ПРОИЗВОДНЫЕ ХИНОЛИНА ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ЛЕЧЕНИИ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКЕ ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение имеет целью снизить вирусную нагрузку у пациента, инфицированного вирусом, в частности ВИЧ, или пациента со связанным с вирусом состоянием с продолжительным эффектом и отсутствием резистентности.

Изобретение также относится к новым дозам и схемам приема указанных производных хинолина и их применению в лечении или профилактике вирусной инфекции, и в частности ВИЧ, или состояния, связанного с вирусом, более конкретно, когда его применение поддерживает низкую вирусную нагрузку после прекращения лечения.

Изобретение также относится к идентификации производных хинолина, которые эффективны при лечении или профилактике у инфицированных вирусом, в частности вирусом ВИЧ, пациентов или пациентов со связанными с вирусом состояниями, для которых показаны неэффективность или снижение эффективности предшествующего лечения против ВИЧ.

Изобретение также относится к идентификации производных хинолина, которые эффективны при лечении или профилактике у инфицированных вирусами, в частности вирусом ВИЧ, пациентов, которые имеют устойчивость к классическим противовирусным препаратам.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Репликация вируса связана с образованием вирусов в процессе заражения в клетках-хозяевах-мишенях, включая трансляцию вирусной РНК посредством эндогенного механизма.

Идентификация соединений для лечения или профилактики вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния у пациента, привела к разработке новых методов лечения.

Одним из недостатков современных методов лечения вирусных инфекций и, в частности, ВИЧ-инфекции является то, что вирусы начинают размножаться снова, как только прием лекарств прекращается, что обычно означает необходимость ежедневного, пожизненного лечения пациентов.

Среди связанных с вирусом состояний СПИД превратился во всемирную пандемию. Более 30 миллионов человек инфицированы вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Современная терапия успешно справилась с этим заболеванием, но длительное применение антиретровирусной терапии (APT) ограничено из-за характера цикла вирусной репликации этих вирусов, а также проблем побочных эффектов.

Более того, эти соединения не обязательно ингибируют репликацию вирусных штаммов, несущих мутации, в долгосрочной перспективе, причем вероятны сообщения о развитии устойчивых к лекарственным средствам штаммов и их участии в восстановлении вирусной инфекции у пациентов, прошедших лечение.

В частности, в случае ВИЧ-инфекций существующие в настоящее время APT лекарства нужно принимать пожизненно и они способны только ослаблять болезнь, не вылечивая ее. Одна из причин заключается в том, что нынешние терапии вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) снижают вирусную нагрузку во время лечения, но титры восстанавливаются после прекращения лечения, что является одним из последствий латентного сохранения вируса.

Таким образом, были предложены альтернативы APT, включая комбинацию 3ТС-Тенофовир-Ралтегравир и азидотимидина (AZT) (ВААРТ).

Доступ к высокоактивной антиретровирусной терапии (ВААРТ), основанной на комбинации ВИЧ-протеазы и ингибиторов обратной транскриптазы, резко изменил прогноз ВИЧ-инфекции. В результате ВИЧ рассматривается как хроническое заболевание в развитых странах. Однако долгосрочное применение ВААРТ ограничено проблемами лекарственной устойчивости и побочных эффектов.

Например, устойчивость к новым классам препаратов против ВИЧ/СПИДа, таких как Raltegravir® (ингибитор интегразы) и Enfuvirtide® (ингибитор поступления), уже наблюдается.

Причины, объясняющие повторное усиление вирусных инфекций у ранее пролеченных пациентов, включают:

(I) тот факт, что многие вирусы, включая ретровирусы, такие как ВИЧ или ДНК-содержащие вирусы семейства Herpesviridae, характеризуются вирусной латентностью, которая является способностью вируса находиться бездействующим в клетке, таким образом определяя лизогенную часть жизненного цикла вируса. Латентность представляет собой фазу цикла репликации вируса, при котором после первичной инфекции пролиферация вирусных частиц прекращается без полной ликвидации вируса. Явление вирусной латентности связано с появлением так называемых «резервуаров» внутри хозяина, которые, как правило, труднодоступны, и которые также являются одной из основных причин трудности лечения ВИЧ;

(II) появление устойчивых к лекарственным средствам штаммов, особенно для вирусных инфекций, требующих длительного лечения. Вероятность появления мутантных штаммов особенно важна для ретровирусов, включая ВИЧ. Действительно, устойчивость к лекарствам против ВИЧ можно объяснить на биологическом уровне следующим образом. Как ретровирус ВИЧ использует фермент обратную транскриптазу для синтеза ДНК из его РНК генома и не имеет механизма для исправления ошибок, возникающих при воспроизведении его генома. В результате ВИЧ реплицирует свой геном с наивысшей скоростью мутаций, известной для любого живого организма. Это создает идеальную ситуацию для воздействия естественного отбора на популяцию ВИЧ, поскольку генетическая вариация является сырьем для естественного отбора.

Эти мутации накапливаются в течение поколений и в популяциях, что приводит к большой генетической вариации среди популяций ВИЧ и увеличивает вероятность развития у вириона эволюционного избирательного преимущества перед другими вирионами. Естественный отбор затем действует на ВИЧ, выбирая вирионы с наиболее высокой приспособленностью, так как все остальные в конечном итоге уничтожаются при лечении лекарственными средствами. Вирионы, способные избежать вредного воздействия препарата, создают совершенно новую, устойчивую к лекарствам популяцию.

