08.08.2020
220.018.3e20

АНТИ-TIGIT АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

Вид РИД

Изобретение

Юридическая информация Свернуть Развернуть
№ охранного документа
0002729379
Дата охранного документа
06.08.2020
Краткое описание РИД Свернуть Развернуть
Аннотация: Изобретение относится к области биохимии, в частности выделенному антителу, которое специфически связывает TIGIT человека (hTIGIT), а также к его применению в лечении заболевания, выбранного из рака и вирусной инфекции. Также раскрыты выделенный полинуклеотид, кодирующий вышеуказанное антитело, вектор, клетка-хозяин, его содержащие, а также способ продуцирования антитела, предусматривающий экспрессии антитела в указанной клетке-хозяине. Изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения заболевания, которое можно лечить с помощью анти-TIGIT антитела, содержащей эффективное количество вышеуказанного антитела, а также к способу лечения или профилактики заболевания или патологии, при которых может быть полезно лечение анти-TIGIT антителом, предусматривающему применение анти-TIGIT антитела или композиции, его содержащей. Изобретение позволяет эффективно осуществлять лечение заболевания, выбранного из рака и вирусной инфекции. 19 н. и 68 з.п. ф-лы, 14 ил., 18 табл., 11 пр.
Реферат Свернуть Развернуть

[0001] Данная заявка заявляет приоритет по предварительной заявке США №62/235990, поданной 1 октября 2015 года, которая тем самым включена в данный документ в полном объеме посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[0002] Согласно настоящему изобретению предложены антиген-связывающие белки (АВР) со специфичностью связывания с Т-клеточным иммунорецептором с доменами Ig и ITIM (TIGIT), и композиции, содержащие такие АВР, включая фармацевтические композиции, диагностические композиции и наборы. Также предложены способы получения TIGIT АВР, и способы применения TIGIT АВР, например, в терапевтических целях, в диагностических целях и в исследовательских целях.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0003] TIGIT был идентифицирован как ко-ингибирующий рецептор, который ограничивает реакцию Т-лимфоцитов на рак и хроническую инфекцию. См. Grogan et al., J. Immunol., 2014, 192: (Дополнение 1) 203.15., включен в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Показано, что блокировка TIGIT способствует усилению эффекторной функции CD8+ Т-лимфоцитов и улучшению вирусного клиренса и опухолевого отторжения. См. Id.

[0004] Таким образом, существует потребность в терапевтических средствах, которые могут антагонизировать TIGIT. Согласно настоящему изобретению предложены АВР, которые удовлетворяют эту потребность.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0005] Согласно настоящему изобретению предложены АВР, которые специфически связывают TIGIT, и способы применения таких АВР.

[0006] В некоторых вариантах осуществления, TIGIT выбирают из TIGIT человека («hTIGIT», SEQ ID NO: 1), TIGIT яванского макака («cTIGIT», SEQ ID NO: 2) и TIGIT мыши («mTIGIT», SEQ ID NO: 3 или 138).

[0007] В некоторых вариантах осуществления, АВР содержит антитело. В некоторых аспектах, антитело представляет собой моноклональное антитело. В некоторых аспектах, антитело представляет собой химерное антитело. В некоторых аспектах антитело представляет собой гуманизированное антитело. В некоторых аспектах антитело представляет собой человеческое антитело. В некоторых аспектах, АВР содержит фрагмент антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР содержит альтернативный каркас.

[0008] В некоторых вариантах осуществления, TIGIT экспрессируется на поверхности клетки-мишени. В некоторых аспектах, АВР антагорнизирует TIGIT, экспрессируемый на поверхности клетки-мишени.

[0009] В некоторых вариантах осуществления, клетку-мишень выбирают из эффекторного Т-лимфоцита, регуляторного Т-лимфоцита, клетки естественного киллера (NK) и Т-лимфоцита естественного киллера (NKT). В некоторых аспектах, клетка-мишень представляет собой эффекторный Т-лимфоцит, выбранный из Т-хелпера (CD4-позитивный, «CD4+»), цитотоксического Т-лимфоцита (CD8-позитивный, «CD8+»), и их комбинаций. В некоторых аспектах, клетка-мишень представляет собой регуляторный Т-лимфоцит, выбранный из регуляторного Т-лимфоцита CD4+CD25+Foxp3+, регуляторного Т-лимфоцита CD8+CD25+, и их комбинаций.

[0010] В некоторых вариантах осуществления, АВР предложенные в данном документе индуцируют различные биологические эффекты, связанные с ингибированием TIGIT. В некоторых аспектах, предложенный в данном документе АВР предотвращает ингибирование эффекторного Т-лимфоцита. В некоторых аспектах, АВР ко-стимулирует эффекторный Т-лимфоцит. В некоторых аспектах, АВР ингибирует подавление эффекторного Т-лимфоцита регуляторным Т-лимфоцитом. В некоторых аспектах, АВР увеличивает количество эффекторных Т-лимфоцитов в ткани или в кровеносной системе. В некоторых аспектах, ткань представляет собой опухоль. В некоторых аспектах, ткань представляет собой ткань, которая заражена вирусом.

[0011] Также предложены наборы, содержащие один или большее количество АВР, предложенных в данном документе, и инструкции для применения АВР. Также предложены наборы, содержащие одну или большее количество фармацевтических композиций, предложенных в данном документе, и инструкции для применения фармацевтической композиции.

[0012] Также предложены выделенные полинуклеотиды, кодирующие АВР, предложенные в данном документе, и их части.

[0013] Также предложены векторы, содержащие такие полинуклеотиды.

[0014] Также предложены рекомбинантные клетки-хозяева, содержащие такие полинуклеотиды, и рекомбинантные клетки-хозяева, содержащие такие векторы.

[0015] Также предложены способы получения АВР, предложенного в данном документе, с применением полинуклеотидов, векторов или клеток-хозяев, предложенных в данном документе.

[0016] Также предложены фармацевтические композиции, содержащие АВР, предложенные в данном документе, и фармацевтически приемлемый наполнитель.

[0017] Также предложены способы лечения или профилактики заболевания или патологии у субъекта, нуждающегося в этом, включая введение субъекту эффективного количества АВР, предложенного в данном документе, или фармацевтической композиции, содержащей такой АВР. В некоторых аспектах, заболевание или патология представляет собой рак. В некоторых аспектах, заболевание или патология представляет собой вирусную инфекцию. В некоторых аспектах, способ дополнительно включает введение одного или большего количества дополнительных терапевтических агентов. В некоторых аспектах, дополнительный терапевтический агент представляет собой иммуностимулирующий агент.

[0018] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложено первое семейство АВР, причем АВР такого семейства содержит следующие шесть последовательностей CDR: а) CDR-H3, имеющую последовательность A-R-D-G-V-L-X1-L-N-K-R-S-F-D-I, в которой X1 представляет собой А или Т (SEQ ID NO: 128); b) CDR-H2, имеющую последовательность S-I-Y-Y-S-G-X2-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S, в которой Х2 представляет собой S, Q или G (SEQ ID NO: 129); с) CDR-H1, имеющую последовательность G-S-I-X3-S-G-X4-Y-Y-W-G, в которой Х3 представляет собой Е или А, и Х4 представляет собой L, V или S (SEQ ID NO: 130); d) CDR-L3, имеющую последовательность QQHTVRPPLT (SEQ ID NO: 64); e) CDR-L2, имеющую последовательность GASSRAT (SEQ ID NO: 68); и f) CDR-L1, имеющую последовательность RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO: 71). В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен АВР такого первого семейства.

[0019] В некоторых вариантах осуществления, АВР такого первого семейства содержит: а) CDR-H3 SEQ ID NO: 32, CDR-H2 SEQ ID NO: 40, CDR-H1 SEQ ID NO: 54, CDR-L3 SEQ ID NO: 64, CDR-L2 SEQ ID NO: 68, и CDR-L1 SEQ ID NO: 71; b) CDR-H3 SEQ ID NO: 31, CDR-H2 SEQ ID NO: 40, CDR-H1 SEQ ID NO: 54, CDR-L3 SEQ ID NO: 64, CDR-L2 SEQ ID NO: 68, и CDR-L1 SEQ ID NO: 71; c) CDR-H3 SEQ ID NO: 31, CDR-H2 SEQ ID NO: 39, CDR-H1 SEQ ID NO: 51, CDR-L3 SEQ ID NO: 64, CDR-L2 SEQ ID NO: 68, и CDR-L1 SEQ ID NO: 71; d) CDR-H3 SEQ ID NO: 31, CDR-H2 SEQ ID NO: 40, CDR-H1 SEQ ID NO: 52, CDR-L3 SEQ ID NO: 64, CDR-L2 SEQ ID NO: 68, и CDR-L1 SEQ ID NO: 71; или e) CDR-H3 SEQ ID NO: 31, CDR-H2 SEQ ID NO: 41, CDR-H1 SEQ ID NO: 53, CDR-L3 SEQ ID NO: 64, CDR-L2 SEQ ID NO: 68, и CDR-L1 SEQ ID NO: 71.

[0020] В некоторых вариантах осуществления, АВР такого первого семейства содержит: а) последовательность VH SEQ ID NO: 13 и последовательность VL SEQ ID NO: 26; b) последовательность VH SEQ ID NO: 12 и последовательность VL SEQ ID NO: 26; c) последовательность VH SEQ ID NO: 14 и последовательность VL SEQ ID NO: 26; d) последовательность VH SEQ ID NO: 15 и последовательность VL SEQ ID NO: 26; e) последовательность VH SEQ ID NO: 9 и последовательность VL SEQ ID NO: 26; f) последовательность VH SEQ ID NO: 10 и последовательность VL SEQ ID NO: 26; или g) последовательность VH SEQ ID NO: 11 и последовательность VL SEQ ID NO: 26.

[0021] В некоторых вариантах осуществления, АВР такого первого семейства содержит: а) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 99 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 100 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; b) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 97 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 98 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; c) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 101 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 102 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; d) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 103 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 104 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; e) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 90 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 91 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; f) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 93 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 94 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; или g) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 95 и легкую цепь SEQ ID NO: 92; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 96 и легкую цепь SEQ ID NO: 92.

[0022] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложено второе семейство АВР, причем АВР такого семейства содержит следующие шесть последовательностей CDR: а) CDR-H3, имеющую последовательность A-R-D-A-N-Y-Y-G-X1-A-W-A-F-D-P, в которой X1 представляет собой S или G (SEQ ID NO: 131); b) CDR-H2, имеющую последовательность S-I-Y-Y-S-G-X2-T-F-Y-N-P-S-L-K-X3, в которой Х2 представляет собой S или А, и Х3 представляет собой S или G (SEQ ID NO: 132); с) CDR-Н1, имеющую последовательность G-S-I-X4-S-X5-X6-X7-Y-W-G, в которой Х4 представляет собой S или Т, Х5 представляет собой S или Т, Х6 представляет собой S или K, и Х7 представляет собой Н или Y (SEQ ID NO: 133); d) CDR-L3, имеющую последовательность QQHFNLPT (SEQ ID NO: 63); е) CDR-L2, имеющую последовательность DASNRAT (SEQ ID NO: 67); и f) CDR-L1, имеющую последовательность RASQSVSSYLA (SEQ ID NO: 70). В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен АВР такого второго семейства.

[0023] В некоторых вариантах осуществления, АВР такого второго семейства содержит: а) CDR-H3 SEQ ID NO: 29, CDR-H2 SEQ ID NO: 37, CDR-H1 SEQ ID NO: 49, CDR-L3 SEQ ID NO: 63, CDR-L2 SEQ ID NO: 67 и CDR-L1 SEQ ID NO: 70; b) CDR-H3 SEQ ID NO: 30, CDR-H2 SEQ ID NO: 37, CDR-H1 SEQ ID NO: 50, CDR-L3 SEQ ID NO: 63, CDR-L2 SEQ ID NO: 67 и CDR-L1 SEQ ID NO: 70; c) CDR-H3 SEQ ID NO: 29, CDR-H2 SEQ ID NO: 38, CDR-H1 SEQ ID NO: 50, CDR-L3 SEQ ID NO: 63, CDR-L2 SEQ ID NO: 67 и CDR-L1 SEQ ID NO: 70; d) CDR-H3 SEQ ID NO: 29, CDR-H2 SEQ ID NO: 36, CDR-H1 SEQ ID NO: 48, CDR-L3 SEQ ID NO: 63, CDR-L2 SEQ ID NO: 67 и CDR-L1 SEQ ID NO: 70; или e) CDR-H3 SEQ ID NO: 29, CDR-H2 SEQ ID NO: 37, CDR-H1 SEQ ID NO: 50, CDR-L3 SEQ ID NO: 63, CDR-L2 SEQ ID NO: 67 и CDR-L1 SEQ ID NO: 70.

[0024] В некоторых вариантах осуществления, АВР такого второго семейства содержит: а) последовательность VH SEQ ID NO: 5 и последовательность VL SEQ ID NO: 25; b) последовательность VH SEQ ID NO: 7 и последовательность VL SEQ ID NO: 25; c) последовательность VH SEQ ID NO: 8 и последовательность VL SEQ ID NO: 25; d) последовательность VH SEQ ID NO: 4 и последовательность VL SEQ ID NO: 25; или e) последовательность VH SEQ ID NO: 6 и последовательность VL SEQ ID NO: 25.

[0025] В некоторых вариантах осуществления, АВР такого второго семейства содержит: а) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 82 и легкую цепь SEQ ID NO: 81; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 83 и легкую цепь SEQ ID NO: 81; b) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 86 и легкую цепь SEQ ID NO: 81; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 87 и легкую цепь SEQ ID NO: 81; с) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 88 и легкую цепь SEQ ID NO: 81; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 89 и легкую цепь SEQ ID NO: 81; d) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 79 и легкую цепь SEQ ID NO: 81; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 80 и легкую цепь SEQ ID NO: 81; или e) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 84 и легкую цепь SEQ ID NO: 81; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 85 и легкую цепь SEQ ID NO: 81.

[0026] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложено третье семейство АВР, причем АВР такого семейства содержит следующие шесть последовательностей CDR: а) CDR-H3, имеющую последовательность A-R-G-G-R-T-T-W-I-G-A-X1-D-I, в которой X1 представляет собой F или L (SEQ ID NO: 134); b) CDR-H2, имеющую последовательность I-I-N-P-S-X2-G-L-T-S-Y-A-X3-K-F-Q-G, в которой Х2 представляет собой L или I, и Х3 представляет собой Q или R (SEQ ID NO: 135); с) CDR-Н1, имеющую последовательность Y-T-F-X4-X5-Y-Y-X6-H, в которой Х4 представляет собой G, Р или R, и Х5 представляет собой N, А или Е, и Х6 представляет собой М или I (SEQ ID NO: 136); d) CDR-L3, имеющую последовательность QQYVVWPPLT (SEQ ID NO: 65); e) CDR-L2, имеющую последовательность GASTRAT (SEQ ID NO: 69); и f) CDR-L1, имеющую последовательность RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 72). В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен АВР такого третьего семейства.

[0027] В некоторых вариантах осуществления АВР такого третьего семейства содержит: а) CDR-H3 SEQ ID NO: 33, CDR-H2 SEQ ID NO: 43, CDR-H1 SEQ ID NO: 60, CDR-L3 SEQ ID NO: 65, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72; b) CDR-H3 SEQ ID NO: 34, CDR-Н2 SEQ ID NO: 43, CDR-H1 SEQ ID NO: 60, CDR-L3 SEQ ID NO: 65, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72; c) CDR-H3 SEQ ID NO: 33, CDR-H2 SEQ ID NO: 44, CDR-H1 SEQ ID NO: 59, CDR-L3 SEQ ID NO: 65, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72; d) CDR-H3 SEQ ID NO: 33, CDR-H2 SEQ ID NO: 42, CDR-H1 SEQ ID NO: 58, CDR-L3 SEQ ID NO: 65, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72; e) CDR-H3 SEQ ID NO: 33, CDR-H2 SEQ ID NO: 42, CDR-H1 SEQ ID NO: 59, CDR-L3 SEQ ID NO: 65, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72; или f) CDR-H3 SEQ ID NO: 34, CDR-H2 SEQ ID NO: 44, CDR-H1 SEQ ID NO: 61, CDR-L3 SEQ ID NO: 65, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72.

[0028] В некоторых вариантах осуществления, АВР такого третьего семейства содержит: а) последовательность VH SEQ ID NO: 18 и последовательность VL SEQ ID NO: 27; b) последовательность VH SEQ ID NO: 19 и последовательность VL SEQ ID NO: 27; c) последовательность VH SEQ ID NO: 21 и последовательность VL SEQ ID NO: 27; d) последовательность VH SEQ ID NO: 16 и последовательность VL SEQ ID NO: 27; e) последовательность VH SEQ ID NO: 17 и последовательность VL SEQ ID NO: 27; или f) последовательность VH SEQ ID NO: 20 и последовательность VL SEQ ID NO: 27.

[0029] В некоторых вариантах осуществления, АВР такого третьего семейства содержит: а) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 110 и легкую цепь SEQ ID NO: 107; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 111 и легкую цепь SEQ ID NO: 107; b) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 112 и легкую цепь SEQ ID NO: 107; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 113 и легкую цепь SEQ ID NO: 107; с) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 116 и легкую цепь SEQ ID NO: 107; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 117 и легкую цепь SEQ ID NO: 107; d) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 105 и легкую цепь SEQ ID NO: 107; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 106 и легкую цепь SEQ ID NO: 107; e) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 108 и легкую цепь SEQ ID NO: 107; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 109 и легкую цепь SEQ ID NO: 107; или f) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 114 и легкую цепь SEQ ID NO: 107; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 115 и легкую цепь SEQ ID NO: 107.

[0030] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложено четвертое семейство АВР, причем АВР такого семейства содержит следующие шесть последовательностей CDR: а) CDR-H3, имеющую последовательность ARLHVSGSYYPAYLDY (SEQ ID NO: 35); b) CDR-H2, имеющую последовательность X1-I-N-P-S-M-G-A-T-S-Y-X2-Q-K-F-X3-G, в которой X1 представляет собой V или I, Х2 представляет собой А или Т, и Х3 представляет собой Q или R (SEQ ID NO: 137); с) CDR-Н1 имеющую последовательность YTFTSHYMG (SEQ ID NO: 62); d) CDR-L3 имеющую последовательность QQYIVFPWT (SEQ ID NO: 66); e) CDR-L2 имеющую последовательность GASTRAT (SEQ ID NO: 69); и f) CDR-L1 имеющую последовательность RASQSVSSNLA, (SEQ ID NO: 72). В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен АВР такого четвертого семейства.

[0031] В некоторых вариантах осуществления, АВР такого четвертого семейства содержит: a) CDR-H3 SEQ ID NO: 35, CDR-H2 SEQ ID NO: 46, CDR-H1 SEQ ID NO: 62, CDR-L3 SEQ ID NO: 66, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72; b) CDR-H3 SEQ ID NO: 35, CDR-H2 SEQ ID NO: 47, CDR-H1 SEQ ID NO: 62, CDR-L3 SEQ ID NO: 66, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72; или с) CDR-H3 SEQ ID NO: 35, CDR-H2 SEQ ID NO: 45, CDR-H1 SEQ ID NO: 62, CDR-L3 SEQ ID NO: 66, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72.

[0032] В некоторых вариантах осуществления, АВР такого четвертого семейства содержит: а) последовательность VH SEQ ID NO: 23 и последовательность VL SEQ ID NO: 28; b) последовательность VH SEQ ID NO: 24 и последовательность VL SEQ ID NO: 28; или с) последовательность VH SEQ ID NO: 22 и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0033] В некоторых вариантах осуществления, АВР такого четвертого семейства содержит: a) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 121 и легкую цепь SEQ ID NO: 120; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 122 и легкую цепь SEQ ID NO: 120; b) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 123 и легкую цепь SEQ ID NO: 120; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 124 и легкую цепь SEQ ID NO: 120; или с) (i) тяжелую цепь SEQ ID NO: 118 и легкую цепь SEQ ID NO: 120; или (ii) тяжелую цепь SEQ ID NO: 119 и легкую цепь SEQ ID NO: 120.

