метод (жидкостной хроматограф «Цвет-Яуза-01-AA»). Массовую концентрацию водорастворимых антиоксидантов определяли с использованием градуировочного графика по кверцетину [35].

Сущность заявляемого изобретения поясняется на нижеследующих примерах (1-3) конкретного выполнения, показывающих достижение технического результата.

Пример 1

Изучение ранозаживляющего действия коллагенового средства. Данное действие установлено на определении показателей ранозаживления (площадь ран) и гистологического анализа образцов кожной ткани.

Результаты представлены в таблицах 3, 4 и на фиг. 1-3.

Из данных, представленных в таблице 3, следует, что площади ран животных 1 и 2 опытных групп, начиная с 3-го дня опыта, статистически значимо отличались от результатов контрольной группы.

Полученные данные свидетельствуют о репаративном действии коллагенового средства, которое сравнимо с эффектом фармакопейного препарата «Левомеколь». Причем окончательное и полное заживление ожоговых ран у крыс, обработанных коллагеновым средством и «Левомеколем» наступало, соответственно, к 19-му и 21 дню, а у животных контрольной группы - к 23-25-му дню.

Результаты гистологических и морфометрических исследований подтвердили динамику восстановления кожной ткани после экспериментального ожога.

Ранозаживление в опытных группах животных характеризовалось более легким течением процесса, купированием распространения некроза в глубокие слои кожи.

Для опытной группы 1, в которой при лечении термического ожога экспериментальных животных использовали коллагеновое средство, характерно более равномерное созревание грануляционной ткани, отсутствие гнойно-некротических осложнений в процессе заживления, формирование регенерата, приближающегося по своему строению к нормальной коже крыс (интактным животным).

Морфометрические данные кожи экспериментальных животных после термического ожога, воздействия коллагенового средства и препарата сравнения «Левомеколь» на 20-й день эксперимента представлены в табл. 4 и на Фиг. 1-3.

Таким образом, из приведенных выше данных следует, что коллагеновое средство проявляло выраженное ранозаживляющее действие на модели термического ожога, сравнимое с эффектом фармакопейного препарата «Левомеколь».

Пример 2

Противовоспалительное действие коллагенового средства. Влияние коллагенового средства на содержание лейкоцитов в крови крыс при термическом ожоге представлено в таблице 5.

Как следует из полученных данных (табл.5), увеличение количества лейкоцитов в контрольной группе на 6 и 13-й дни эксперимента составило, соответственно, 23,5% и 63,9%) по отношению к норме (интактным животным). Применение изучаемого коллагенового средства и «Левомеколя» в эксперименте способствовало нормализации данного показателя, причем процесс восстановления количества лейкоцитов был наиболее выражен на 13-й день исследования в 1-й опытной группе.

Пример 3

Антиоксидантное действие коллагенового средства. Данное действие установлено на определении суммарной антиоксидантной активности (САА) сыворотки крови крыс при термическом ожоге. Данные представлены в таблице 6.

Как следует из данных, представленных в таблице 6, при ожоге (контрольная группа) наблюдалось уменьшение суммарной антиоксидантной активности (САА). И на 6 и 13-е сутки эксперимента снижение составило, соответственно, 17,8%) и 23,5%) по отношению к норме (интактным животным). Применение коллагенового средства, как и препарата сравнения («Левомеколь»), способствовало нормализации показателя САА, причем процесс восстановления данного показателя был наиболее выражен в 1-й опытной группе (при действии коллагенового средства).

Приведенные примеры применения предполагаемого изобретения (коллагенового средства) показывают его полезность, выражающуюся в эффективности его применения для регенерации тканей кожи при термическом ожоге. Сопоставимая с действием фармакологического препарата «Левомеколь» эффективность полученного коллагенового средства для регенерации тканей кожи является одним из существенных преимуществ предполагаемого изобретения.

Заявленное техническое решение можно реализовать в промышленном производстве (используются продукты крупнотоннажной переработки коллагенсодержащего сырья) и в деятельности организаций здравоохранения посредством использования известных стандартных моделей и методов исследования.

Предлагаемое изобретение «Средство для лечения ран и ожогов» имеет следующие преимущества:

- высокое ранозаживляющее действие;

- высокое противовоспалительное действие;

- высокие антиоксидантные свойства.

Приложение 1

Список патентной документации и литературных источников:

1. Гайнутдинов Т.Р. Терапевтическая эффективность противоожоговых препаратов при термическом поражении организма // Ветеринарный врач. -2021. -№3.-С.14-18.

2. Будкевич Л.И., Мирзоян Г.В., Габитов Р.Б. и др. Биопластический коллагеновый материал «Коллост» при лечении ожоговой травмы // Современные технологии в медицине. - 2020. - №12(1). - С.92-97.

3. Толстов А.В., Новиков И.В., Подсевалова И.В., Воронин А.С., Дыдыкин С.С., Алипов В.В. Клинико-морфологическая оценка эффективности разработанного способа местного лечения локальных поверхностных ожогов // Наука и инновации в медицине. - 2020. - №5(4). - С.283-287.

4. Сидельская У.Ю. Сравнительная характеристика способов лечения животных с термическими ожогами // Международный научно-исследовательский журнал. - 2017. - №8-2 (62). - С.30-34.

5. Алексеев А.А., Бобровников А.Э. Местное консервативное лечение ожогов. Рекомендации для врачей. - М.: Медицинское информационное агентство, 2015. - 142 с.

6. Мельникова О.А., Самкова И.А. Анализ фармацевтического рынка противоожоговых лекарственных препаратов для наружного применения РФ //Научные ведомости. Серия Медицина. Фармация. -2016. -№12 (233). - Вып.34. -С.150- 158.