[0034] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен выделенный антиген-связывающий белок (АВР), который специфически связывает TIGIT человека (hTIGIT; SEQ ID NO: 1), содержащий: a) CDR-H3, имеющую по меньшей мере примерно 80% идентичности с CDR-H3 области VH, выбранной из SEQ ID NO: 4-24; b) CDR-H2, имеющую по меньшей мере примерно 80% идентичности с CDR-H2 области VH, выбранной из SEQ ID NO: 4-24; с) CDR-H1, имеющую по меньшей мере примерно 80% идентичности с CDR-H1 области VH, выбранной из SEQ ID NO: 4-24; d) CDR-L3, имеющую по меньшей мере примерно 80% идентичности CDR-L3 области VL, выбранной из SEQ ID NO: 25-28; е) CDR-L2, имеющую по меньшей мере примерно 80% идентичности с CDR-L2 области VL, выбранной из SEQ ID NO: 25-28; и f) CDR-L1, имеющую по меньшей мере примерно 80% идентичности с CDR-L1 области VL, выбранной из SEQ ID NO: 25-28. В некоторых вариантах осуществления, CDR-H3, CDR-H2, CDR-H1, CDR-L3, CDR-L2 и CDR-L1 каждую идентифицируют в соответствии со схемой нумерации, выбранной из схемы нумерации по Кабату, схемы нумерации по Чотиа или схема нумерации по IMGT (ImMunoGeneTics). В некоторых вариантах осуществления, CDR-H1 идентифицируют, как определено схемами нумерации по Чотиа и Кабату, включая границы обеих схем нумерации. В некоторых вариантах осуществления: а) CDR-H3 содержит CDR-H3, выбранную из SEQ ID NO: 29-35, или ее вариант, имеющий 1, 2 или 3 аминокислотные замены; b) CDR-H2 содержит CDR-Н3, выбранную из SEQ ID NO: 36-47, или ее вариант, имеющий 1, 2 или 3 аминокислотные замены; с) CDR-H1 содержит CDR-H1, выбранную из SEQ ID NO: 48-54 или 58-62, или ее вариант, имеющий 1 или 2 аминокислотные замены; d) CDR-L3 содержит CDR-L3, выбранную из SEQ ID NO: 63-66, или ее вариант, имеющий 1 или 2 аминокислотные замены; е) CDR-L2 содержит CDR-L2, выбранную из SEQ ID NO: 67-69, или ее вариант, имеющий 1 аминокислотную замену; и f) CDR-L1 содержит CDR-L1, выбранную из SEQ ID NO: 70-72, или ее вариант, имеющий 1 или 2 аминокислотные замены.

[0035] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен выделенный антиген-связывающий белок (АВР), который специфически связывает TIGIT человека (hTIGIT; SEQ ID NO: 1) содержащий: а) область VH, имеющую по меньшей мере примерно 90% идентичности с областью VH, выбранной из SEQ ID NO: 4-24; и b) область VL, имеющую по меньшей мере примерно 90% идентичности с областью VL, выбранной из SEQ ID NO: 25-28. В некоторых вариантах осуществления: а) область VH содержит область VH, выбранную из SEQ ID NO: 4-24, или ее вариант, имеющий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 аминокислотных замен; и b) область VL содержит область VL, выбранную из SEQ ID NO: 25-28, или ее вариант, имеющий 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен. В некоторых вариантах осуществления, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены.

[0036] В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР: а) конкурирует за связывание с TIGIT с антителом, выбранным из МАБ1, МАБ2, МАБ3, МАБ4, МАБ5, МАБ6, МАБ7, МАБ8, МАБ9, МАБ10, МАБ11, МАБ12, МАБ13, МАБ14, МАБ15, МАБ16, МАБ17, МАБ18, МАБ19, МАБ20 или МАБ21, каждое из которых представлено в Таблице 5 данного описания; b) ингибирует связывание CD155 с TIGIT; с) ингибирует связывание CD112 с TIGIT; d) ингибирует ассоциацию CD226 с TIGIT; е) активирует эффекторный Т-лимфоцит или естественный киллер (NK); f) уменьшает количество регуляторных Т-лимфоцитов в ткани или в кровеносной системе; g) ингибирует подавление эффекторного Т-лимфоцита регуляторным Т-лимфоцитом; h) не связывается специфически с любыми из PVRL1, PVRL2, PVRL3 или PVRL4; или i) допускает любую комбинацию a)-h).

[0037] В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР: а) специфически связывает TIGIT яванского макака (cTIGIT; SEQ ID NO: 2); b) связывает TIGIT мыши (mTIGIT; SEQ ID NO: 3) с аффинностью ниже (на что указывает более высокая KD), чем аффинность АВР к hTIGIT, или не связывает mTIGIT; или с) допускает любую комбинацию а)-b).

[0038] В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР: а) специфически связывает cTIGIT (SEQ ID NO: 2); b) связывает mTIGIT (SEQ ID NO: 3) с аффинностью ниже (на что указывает более высокая KD), чем аффинность АВР к hTIGIT и cTIGIT; и с) ингибирует связывание CD155 с TIGIT.

[0039] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен АВР, который конкурирует за связывание с TIGIT с любым из вышеуказанных АВР, причем АВР: а) специфически связывает cTIGIT (SEQ ID NO: 2); b) связывает mTIGIT (SEQ ID NO: 3) с аффинностью ниже (на что указывает более высокая KD), чем аффинность АВР к hTIGIT и cTIGIT; и с) ингибирует связывание CD155 с TIGIT.

[0040] В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР содержит антитело. В некоторых вариантах осуществления, антитело представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления, антитело выбрано из человеческого антитела, гуманизированного антитела или химерного антитела.

[0041] В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР является мультиспецифичным. В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР связывает больше чем один антиген (т.е. TIGIT и другой (не-TIGIT) антиген). В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР связывает больше чем один эпитоп на одном антигене (т.е. два или более эпитопа на TIGIT).

[0042] В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР содержит фрагмент антитела.

[0043] В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР содержит альтернативный каркас.

[0044] В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР содержит константную область иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления, АВР содержит константную область тяжелой цепи класса, выбранного из IgA, IgD, IgE, IgG или IgM. В некоторых вариантах осуществления, АВР содержит константную область тяжелой цепи класса IgG, и подкласс выбран из IgG4, IgG1, IgG2 или IgG3.

[0045] В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР связывает hTIGIT (SEQ ID NO: 1) с KD меньшей чем около 10 нМ, как измерено интерферометрией биослоя. В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР связывает hTIGIT (SEQ ID NO: 1) с KD меньшей чем около 5 нМ, как измерено интерферометрией биослоя. В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР связывает hTIGIT (SEQ ID NO: 1) с KD меньшей чем около 2 нМ, как измерено интерферометрией биослоя. В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР связывает cTIGIT (SEQ ID NO: 2) с KD меньшей чем около 100 нМ, как измерено интерферометрией биослоя. В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР связывает cTIGIT (SEQ ID NO: 2) с KD меньшей чем около 10 нМ, как измерено интерферометрией биослоя. В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР не показывает значительного связывания с mTIGIT в анализе интерферометрии биослоя. В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР связывается с mTIGIT клеточной поверхности с KD меньшей чем около 50 нМ. В некоторых вариантах осуществления, mTIGIT содержит SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, mTIGIT содержит SEQ ID NO: 138.

[0046] В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР содержит полипептидную последовательность, имеющую остаток пироглутамата (рЕ) на своем N-конце. В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР содержит последовательность VH, в которой Q N-конца замещен на рЕ. В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР содержит последовательность VL, в которой Е N-конца замещена на рЕ. В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР содержит последовательность тяжелой цепи, в которой Q N-конца замещен на рЕ. В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных АВР содержит последовательность легкой цепи, в которой Е N-конеца замещена на рЕ.

[0047] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложены любые из вышеуказанных АВР для применения в качестве терапевтического агента. В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложены любые из вышеуказанных АВР для лечения рака или вирусной инфекции. В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложены любые из вышеуказанных АВР для лечения рака, причем рак выбран из солидной опухоли или гематологической опухоли. В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложены любые из вышеуказанных АВР для применения в качестве терапевтического агента в лечении заболевания или патологии, что не отвечало(а) на предшествующее лечение. В некоторых вариантах осуществления, предшествующее лечение представляло собой лечение, включающее агент, который ингибирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1.

[0048] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен выделенный полинуклеотид, кодирующий любой из вышеуказанных АВР, его VH, его VL, его легкую цепь, его тяжелую цепь или его антиген-связывающую часть. В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен вектор, содержащий полинуклеотид. В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложена клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид и/или вектор. В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен способ получения любого из вышеуказанных ABP, включающий экспрессию АВР в клетке-хозяине и выделение экспрессированного АВР.

[0049] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложена фармацевтическая композиция, содержащая любой из вышеуказанных ABP. В некоторых вариантах осуществления, количество АВР в фармацевтической композиции является достаточным для: а) увеличения активности эффекторных Т-лимфоцитов; b) увеличения активности цитолитических Т-лимфоцитов; c) увеличения активности NK-клеток; d) ингибирования опосредованного TIGIT сигналинга; e) ингибирования или блокирования связывание CD155 и CD112 с TIGIT; или f) любой комбинации a)-e), у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, любая из вышеуказанных фармацевтических композиций дополнительно содержит антитело, которое антагонизирует PD-1 или блокирует взаимодействие PD-L1 с PD-1. В некоторых вариантах осуществления, любая из вышеуказанных фармацевтических композиций предназначена для применения в качестве терапевтического агента. В некоторых вариантах осуществления, любая из вышеуказанных фармацевтических композиций предназначена для лечения рака или вирусной инфекции. В некоторых вариантах осуществления, любая из вышеуказанных фармацевтических композиций предназначена для лечения рака, причем рак выбирают из солидной опухоли и гематологической опухоли. В некоторых вариантах осуществления, любая из вышеуказанных фармацевтических композиций предназначена для применения в качестве терапевтического агента при лечении заболевания или патологии, что не реагирует на предшествующее лечение. В некоторых вариантах осуществления, предшествующее лечение представляло собой лечение, включающее агент, который ингибирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1.

[0050] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен способ лечения или профилактики заболевания или патологии у субъекта, нуждающегося в этом, включая введение субъекту эффективного количества любого из вышеуказанных ABP или любой из вышеуказанных фармацевтических композиций. В некоторых вариантах осуществления, заболевание или патология представляет собой рак или вирусную инфекцию. В некоторых вариантах осуществления, заболевание или патология представляет собой рак, и рак выбирают из солидной опухоли и гематологической опухоли. В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен способ модулирования иммунного ответа у субъекта, нуждающегося в этом, включая введение субъекту эффективного количества любого из вышеуказанных ABP или любой из вышеуказанных фармацевтических композиций. В некоторых вариантах осуществления, любой из вышеуказанных способов дополнительновключает введение одного или большего количества дополнительных терапевтических агентов субъекту. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент выбирают из агента, который ингибирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1, химиотерапиии, иммуностимулирующего агента, излучения и их комбинаций.

[0051] В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент для применения в любом из вышеуказанных способов лечения, применяя АВР или применяя фармацевтическую композицию, представляет собой агент, который ингибирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1, и причем агент, который ингибирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1, выбирают из антитела, пептидомиметика, малой молекулы или нуклеиновой кислоты, кодирующей такой агент. В некоторых вариантах осуществления, агент, который ингибирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1, выбирают из пембролизумаба, ниволумаба, атезолизумаба, авелумаба, дурвалаумаба, BMS-936559, сульфамономэтоксина 1 и сульфаметизола 2.

[0052] В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент для применения в любом из вышеуказанных способов лечения, применяя АВР или применяя фармацевтическую композицию, представляет собой иммуностимулирующий агент, выбранный из: а) агента, который блокирует сигналинг ингибирующего рецептора иммунной клетки или его лиганд, или нуклеиновой кислоты, кодирующей такой агент; b) агониста стимулирующего рецептора иммунной клетки или нуклеиновой кислоты, кодирующей такой агонист; с) цитокина или нуклеиновой кислоты, кодирующей цитокин; d) онколитического вируса или нуклеиновой кислоты, кодирующей онколитический вирус; e) Т-лимфоцита, экспрессирующего рецептор химерного антигена; f) би- или мультиспецифического антитела, направленного на Т-лимфоцит, или нуклеиновой кислоты, кодирующей такое антитело; g) анти-TGF-β антитела или нуклеиновой кислоты, кодирующей такое антитело; h) ловушки TGF-β или нуклеиновой кислоты, кодирующей такую ловушку; i) вакцины к ассоциированному с раком антигену, включая такой антиген или нуклеиновую кислоту, кодирующую такой антиген, и j) их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой агент, который блокирует сигналинг ингибирующего рецептора иммунной клетки или его лиганд, или нуклеиновую кислоту, кодирующую такой агент, и ингибирующий рецептор или его лиганд выбирают из CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, Tim3, нейритина, BTLA, СЕСАМ-1, СЕСАМ-5, VISTA, LAIR1, CD160, 2В4, TGF-R, KIR и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент является агонистом стимулирующего рецептора иммунной клетки, или нуклеиновой кислотой, кодирующей такой агонист, и стимулирующий рецептор иммунной клетки выбирают из ОХ40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD28, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, лиганда CD83, и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой цитокин или нуклеиновую кислоту, кодирующую цитокин, выбранный из ИЛ-2, ИЛ-5, ИЛ-7, ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-21, и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой онколитический вирус или нуклеиновую кислоту, кодирующую онколитический вирус, выбранный из вируса простого герпеса, вируса везикулярного стоматита, аденовируса, вируса болезни Ньюкасла, вируса коровьей оспы, вируса мараба и их комбинаций.

[0053] В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент входит в состав той же фармацевтической композиции, что и АВР. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент входит в состав фармацевтической композиции, отличающейся от фармацевтической композиции с АВР. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент применяют до введения АВР. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент применяют после введения АВР. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент применяют одновременно с АВР.

[0054] В некоторых вариантах осуществления, субъект является субъектом, которого лечили с помощью агента, который ингибирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1 перед выполнением такого способа.

[0055] В некоторых вариантах осуществления, болезнь или патология, поражающая субъекта, не реагировала на предшествующую терапию. В некоторых вариантах осуществления, предшествующее лечение представляло собой лечение, включающее агент, который ингибирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1.

[0056] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен набор, содержащий любую из вышеуказанных фармацевтических композиций, и инструкции по применению такой фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления, набор дополнительно содержит дополнительную фармацевтическую композицию, содержащую дополнительный терапевтический агент и инструкции для применения такого дополнительного терапевтического агента. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент выбирают из агента, который ингибирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1, химиотерапиии, иммуностимулирующего агента, излучения и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой агент, который ингибирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1, и при этом агент, ингибирующий взаимодействие между PD-1 и PD-L1, выбирают из антитела, пептидомиметика, малой молекулы или нуклеиновой кислоты, кодирующей такой агент. В некоторых вариантах осуществления, агент, который ингибирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1, выбирают из пембролизумаба, ниволумаба, атезолизумаба, авелумаба, дурвалаумаба, BMS-936559, сульфамономэтоксина 1 и сульфаметизола 2. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой иммуностимулирующий агент, выбранный из: а) агента, который блокирует сигналинг ингибирующего рецептора иммунной клетки или его лиганд, или нуклеиновой кислоты, кодирующей такой агент; b) агониста стимулирующего рецептора иммунной клетки или нуклеиновой кислоты, кодирующей такой агонист; с) цитокина или нуклеиновой кислоты, кодирующей цитокин; d) онколитического вируса или нуклеиновой кислоты, кодирующей онколитический вирус; е) Т-лимфоцита, экспрессирующего рецептор химерного антигена; f) би- или мультиспецифического антитела, направленного на Т-лимфоцит, или нуклеиновой кислоты, кодирующей такое антитело; g) анти-TGF-β антитела или нуклеиновой кислоты, кодирующей такое антитело; h) ловушки TGF-β или нуклеиновой кислоты, кодирующей такую ловушку; i) вакцины к ассоциированному с раком антигену, включая такой антиген или нуклеиновую кислоту, кодирующую такой антиген, и j) их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой агент, который блокирует сигналинг ингибирующего рецептора иммунной клетки или его лиганд, или нуклеиновую кислоту, кодирующую такой агент, и ингибирующий рецептор или его лиганд выбирают из CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, Tim3, нейритина, BTLA, СЕСАМ-1, СЕСАМ-5, VISTA, LAIR1, CD160, 2В4, TGF-R, KIR и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент является агонистом стимулирующего рецептора иммунной клетки, или нуклеиновой кислотой, кодирующей такой агонист, и стимулирующий рецептор иммунной клетки выбирают из ОХ40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD28, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, лиганда CD83, и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой цитокин или нуклеиновую кислоту, кодирующую цитокин, выбранный из ИЛ-2, ИЛ-5, ИЛ-7, ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-21, и их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления, дополнительный терапевтический агент представляет собой онколитический вирус или нуклеиновую кислоту, кодирующую онколитический вирус, выбранный из вируса простого герпеса, вируса везикулярного стоматита, аденовируса, вируса болезни Ньюкасла, вируса коровьей оспы, вируса мараба и их комбинаций.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0057] На Фиг. 1А-1В показаны выравнивания последовательностей различных молекул, описанных дополнительно в Примерах. На Фиг. 1А показаны выравнивания последовательностей внеклеточных доменов TIGIT из человека, яванского макака, мыши (SEQ ID NO: 3) и референсных последовательностей TIGIT крысы. На Фиг. 1В показано выравнивание внеклеточных доменов человеческих TIGIT и PVRL4.

[0058] Фиг. 2 иллюстрирует сходство между путями CD28-CTLA4 и CD226-TIGIT и, следовательно, полезность TIGIT в качестве целевой контрольной точки иммунной системы. Биология костимуляции/коингибирования CD226/TIGIT аналогична таковой CD28/CTLA4; TIGIT обеспечивает подавляющий сигнал для Т-лимфоцитов, в то время как CD226 обеспечивает сигнал костимуляции для Т-лимфоцитов. Лиганды TIGIT CD155 и CD112 широко экспрессируются в опухолях, обеспечивая подавляющую иммунитет среду.

[0059] На Фиг. 3 показана схематическая диаграмма анализа совместного культивирования TIGIT Jurkat/анти-CD3 НТ-1080, описанного в Примере 7.

[0060] На Фиг. 4А показаны кривые EC50 из иллюстративных экспериментов, сравнивающих способность МАБ10 и изотипного контрольного IgG4 индуцировать продуцирование ИЛ-2 в модифицированных клетках Jurkat, экспрессирующих TIGIT человека. На Фиг. 4В показаны кривые ЕС50 из иллюстративных экспериментов, сравнивающих способность МАБ10 и изотипного контрольного IgG4 индуцировать продуцирование ИЛ-2 в модифицированных клетках Jurkat, экспрессирующих TIGIT яванского макака.

[0061] На Фиг. 5А-5С показан анализ экспрессии TIGIT на CD4+ Т-лимфоцитах человека с помощью FACS. На Фиг. 5А и 5В показан ряд графиков, показывающих анализ экспрессии TIGIT, PVR и CD226 на нестимулированных (Фиг. 5А) и стимулированных (Фиг. 5В) CD4+ Т-лимфоцитах. На Фиг. 5С показан анализ экспрессии TIGIT на наивном CD4+ Т-лимфоците (позитивный по CD45RA, маркере наивных Т-лимфоцитов, верхняя правая панель) и CD4+ Т-лимфоците памяти (позитивный по CD45RO, маркере активированных Т-лимфоцитов, нижняя правая панель).

[0062] На Фиг. 6А-6O показан эффект лечения с помощью МАБ на субоптимально стимулированных МКПК из человеческих доноров. МАБ тестировали на их способность индуцировать ИНФ-γ в МКПК из человеческих доноров, включая контрольное антитело IgG4 (Фиг. 6А), МАБ2 (Фиг. 6В), МАБ3 (Фиг. 6С), МАБ4 (Фиг. 6D), МАБ5 (Фиг. 6Е), МАБ10 (Фиг. 6F), МАБ11 (Фиг. 6G), МАБ12 (Фиг. 6Н), МАБ15 (Фиг. 6I), МАБ16 (Фиг. 6J) и SEC1 (антитело хомяка против TIGIT мыши, Фиг. 6K). Обработка МКПК из донора 1 с помощью МАБ10 вызывает повышение экспрессии нескольких провоспалительных цитокинов, включая фактор некроза опухоли альфа (ФНО, Фиг. 6L), лимфотоксин альфа (LT-α, Фиг. 6М) и интерферон-гамма (ИНФ-γ, Фиг. 6N). На Фиг. 6O показан график, иллюстрирующий ЕС50 МАБ10 в МКПК из донора 1, как измерено по продуцированию ИНФ-γ.

[0063] На Фиг. 7А-7Е представлена серия графиков, показывающих влияние МАБ10 на секрецию цитокинов в субоптимально стимулированных МКПК из донора 2, включая ИНФ-γ (Фиг. 7А), ФНО (Фиг. 7В), интерлейкин 6 (ИЛ-6, Фиг. 7С), гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF, Фиг. 7D) и LT-α (Фиг. 7Е). Данные из клеток, обработанных МАБ10, показаны как черные столбцы, а данные из клеток, обработанных изотипом контрольного IgG4, показаны как светло-серые столбцы. Концентрация антитела для каждого столбца указана в мкг/мл.

[0064] На Фиг. 8А-8С представлен ряд графиков, показывающих, что антагонистическое анти-TIGIT антитело МАБ10 увеличивает ИФН-γ в анализе CD4+ клеток с применением клеток, полученных от трех разных доноров. На Фиг. 8А показаны результаты, полученные для CD4+ клеток, полученных от донора 1. На Фиг. 8В показаны результаты, полученные для CD4+ клеток, полученных от донора 2. На Фиг. 8С показаны результаты, полученные для CD4+ клеток, полученных от донора 3. Продуцирование ИНФ-γ в клетках, обработанных либо МАБ10 (черные столбцы), либо изотипом контрольного IgG4 (светло-серые столбцы), показано на левой панели каждой Фиг. 8А-8С. Среднее значение ЕС50 для МАБ10 в данном анализе рассчитывали путем определения концентрации МАБ10, необходимой для индукции 50% увеличения сигнала ИНФ-γ (нанесенного на график в правой панели каждой из Фиг. 8А-8С).

[0065] На Фиг. 9А показаны результаты анализа, в котором использовали соотношение 1:1 МАБ10 и пембролизумаба (анти-PD-1 антитело) в комбинированном биоанализе, основанном на механизме действия PD-1/TIGIT. Концентрации для каждого антитела составляли 25, 10, 4, 1,6, 0,64, 0,256, 0,1024, 0,04096 и 0,016384 мкг/мл. В качестве контроля использовали нецелевой IgG4. Как показано на Фиг. 9А, только комбинация МАБ10 и пембролизумаба (ЕС50 5,06 нМ) блокировала связывание в достаточной степени, чтобы индуцировать активность люциферазы в клетках Jurkat. На Фиг. 9В показаны результаты анализа с фиксированной дозой (1 мкг/мл) пембролизумаба (или контрольного IgG4) и варьирующей дозой МАБ10 (50, 20, 8, 3,2, 1,28, 0,512, 0,2048, 0,08192 и 0,032768 мкг/мл). На Фиг. 9А и 9В показано что, ни контрольный IgG4, ни комбинация IgG4 + МАБ10 не индуцировали активность люциферазы.

[0066] Фиг. 10A-10D представляют собой ряд графиков, показывающих эффект МАБ10 на ЦМВ-стимулированные CD4+ Т-лимфоциты из человеческого донора с применением окрашивания внутриклеточных цитокинов. Инкубация CD4+ клеток с МАБ10 (черные столбцы) увеличивает продуцирование эффекторных цитокинов дозозависимым образом, включая ФНО (Фиг. 10А), ИЛ-2 (Фиг. 10В) и ИНФ-γ (фиг. 10С) по сравнению с клетками, инкубированными с контрольным IgG4 (белые столбцы). На Фиг. 10D показано, что инкубация с МАБ10 увеличивает долю антигенспецифических активированных CD4+ Т-лимфоцитов. На Фиг. 10D показано что, клетки, которые обрабатывали 20 мкг/мл контрольного IgG4 или МАБ10, анализировали с помощью FACS по экспрессии CD3 (маркер зрелых Т-лимфоцитов) и экспрессии ФНО и ИЛ-2. Статистические различия были рассчитаны между группами МАБ10 и контрольный IgG4 (обработка теми же концентрациями) с применением t-критерия Стьюдента (*=р<0,05, **=р<0,01, ***=р<0,005, ****=р<0,001)

[0067] Фиг. 11A-11D представляют собой ряд графиков, подобных Фиг. 10, но с применением CD8+ клеток, и показывающие продуцирование ФНО (Фиг. 11А), перфорина (Фиг. 11В) и гранзима В (Фиг. 11С) такими клетками, обработанными МАБ10 или контрольным IgG4. На Фиг. 11D показано, что инкубация с МАБ10 увеличивает долю антигенспецифических активированных CD8+ Т-лимфоцитов. Клетки, которые были обработаны 20 мкг/мл контрольного IgG4 или МАБ10, анализировали с помощью FACS по экспрессии CD3, и экспрессии перфорина и гранзима В. Статистические различия были рассчитаны между группами МАБ10 и контрольный IgG4 (обработка теми же концентрациями) с применением t-критерия Стьюдента (*=р<0,05, **=р<0,01, ***=р<0,005, ****=р<0,001)

[0068] На Фиг. 12A-12D показано результаты обработки клеток из того же донора, причем блокирование МАБ10 усиливает ЦМВ-специфичные ответы CD8+ Т-лимфоцитов. Клетки инкубировали с рядом концентраций МАБ10 (черные столбцы) или с контрольным IgG4 (белые столбцы), и анализировали процент популяции, дважды позитивной по перфорин + гранзим В + (Фиг. 12А) или ИНФ-γ + ФНО + (Фиг. 12С). Статистические различия были рассчитаны между группами МАБ10 и контрольный IgG4 (обработка теми же концентрациями) с применением t-критерия Стьюдента (*=р<0,05, **=р<0,01, ***=р<0,005, ****=р<0,001) На Фиг. 12В (анализ перфорин + гразим В +) и Фиг. 12D (анализ ИНФ-γ + ФНО +) показана доля дважды позитивных клеток, сравниваемых с клетками, обработанными 20 мкг/мл контрольного антитела (левые панели) или 20 мкг/мл МАБ10 (правые панели).

[0069] На Фиг. 13 показан график, демонстрирующий комбинированный эффект МАБ10 и PD-1 антитела пембролизумаба на клетках из того же донора, которого применяли для Фиг. 10-12. Клетки стимулировали лизатами ЦМВ и обрабатывали 2 мкг/мл пембролизумаба или контрольного IgG4, и 10, 20 или 40 мкг/мл контрольного антитела или МАБ10, и измеряли продуцирование ФНО. Тестировали четыре группы клеток, обработанных контрольным IgG4 (белые столбцы, самая левая группа), константным количество контрольного IgG4 и титрами МАБ10 (темно-серые столбцы, вторая группа слева), константным количество пембролизумаба и титрами контрольного IgG4 (светло-серые столбцы, вторая группа справа), или константным количество пембролизумаба и титрами МАБ10 (черные полосы, правая группа).

[0070] Фиг. 14А-14С представляют собой ряд графиков, показывающих эффект обработки МАБ10 + пембролизумаб на клетки из трех различных доноров. Клетки стимулировали 0,1 мкг/мл лизата ЦМВ, и обрабатывали 20 мкг/мл МАБ10 или 20 мкг/мл контрольного антитела IgG4, и титрами пембролизумаба, когда измеряли продуцирование ФНО. На Фиг. 14А показаны результаты анализа с применением клеток из донора 1; на Фиг. 14В показаны результаты анализа с применением клеток из донора 2; на Фиг. 14С показаны результаты анализа с применением клеток из донора 3. Добавление МАБ10 (черные столбцы), отдельно или в сочетании с возрастающими концентрациями пембролизумаба, приводит к увеличению продуцирования ФНО по сравнению с группой контрольное антитело + пембролизумаб (белые столбцы). Кроме того, МАБ10 (черные столбцы) в комбинации с пембролизумабом также приводило к увеличению активации по сравнению с только МАБ10. Статистические различия были рассчитаны между только МАБ10 и группами МАБ10 + пембролизумаб с применением t-критерия Стьюдента (*=р<0,05, **=р<0,01, ***=р<0,005, ****=р<0,001)

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Определения

[0071] Если не указано иное, все термины области техники, обозначения и другая научная терминология, используемые в данном документе, предназначены для того, чтобы иметь значения, которые обычно подразумеваются специалистами в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение. В некоторых случаях, термины с общепринятыми значениями определены в данном документе для ясности и/или в качестве готовой ссылки, и включение таких определений в данном документе не обязательно должно истолковываться как представляющее разницу в отношении того, что обычно подразумевается в данной области техники. Методы и процедуры, описанные или упомянутые в данном документе, в целом, как правило, понятны и широко используются при применении традиционных методик специалистами в данной области техники, таких как, например, широко используемые методики молекулярного клонирования, описанные в Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 4th ed. (2012) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. При необходимости процедуры, связанные с применением коммерчески доступных наборов и реагентов, в целом, как правило, выполняются в соответствии с установленными изготовителем протоколами и условиями, если не указано иное.

[0072] Как применяется в данном документе, единственное число существительного также включает множественное число существительного, если контекст явно не указывает на иное. Термины «включать», «такие как» и т.д. предназначены для передачи включения без ограничения, если специально не указано иное.

[0073] Как применяется в данном документе, термин «содержащий» также специфически включает в себя варианты осуществления «состоящий из» и «состоящий в основном из» указанных элементов, если специально не указано иное. Например, мультиспецифичный АВР «содержащий диатело» включает в себя мультиспецифичный АВР «состоящий из диатела», и мультиспецифичный АВР «состоящий в основном из диатела».

[0074] Термин «около» указывает на значение, и охватывает указанное значение и диапазон выше и ниже этого значения. В некоторых вариантах осуществления, термин «около» указывает на обозначенное значение ±10%, ±5% или ±1%. В некоторых вариантах осуществления, где применимо, термин «около» указывает на обозначенное(нные) значение(ния) ± одно стандартное отклонение этого значения(ний).

[0075] Термины «TIGIT», «белок TIGIT» и «антиген TIGIT» применяются в данном документе взаимозаменяемо для обозначения TIGIT человека или любых вариантов (например, сплайс-вариантов и аллельных вариантов), изоформ и гомологов TIGIT человека, которые естественно экспрессируются клетками, или которые экспрессируются клетками, трансфицированными геном tigit. В некоторых аспектах, белок TIGIT представляет собой белок TIGIT, естественным образом экспрессируемый приматом (например, обезьяной или человеком), грызуном (например, мышью или крысой), собакой, верблюдом, кошкой, коровой, козой, лошадью или овцой. В некоторых аспектах, белок TIGIT представляет собой TIGIT человека (hTIGIT; SEQ ID NO: 1). Не ограничиваясь теорией, считается, что позиции 1-21 SEQ ID NO: 1 кодируют сигнальный пептид; позиции 22-141 SEQ ID NO: 1 кодируют внеклеточный домен зрелого белка TIGIT; позиции 142-162 SEQ ID NO: 1 кодируют трансмембранный домен; и позиции 163-244 SEQ ID NO: 1 кодируют цитоплазматический домен. См. UniProt KB - Q495A1 (TIGIT_HUMAN), на www.uniprot.org/uniprot/Q495A1, доступно с 28 сентября 2015 года. В некоторых аспектах, белок TIGIT представляет собой TIGIT яванского макака (cTIGIT; SEQ ID NO: 2). В некоторых аспектах, белок TIGIT представляет собой TIGIT мыши (mTIGIT), имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3. В некоторых аспектах, белок TIGIT представляет собой TIGIT мыши (mTIGIT), имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 138. Как применяется в данном документе, если не указывается SEQ ID NO, то термины «mTIGIT», «мышиный TIGIT» и «TIGIT мыши» обозначают SEQ ID NO: 3 и/или SEQ ID NO: 138. В некоторых аспектах, белок TIGIT представляет собой полноразмерный или непроцесированный белок TIGIT. В некоторых аспектах, белок TIGIT представляет собой укороченный или процессированный белок TIGIT, полученный в результате посттрансляционной модификации. TIGIT также известен по множеству синонимов, включая WUCAM, VSIG9 и Vstm3.

[0076] Термин «иммуноглобулин» относится к классу структурно родственных белков, обычно содержащих две пары полипептидных цепей: одну пару легких (L) цепей и одну пару тяжелых (Н) цепей. В «интактном иммуноглобулине» все четыре из этих цепей связаны между собой дисульфидными связями. Структура иммуноглобулинов хорошо охарактеризована. См., например, Paul, Fundamental Immunology 7th ed., Ch. 5 (2013) Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA. Вкратце, каждая тяжелая цепь обычно содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH) и константную область тяжелой цепи (CH). Константная область тяжелой цепи обычно содержит три домена, сокращенно CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь обычно содержит вариабельную область легкой цепи (VL) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи обычно содержит один домен, сокращенно CL.

[0077] Термин «антиген-связывающий белок» (АВР) относится к белку, содержащему один или больше антиген-связывающих доменов, которые специфически связываются с антигеном или эпитопом. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен связывает антиген или эпитоп со специфичностью и аффинностью, сходными с таковыми встречающихся в природе антител. В некоторых вариантах осуществления, АВР содержит антитело. В некоторых вариантах осуществления, АВР состоит из антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР состоит в основном из антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР содержит альтернативный каркас. В некоторых вариантах осуществления, АВР состоит из альтернативного каркаса. В некоторых вариантах осуществления, АВР состоит в основном из альтернативного каркаса. В некоторых вариантах осуществления, АВР содержит фрагмент антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР состоит из фрагмента антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР состоит в основном из фрагмента антитела. «TIGIT АВР», «анти-TIGIT АВР» или «TIGIT-специфический АВР» представляет собой АВР, как предложено в данном документе, который специфически связывается с антигеном TIGIT. В некоторых вариантах осуществления, АВР связывает внеклеточный домен TIGIT. В некоторых вариантах осуществления, TIGIT АВР, предложенный в данном документе, связывается с эпитопом TIGIT, который является консервативным между белками или среди белков TIGIT из разных видов.

[0078] Термин «антитело» применяется в данном документе в самом широком смысле и включает в себя определенные типы иммуноглобулиновых молекул, содержащих один или больше антиген-связывающих доменов, которые специфически связываются с антигеном или эпитопом. Антитело специфически включает в себя интактные антитела (например, интактные иммуноглобулины), фрагменты антител и мультиспецифические антитела. Антитело представляет собой один тип АВР.

[0079] Термин «альтернативный каркас» относится к молекуле, в которой одна или больше областей могут быть варьированы для получения одного или большего количества антиген-связывающих доменов, которые специфически связываются с антигеном или эпитопом. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен связывает антиген или эпитоп со специфичностью и аффинностью, аналогичной таковым антитела. Иллюстративные альтернативные каркасы включают в себя те, которые получены из фибронектина (например, Adnectins™), β-слоистой структуры (например, iMab), липокалина (например, Anticalins®), EETI-II/AGRP, BPTI/LACI-D1/ITI-D2 (например, домены Куницца), аптамеров тиоредоксинового пептида, белка А (например, Affibody®), анкириновых повторов (например, DARPin), гамма-В-кристаллина/убиквитина (например, Аффилины), CTLD3 (например, Тетрантектины), Финомеров и (модуля LDLR-A) (например, Авимеры). Дополнительная информация об альтернативных каркасах приведена в Binz et al., Nat. Biotechnol., 2005 23:1257-1268; Skerra, Current Opin. in Biotech., 2007 18:295-304; и Silacci et al., J. Biol. Chem., 2014, 289:14392-14398; каждый источник из которых включен посредством ссылки в полном объеме. Альтернативный каркас - это один из типов АВР.

[0080] Термин «антиген-связывающий домен» обозначает часть АВР, которая способна специфически связываться с антигеном или эпитопом. Одним из примеров антиген-связывающего домена является антиген-связывающий домен, сформированный димером VH-VL антитела. Другим примером антиген-связывающего домена является антиген-связывающий домен, сформированный путем варьирования определенных петель из десятого домена типа III фибронектина Аднектина.

[0081] Термины «полноразмерное антитело», «интактное антитело» и «цельное антитело» применяются в данном документе взаимозаменяемо, обозначая антитело, имеющее структуру, по существу, сходную встречающейся в природе структурой антитела, и имеющее тяжелые цепи, которые содержат Fc-область. Например, когда используется для обозначения молекулы IgG, «полноразмерное антитело» представляет собой антитело, которое содержит две тяжелые цепи и две легкие цепи.

[0082] Термин «область Fc» обозначает С-концевую область тяжелой цепи иммуноглобулина, которая в встречающихся в природе антителах взаимодействует с Fc-рецепторами и некоторыми белками системы комплемента. Структуры областей Fc различных иммуноглобулинов, и сайты гликозилирования, содержащиеся в них, известны в данной области техники. См. Schroeder and Cavacini, J. Allergy Clin. Immunol., 2010, 125:S41-52, включен посредством ссылки в полном объеме. Область Fc может быть встречающейся в природе Fc-областью или областью Fc, модифицированной, как описано в данной области техники или в другом месте в данном раскрытии.

[0083] Области VH и VL могут быть далее подразделены на области гипервариабельности («гипервариабельные области (HVR)», также называемые «областями, определяющими комплементарность» (CDR)), чередующиеся с областями, которые являются более консервативными. Более консервативные области называются каркасными областями (FR). Каждая VH и VL в целом, как правило, содержит три CDR и четыре FR, расположенных в следующем порядке (от N-конца до С-конца): FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4. CDR участвуют в связывании антигена и влияют на антигенную специфичность и аффинность связывания антитела. См. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest 5th ed. (1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, включен посредством ссылки в полном объеме.

[0084] Легкая цепь из любых видов позвоночных может быть отнесена к одному из двух типов, называемому каппа (κ) и лямбда (λ), в зависимости от последовательности ее константной области.

[0085] Тяжелая цепь из любых видов позвоночных может быть отнесена к одному из пяти различных классов (или изотипов): IgA, IgD, IgE, IgG и IgM. Эти классы также обозначаются как α, δ, ε, γ и μ соответственно. Классы IgG и IgA далее подразделяются на подклассы на основе различий в последовательности и функции. Люди экспрессируют следующие подклассы: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2.

[0086] Границы аминокислотной последовательности CDR могут быть определены специалистом в данной области техники с применением любой из ряда известных схем нумерации, включая те, которые описаны в Kabat et al., supra (схема нумерации «Кабат»); Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol. Biol., 273:927-948 (схема нумерации «Чотиа»); MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol. 262:732-745 (схема нумерации «Контакт»); Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol., 2003, 27:55-77 (схема нумерации «IMGT»); и Honegge and J. Mol. Biol., 2001, 309:657-70 (схема нумерации «AHo»); каждый из которых включен посредством ссылки в полном объеме.

[0087] В Таблице 1 представлены позиции CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, как определено схемами по Кабату и Чотиа. Для CDR-H1 нумерация остатков обеспечивается с применением схем нумерации по Кабату и Чотиа.

[0088] CDR могут быть обозначены, например, с применением программного обеспечения нумерации антител, такого как Abnum, доступного по адресу www.bioinf.org.uk/abs/abnum/ и описанного в Abhinandan and Martin, Immunology, 2008, 45:3832-3839, включен посредством ссылки в полном объеме.

* С-конец CDR-H1 при нумерации с применением соглашения о нумерации по Кабату варьирует между Н32 и Н34, в зависимости от длины CDR.

[0089] «Схема нумерации ЕС» в целом, как правило применяется при отсылке к остатку в константной области тяжелой цепи антитела (например, как описано в Kabat et al., выше). Если не указано иное, схема нумерации ЕС применяется для обозначения остатков в константных областях тяжелой цепи антитела, описанных в данном документе.