7. Карасев М.М., Редина М.А., Белоусова О.В. Новейшие достижения фармацевтической разработки, основанные на использовании коллагена // Фармация и фармакология. - 2015. - №5(12). - С.12-17.

8. Майорова А.В., Сысуев Б.Б., Ханалиева И.А., Вихрова И.В. Современный ассортимент, свойства и перспективы совершенствования перевязочных средств для лечения ран // Фармация и фармакология. - 2018. -№1 (6). - С.4-32.

9. Патшина М.В., Ворошилин Р.А., Осинцев А.М. Анализ мирового рынка биоматериалов с целью определения потенциальных возможностей сырья животного происхождения // Техника и технология пищевых производств. - 2021. - №51 (2). - С.270-289.

10. Будкевич Л.И., Сошкина В.В., Астамирова Т.С., Королева Т.А., Старостин О.И., Ужевко Ю.С. Инновационные технологии организации и оказания медицинской помощи детям с термическими поражениями в результате чрезвычайных ситуаций // Медицина катастроф. - 2012. - №4(80). - С.29-32.

11. Силина Е.В., Ступин В.А., Золотарева Л.С., Комаров А.Н. Применение нативного коллагена в клинической практике для лечения хронических ран // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. - 2017. - №9. - С.78-84.

12. Файзуллин А.Л., Шехтер А.Б., Истранов Л.П., Истранова Е.В., Руденко Т.Г., Гуллер А.Е., Абоянц Р.К., Тимашев П.С., Бутнару Д.В. Биорезорбируемые коллагеновые материалы в хирургии: 50 лет успеха // Сеченовский вестник. - 2020. - №11(1). - С.59-70.

13. Остроушко А.П., Андреев А.А., Лаптиева А.Ю., Глухов А.А. Коллаген и его применение при лечении ран // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. - 2021. - №14(1). - С.85-90.

14. Ru 2240818 С1, МПК А61К 38/39, А61К 35/36, опубликовано: 27.11.2004. Бюл. №33.

15. Ru 2577699 С2, МПК А61К 8/65, A61Q 19/08, опубликовано: 20.03.2016. Бюл. №8.

16. Ru 2671401 С2, МПК А61К 38/01, А61К 35/32, А61Р 19/10, опубликовано: 31.10.2018. Бюл. №31.

17. Ru 2669933 С2, МПК А61К 38/00, А61Р 17/00, опубликовано: 17.10.2018. Бюл. №29.

18. Ru 2680968 C1, МПК C07K 1/12, C07K 2/00, опубликовано: 01.03.2019. Бюл. №7.

19. Ru 2703284 С1, МПК A61K 31/00, A61K 38/40, A61K 38/39, опубликовано: 16.10.2019. Бюл. №29.

20. Ru 2486258 С1, МПК С14С 1/08, опубликовано: 27.06.2013. Бюл. №18.

21. Ru 2715639, МПК С14С 1/00, A23J 1/10, С07К 14/78, опубликовано: 02.03.2020. Бюл. №7.

22. ГОСТ 25271-93. Пластмассы. Смолы жидкие, эмульсин или дисперсии. Определение кажущейся вязкости по Брукфильду. - Москва: ИПК Издательство стандартов, 1994. - 14 с.

23. ГОСТ 18995.1-73. Продукты химические жидкие. Методы определения плотности. - Москва: ИПК Издательство стандартов, 1974. - 4 с.

24. ОФС 42-0048-07. Ионометрия. 10 с.

25. ГОСТ 938.1-67. Кожа. Метод определения содержания влаги. - Москва: ИПК Издательство стандартов, 2003. - 4 с.

26. ГОСТ 938.5-68. Кожа. Метод определения содержания веществ, экстрагируемых органическими растворителями. - Москва: ИПК Издательство стандартов, 2003. - 4 с.

27. ГОСТ 25011-2017. Мясо и мясные продукты. Методы определения белка. - Москва: Стандартинформ, 2018. - 16 с.

28. Шиян И.С., Припаньковская Я.М. Определение молекулярной массы желатина вискозиметрическим методом // Материалы VIII Международной студенческой научной конференции «Студенческий научный форум» URL:<а href="hittps://scienceforum.ru/2016/article/2016018419">https://scienceforum.ru/2 016/article/2016018419 (дата обращения: 08.11.2021).

29. ГОСТ 10028-67. Методика работы с вискозиметрами типа ВПЖ-2. М., 1967. -3 с.

30. Инструкция по применению Левомеколь. https:// www. asna.ru/ product/levomekol/instruction/.

31. Парамонов Б.А., Чеботарев В.Ю. Методы моделирования термических ожогов кожи при разработке препаратов для местного лечения // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2002. - Т. 134 (11). -С.593-597.

32. Савченко Ю.П., Федосов СР. Методы определения размеров раневой поверхности // Вестник хирургии. - 2007. - Т. 166. - №1. - С.102-105.

33. Мавликеев М.О. Краткий курс гистологической техники. Учебно-методическое пособие / М.О. Мавликеев, Архипова С.С., Чернова О.Н., Титова А.А., Певнев Г.О., Шафигуллина А.К., Киясов А.П. - Казань: Казан, ун-т, 2020. - 107 с.

34. Камышникова B.C. Методы клинических лабораторных исследований. 8-е изд. М.: ООО «МЕДпресс-информ», 2015.

35. Яшин А.Я., Яшин Я.И. Аналитические возможности жидкостного хроматографа «Цвет Яуза» с электрохимическими детекторами // Российский химический журнал (Ж. Хим. об-ва им. Д.И. Менделеева). - 2002. - №46 (4). -С.109-115.