[0090] «Фрагмент антитела» содержит часть интактного антитела, такого как антиген-связывающая или вариабельная область интактного антитела. Фрагменты антитела включают в себя, например, Fv-фрагменты, Fab-фрагменты, фрагменты F(ab')2, фрагменты Fab', фрагменты scFv (sFv) и фрагменты scFv-Fc.

[0091] Фрагменты «Fv» содержат нековалентно связанный димер одного вариабельного домена тяжелой цепи и одного вариабельного домена легкой цепи.

[0092] Фрагменты «Fab» содержат, помимо вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей, константный домен легкой цепи и первый константный домен (CH1) тяжелой цепи. Fab-фрагменты могут быть получены, например, рекомбинантными способами или путем расщепления папаином полноразмерного антитела.

[0093] Фрагменты «F(ab')2» содержат два фрагмента Fab', соединенных, вблизи области шарнира, дисульфидными связями. Фрагменты F(ab')2 могут быть получены, например, рекомбинантными способами или путем расщепления пепсином интактного антитела. Фрагменты F(ab') могут быть диссоциированы, например, обработкой β-меркаптоэтанолом.

[0094] «Одноцепочечные Fv» или «sFv» или «scFv» фрагменты антитела содержат домен VH и домен VL в одной полипептидной цепи. VH и VL в целом, как правило, связаны пептидным линкером. См. А. (1994). Может применятся любой подходящий линкер. В некоторых вариантах осуществления, линкер представляет собой (GGGGS)n (SEQ ID NO: 127). В некоторых вариантах осуществления, n=1, 2, 3, 4, 5 или 6. См. Antibodies from Escherichia coli. In Rosenberg M. & Moore G.P. (Eds.), The Pharmacology of Monoclonal Antibodies vol. 113 (pp. 269-315), Springer-Verlag, Нью-Йорк, включен посредством ссылки в полном объеме.

[0095] Фрагменты «scFv-Fc» содержат scFv, прикрепленный к домену Fc. Например, домен Fc может быть присоединен к С-концу scFv. Домен Fc может следовать за VH или VL в зависимости от ориентации вариабельных доменов в scFv (то есть VH-VL или VL-VH). Может быть использован любой подходящий домен Fc, известный в данной области техники или описанный в данном документе. В некоторых случаях, домен Fc содержит домен Fc IgG4.

[0096] Термин «однодоменное антитело» относится к молекуле, в которой один вариабельный домен антитела специфически связывается с антигеном без присутствия другого вариабельного домена. Однодоменные антитела и их фрагменты описаны в Arabi Ghahroudi et al., FEBS Letters, 1998, 414:521-526 и Muyldermans et al., Trends in Biochem. Sci., 2001, 26:230-245, каждый из которых включен посредством ссылки в полном объеме. Однодоменные антитела также известны как sdAbs или нанотела.

[0097] « мультиспецифичный АВР» представляет собой АВР, который содержит два или больше разных антиген-связывающих домена, которые в совокупности специфически связывают два или больше разных эпитопа. Два или больше различных эпитопа могут быть эпитопами на одном и том же антигене (например, одной молекуле TIGIT, экспрессированной клеткой) или на разных антигенах (например, разных молекулах TIGIT, экспрессированных одной и той же клеткой, или молекуле TIGIT и не-TIGIT молекуле). В некоторых аспектах, мультиспецифичный АВР связывает два разных эпитопа (т.е. «биспецифический АВР»). В некоторых аспектах, мультиспецифичный АВР связывает три разных эпитопа (т.е. «триспецифический АВР»). В некоторых аспектах, мультиспецифичный АВР связывает четыре разных эпитопа (т.е. «квадроспецифический АВР»). В некоторых аспектах, мультиспецифическый АВР связывает пять различных эпитопов (т.е. «квинтиспецифический АВР»). В некоторых аспектах, мультиспецифичный АВР связывает 6, 7, 8 или больше разных эпитопов. Каждая связывающая специфичность может присутствовать в любой подходящей валентности. Примеры мультиспецифических АВР приведены в других частях данного раскрытия.

[0098] «Моноспецифический АВР» представляет собой АВР, который содержит один или больше сайтов связывания, которые специфически связываются с одним эпитопом. Примером моноспецифического АВР является встречающаяся в природе молекула IgG, которая, будучи двухвалентной (т.е. имеющей два антиген-связывающих домена), распознает один и тот же эпитоп в каждом из двух антиген-связывающих доменов. Специфичность связывания может быть представлена в любой подходящей валентности.

[0099] Термин «моноклональное антитело» относится к антителу из популяции по существу гомогенных антител. Популяция по существу гомогенных антител содержит антитела, которые по существу похожи и которые связывают один и тот же эпитоп(ы), за исключением вариантов, которые обычно могут возникать в процессе получения моноклонального антитела. Такие варианты в целом, как правило, присутствуют только в незначительных количествах. Моноклональное антитело обычно получают способом, который включает в себя выбор одного антитела из множества антител. Например, процесс отбора может быть выбором уникального клона из множества клонов, таких как пул гибридомных клонов, фаговых клонов, дрожжевых клонов, бактериальных клонов или других клонов рекомбинантных ДНК. Выбранное антитело может быть дополнительно изменено, например, для улучшения сродства к мишени («аффиное созревание»), для гуманизации антитела, для улучшения его продуцирования в культуре клеток и/или для снижения его иммуногенности у субъекта.

[0100] Термин «химерное антитело» относится к антителу, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи получена из конкретного источника или вида, тогда как остальная часть тяжелой и/или легкой цепи получена из другого источника или вида.

[0101] «Гуманизированные» формы нечеловеческих антител представляют собой химерные антитела, которые содержат минимальную последовательность, полученную из нечеловеческого антитела. Гуманизированное антитело в целом, как правило, представляет собой человеческое антитело (антитело-реципиент), в котором остатки из одного или большего количества CDR заменяются остатками из одного или большего количества CDR нечеловеческого антитела (донорное антитело). Донорным антителом может быть любое подходящее нечеловеческое антитело, такое как мышиное, крысиное, кроличье, куриное или антитело низших приматов, имеющее желаемую специфичность, сродство или биологический эффект. В некоторых случаях, выбранные остатки каркасной области антитела-реципиента заменяются соответствующими остатками каркасной области из донорного антитела. Гуманизированные антитела могут также содержать остатки, которые не обнаружены ни в антителе-реципиенте, ни в донорном антителе. Такие модификации могут быть сделаны для дополнительного улучшения функции антител. Для дополнительных деталей, см. Jones et al., Nature, 1986, 321:522-525; Riechmann et al., Nature, 1988, 332:323-329; и Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 1992, 2:593-596, каждый из которых включен посредством ссылки в полном объеме.

[0102] «Человеческое антитело» представляет собой такое антитело, которое обладает аминокислотной последовательностью, соответствующей таковой антитела, продуцируемого человеком или клеткой человека, или полученной из нечеловеческого источника, который использует репертуар человеческих антител или последовательностей, кодирующих человеческие антитела (например, полученные из человеческих источников или разработанные de novo). Человеческие антитела специфически исключают гуманизированные антитела.

[0103] «Выделенный АВР» или «выделенная нуклеиновая кислота» представляет собой АВР или нуклеиновую кислоту, который(рая) был отделен(на) от и/или выделен(на) из компонента его(ее) естественной среды. Компоненты природной среды могут включать ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые материалы. В некоторых вариантах осуществления, выделенный АВР очищают до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности, например, с помощью секвенатора с вращающимся стаканом. В некоторых вариантах осуществления, выделенный АВР очищают до гомогенности с помощью гель-электрофореза (например, SDS-PAGE) в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с обнаружением окрашиванием синим Кумасси или серебром. В некоторых вариантах осуществления, выделенный АВР может включать в себя АВР in situ в рекомбинантных клетках, поскольку по меньшей мере один компонент природной среды АВР отсутствует. В некоторых аспектах, выделенный АВР или выделенную нуклеиновую кислоту получают, по меньшей мере, на одной стадии очистки. В некоторых вариантах осуществления, выделенный АВР или выделенную нуклеиновую кислоту очищают по меньшей мере до 80%, 85%, 90%, 95% или 99% по массе. В некоторых вариантах осуществления, выделенный АВР или выделенную нуклеиновую кислоту очищают по меньшей мере до 80%, 85%, 90%, 95% или 99% по объему. В некоторых вариантах осуществления, выделенный АВР или выделенную нуклеиновую кислоту предоставляют в виде раствора, содержащего по меньшей мере 85%, 90%, 95%, 98%, от 99% до 100% АВР или нуклеиновой кислоты по массе. В некоторых вариантах осуществления, выделенный АВР или выделенную нуклеиновую кислоту предоставляют в виде раствора, содержащего по меньшей мере 85%, 90%, 95%, 98%, от 99% до 100% АВР или нуклеиновой кислоты по объему.

[0104] «Аффинность» относится к силе суммарного количества нековалентных взаимодействий между одним сайтом связывания молекулы (например, АВР) и ее партнером по связыванию (например, антигеном или эпитопом). Если не указано иное, как используется в данном документе, термин «аффинность» относится к аффинности характерного связывания, которая отражает взаимодействие 1:1 между членами пары связывания (например, АВР и антигеном или эпитопом). Аффинность молекулы X к ее партнеру Y может быть представлена константой равновесия при диссоциации (KD). Кинетические компоненты, которые вносят вклад в константу равновесия при диссоциации, более подробно описаны ниже. Аффинность может быть измерена обычными способами, известными в данной области техники, включая описанные в данном документе, такие как технология поверхностного плазмонного резонанса (SPR) (например, BIACORE®) или интерферометрия биослоя (например, FORTEBIO®).

[0105] Что касается связывания АВР с молекулой-мишенью, термины «связывать», «специфическое связывание», «специально связывается с», «специфически», «избирательно связывается» и «избирательно к» конкретному антигену (например, полипептидная мишень) или эпитопу на определенном антигене обозначают связывание, которое заметно отличается от неспецифического или неселективного взаимодействия (например, с нецелевой молекулой). Специфическое связывание может быть измерено, например, путем измерения связывания с молекулой-мишенью и сравнения его со связыванием с молекулой, не являющейся мишенью. Специфическое связывание может также определяться конкуренцией с контрольной молекулой, которая имитирует эпитоп, распознаваемый на молекуле-мишени. В этом случае, указывается специфическое связывание, если связывание АВР с молекулой-мишенью конкурентно ингибируется контрольной молекулой. В некоторых аспектах, аффинность TIGIT АВР к нецелевой молекуле составляет меньше чем примерно 50% от сродства к TIGIT. В некоторых аспектах, аффинность TIGIT АВР к нецелевой молекуле составляет меньше чем примерно 40% от сродства к TIGIT. В некоторых аспектах, аффинность TIGIT АВР к нецелевой молекуле составляет меньше чем примерно 30% от сродства к TIGIT. В некоторых аспектах, аффинность TIGIT АВР к нецелевой молекуле составляет меньше чем примерно 20% от сродства к TIGIT. В некоторых аспектах, аффинность TIGIT АВР к нецелевой молекуле составляет меньше чем примерно 10% от сродства к TIGIT. В некоторых аспектах, аффинность TIGIT АВР к нецелевой молекуле составляет меньше чем примерно 1% от сродства к TIGIT. В некоторых аспектах, аффинность TIGIT АВР к нецелевой молекуле составляет меньше чем примерно 0,1% от сродства к TIGIT.

[0106] Как применяется в данном документе, термин «kd» (с-1) относится к константе скорости диссоциации конкретного взаимодействия АВР-антиген. Данное значение также упоминается как значение koff.

[0107] Как применяется в данном документе, термин «ka» (М-1×с-1) относится к константе скорости ассоциации конкретного взаимодействия АВР-антиген. Данное значение также упоминается как значение kon.

[0108] Как применяется в данном документе, термин «KD» (М) относится к константе равновесия при диссоциации конкретного взаимодействия АВР-антиген. KD=kd/ka. В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР описывается в терминах KD для взаимодействия между таким АВР и его антигеном. Для ясности, как известно в данной области техники, меньшее значение KD указывает на более высокую аффинность взаимодействие, тогда как большее значение KD указывает на более низкую аффинность взаимодействие.

[0109] Как применяется в данном документе, термин «KA» (М-1) относится к константе равновесия при ассоциации конкретного взаимодействия АВР-антиген. KA=ka/kd.

[0110] АВР с «созревшей аффинностью» представляет собой АВР с одним или больше изменениями (например, в одной или нескольких CDR, или FR) относительно родительского АВР (то есть АВР, из которого получен или сконструирован измененный АВР), что приводит к улучшению в аффинности АВР к его антигену, по сравнению с родительским АВР, который не обладает изменением(ями). В некоторых вариантах осуществления, АВР с созревшей аффинностью имеет наномолярное или пикомолярное сродство к целевому антигену. АВР с созревшей аффинностью могут быть получены с применением различных способов, известных в данной области техники. Например, Marks et al. (Bio/Technology, 1992, 10:779-783, включен посредством ссылки в полном объеме) описывает аффиное созревание путем перестановки доменов VH и VL. Случайный мутагенез CDR и/или каркасных остатков описывается, например, Barbas et al. (Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1994, 91:3809-3813); Schier et al., Gene, 1995, 169:147-155; Yelton et al., J. Immunol., 1995, 155:1994-2004; Jackson et al., J. Immunol., 1995, 154:3310-33199; и Hawkins et al, J. Mol. Biol., 1992, 226:889-896; каждый из которых включен посредством ссылки в полном объеме.

[0111] «Иммуноконъюгат» представляет собой АВР, конъюгированный с одной или большим количеством гетерологичных молекул, например терапевтическим или диагностическим агентом.

[0112] «Эффекторные функции» относятся к той биологической активности, которая опосредуется областью Fc антитела, активность которой может варьировать в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антител включают C1q-связывание для активации комплемент-зависимой цитотоксичности (КЗЦ), связывания Fc-рецептора для активации антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ) и антителозависимого клеточного фагоцитоза (АЗКФ).

[0113] При использовании в данном документе в контексте двух или больше АВР термин «конкурирует с» или «перекрестно конкурирует с» означает, что два или более АВР конкурируют за связывание с антигеном (например, TIGIT). В одном иллюстративном анализе, поверхность покрывают TIGIT и приводят в контакт с первым TIGIT АВР, после чего добавляют второй TIGIT АВР. В другом иллюстративном анализе, поверхность покрывают первым TIGIT АВР и приводят в контакт с TIGIT, после чего добавляют второй TIGIT АВР. Если присутствие первого TIGIT АВР уменьшает связывание второго TIGIT АВР, в любом из анализов, то АВР конкурируют друг с другом. Термин «конкурирует с» также включает комбинации АВР, где один АВР уменьшает связывание другого АВР, но не наблюдается конкуренция, когда АВР добавляют в обратном порядке. Однако в некоторых вариантах осуществления, первый и второй АВР блокируют связывание друг друга, независимо от порядка, в котором они добавлены. В некоторых вариантах осуществления, один АВР уменьшает связывание другого АВР с его антигеном по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95%. Специалист в данной области техники может выбрать концентрации антител, используемых в конкурентных анализах, на основе аффинности АВР к TIGIT и валентности АВР. Анализы, описанные в данном определении, являются иллюстративными, и квалифицированный специалист может использовать любой подходящий анализ для определения того, конкурируют ли антитела друг с другом. Подходящие анализы описаны, например, в Сох et al., «Immunoassay Methods», в Assay Guidance Manual [Internet], обновлено 24 декабря, 2014 года (www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92434/; доступно с 29 сентября, 2015 года); Silman et al., Cytometry, 2001, 44:30-37; и Finco et al., J. Pharm. Biomed. Anal., 2011, 54:351-358; каждый из которых включен посредством ссылки в полном объеме.

[0114] Термин «эпитоп» обозначает часть антигена, которая специфически связывается с АВР. Эпитопы часто состоят из доступных на поверхности аминокислотных остатков и/или сахарных боковых цепей, и могут иметь специфические трехмерные структурные характеристики, а также характеристики удельного заряда. Конформационный и неконформационный эпитопы отличаются тем, что связывание с первым, но не последним, может быть утрачено в присутствии денатурирующих растворителей. Эпитоп может содержать аминокислотные остатки, которые непосредственно участвуют в связывании, и другие аминокислотные остатки, которые непосредственно не участвуют в связывании. Эпитоп, с которым связывается АВР, может быть определен с применением известных методов определения эпитопа, таких как, например, тестирование связывания АВР с вариантами TIGIT с различными точечными мутациями или с химерными вариантами TIGIT.

[0115] Процент «идентичности» между полипептидной последовательностью и эталонной последовательностью определяется как процент аминокислотных остатков в полипептидной последовательности, которые идентичны аминокислотным остаткам в эталонной последовательности после выравнивания последовательностей и внесения пробелов, если необходимо, для достижения максимального процента идентичности последовательностей. Выравнивание для целей определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть достигнуто различными способами, которые входят в компетенцию специалиста в данной области техники, например, с применением общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как BLAST, BLAST-2, ALIGN, MEGALIGN (DNASTAR), CLUSTALW, CLUSTAL OMEGA или MUSCLE. Специалисты в данной области техники могут определить соответствующие параметры для выравнивания последовательностей, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей.

[0116] «Консервативная замена» или «консервативная замена аминокислоты» относится к замене аминокислоты на химически или функционально подобную аминокислоту. Таблицы консервативных замен, предоставляющие схожие аминокислоты, хорошо известны в данной области техники. В качестве примера, группы аминокислот, предложенные в Таблицах 2-4, в некоторых вариантах осуществления, рассматривают как консервативные замены друг для друга.

[0117] Дополнительные консервативные замены могут быть найдены, например, в Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties 2nd ed. (1993) W.H. Freeman & Co., New York, NY. АВР, полученный путем внесения одной или нескольких консервативных замен аминокислотных остатков в исходную АВР, называется «консервативно модифицированным вариантом».

[0118] Термин «аминокислота» относится к двадцати общепринятым встречающимся в природе аминокислотам. Естественно встречающиеся аминокислоты включают в себя: аланин (Ala; А), аргинин (Arg; R), аспарагин (Asn; N), аспарагиновую кислоту (Asp; D), цистеин (Cys; С); глутаминовую кислоту (Glu; Е), глутамин (Gln; Q), глицин (Gly; G); гистидин (His, Н), изолейцин (Ile; I), лейцин (Leu; L), лизин (Lys; K), метионин (Met; М), фенилаланин (Phe; F), пролин (Pro; Р), серин (Ser; S), треонин (Thr; Т), триптофан (Trp; W), тирозин (Tyr; Y) и валин (Val; V).

[0119] Как применяется в данном документе, термин «вектор» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной размножать другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана. Термин включает в себя вектор как самовоспроизводящуюся структуру нуклеиновой кислоты, также как и вектор, встроенный в геном клетки-хозяина, в которую он был введен. Некоторые векторы способны направлять экспрессию нуклеиновых кислот, с которыми они функционально связаны. Такие векторы упоминаются в данном документе как «векторы экспрессии».

[0120] Термины «клетка-хозяин», «линия клеток-хозяев» и «культура клеток-хозяев» используются взаимозаменяемо и относятся к клеткам, в которые была введена экзогенная нуклеиновая кислота, и к потомству таких клеток. Клетки-хозяева включают в себя «трансформанты» (или «трансформированные клетки») и «трансфектанты» (или «трансфицированные клетки»), каждая из которых включает в себя первичную трансформированную или трансфицированную клетку и полученное от нее потомство. Такое потомство не может быть полностью идентичным по содержанию нуклеиновой кислоты по отношению к родительской клетке, и может содержать мутации.

[0121] Термин «проводить лечение» (и его вариации, такие как «лечить» или «лечение») относится к клиническому вмешательству в попытке изменить естественный ход заболевания или патологии у субъекта, нуждающегося в этом. Лечение может быть выполнено как для профилактики, так и во время клинической патологии. Желательные эффекты лечения включают в себя предотвращение возникновения или рецидива заболевания, облегчение симптомов, уменьшение любых прямых или косвенных патологических последствий заболевания, предотвращение метастазов, снижение скорости прогрессирования заболевания, улучшение или ослабление состояния болезни, и ремиссию или улучшение прогноза.

[0122] Как применяется в данном документе, термин «терапевтически эффективное количество» или «эффективное количество» относится к количеству АВР или фармацевтической композиции, предложенных в данном документе, которое при введении субъекту эффективно для лечения заболевания или патологии.

[0123] Как применяется в данном документе, термин «субъект» обозначает субъект-млекопитающее. Иллюстративные субъекты включают в себя людей, обезьян, собак, кошек, мышей, крыс, коров, лошадей, верблюдов, коз, кроликов и овец. В некоторых вариантах осуществления, субъектом является человек. В некоторых вариантах осуществления, субъект имеет заболевание или патологию, которое(ую) можно лечить с помощью АВР, предложенного в данном документе. В некоторых аспектах, заболевание или патология представляет собой рак. В некоторых аспектах, заболевание или патология представляет собой вирусную инфекцию.

[0124] Термин «листок-вкладыш в упаковке» используется для обозначения инструкций, обычно включаемых в коммерческие упаковки терапевтических или диагностических продуктов (например, наборы), которые содержат информацию о показаниях, использовании, дозировке, введении, комбинированной терапии, противопоказаниях и/или предупреждениях, касающихся применения таких терапевтических или диагностических продуктов.

[0125] Как применяется в данном документе, термин «цитотоксический агент» относится к веществу, которое ингибирует или блокирует клеточную функцию, и/или вызывает гибель, или разрушение клеток.

[0126] «Химиотерапевтическое средство» относится к химическому соединению, полезному для лечения рака. Химиотерапевтические агенты включают в себя «антигормональные средства» или «эндокринные терапевтические агенты», которые действуют, чтобы регулировать, уменьшать, блокировать или ингибировать эффекты гормонов, которые могут способствовать росту рака.

[0127] Термин «цитостатический агент» относится к соединению или композиции, которая останавливает рост клетки как in vitro, так и in vivo. В некоторых вариантах осуществления, цитостатический агент представляет собой агент, который уменьшает процент клеток в S-фазе. В некоторых вариантах осуществления, цитостатический агент уменьшает процент клеток в S-фазе, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на около 40%, по меньшей мере на около 60% или по меньшей мере на около 80%.

[0128] Термин «опухоль» относится к любому росту и пролиферации опухолевых клеток, будь то злокачественные или доброкачественные, и ко всем предраковым и раковым клеткам и тканям. Термины «рак», «раковый», «клеточная пролиферативная патология», «пролиферативная патология» и «опухоль» не являются взаимоисключающими, как указано в данном. Термины «клеточная пролиферативная патология» и «пролиферативная патология» относятся к нарушениям, которые связаны с некоторой степенью аномальной клеточной пролиферации. В некоторых вариантах осуществления, клеточная пролиферативная патология представляет собой рак. В некоторых аспектах, опухоль представляет собой солидную опухоль. В некоторых аспектах, опухоль представляет собой гематологическое злокачественное новообразование.

[0129] Термин «фармацевтическая композиция» относится к препарату, который находится в такой форме, чтобы биологическая активность активного ингредиента, содержащегося в нем, была эффективной при лечении субъекта и которая не содержит дополнительных компонентов, которые неприемлемо токсичны для субъекта в количествах, указанных в фармацевтической композиции.

[0130] Термины «модулировать» и «модулирование» относятся к уменьшению или ингибированию или, в качестве альтернативы, активации или увеличению, указанной переменной.

[0131] Термины «увеличить» и «активировать» относятся к увеличению на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 100%, 2-кратно, 3-кратно, 4-кратно, 5-кратно, 10-кратно, 20-кратно, 50-кратно, 100-кратно или больше для указанной переменной.

[0132] Термины «уменьшить» и «ингибировать» относятся к уменьшению на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 2-кратно, 3-кратно, 4-кратно, 5-кратно, 10-кратно, 20-кратно, 50-кратно, 100-кратно или больше для указанной переменной.

[0133] Термин «агонизм» относится к активации рецепторного сигналинга для индукции биологического ответа, связанного с активацией рецептора. «Агонист» представляет собой сущность, которая связывает и выступает агонистом для рецептора.

[0134] Термин «антагонизировать» относится к ингибированию рецепторного сигналинга для ингибирования биологического ответа, связанного с активацией рецептора. «Антагонист» представляет собой сущность, которая связывает и выступает антагонистом для рецептора.

[0135] Термин «эффекторный Т-лимфоцит» включает в себя Т-хелперы (т.е. CD4+) и цитотоксические (т.е. CD8+) Т-лимфоциты. CD4+ эффекторные Т-лимфоциты способствуют развитию нескольких иммунологических процессов, включая созревание В-лимфоцитов в плазматические клетки и В-лимфоциты памяти, а также активацию цитотоксических Т-лимфоцитов и макрофагов. CD8+ эффекторные Т-лимфоциты уничтожают инфицированные вирусом клетки и опухолевые клетки. См. Seder and Ahmed, Nature Immunol., 2003, 4:835-842, включен посредством ссылки в полном объеме, для получения дополнительной информации об эффекторных Т-лимфоцитах.

[0136] Термин «регуляторный Т-лимфоцит» включает в себя клетки, которые регулируют иммунологическую толерантность, например, путем подавления эффекторных Т-лимфоцитов. В некоторых аспектах, регуляторный Т-лимфоцит имеет фенотип CD4+CD25+Foxp3+. В некоторых аспектах, регуляторный Т-лимфоцит имеет фенотип CD8+CD25+. См. Nocentini et al., Br. J. Pharmacol., 2012, 165:2089-2099, включен посредством ссылки в полном объеме, для дополнительной информации о регуляторных Т-лимфоцитах, экспрессирующих TIGIT.

[0137] Термин «дендритная клетка» относится к специализированной антигенпредставляющей клетке, способной активировать наивный Т-лимфоцит и стимулировать рост и дифференциацию В-лимфоцита.

2. TIGIT антиген-связывающие белки

2.1. Связывание TIGIT и клетки-мишени

[0138] Согласно настоящему изобретению предложены АВР, которые специфически связываются с TIGIT. В некоторых аспектах, TIGIT представляет собой hTIGIT (SEQ ID NO: 1). В некоторых аспектах, TIGIT представляет собой cTIGIT (SEQ ID NO: 2). В некоторых аспектах, TIGIT представляет собой mTIGIT с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 3. В некоторых аспектах, TIGIT представляет собой mTIGIT с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 138.

[0139] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, специфически связываются с hTIGIT (SEQ ID NO: 1), cTIGIT (SEQ ID NO: 2), и mTIGIT SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, специфически связываются с hTIGIT (SEQ ID NO: 1), cTIGIT (SEQ ID NO: 2), и mTIGIT SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, специфически связываются с hTIGIT (SEQ ID NO: 1), cTIGIT (SEQ ID NO: 2). В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, специфически связываются с hTIGIT (SEQ ID NO: 1). В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, не связываются с mTIGIT SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, не связываются с mTIGIT SEQ ID NO: 138.

[0140] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, специфически связываются с внеклеточным доменом TIGIT.

[0141] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, представляет собой антитело. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, представляет собой фрагмент антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, представляет собой альтернативный каркас.

[0142] TIGIT может быть экспрессирован на поверхности любой подходящей клетки-мишени. В некоторых вариантах осуществления, клетка-мишень представляет собой Т-лимфоцит. В некоторых вариантах осуществления, клетка-мишень представляет собой эффекторный Т-лимфоцит. В некоторых вариантах осуществления, клетка-мишень представляет собой регуляторный Т-лимфоцит. В некоторых вариантах осуществления, клетка-мишень представляет собой естественный киллер (NK). В некоторых вариантах осуществления, клетка-мишень представляет собой естественный киллер (NKT) Т-лимфоцит.

[0143] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, содержат иммуноглобулиновую молекулу. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, состоят из иммуноглобулиновой молекулы. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, состоят в основном из иммуноглобулиновой молекулы. В некоторых аспектах, иммуноглобулиновая молекула содержит антитело. В некоторых аспектах, иммуноглобулиновая молекула состоит из антитела. В некоторых аспектах, иммуноглобулиновая молекула состоит в основном из антитела.

[0144] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, содержат легкую цепь. В некоторых аспектах, легкая цепь представляет собой легкую цепь каппа. В некоторых аспектах, легкая цепь представляет собой легкую цепь лямбда.

[0145] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, содержат легкую цепь каппа, содержащую SEQ ID NO: 126.

[0146] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, содержат тяжелую цепь. В некоторых аспектах, тяжелая цепь представляет собой IgA. В некоторых аспектах, тяжелая цепь представляет собой IgD. В некоторых аспектах, тяжелая цепь представляет собой IgE. В некоторых аспектах, тяжелая цепь представляет собой IgG. В некоторых аспектах, тяжелая цепь представляет собой IgM. В некоторых аспектах, тяжелая цепь представляет собой IgG1. В некоторых аспектах, тяжелая цепь представляет собой IgG2. В некоторых аспектах, тяжелая цепь представляет собой IgG3. В некоторых аспектах, тяжелая цепь представляет собой IgG4. В некоторых аспектах, тяжелая цепь представляет собой IgA1. В некоторых аспектах, тяжелая цепь представляет собой IgA2.

[0147] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные данном документе, содержат тяжелую цепь IgG4, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 55 и SEQ ID NO: 56. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные данном документе, содержат тяжелую цепь IgG1, содержащую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 57 и SEQ ID NO: 125.

[0148] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, содержат фрагмент антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, состоят из фрагмента антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, состоят в основном из фрагмента антитела. В некоторых аспектах, фрагмент антитела представляет собой Fv-фрагмент. В некоторых аспектах, фрагмент антитела представляет собой Fab-фрагмент. В некоторых аспектах, фрагмент антитела представляет собой фрагмент F(ab')2. В некоторых аспектах, фрагмент антитела представляет собой фрагмент Fab'. В некоторых аспектах, фрагмент антитела представляет собой фрагмент scFv (sFv). В некоторых аспектах, фрагмент антитела представляет собой фрагмент scFv-Fc. В некоторых аспектах, фрагмент антитела представляет собой фрагмент однодоменного антитела.

[0149] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, получают из иллюстративного антитела, предложенного в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, фрагменты антитела, предложенные в данном документе, не получают из иллюстративного антитела, предложенного в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения фрагментов антител.

[0150] В некоторых вариантах осуществления, предложенный фрагмент антитела специфически связывает hTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, специфически связывает cTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, специфически связывает mTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, специфически связывает hTIGIT и cTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, специфически связывает hTIGIT и mTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, специфически связывает cTIGIT и mTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, специфически связывает hTIGIT, cTIGIT и mTIGIT.

[0151] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, полученный из антитела, предложенного в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, к hTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого антитела. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, полученный из антитела, предложенного в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, к cTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого антитела. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, полученный из антитела, предложенного в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, к mTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого антитела. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, полученный из антитела, предложенного в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, как к hTIGIT так и к cTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого антитела. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, полученный из антитела, предложенного в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, как к hTIGIT так и к mTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого антитела. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, полученный из антитела, предложенного в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, как к cTIGIT так и к mTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого антитела. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, полученный из антитела, предложенного в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, ко всем трем hTIGIT, cTIGIT и mTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого антитела.

[0152] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, сохраняет способность антагонизировать TIGIT, как измерено одним или больше анализами или биологическими эффектами, описанными в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, сохраняет способность предотвращать взаимодействие TIGIT с одним или большим количеством его лигандов, как описано в данном документе.

[0153] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, конкурирует за связывание с TIGIT с антителом, выбранным из МАБ1, МАБ2, МАБ3, МАБ4, МАБ5, МАБ6, МАБ7, МАБ8, МАБ9, МАБ10, МАБ11, МАБ12, МАБ13, МАБ14, МАБ15, МАБ16, МАБ17, МАБ18, МАБ19, МАБ20 или МАБ21, каждое из которых представлено в Таблице 5 данного раскрытия изобретения.

[0154] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, ингибирует связывание CD155 с TIGIT. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, ингибирует связывание CD112 с TIGIT. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, ингибирует связывание CD226 с TIGIT.

[0155] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, активирует эффекторный Т-лимфоцит или клетку естественный киллер (NK). В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, уменьшает количество регуляторных Т-лимфоцитов в ткани или в кровеносной системе. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, ингибирует подавление эффекторного Т-лимфоцита регуляторным Т-лимфоцитом.

[0156] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, не связывается специфически с любыми из PVRL1, PVRL2, PVRL3 или PVRL4.

[0157] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, связывает TIGIT мыши (mTIGIT; SEQ ID NO: 3) с аффинностью ниже (как указано более высоким KD), чем аффинность фрагмента антитела к hTIGIT, или не связывает mTIGIT.

[0158] В некоторых вариантах осуществления, фрагмент антитела, предложенный в данном документе, связывает один и тот же эпитоп TIGIT в качестве такого антитела.

[0159] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, являются моноклинальными антителами. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, являются поликлональными антителами.

[0160] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, содержат химерное антитело. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, состоят из химерного антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, состоят в основном из химерного антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, содержат гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, состоят из гуманизированного антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, состоят в основном из гуманизированного антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, содержат человеческое антитело. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, состоят из человеческого антитела. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, состоят в основном из человеческого антитела.

[0161] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, являются с созревшей аффинностью. В некоторых аспектах, АВР с созревшей аффинностью являются АВР с созревшей аффинностью, полученными из иллюстративного АВР, предложенного в данном документе.

[0162] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, содержат альтернативный каркас. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, состоят из альтернативного каркаса. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, состоят в основном из альтернативного каркаса. Может применятся любой подходящий альтернативный каркас. В некоторых аспектах, альтернативный каркас выбирают из Adnectin™, iMab, Anticalin®, EETI-II/AGRP, домена Kunitz, аптамера тиоредоксинового пептида, Affibody®, DARPin, Аффилина, Тетранектина, Финомера и Авимера.

[0163] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, ингибирует связывание TIGIT с одним или большим количеством лигандов TIGIT. В некоторых аспектах, лиганд TIGIT выбирают из одного или большего количества рецепторов полиовируса (PVR, CD155) и нектина-2 (CD112, PVRL2). В некоторых аспектах, АВР ингибирует связывание TIGIT с одним или большим количеством лигандов TIGIT по меньшей мере на 50%. В некоторых аспектах, АВР ингибирует связывание TIGIT с одним или большим количеством лигандов TIGIT по меньшей мере на 75%. В некоторых аспектах, АВР ингибирует связывание TIGIT с одним или большим количеством лигандов TIGIT по меньшей мере на 90%. В некоторых аспектах, АВР ингибирует связывание TIGIT с одним или большим количеством лигандов TIGIT по меньшей мере на 95%.

[0164] В некоторых вариантах осуществления, АВР по изобретению представляет собой АВР, который конкурирует с иллюстративным АВР, предложенным в данном документе. В некоторых аспектах, АВР, который конкурирует с иллюстративным АВР, предложенным в данном документе, связывает тот же эпитоп, что и иллюстративный АВР, предложенный в данном документе.

[0165] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, не связывает PVRL4.

[0166] Известно, что когда антитело экспрессируется в клетках, антитело модифицируется после трансляции. Примеры посттрансляционной модификации включают: отщепление лизина на С-конце тяжелой цепи карбоксипептидазой; модификацию глутамина или глутаминовой кислоты на N-конце тяжелой цепи и легкой цепи до пироглутаминовой кислоты путем пироглутамилирования; гликозилирование; окисление; деамидирование; и гликирование, и известно, что такие посттрансляционные модификации происходят в различных антителах (см. Journal of Pharmaceutical Sciences, 2008, Vol. 97, p. 2426-2447, включен посредством ссылки в полном объеме). В некоторых вариантах осуществления, АВР по изобретению представляет собой антитело или его антиген-связывающий фрагмент, которое(ый) подверглось(гся) посттрансляционному модифицированию. Примеры антитела или его антиген-связывающего фрагмента, которые подверглись посттрансляционному модифицированию, включают антитело или его антиген-связывающие фрагменты, которые подверглись пироглутамилированию на N-конце вариабельной области тяжелой цепи и/или удалению лизина на С-конце тяжелой цепи. В данной области техники известно, что такое посттрансляционное модифицирование, вызванное пироглутамилированием на N-конце и удалением лизина на С-конце, не оказывает никакого влияния на активность антитела или его фрагмента (Analytical Biochemistry, 2006, Vol. 348, p. 24-39, включен посредством ссылки в полном объеме).

2.2. Последовательности TIGIT антиген-связывающих белков

2.2.1. Домены VH

[0167] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH, выбранную из SEQ ID NO: 4-24. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 14. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 15. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 16. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 17. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 18. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 22. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 23. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 24.

[0168] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH, имеющую по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% идентичности с иллюстративной последовательностью VH, предложенной в SEQ ID NO: 4-24. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH, предложенную в SEQ ID NO: 4-24, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффиным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

2.2.2. Домены VL

[0169] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VL, выбранную из SEQ ID NO: 25-28. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0170] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VL, имеющую по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% идентичности с иллюстративной последовательностью VL, предложенной в SEQ ID NO: 25-28. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VL, предложенную в SEQ ID NO: 25-28, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффиным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

2.2.3. Комбинации VH-VL

[0171] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH, выбранную из SEQ ID NO: 4-24, и последовательность VL, выбранную из SEQ ID NO: 25-28.

[0172] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 4, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 5, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 6, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 7, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 8, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 9, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 10, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 11, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 12, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 13, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 14, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 15, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 16, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 17, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 18, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 19, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 20, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 21, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 22, и последовательность VL SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 23, и последовательность VL SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 24, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0173] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 4, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 4, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 4, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0174] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 5, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 5, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 5, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0175] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 6, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 6, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 6, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0176] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 7, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 7, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 7, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0177] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 8, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 8, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 8, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0178] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 9, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 9, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 9, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0179] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 10, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 10, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 10, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0180] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 11, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 11, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 11, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0181] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 12, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 12, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 12, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0182] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 13, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 13, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 13, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0183] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 14, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 14, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 14, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0184] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 15, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 15, и последовательность VL SEQ ID NO: 27. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 15, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0185] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 16, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 16, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 16, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0186] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 17, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 17, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 17, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0187] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 18, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 18, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 18, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0188] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 19, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 19, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 19, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0189] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 20, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 20, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 20, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0190] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 21, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 21, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 21, и последовательность VL SEQ ID NO: 28.

[0191] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 22, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 22, и последовательность VL SEQ ID NO: 26.

В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO:22, и последовательность VL SEQ ID NO: 27.

[0192] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 23, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 23, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 23, и последовательность VL SEQ ID NO: 27.

[0193] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 24, и последовательность VL SEQ ID NO: 25. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 24, и последовательность VL SEQ ID NO: 26. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH SEQ ID NO: 24, и последовательность VL SEQ ID NO: 27.

[0194] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH, имеющую по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% идентичности с иллюстративной последовательностью VH, предложенной в SEQ ID NO: 4-24, и последовательность VL, имеющую по меньшей мере 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или 99% идентичности с иллюстративной последовательностью VL, предложенной в SEQ ID NO: 25-28. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит последовательность VH, предложенную в SEQ ID NO: 4-24, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 аминокислотными заменами, и последовательность VL, предложенную в SEQ ID NO: 25-28, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

2.2.4. CDR

[0195] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит от одного до трех CDR домена VH, выбранного из SEQ ID NO: 4-24. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит от двух до трех CDR домена VH, выбранного из SEQ ID NO: 4-24. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит три CDR домена VH, выбранного из SEQ ID NO: 4-24. В некоторых аспектах, CDR представляют собой CDR по Кабату. В некоторых аспектах, CDR представляют собой CDR по Чотиа. В некоторых аспектах, CDR представляют собой CDR по IMGT.

[0196] В некоторых вариантах осуществления, CDR представляют собой CDR, имеющие по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-H1, CDR-Н2 или CDR-H3 SEQ ID NO: 4-24. В некоторых вариантах осуществления, CDR-H1 представляет собой CDR-H1 домена VH, выбранного из SEQ ID NO: 4-24, с вплоть до 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами. В некоторых вариантах осуществления, CDR-H2 представляет собой CDR-H2 домена VH, выбранного из SEQ ID NO: 4-24, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислотными заменами. В некоторых вариантах осуществления, CDR-Н3 представляет собой CDR-H3 домена VH, выбранного из SEQ ID NO: 4-24, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

[0197] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит от одного до трех CDR домена VL, выбранного из SEQ ID NO: 25-28. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит от двух до трех CDR домена VL, выбранного из SEQ ID NO: 25-28. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит три CDR домена VL, выбранного из SEQ ID NO: 25-28. В некоторых аспектах, CDR представляют собой CDR по Кабату. В некоторых аспектах, CDR представляют собой CDR по Чотиа. В некоторых аспектах, CDR представляют собой CDR по IMGT.

[0198] В некоторых вариантах осуществления, CDR представляют собой CDR, имеющие по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-L1, CDR-L2 или CDR-L3 SEQ ID NO: 25-28. В некоторых вариантах осуществления, CDR-L1 представляет собой CDR-L1 домена VL, выбранного из SEQ ID NO: 25-28, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислотными заменами. В некоторых вариантах осуществления, CDR-L2 представляет собой CDR-L2 домена VL, выбранного из SEQ ID NO: 25-28, с вплоть до 1, 2, 3 или 4 аминокислотными заменами. В некоторых вариантах осуществления, CDR-L3 представляет собой CDR-L3 домена VL, выбранного из SEQ ID NO: 25-28, с вплоть до 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

[0199] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит от одного до трех CDR домена VH, выбранного из SEQ ID NO: 4-24, и от одного до трех CDR домена VL, выбранного из SEQ ID NO: 25-28. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит от двух до трех CDR домена VH, выбранного из SEQ ID NO: 4-24, и от одного до трех CDR домена VL, выбранного из SEQ ID NO: 25-28. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит три CDR домена VH, выбранного из SEQ ID NO: 4-24, и три CDR домена VL, выбранного из SEQ ID NO: 25-28. В некоторых аспектах, CDR представляют собой CDR по Кабату. В некоторых аспектах, CDR представляют собой CDR по Чотиа. В некоторых аспектах, CDR представляют собой CDR по IMGT.

[0200] В некоторых вариантах осуществления, CDR представляют собой CDR, имеющие по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-H1, CDR-Н2 или CDR-H3 SEQ ID NO: 4-24, и по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-L1, CDR-L2 или CDR-L3 SEQ ID NO: 25-28. В некоторых вариантах осуществления, CDR-H1 представляет собой CDR-H1 домена VH, выбранного из SEQ ID NO: 4-24, с вплоть до 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами; CDR-H2 представляет собой CDR-H2 домена VH, выбранного из SEQ ID NO: 4-24, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислотными заменами; CDR-H3 представляет собой CDR-H3 домена VH, выбранного из SEQ ID NO: 4-24, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислотными заменами; CDR-L1 представляет собой CDR-L1 домена VL, выбранного из SEQ ID NO: 25-28, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислотными заменами; CDR-L2 представляет собой CDR-L2 домена VL, выбранного из SEQ ID NO: 25-28, с вплоть до 1, 2, 3 или 4 аминокислотными заменами; CDR-L3 представляет собой CDR-L3 домена VL, выбранного из SEQ ID NO: 25-28, с вплоть до 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

[0201] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3, выбранную из SEQ ID NO: 29-35. В некоторых аспектах, CDR-H3 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-H3 SEQ ID NO: 29-35. В некоторых аспектах, CDR-H3 представляет собой CDR-H3 в соответствии с системой нумерации IMGT. В некоторых вариантах осуществления, CDR-H3 представляет собой CDR-H3, выбранную из SEQ ID NO: 29-35, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

[0202] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H2, выбранную из SEQ ID NO: 36-47. В некоторых аспектах, CDR-H2 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-H2 SEQ ID NO: 36-47. В некоторых аспектах, CDR-H2 представляет собой CDR-H2 в соответствии с системой нумерации по Кабату. В некоторых вариантах осуществления, CDR-H2 представляет собой CDR-H2, выбранную из SEQ ID NO: 36-47, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

[0203] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H1, выбранную из SEQ ID NO: 48-54 или 58-62. В некоторых аспектах, CDR-Н1 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-H1 SEQ ID NO: 48-54 или 58-62. В некоторых аспектах, CDR-H1 представляет собой CDR-Н1, которая охватывает CDR-H1, как определено системами нумерации по Чотиа и Кабату. В некоторых вариантах осуществления, CDR-H1 представляет собой CDR-H1, выбранную из SEQ ID NO: 48-54 или 58-62, с вплоть до 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

[0204] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3, выбранную из SEQ ID NO: 29-35, и CDR-H2, выбранную из SEQ ID NO: 36-47. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3, выбранную из SEQ ID NO: 29-35, CDR-H2, выбранную из SEQ ID NO: 36-47, и CDR-H1, выбранную из SEQ ID NO: 48-54 или 58-62. В некоторых вариантах осуществления, CDR-H3 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-H3 SEQ ID NO: 29-35, CDR-H2 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-H2 SEQ ID NO: 36-47, CDR-H1 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-H1 SEQ ID NO: 48-54 или 58-62. В некоторых вариантах осуществления, CDR-H3 представляет собой CDR-H3, выбранную из SEQ ID NO: 29-35, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислотными заменами; CDR-H2 представляет собой CDR-H2, выбранную из SEQ ID NO: 36-47, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислотными заменами; и CDR-H1 представляет собой CDR-H1, выбранную из SEQ ID NO: 48-54 или 58-62, с вплоть до 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

[0205] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-L3, выбранную из SEQ ID NO: 63-66. В некоторых аспектах, CDR-L3 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-L3 SEQ ID NO: 63-66. В некоторых аспектах, CDR-L3 представляет собой CDR-L3 в соответствии с системами нумерации по Кабату, Чотиа и IMGT. В некоторых вариантах осуществления, CDR-L3 представляет собой CDR-L3, выбранную из SEQ ID NO: 63-66, с вплоть до 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

[0206] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-L2, выбранную из SEQ ID NO: 67-69. В некоторых аспектах, CDR-L2 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-L2 SEQ ID NO: 67-69. В некоторых аспектах, CDR-L2 представляет собой CDR-L2 в соответствии с системами нумерации по Кабату и Чотиа. В некоторых вариантах осуществления, CDR-L2 представляет собой CDR-L2, выбранную из SEQ ID NO: 67-69, с вплоть до 1, 2, 3 или 4 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

[0207] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-L1, выбранную из SEQ ID NO: 70-72. В некоторых аспектах, CDR-L1 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-L1 SEQ ID NO: 70-72. В некоторых аспектах, CDR-L1 представляет собой CDR-L1 в соответствии с системами нумерации по Кабату и Чотиа. В некоторых вариантах осуществления, CDR-L1 представляет собой CDR-L1, выбранную из SEQ ID NO: 70-72, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

[0208] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-L3, выбранную из SEQ ID NO: 63-66, и CDR-L2, выбранную из SEQ ID NO: 67-69. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-L3, выбранную из SEQ ID NO: 63-66, CDR-L2, выбранную из SEQ ID NO: 67-69, и CDR-L1, выбранную из SEQ ID NO: 70-72. В некоторых вариантах осуществления, CDR-L3 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-L3 SEQ ID NO: 63-66, CDR-L2 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-L2 SEQ ID NO: 67-69, и CDR-L1 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-L1 SEQ ID NO: 70-72. В некоторых вариантах осуществления, CDR-L3 представляет собой CDR-L3, выбранную из SEQ ID NO: 63-66, с вплоть до 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами; CDR-L2 представляет собой CDR-L2, выбранную из SEQ ID NO: 67-69, с вплоть до 1, 2, 3 или 4 аминокислотными заменами; и CDR-L1 представляет собой CDR-L1, выбранную из SEQ ID NO: 70-72, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

[0209] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3, выбранную из SEQ ID NO: 29-35, CDR-H2, выбранную из SEQ ID NO: 36-47, CDR-H1, выбранную из SEQ ID NO: 48-54 или 58-62, CDR-L3, выбранную из SEQ ID NO: 63-66, CDR-L2, выбранную из SEQ ID NO: 67-69, и CDR-L1, выбранную из SEQ ID NO: 70-72. В некоторых вариантах осуществления, CDR-H3 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-H3 SEQ ID NO: 29-35, CDR-H2 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-H2 SEQ ID NO: 36-47, CDR-H1 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-H1 SEQ ID NO: 48-54 или 58-62, CDR-L3 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-L3 SEQ ID NO: 63-66, CDR-L2 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-L2 SEQ ID NO: 67-69, CDR-L1 имеет по меньшей мере около 50%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичности с CDR-L1 SEQ ID NO: 70-72. В некоторых вариантах осуществления, CDR-H3 представляет собой CDR-H3, выбранную из SEQ ID NO: 29-35, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислотными заменами; CDR-H2 представляет собой CDR-H2, выбранную из SEQ ID NO: 36-47, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислотными заменами; CDR-H1 представляет собой CDR-H1, выбранную из SEQ ID NO: 48-54 или 58-62, с вплоть до 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами; CDR-L3 представляет собой CDR-L3, выбранную из SEQ ID NO: 63-66, с вплоть до 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотными заменами; CDR-L2 представляет собой CDR-L2, выбранную из SEQ ID NO: 67-69, с вплоть до 1, 2, 3 или 4 аминокислотными заменами; CDR-L1 представляет собой CDR-L1, выбранную из SEQ ID NO: 70-72, с вплоть до 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислотными заменами. В некоторых аспектах, аминокислотные замены представляют собой консервативные аминокислотные замены. В некоторых вариантах осуществления, АВР, описанные в этом параграфе, упоминаются в данном документе как «варианты». В некоторых вариантах осуществления, такие варианты получают из последовательности, предложенной в данном документе, например, аффинным созреванием, сайт-направленным мутагенезом, случайным мутагенезом или любым другим способом, известным в данной области техники или описанным в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, такие варианты не получены из последовательности, предложенной в данном документе, и могут, например, быть выделены de novo в соответствии с предложенными в данном документе способами для получения АВР.

[0210] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 29, CDR-H2 SEQ ID NO: 36, CDR-H1 SEQ ID NO: 48, CDR-L3 SEQ ID NO: 63, CDR-L2 SEQ ID NO: 67 и CDR-L1 SEQ ID NO: 70.

[0211] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 29, CDR-H2 SEQ ID NO: 37, CDR-H1 SEQ ID NO: 49, CDR-L3 SEQ ID NO: 63, CDR-L2 SEQ ID NO: 67 и CDR-L1 SEQ ID NO: 70.

[0212] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 29, CDR-H2 SEQ ID NO: 37, CDR-H1 SEQ ID NO: 50, CDR-L3 SEQ ID NO: 63, CDR-L2 SEQ ID NO: 67 и CDR-L1 SEQ ID NO: 70.

[0213] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 30, CDR-H2 SEQ ID NO: 37, CDR-H1 SEQ ID NO: 50, CDR-L3 SEQ ID NO: 63, CDR-L2 SEQ ID NO: 67 и CDR-L1 SEQ ID NO: 70.

[0214] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 29, CDR-H2 SEQ ID NO: 38, CDR-H1 SEQ ID NO: 50, CDR-L3 SEQ ID NO: 63, CDR-L2 SEQ ID NO: 67 и CDR-L1 SEQ ID NO: 70.

[0215] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 31, CDR-H2 SEQ ID NO: 39, CDR-H1 SEQ ID NO: 51, CDR-L3 SEQ ID NO: 64, CDR-L2 SEQ ID NO: 68 и CDR-L1 SEQ ID NO: 71.

[0216] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 31, CDR-H2 SEQ ID NO: 40, CDR-H1 SEQ ID NO: 52, CDR-L3 SEQ ID NO: 64, CDR-L2 SEQ ID NO: 68 и CDR-L1 SEQ ID NO: 71.

[0217] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 31, CDR-H2 SEQ ID NO: 41, CDR-H1 SEQ ID NO: 53, CDR-L3 SEQ ID NO: 64, CDR-L2 SEQ ID NO: 68 и CDR-L1 SEQ ID NO: 71.

[0218] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 31, CDR-H2 SEQ ID NO: 40, CDR-H1 SEQ ID NO: 54, CDR-L3 SEQ ID NO: 64, CDR-L2 SEQ ID NO: 68 и CDR-L1 SEQ ID NO: 71.

[0219] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 32, CDR-H2 SEQ ID NO: 40, CDR-H1 SEQ ID NO: 54, CDR-L3 SEQ ID NO: 64, CDR-L2 SEQ ID NO: 68 и CDR-L1 SEQ ID NO: 71.

[0220] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 32, CDR-H2 SEQ ID NO: 40, CDR-H1 SEQ ID NO: 54, CDR-L3 SEQ ID NO: 64, CDR-L2 SEQ ID NO: 68 и CDR-L1 SEQ ID NO: 71.

[0221] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 32, CDR-H2 SEQ ID NO: 40, CDR-H1 SEQ ID NO: 54, CDR-L3 SEQ ID NO: 64, CDR-L2 SEQ ID NO: 68 и CDR-L1 SEQ ID NO: 71.

[0222] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 33, CDR-H2 SEQ ID NO: 42, CDR-H1 SEQ ID NO: 58, CDR-L3 SEQ ID NO: 65, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72.

[0223] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 33, CDR-H2 SEQ ID NO: 42, CDR-H1 SEQ ID NO: 59, CDR-L3 SEQ ID NO: 65, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO:72.

[0224] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 33, CDR-H2 SEQ ID NO:43, CDR-H1 SEQ ID NO: 60, CDR-L3 SEQ ID NO: 65, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72.

[0225] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 34, CDR-H2 SEQ ID NO: 43, CDR-H1 SEQ ID NO: 60, CDR-L3 SEQ ID NO: 65, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72.

[0226] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 34, CDR-H2 SEQ ID NO: 44, CDR-H1 SEQ ID NO: 61, CDR-L3 SEQ ID NO: 65, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72.

[0227] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 33, CDR-H2 SEQ ID NO: 44, CDR-H1 SEQ ID NO: 59, CDR-L3 SEQ ID NO: 65, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72.

[0228] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 35, CDR-H2 SEQ ID NO: 45, CDR-H1 SEQ ID NO: 62, CDR-L3 SEQ ID NO: 66, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72.

[0229] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 35, CDR-H2 SEQ ID NO: 46, CDR-H1 SEQ ID NO: 62, CDR-L3 SEQ ID NO: 66, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72.

[0230] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит CDR-H3 SEQ ID NO: 35, CDR-H2 SEQ ID NO: 47, CDR-H1 SEQ ID NO: 62, CDR-L3 SEQ ID NO: 66, CDR-L2 SEQ ID NO: 69 и CDR-L1 SEQ ID NO: 72.

2.2.5. Тяжелые цепи и легкие цепи

[0231] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит VH, выбранную из VH SEQ ID NO: 4-24 (или варианта, описанного в данном документе), и константную область, выбранную из SEQ ID NO: 55-57 или 125. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит VL, выбранную из VL SEQ ID NO: 25-28 (или варианта, описанного в данном документе), и константную область SEQ ID NO: 126.

[0232] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 79. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит легкую цепь SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 79 и легкую цепь SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 80 и легкую цепь SEQ ID NO: 81.

[0233] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 82. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 83. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 82 и легкую цепь SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 83 и легкую цепь SEQ ID NO: 81.

[0234] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 84. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 85. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 84 и легкую цепь SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 85 и легкую цепь SEQ ID NO: 81.

[0235] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 86. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 87. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 86 и легкую цепь SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 87 и легкую цепь SEQ ID NO: 81.

[0236] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 88. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 89. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 88 и легкую цепь SEQ ID NO: 81. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 89 и легкую цепь SEQ ID NO: 81.

[0237] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 91. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит легкую цепь SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 90 и легкую цепь SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 91 и легкую цепь SEQ ID NO: 92.

[0238] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 93. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 94. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 93 и легкую цепь SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 94 и легкую цепь SEQ ID NO: 92.

[0239] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 95. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 96. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 95 и легкую цепь SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 96 и легкую цепь SEQ ID NO: 92.

[0240] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 97. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 98. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 97 и легкую цепь SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 98 и легкую цепь SEQ ID NO: 92.

[0241] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 99. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 100. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 99 и легкую цепь SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 100 и легкую цепь SEQ ID NO: 92.

[0242] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 101. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 102. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 101 и легкую цепь SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 102 и легкую цепь SEQ ID NO: 92.

[0243] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 104. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 103 и легкую цепь SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 104 и легкую цепь SEQ ID NO: 92.

[0244] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 105. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит легкую цепь SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 105 и легкую цепь SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 106 и легкую цепь SEQ ID NO: 107.

[0245] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 108. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 109. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 108 и легкую цепь SEQ ID NO:107. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 109 и легкую цепь SEQ ID NO: 107.

[0246] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 110. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 111. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 110 и легкую цепь SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 111 и легкую цепь SEQ ID NO: 107.

[0247] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 112. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 113. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 112 и легкую цепь SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 113 и легкую цепь SEQ ID NO: 107.

[0248] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 114. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 115. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 114 и легкую цепь SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 115 и легкую цепь SEQ ID NO: 107.

[0249] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 116. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 117. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 116 и легкую цепь SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 117 и легкую цепь SEQ ID NO: 107.

[0250] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 118. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 119. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит легкую цепь SEQ ID NO: 120. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 118 и легкую цепь SEQ ID NO: 120. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 119 и легкую цепь SEQ ID NO: 120.

[0251] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 121. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 122. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 121 и легкую цепь SEQ ID NO: 120. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 122 и легкую цепь SEQ ID NO: 120.

[0252] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 123. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 124. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 123 и легкую цепь SEQ ID NO: 120. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, содержит тяжелую цепь SEQ ID NO: 124 и легкую цепь SEQ ID NO: 120.

2.2.6. Консенсусные последовательности

[0253] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложено первое семейство АВР, причем АВР такого семейства содержит следующие шесть последовательностей CDR: а) CDR-H3, имеющую последовательность A-R-D-G-V-L-X1-L-N-K-R-S-F-D-I, в которой X1 представляет собой А или Т (SEQ ID NO: 128); b) CDR-H2, имеющую последовательность S-I-Y-Y-S-G-X2-T-Y-Y-N-P-S-L-K-S, в которой Х2 представляет собой S, Q или G (SEQ ID NO: 129); с) CDR-H1, имеющую последовательность G-S-I-X3-S-G-X4-Y-Y-W-G, в которой Х3 представляет собой Е или А, и Х4 представляет собой L, V или S (SEQ ID NO: 130); d) CDR-L3, имеющую последовательность QQHTVRPPLT (SEQ ID NO: 64); e) CDR-L2, имеющую последовательность GASSRAT (SEQ ID NO: 68); и f) CDR-L1, имеющую последовательность RASQSVSSSYLA (SEQ ID NO: 71). В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен АВР такого первого семейства.

[0254] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложено второе семейство АВР, причем АВР такого семейства содержит следующие шесть последовательностей CDR: а) CDR-H3, имеющую последовательность A-R-D-A-N-Y-Y-G-X1-A-W-A-F-D-P, в которой X1 представляет собой S или G (SEQ ID NO: 131); b) CDR-H2, имеющую последовательность S-I-Y-Y-S-G-X2-T-F-Y-N-P-S-L-K-X3, в которой Х2 представляет собой S или А, и Х3 представляет собой S или G (SEQ ID NO: 132); с) CDR-Н1, имеющую последовательность G-S-I-X4-S-X5-X6-X7-Y-W-G, в которой Х4 представляет собой S или Т, Х5 представляет собой S или Т, Х6 представляет собой S или K, и X7 представляет собой Н или Y (SEQ ID NO: 133); d) CDR-L3, имеющую последовательность QQHFNLPT (SEQ ID NO: 63); е) CDR-L2, имеющую последовательность DASNRAT (SEQ ID NO: 67); и f) CDR-L1, имеющую последовательность RASQSVSSYLA (SEQ ID NO: 70). В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен АВР такого второго семейства.

[0255] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложено третье семейство АВР, причем АВР такого семейства содержит следующие шесть последовательностей CDR: а) CDR-H3, имеющую последовательность A-R-G-G-R-T-T-W-I-G-A-X1-D-I, в которой X1 представляет собой F или L (SEQ ID NO: 134); b) CDR-H2, имеющую последовательность I-I-N-P-S-X2-G-L-T-S-Y-A-X3-K-F-Q-G, в которой Х2 представляет собой L или I, и Х3 представляет собой Q или R (SEQ ID NO: 135); с) CDR-Н1, имеющую последовательность Y-T-F-X4-X5-Y-Y-X6-H, в которой X4 представляет собой G, Р или R, и X5 представляет собой N, А или Е, и Х6 представляет собой М или I (SEQ ID NO: 136); d) CDR-L3, имеющую последовательность QQYVVWPPLT (SEQ ID NO: 65); e) CDR-L2, имеющую последовательность GASTRAT (SEQ ID NO: 69); и f) CDR-L1, имеющую последовательность RASQSVSSNLA (SEQ ID NO: 72). В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен АВР такого третьего семейства.

[0256] В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложено четвертое семейство АВР, причем АВР такого семейства содержит следующие шесть последовательностей CDR: а) CDR-H3, имеющую последовательность ARLHVSGSYYPAYLDY (SEQ ID NO: 35); b) CDR-H2, имеющую последовательность X1-I-N-P-S-M-G-A-T-S-Y-X2-Q-K-F-X3-G, в которой X1 представляет собой V или I, X2 представляет собой А или Т, и Х3 представляет собой Q или R (SEQ ID NO: 137); с) CDR-Н1 имеющую последовательность YTFTSHYMG (SEQ ID NO: 62); d) CDR-L3 имеющую последовательность QQYIVFPWT (SEQ ID NO: 66); e) CDR-L2 имеющую последовательность GASTRAT (SEQ ID NO: 69); и f) CDR-L1 имеющую последовательность RASQSVSSNLA, (SEQ ID NO: 72). В некоторых вариантах осуществления, в данном документе предложен АВР такого четвертого семейства.

2.2.7. Функциональные свойства вариантов АВР

[0257] Как описано выше, и в других местах данного раскрытия изобретения, варианты АВР, предложенные в данном документе, определенны на основе процента идентичности с иллюстративной последовательностью АВР, предложенной в данном документе, или замены аминокислотных остатков по сравнению с иллюстративной последовательностью АВР, предложенной в данном документе.

[0258] В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, имеет специфичность к hTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, имеет специфичность к cTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, имеет специфичность к mTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, имеет специфичность к hTIGIT и cTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, имеет специфичность к hTIGIT и mTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, имеет специфичность к cTIGIT и mTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, имеет специфичность к hTIGIT, cTIGIT и mTIGIT.

[0259] В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, который получен из иллюстративной последовательности АВР, предложенной в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, к hTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5 кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого иллюстративного АВР. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, который получен из иллюстративной последовательности АВР, предложенной в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, к cTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого иллюстративного АВР. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, который получен из иллюстративной последовательности АВР, предложенной в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, к mTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого иллюстративного АВР. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, который получен из иллюстративной последовательности АВР, предложенной в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, как к hTIGIT так и к cTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого иллюстративного АВР. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, который получен из иллюстративной последовательности АВР, предложенной в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, как к hTIGIT так и к mTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого иллюстративного АВР. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, который получен из иллюстративной последовательности АВР, предложенной в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, как к cTIGIT так и к mTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого иллюстративного АВР. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, который получен из иллюстративной последовательности АВР, предложенной в данном документе, сохраняет аффинность, как измерено по KD, к всем трем hTIGIT, cTIGIT и mTIGIT, которая находится в пределах примерно 1,5-кратной, примерно 2-кратной, примерно 3-кратной, примерно 4-кратной, примерно 5-кратной, примерно 6-кратной, примерно 7-кратной, примерно 8-кратной, примерно 9-кратной или примерно 10-кратной аффиности такого иллюстративного АВР.

[0260] В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, сохраняет способность антагонизировать TIGIT, как измерено одним или больше анализами или биологическими эффектами, описанными в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, сохраняет способность предотвращать взаимодействие TIGIT с одним или большим количеством его лигандов, как описано в данном документе.

[0261] В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, конкурирует за связывание с TIGIT с антителом, выбранным из МАБ1, МАБ2, МАБ3, МАБ4, МАБ5, МАБ6, МАБ7, МАБ8, МАБ9, МАБ10, МАБ11, МАБ12, МАБ13, МАБ14, МАБ15, МАБ16, МАБ17, МАБ18, МАБ19, МАБ20 или МАБ21, каждое из которых представлено в Таблице 5 данного раскрытия изобретения.

[0262] В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, ингибирует связывание CD155 с TIGIT. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, ингибирует связывание CD112 с TIGIT. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, ингибирует связывание CD226 с TIGIT.

[0263] В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, активирует эффекторный Т-лимфоцит или клетку естественный киллер (NK). В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, уменьшает количество регуляторных Т-лимфоцитов в ткани или в кровеносной системе. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, ингибирует подавление эффекторного Т-лимфоцита регуляторным Т-лимфоцитом.

[0264] В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, не связывается специфически с любыми из PVRL1, PVRL2, PVRL3 или PVRL4.

[0265] В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, связывает TIGIT мыши (SEQ ID NO: 3) с аффинностью ниже (как указано более высоким KD), чем аффинность варианта АВР к hTIGIT, или не связывает mTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, связывает TIGIT мыши (SEQ ID NO: 138) с аффинностью ниже (как указано более высоким KD), чем аффинность варианта АВР к hTIGIT, или не связывает mTIGIT.

[0266] В некоторых вариантах осуществления, вариант АВР, предложенный в данном документе, связывает один и тот же эпитоп TIGIT в качестве такого АВР.

2.2.8. Другие функциональные свойства АВР

[0267] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, имеет одно или большее количество свойств, перечисленных в следующих a)-j): а) конкурирует за связывание с TIGIT с антителом, выбранным из МАБ1, МАБ2, МАБ3, МАБ4, МАБ5, МАБ6, МАБ7, МАБ8, МАБ9, МАБ10, МАБ11, МАБ12, МАБ13, МАБ14, МАБ15, МАБ16, МАБ17, МАБ18, МАБ19, МАБ20 или МАБ21, каждое из которых представлено в Таблице 5 данного раскрытия изобретения; b) ингибирует связывание CD 155 с TIGIT; с) ингибирует связывание CD112 с TIGIT; d) ингибирует ассоциацию CD226 с TIGIT; е) активирует эффекторный Т-лимфоцит или естественный киллер (NK); f) уменьшает количество регуляторных Т-лимфоцитов в ткани или в кровеносной системе; g) ингибирует подавление эффекторного Т-лимфоцита регуляторным Т-лимфоцитом; h) не связывается специфически с любыми из PVRL1, PVRL2, PVRL3 или PVRL4; i) специфически связывает TIGIT яванского макака (cTIGIT; SEQ ID NO: 2); или j) связывает TIGIT мыши (mTIGIT; SEQ ID NO: 3) с аффинностью ниже (как указано более высоким KD), чем аффинность АВР к hTIGIT, или не связывает mTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, имеет два или больше свойств, перечисленных в вышеуказанных a)-j). В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, имеет три или больше свойств, перечисленных в вышеуказанных a)-j). В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, имеет четыре или больше свойств, перечисленных в вышеуказанных а)-j). В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, имеет пять или больше свойств, перечисленных в вышеуказанных a)-j). В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, имеет шесть или больше свойств, перечисленных в вышеуказанных a)-j). В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, имеет семь или больше свойств, перечисленных в вышеуказанных a)-j). В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, имеет восемь или больше свойств, перечисленных в вышеуказанных а)-j). В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, имеет девять или больше свойств, перечисленных в вышеуказанных a)-j). В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, имеет десять или больше свойств, перечисленных в вышеуказанных a)-j).

[0268] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенный в данном документе, проявляет комбинацию свойств, перечисленных в следующих a)-j): а) конкурирует за связывание с TIGIT с антителом, выбранным из МАБ1, МАБ2, МАБ3, МАБ4, МАБ5, МАБ6, МАБ7, МАБ8, МАБ9, МАБ10, МАБ11, МАБ12, МАБ13, МАБ14, МАБ15, МАБ16, МАБ17, МАБ18, МАБ19, МАБ20 или МАБ21, каждое из которых представлено в Таблице 5 данного раскрытия изобретения; b) ингибирует связывание CD155 с TIGIT; с) ингибирует связывание CD112 с TIGIT; d) ингибирует ассоциацию CD226 с TIGIT; е) активирует эффекторный Т-лимфоцит или естественный киллер (NK); f) уменьшает количество регуляторных Т-лимфоцитов в ткани или в кровеносной системе; g) ингибирует подавление эффекторного Т-лимфоцита регуляторным Т-лимфоцитом; h) не связывается специфически с любыми из PVRL1, PVRL2, PVRL3 или PVRL4; i) специфически связывает TIGIT яванского макака (cTIGIT; SEQ ID NO: 2); или j) связывает TIGIT мыши (mTIGIT; SEQ ID NO: 3) с аффинностью ниже (как указано более высоким KD), чем аффинность АВР к hTIGIT, или не связывает mTIGIT. В некоторых вариантах осуществления, такой АВР проявляет комбинацию свойств, выбранных из (а и b), (а и с), (а и d), (а и е), (а и f), (а и g), (а и h), (а и i), (а и j), (b и а), (b и с), (b и d), (b и е), (b и f), (b и g), (b и h), (b и i), (b и j), (с и а), (с и b), (с и d), (с и е), (с и f), (с и g), (с и h), (с и i), (с и j), (d и a), (d и b), (d и с), (d и е), (d и f), (d и g), (d и h), (d и i), (d и j), (e и a), (e и b), (e и с), (e и d), (e и f), (e и g), (e и h), (e и i), (e и j), (f и a), (f и b), (f и с), (f и d), (f и e), (f и g), (f и h), (f и i), (f и j), (g и a), (g и b), (g и с), (g и d), (g и e), (g и f), (g и h), (g и i), (g и j), (h и a), (h и b), (h и с), (h и d), (h и e), (h и f), (h и g), (h и i), (h и j), (i и a), (i и b), (i и с), (i и d), (i и e), (i и f), (i и g), (i и h), (i и j), (j и a), (j и b), (j и с), (j и d), (j и e), (j и f), (j и g), (j и h) и (j и i). В некоторых вариантах осуществления, такой АВР проявляет комбинацию свойств, выбранных из (а и b и с), (а и b и d), (а и b и е), (а и b и f), (а и b и g), (a, b и h), (а и b и i), (а и b и j), (а, с и b), (а и с и d), (а и с и е), (а и с и f), (а и с и g), (а, с и h), (а и с и i), (а и с и j), (a, d и b), (а и d и с), (а и d и е), (a, d и f), (а и d и g), (a, d и h), (а и d и i), (а и d и j), (а и е и b), (а и е и с), (а и е и d), (а и е и f), (а и е и g), (а и е и h), (а и е и i), (а и е и j), (а и f и b), (а и f и с), (а и f и d), (а и f и е), (а и f и g), (а и f и h), (а и f и i), (а и f и j), (а и g и b), (а и g и с), (а и g и d), (а и g и е), (а и g и f), (а и g и h), (а и g и i), (а и g и j), (а и h и b), (а и h и с), (а и h и d), (а и h и е), (а и h и f), (а и h и g), (а и h и i), (а и h и j), (а и i и b), (а и i и с), (а и i и d), (а и i и е), (а и i и f), (а и i и g), (а и i и h), (а и i и j), (а и j и b), (а и j и с), (а и j и d), (а и j и е), (а и j и f), (а и j и g), (а и j и h), (а и j и i), (b и а и j), (b и а и с), (b и а и d), (b и а и е), (b и а и f), (b, а и g), (b и а и h), (b и а и i), (b и с и j), (b и с и а), (b и с и d), (b и с и е), (b и с и f), (b и с и g), (b и с и h), (b и с и i), (b и d и j), (b и d и а), (b и d и с), (b и d и е), (b и d и f), (b и d и g), (b и d и h), (b и d и i), (b и е и j), (b и е и а), (b и е и с), (b, е и d), (b и е и f), (b и е и g), (b и е и h), (b и е и i), (b и f и j), (b и f и a), (b и f и с), (b и f и d), (b и f и е), (b и f и g), (b и f и h), (b и f и i), (b и g и j), (b и g и a), (b и g и с), (b и g и d), (b и g и e), (b и g и f), (b и g и h), (b и g и i), (b и h и j), (b и h и a), (b и h и с), (b и h и d), (b и h и e), (b и h и f), (b и h и g), (b и h и i), (b и i и j), (b и i и a), (b и i и с), (b и i и d), (b и i и e), (b и i и f), (b и i и g), (b и i и h), (b и j и i), (b и j и a), (b и j и с), (b и j и d), (b и j и e), (b и j и f), (b и j и g), (b и j и h), (с и а и i), (с и а и j), (с и а и b), (с и а и d), (с и а и е), (с и а и f), (с и а и g), (с и а и h), (с и b и i), (с и b и j), (с и b и а), (с и b и d), (с и b и е), (с и b и f), (с и b и g), (с и b и h), (с и d и i), (с и d и j), (с и d и а), (с и d и b), (с и d и е), (с и d и f), (с и d и g), (с и d и h), (с и е и i), (с и е и j), (с и е и а), (с и е и b), (с и е и d), (с и е и f), (с и е и g), (с и е и h), (с и f и i), (с и f и j), (с и f и а), (с и f и b), (с и f и d), (с и f и е), (с и f и g), (с и f и h), (с и g и i), (с и g и j), (с и g и а), (с и g и b), (с и g и d), (с и g и е), (с и g и f), (с и g и h), (с и h и i), (с и h и j), (с и h и а), (с и h и b), (с и h и d), (с и h и е), (с и h и f), (с и h и g), (с и i и h), (с и i и j), (с и i и а), (с и i и b), (с и i и d), (с и i и е), (с и i и f), (с и i и g), (с и j и h), (с и j и i), (с и j и а), (с и j и b), (с и j и d), (с и j и е), (с и j и f), (с и j и g), (d и а и h), (d и а и i), (d и а и j), (d и а и b), (d и а и с), (d и а и е), (d и а и f), (d и а и g), (d и b и h), (d и b и i), (d и b и j), (d и b и a), (d и b и с), (d и b и e), (d и b и f), (d и b и g), (d и с и h), (d и с и i), (d и с и j), (d и с и a), (d и с и b), (d и с и е), (d и с и f), (d и с и g), (d и е и h), (d и е и i), (d и е и j), (d и е и a), (d и е и b), (d и е и с), (d и е и f), (d и е и g), (d и f и h), (d и f и i), (d и f и j), (d и f и a), (d и f и b), (d и f и с), (d и f и e), (d и g и g), (d и g и h), (d и g и i), (d и g и j), (d и g и a), (d и g и b), (d и g и с), (d и g и e), (d и g и f), (d и h и g), (d и h и i), (d и h и j), (d и h и a), (d и h и b), (d и h и с), (d и h и e), (d и h и f), (d и i и g), (d и i и h), (d и i и j), (d и i и a), (d и i и b), (d и i и с), (d и i и e), (d и i и f), (d и j и g), (d и j и h), (d и j и i), (d и j и a), (d и j и b), (d и j и с), (d и j и e), (d и j и f), (e и а и g), (e и а и h), (e и а и i), (e и а и j), (e и а и b), (e и а и с), (e и а и d), (e и а и f), (e и b и g), (e и b и h), (e и b и i), (e и b и j), (e и b и a), (e и b и с), (e и b и d), (e и b и f), (e и с и g), (e и с и h), (е и с и i), (е и с и j), (е и с и а), (е и с и b), (е и с и d), (е и с и f), (е и d и g), (е и d и h), (е и d и i), (е и d и j), (е и d и а), (е и d и b), (е и d и с), (е и d и f) (е и f и g), (е и f и h), (е и f и i), (е и f и j), (е и f и а), (е и f и b), (е и f и с), (е и f и d), (е и g и f), (е и g и h), (е и g и i), (е и g и j), (е и g и а), (е и g и b), (е и g и с), (е, g и d), (е и h и f), (е и h и g), (е и h и i), (е и h и j), (е и h и а), (е и h и b), (е и h и с), (е и h и d), (е и i и f), (е и i и g), (е и i и h), (е и i и j), (е и i и а), (е и i и b), (е и i и с), (е и i и d), (е и j и f), (е и j и g), (е и j и h), (е и j и i), (е и j и а), (е и j и b), (е и j и с), (е и j и d), (f и а и е), (f и а и g), (f и а и h), (f и а и i), (f и а и j), (f и а и b), (f и а и с), (f и а и d), (f и b и е), (f и b и g), (f и b и h), (f и b и i), (f и b и j), (f и b и a), (f и b и с), (f и b и d), (f и с и e), (f и с и g), (f и с и h), (f и с и i), (f и с и j), (f и с и a), (f и с и b), (f и с и d), (f и d и е), (f и d и g), (f и d и h), (f и d и i), (f и d и j), (f и d и a), (f и d и b), (f и d и с), (f и e и d), (f и e и g), (f и e и h), (f и e и i), (f и e и j), (f и e и a), (f и e и b), (f и e и с), (f и g и d), (f и g и e), (f и g и h), (f и g и i), (f и g и j), (f и g и a), (f и g и b), (f и g и с), (f и h и d), (f и h и e), (f и h и g), (f и h и i), (f и h и j), (f и h и a), (f и h и b), (f и h и с), (f и i и d), (f и i и e), (f и i и g), (f и i и h), (f и i и j), (f и i и a), (f и i и b), (f и i и с), (f и j и d), (f и j и e), (f и j и g), (f и j и h), (f и j и i), (f и j и a), (f и j и b), (f и j (g и а и d), (g и а и e), (g и а и f), (g и а и h), (g и а и i), (g и а и j), (g и а и b), (g и а и с), (g и b и d), (g и b и е), (g и b и f), (g и b и h), (g и b и i), (g и b и j), (g и b и a), (g и b и с), (g и с и d), (g и с и е), (g и с и f), (g и с и h), (g и с и i), (g и с и j), (g и с и a), (g и с и b), (g и d и с), (g и d и е), (g и d и f), (g и d и h), (g и d и i), (g и d и j), (g и d и a), (g и d и b), (g и e и с), (g и e и d), (g и e и f), (g и e и h), (g и e и i), (g и e и j), (g и e и a), (g и e и b), (g и f и с), (g и f и d), (g и f и e), (g и f и h), (g и f и i), (g и f и j), (g и f и a), (g и f и b), (g и h и с), (g и h и d), (g и h и e), (g и h и f), (g и h и i), (g и h и j), (g и h и a), (g и h и b), (g и i и с), (g и i и d), (g и i и e), (g и i и f), (g и i и h), (g и i и j), (g и i и a), (g и j и b), (g и j и с), (g и j и d), (g и j и e), (g и j и f), (g и j и h), (g и j и i), (g и j и a), (g и j и b), (h и а и с), (h и а и d), (h и а и e), (h и а и f), (h и а и g), (h и а и i), (h и а и j), (h, а и b), (h и b и с), (h и b и d), (h и b и e), (h и b и f), (h и b и g), (h и b и i), (h и b и j), (h и b и a), (h и с и b), (h и с и d), (h и с и е), (h и с и f), (h и с и g), (h и с и i), (h и с и j), (h и с и a), (h и d и b), (h и d и с), (h и d и е), (h и d и f), (h и d и g), (h и d и i), (h и d и j), (h и d и a), (h и e и b), (h и e и с), (h и e и d), (h и e и f), (h и e и g), (h и e и i), (h и e и j), (h и e и a), (h и f и b), (h и f и с), (h и f и d), (h и f и e), (h и f и g), (h и f и i), (h и f и j), (h и f и a), (h и g и b), (h и g и с), (h и g и d), (h и g и e), (h и g и f), (h и g и i), (h и g и j), (h и g и a), (h и i и b), (h и i и с), (h, i и d), (h и i и e), (h и i и f), (h и i и g), (h и i и j), (h и i и a), (h и j и b), (h и j и с), (h и j и d), (h и j и e), (h и j и f), (h и j и g), (h и j и i), (h и j и a), (i и а и b), (i и а и с), (i и а и d), (i и а и e), (i и а и f), (i и а и g), (i и а и h), (i и а и j), (i и b и a), (i и b и с), (i и b и d), (i и b и e), (i и b и f), (i и b и g), (i и b и h), (i и b и j), (i и с и a), (i и с и b), (i и с и d), (i и с и е), (i и с и f), (i и с и g), (i и с и h), (i и с и j), (i и d и a), (i и d и b), (i и d и с), (i и d и е), (i и d и f), (i и d и g), (i и d и h), (i и d и j), (i и е и a), (i и е и b), (i и е и с), (i и е и d), (i и е и f), (i и е и g), (i и е и h), (i и е и j), (i и f и a), (i и f и b), (i и f и с), (i и f и d), (i и f и е), (i и f и g), (i и f и h), (i и f и j), (i и g и a), (i и g и b), (i и g и с), (i и g и d), (i и g и e), (i и g и f), (i и g и h), (i и g и j), (i и h и a), (i и h и b), (i и h и с), (i и h и d), (i и h и e), (i и h и f), (i и h и g), (i и h и j), (i и j и a), (i и j и b), (i и j и с), (i и j и d), (i и j и e), (i и j и f), (i иj и g), (i и j и h), (j и а и i), (j, а и b), (j и а и с), (j и а и d), (j и а и e), (j и a и f), (j и а и g), (j и а и h), (j и b и i), (j и b и a), (j и b и с), (j и b и d), (j и b и e), (j и b и f), (j и b и g), (j и b и h), (j и с и i), (j и с и а), и (j и с и b), (j и с и d), (j и с и е), (j и с и f), (j и с и g), (j и с и h), (j и d и i), (j и d и a), (j и d и b), (j и d и с), (j и d и е), (j и d и f), (j и d и g), (j и d и h), (j и е и i), (j и е и a), (j и е и b), (j и е и с), (j и е и d), (j и е и f), (j и е и g), (j и е и h), (j и f и i), (j и f и a), (j и f и b), (j и f и с), (j и f и d), (j и f и е), (j и f и g), (j и f и h), (j и g и i), (j и g и а), (j и g и b), (j и g и с), (j и g и d), (j и g и е), (j и g и f), (j и g и h), (j и h и i), (j и h и a), (j и h и b), (j и h и с), (j и h и d), (j и h и е), (j и h и f), (j и h и g), (j и i и h), (j и i и a), (j и i и b), (j и i и с), (j и i и d), (j и i и е), (j и i и f) и (j и i и g).

2.3. Зародышевая линия

[0269] Предложенные в данном документе АВР могут содержать любые подходящие последовательности VH и VL зародышевой линии.

[0270] В некоторых вариантах осуществления, область VH АВР, предложенного в данном документе, представляет собой область из зародышевой линии VH4. В некоторых вариантах осуществления, область VH АВР, предложенного в данном документе, представляет собой область из зародышевой линии VH1.

[0271] В некоторых вариантах осуществления, область VH АВР, предложенного в данном документе, представляет собой область из зародышевой линии VH4-39. В некоторых вариантах осуществления, область VH АВР, предложенного в данном документе, представляет собой область из зародышевой линии VH4-31. В некоторых вариантах осуществления, область VH АВР, предложенного в данном документе, представляет собой область из зародышевой линии VH1-46.

[0272] В некоторых вариантах осуществления, область VL АВР, предложенного в данном документе, представляет собой область из зародышевой линии VK3.

[0273] В некоторых вариантах осуществления, область VL АВР, предложенного в данном документе, представляет собой область из зародышевой линии VK3-11. В некоторых вариантах осуществления, область VL АВР, предложенного в данном документе, представляет собой область из зародышевой линии VK3-20. В некоторых вариантах осуществления, область VL АВР, предложенного в данном документе, представляет собой область из зародышевой линии VK3-15.

2.4. Моноспецифические и мультиспецифические белки, связывающие антиген TIGIT

[0274] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, представляют собой моноспецифические АВР.

[0275] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, представляют собой мультиспецифические АВР.

[0276] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР, предложенный в данном документе, связывает больше одного антигена. В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифическое антитело связывает 2 антигена. В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифическое антитело связывает 3 антигена. В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифическое антитело связывает 4 антигена. В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифическое антитело связывает 5 антигенов.

[0277] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифическое антитело, предложенное в данном документе, связывает больше одного эпитопа на антигене TIGIT. В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифическое антитело связывает 2 эпитопа на антигене TIGIT. В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифическое антитело связывает 3 эпитопа на антигене TIGIT.

[0278] Многие мультиспецифические конструкции АВР являются известными в данной области техники, и АВР, предложенные в данном документе, могут быть предоставлены в виде любой подходящей мультиспецифической конструкции.

[0279] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит иммуноглобулин, содержащий по меньшей мере две различные вариабельные области тяжелой цепи, каждая в паре с общей вариабельной областью легкой цепи (то есть «общим антителом легкой цепи»). Общая вариабельная область легкой цепи формирует отдельный антиген-связывающий домен с каждой из двух различных вариабельных областей тяжелой цепи. См. Merchant et al., Nature Biotechnol., 1998, 16:677-681, включен посредством ссылки в полном объеме.

[0280] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит иммуноглобулин, содержащий антитело или его фрагмент, присоединенный к одному или большему количеству N- или С-концов тяжелых или легких цепей такого иммуноглобулина. См. Coloma и Morrison, Nature Biotechnol., 1997, 15:159-163, включен посредством ссылки в полном объеме. В некоторых аспектах, такой АВР содержит четырехвалентное биспецифическое антитело.

[0281] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит гибридный иммуноглобулин, содержащий по меньшей мере две различные вариабельные области тяжелой цепи, и по меньшей мере две различные вариабельные области легкой цепи. См. Milstein and Cuello, Nature, 1983, 305:537-540; и Staerz and Bevan, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1986, 83:1453-1457; каждый из которых включен посредством ссылки в полном объеме.

[0282] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит иммуноглобулиновые цепи с изменениями для уменьшения формирования побочных продуктов, которые не обладают мультиспецифичностью. В некоторых аспектах, АВР содержат одну или больше модификаций «выступы-во-впадину», как описано в патенте США №5731168, включен посредством ссылки в полном объеме.

[0283] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит иммуноглобулиновые цепи с одной или больше электростатическими модификациями для содействия сборке гетеро-мультимеров Fc. См. WO 2009/089004, включен посредством ссылки в полном объеме.

[0284] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит биспецифическую одноцепочечную молекулу. См. Traunecker et al., EMBOJ., 1991, 10:3655-3659; и Gruber et al., J. Immunol., 1994, 152:5368-5374; каждый из которых включен посредством ссылки в полном объеме.

[0285] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, соединенные полипептидным линкером, где длина линкера выбрана так, что способствует сборке мультиспецифических АВР с желаемой мультиспецифичностью. Например, моноспецифические scFvs в целом, как правило, формируются, когда вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи соединяют полипептидным линкером из более чем 12 аминокислотных остатков. См. патент США №4946778 и 5132405, каждый из которых включен посредством ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах осуществления, уменьшение длины полипептидного линкера до менее чем 12 аминокислотных остатков предотвращает формирование пар вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей на одной и той же полипептидной цепи, тем самым делая возможным формирование пар вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей из одной цепи с комплементарными доменами на другой цепи. Таким образом, полученные АВР имеют мультиспецифичность, причем специфичность каждого сайта связывания создается более чем одной полипептидной цепью. Полипептидные цепи, содержащие вариабельные домены тяжелой и легкой цепей, которые соединены линкерами с длинной между 3 и 12 аминокислотными остатками, формируют преимущественно димеры (называемые диателами). В случае линкеров с длинной между 0 и 2 аминокислотными остатками, преимущественно будут тримеры (называемые триателами) и тетрамеры (называемые тетрателами). Однако точный тип олигомеризации, по-видимому, зависит от аминокислотного состава и порядка вариабельного домена в каждой полипептидной цепи (например, VH-линкер-VL против VL-линкер-VH), в дополнение к длине линкера. Специалист в данной области техники может выбрать подходящую длину линкера исходя из желаемой мультиспецифичности.

[0286] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит диатело. См. Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90:6444-6448, включен посредством ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит триатело. См. Todorovska et al., J. Immunol. Methods, 2001, 248:47-66, включен посредством ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит тетратело. См. id., включен посредством ссылки в полном объеме.

[0287] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит триспецифическое производное F(ab')3. См. Tutt et al. J. Immunol., 1991, 147:60-69, включен посредством ссылки в полном объеме.

[0288] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит перекрестно-сшитое антитело. См. патент США №4676980; Brennan et al., Science, 1985, 229:81-83; Staerz, et al. Nature, 1985, 314:628-631; и ЕР 0453082; каждый из которых включен посредством ссылки в полном объеме.

[0289] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит антиген-связывающие домены, собранные лейциновыми зиперами. См. Kostelny et al., J. Immunol, 1992, 148:1547-1553, включен посредством ссылки в полном объеме.

[0290] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит комплементарные белковые домены. В некоторых аспектах, комплементарные белковые домены содержат якорный домен (AD), и домен димеризации и докинга (DDD). В некоторых вариантах осуществления, AD и DDD связываются друг с другом и тем самым обеспечивают сборку мультиспецифических структур АВР посредством подхода «докинг и захват» (DNL). Могут быть собраны АВР с многими специфичностями, включая биспецифические АВР, триспецифические АВР, тетраспецифические АВР, квинтспецифические АВР и гексаспецифические АВР. Мультиспецифические АВР, содержащие комплементарные белковые домены, описаны, например, в патентах США №7521056; 7550143; 7534866; и 7527787; каждый из которых включен посредством ссылки в полном объеме.

[0291] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит антитело Fab двойного действия (DAF), как описано в публикации патентна США №2008/0069820, включенной посредством ссылки в полном объеме.

[0292] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит антитело, сформированное путем восстановления двух родительских молекул с последующим смешиванием двух родительских молекул и повторным окислением с целью сборки гибридной структуры. См. Carlring et al., PLoS One, 2011, 6:e22533, включен посредством ссылки в полном объеме.

[0293] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит DVD-Ig™. DVD-Ig™ представляет собой иммуноглобулин с двойным вариабельным доменом, который может связываться с двумя или больше антигенами. DVD-Igs™ описаны в патенте США №7612181, который включен посредством ссылки в полном объеме.

[0294] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит DART™. DART™ описаны в Moore et al., Blood, 2011, 117:454-451, включен посредством ссылки в полном объеме.

[0295] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит DuoBody®. DuoBodies® описаны в Labrijn et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2013, 110:5145-5150; Gramer et al., mAbs, 2013, 5:962-972; и Labrijn et al., Nature Protocols, 2014, 9:2450-2463; каждый из которых включен посредством ссылки в полном объеме.

[0296] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит фрагмент антитела, присоединенный к другому антителу или фрагменту. Присоединение может быть ковалентным или нековалентным. Когда присоединение является ковалентным, оно может быть в форме гибридного белка или через химический линкер. Иллюстративные примеры мультиспецифических АВР, содержащих фрагменты антител, присоединенные к другим антителам, включают четырехвалентные биспецифические антитела, где scFv слит с С-концом СH3 из IgG. См. Coloma and Morrison, Nature Biotechnol., 1997, 15:159-163. Другие примеры включают антитела, в которых молекула Fab присоединена к константной области иммуноглобулина. См. Miler et al., J. Immunol., 2003, 170:4854-4861, включен посредством ссылки в полном объеме. Можно использовать любой подходящий фрагмент, включая любой из фрагментов, описанных в данном документе или известных в данной области техники.

[0297] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит CovX-Body. CovX-Bodies описаны, например, в Doppalapudi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2010, 107:22611-22616, включен посредством ссылки в полном объеме.

[0298] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит антитело Fcab, где один или больше антиген-связывающих доменов вносят в область Fc. Антитела Fcab описаны в Wozniak-Knopp et al., Protein Eng. Des. Sel., 2010, 23:289-297, включен посредством ссылки в полном объеме.

[0299] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит антитело TandAb®. Антитела TandAb® описаны в Kipriyanov et al., J. Mol. Biol., 1999, 293:41-56 и Zhukovsky et al., Blood, 2013, 122:5116, каждый из которых включен посредством ссылки в полном объеме.

[0300] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит тандем Fab. Тандемные Fab описаны в WO 2015/103072, включен посредством ссылки в полном объеме.

[0301] В некоторых вариантах осуществления, мультиспецифичный АВР содержит Zybody™. Zybodies™ описаны в LaFleur et al., mAbs, 2013, 5:208-218, включен посредством ссылки в полном объеме.

2.5. Антагонизм TIGIT

[0302] В некоторых вариантах осуществления, АВР, предложенные в данном документе, антагонизируют TIGIT при связывании.

[0303] В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к димеризации и/или активации CD226 (также известного как DNAM-1), ко-стимулирующего рецептора, димеризация и функционирование которого нарушается путем прямого взаимодействия с TIGIT. См. Grogan et al., J. Immunol., 2014, 192 (1 приложение) 2013.15., включен в данный документ посредством ссылки в полном объеме. На Фиг. 2 показана иллюстрация пути CD226-TIGIT по сравнению с путем CD28/CTLA4, который имеет аналогичную биохимию костимуляции/коингибирования.

[0304] В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, увеличивает количество CD226 и CD155, которое взаимодействует, по сравнению с количеством, которое взаимодействует в отсутствие АВР.

[0305] В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к активации эффекторного Т-лимфоцита. В некоторых аспектах, эффекторный Т-лимфоцит представляет собой CD8+Т-лимфоцит. В некоторых аспектах, эффекторный Т-лимфоцит представляет собой CD4+Т-лимфоцит.

[0306] В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к активации клетки NK. В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к активации клетки NKT.

[0307] В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к уменьшению ингибирующей активности регуляторного Т-лимфоцита в отношении эффекторного Т-лимфоцита.

[0308] В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к усиленной секреции ИЛ-2, ИЛ-6, GM-CSF, ФНО, LT-α и/или ИНФ-γ клеткой-мишенью.

[0309] В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, увеличивает пролиферацию, выживание и/или функцию эффекторного Т-лимфоцита. В некоторых аспектах, эффекторный Т-лимфоцит представляет собой эффекторный CD4+Т-лимфоцит.В некоторых аспектах, эффекторный Т-лимфоцит представляет собой эффекторный CD8+Т-лимфоцит.

[0310] В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, отменяет подавление эффекторного Т-лимфоцита регуляторным Т-лимфоцитом. В некоторых аспектах, регуляторный Т-лимфоцит представляет собой CD4+CD25+Foxp3+регуляторный Т-лимфоцит. В некоторых аспектах, регуляторный Т-лимфоцит представляет собой CD8+CD25+регуляторный Т-лимфоцит.

[0311] В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к усилению иммунного ответа.

[0312] В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к предотвращению образования опухоли. В некоторых вариантах осуществления, антагонизм TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к задержке начала образования опухоли. В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к уменьшению размера опухоли. В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к устранению опухоли. В некоторых вариантах осуществления, антагонизивание TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к уменьшению количества метастаз.

[0313] В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к предотвращению вирусной болезни. В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к задержке начала вирусного заболевания. В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к уменьшению вирусной нагрузки у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, антагонизирование TIGIT с помощью АВР, предложенного в данном документе, приводит к устранению вирусной инфекции.

2.6. Аффинность и кинетика антиген-связывающих белков к TIGIT;

Эффективность

[0314] В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР, предложенного в данном документе, к TIGIT, как определенно по KD, составляет меньше чем около 10-5 М, меньше чем около 10-6 М, меньше чем около 10-7 М, меньше чем около 10-8 М, меньше чем около 10-9 М, меньше чем около 10-10 М, меньше чем около 10-11 М или меньше чем около 10-12 М. В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР находится в интервале между около 10-7М и 10-12 М. В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР находится в интервале между около 10-7 М и 10-11 М. В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР находится в интервале между около 10-7 М и 10-10 М. В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР находится в интервале между около 10-7 М и 10-9 М. В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР находится в интервале между около 10-7 М и 10-8 М. В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР находится в интервале между около 10-8 М и 10-12 М. В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР находится в интервале между около 10-8 М и 10-11 М. В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР находится в интервале между около 10-9 М и 10-11 М. В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР находится в интервале между около 10-10 М и 10-11 М.

[0315] В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР, предложенного в данном документе, к hTIGIT, как определенно по KD, измеренной с помощью ForteBio, как указано в Примере 4, выбирают из около 5,24×10-10 М, около 4,57×10-10 М, около 3,32×10-10 М, около 2,46×10-10 М, около 1,96×10-10 М, около 3,11×10-9 М, около 2,54×10-9 М, около 3,13×10-9 М, около 2,83×10-9 М, около 1,71×10-9 М, около 2,47×10-9 М, около 2,35×10-9 М, около 1,44×10-9 М, около 1,23×10-9 М, около 5,26×10-10 М, около 3,78×10-10 М, около 4,29×10-10 М, или около 4,48×10-10 М. В некоторых вариантах осуществления, такая аффинность составляет от около 3,13×10-9 М до около 1,96×10-10 М. В некоторых вариантах осуществления, такая КD составляет около 3,13×10-9 М или меньше.

[0316] В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР, предложенного в данном документе, к cTIGIT, как определенно по KD, измеренной с помощью ForteBio, как указано в Примере 4, выбирают из около 2,64×10-9 М, около 6,55×10-9 М, около 8,14×10-9 М, около 6,57×10-9 М, около 7,94×10-8 М, около 7,04×10-8 М, около 1,10×10-7 М, около 7,20×10-8 М, около 1,57×10-9 М, около 8,02×10-10 М, около 3,67×10-10 М, около 8,98×10-10 М, около 1,75×10-8 М, около 2,58×10-8 М, около 9,35×10-9 М. В некоторых вариантах осуществления, такая аффинность составляет от около 1,10×10-7 М до около 3,69×10-10 М. В некоторых вариантах осуществления, такая КD составляет около 1,10×10-7 М или меньше.

[0317] В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР, предложенного в данном документе, к hTIGIT, как определенно по KD, измеренной с помощью способов произведения растворимости (MSD-SET), как указано в Примере 4, выбирают из около 5,40×10-11 М, около 1,10×10-10 М, около 1,50×10-10 М, около 5,60×10-11 М, около 4,00×10-10 М, около 3,80×10-10 М, около 2,10×10-10 М, около 7,00×10-11 М, около 4,10×10-11 М, около 2,50×10-11 М, около 3,00×10-11 М, около 8,00×10-11 М, около 8,10×10-12 М, около 5,00×10-12 М, или около 4,90×10-12 М. В некоторых вариантах осуществления, такая аффинность составляет от около 4,00×10-10 М до около 4,90×10-12 М. В некоторых вариантах осуществления, такая КD составляет около 4,00×10-10 М или меньше.

[0318] В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР, предложенного в данном документе, к cTIGIT, как определенно по KD, измеренной с помощью MSD-SET, как указано в Примере 4, выбирают из около 3,20×10-10 М, около 2,30×10-10 М, около 3,50×10-11 М, около 1,50×10-11 М, или около 4,60×10-11 М. В некоторых вариантах осуществления, такая аффинность составляет от около 3,20×10-10 М до около 1,50×10-11 М. В некоторых вариантах осуществления, такая КD составляет около 3,20×10-10 М или меньше.

[0319] В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР, предложенного в данном документе, к hTIGIT, как определенно по KD, измеренной с помощью ForteBio, как указано в Примере 6, выбирают из около 7,1×10-10 М, около 8,1×10-11 М, около 1,9×10-10 М, около 5,6×10-10 М, около 2,4×10-10 М, около 2,8×10-10 М, около 1,6×10-10 М, около 5,8×10-10 М, около 1,1×10-9 М, около 8,1×10-10 М, около 4,6×10-10 М, около 3,6×10-10 М. В некоторых вариантах осуществления, такая аффинность составляет от около 1,1×10-9 М до около 8,1×10-11 М. В некоторых вариантах осуществления, такая КD составляет около 1,1×10-9 М или меньше.

[0320] В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР, предложенного в данном документе, к hTIGIT, как определенно по KD, измеренной с помощью ForteBio, как указано в Примере 6, составляет около 2,4×10-10 М. В некоторых вариантах осуществления, аффинность АВР, предложенного в данном документе, к cTIGIT, как определенно по KD, измеренной с помощью ForteBio, как у