Следствием снижения эффективности предшествующего лечения является то, что вирионы воспроизводятся до тех пор, пока у пациента не будет увеличенной, обнаруживаемой вирусной нагрузки, столь же большой, как и до лечения. Это создает цикл, в котором пациенты, особенно ВИЧ-инфицированные, впервые испытывают успех в лечении, поскольку:

- их вирусная нагрузка находится под контролем или даже уменьшается;

- уровень количества CD4+ клеток поддерживается или даже восстанавливается; и/или

- клинические признаки, которые обычно связаны со связанным с вирусом состоянием, таким как СПИД, стабилизируются или даже исчезают. Клинические признаки СПИДа различаются в зависимости от стадии заражения.

Затем со временем у этих пациентов может наблюдаться снижение эффективности лечения, так как вирус развивает устойчивость и восстанавливает популяцию вирусных частиц.

В частности, это явление усиливается для терапией против ВИЧ, по меньшей мере по трем причинам, которые включают:

(I) тот факт, что ВИЧ является ретровирусом, и появление новых мутантных штаммов особенно важно для этого класса вирусов, как указано ранее;

(II) тот факт, что ВИЧ имеет способность переходить в латентную фазу и, таким образом, формировать «скрытые» резервуары, на которые доступные в настоящее время методы лечения не имеют эффективного специфического воздействия;

(III) тот факт, что имеющиеся в настоящее время методы лечения также склонны отбирать мутантные штаммы ВИЧ с течением времени, что в долгосрочной перспективе играет важную роль в возникновении устойчивости к лекарственным средствам.

Поэтому остается потребность в соединениях, которые обеспечивают длительное снижение вирусной нагрузки после прекращения лечения.

Также остается потребность в соединениях, которые оказывают длительное терапевтическое воздействие на вирусную нагрузку после прекращения лечения.

Все еще существует потребность в соединениях, которые могут вводиться в течение более короткого периода или с более длительными интервалами, чем стандартные методы лечения, что позволяет снизить затраты на здравоохранение и обеспечить более широкий доступ к лечению.

В частности, существует постоянная потребность в новых лекарствах, в частности тех, которые действуют посредством новых и еще не исследованных механизмов действия для достижения контроля над инфекцией или лечения у пациентов, для которых было отмечено снижение эффективности предшествующего лечения, а также из-аз образования мутантных штаммов, устойчивых к лечению.

Таким образом, также остается найти и оптимизировать терапевтические подходы к лечению или профилактике у инфицированных вирусами пациентов, в частности ВИЧ-положительных пациентов, демонстрирующих устойчивость к классическим методам лечения.

Недавно некоторые производные хинолина были описаны в следующих патентных заявках: WO 02010/143169, WO 2012080953, ЕР 14306164 и ЕР 14306166, полезных для лечения СПИДа или воспалительных заболеваний.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к производному хинолина формулы (I), как определено здесь далее, или любому из его фармацевтически приемлемых солей и метаболитов, пригодных для применения в лечении или профилактике вирусной инфекции, в частности ВИЧ-инфекции, или связанного с ВИЧ состояния у пациента; с последующим прекращением лечения, когда: вирусная нагрузка низкая или неопределяемая; и/или уровень количества клеток CD4+ сохраняется или восстанавливается.

Изобретение также относится к производному хинолина формулы (I), как определено здесь далее, или любой из его фармацевтически приемлемых солей и метаболитов для применения в лечении или профилактике вирусной инфекции, в частности ВИЧ-инфекции, или связанного с ВИЧ состояния у пациента, для которого была показана неэффективность предшествующего антиретровирусного лечения или снижение эффективности предшествующей антиретровирусной терапии.

Изобретение также относится к производному хинолина формулы (I), как определено здесь далее, или любой из его фармацевтически приемлемых солей и метаболитов, пригодных для применения в лечении или профилактике вирусной инфекции, в частности ВИЧ-инфекции, или связанного с ВИЧ состояния у пациента в случае, в котором пациент инфицирован устойчивым к лекарственным средствам вирусным штаммом и, в частности, устойчивым к лекарственным средствам штаммом ВИЧ.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1. Потенциал производных хинолина для ингибирования получения ВИЧ-1 в клетках, инфицированных РВМС- и макрофагами. А) штамм ВИЧ-1 Ada-MR5 применяли для инфицирования активированных мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) в трех повторах от разных доноров (стимулированных в течение двух дней с помощью РНА и IL2) в отсутствие или в присутствии возрастающих концентраций соединения 22, как определено ниже, а более конкретно в таблице А. Супернатант собирали через 6 дней после инфицирования (ПИ), а антиген вирусного капсидного белка р24 определяли количественно с использованием стандартного протокола иммуноферментного анализа (ИФА). Каждая точка представляет 6 доноров. Б) штамм ВИЧ-1 YU2 использовали для инфицирования в трех повторах макрофагов, полученных из моноцитов, от разных доноров в отсутствие или в присутствии возрастающих концентраций соединения 22. Супернатант собирали в течение 8 дней ПИ, а антиген вирусного капсидного белка р24 определяли количественно с использованием стандартного протокола ИФА. Каждая точка представляет 8 доноров.

Фиг. 2. Ингибирование соединения 22 ВИЧ р24 из разных штаммов ВИЧ-1. А) Различные штаммы ВИЧ-1 (клада В, клада С и рекомбинантные клады) использовали для инфицирования РВМС от трех разных доноров в отсутствие присутствия 5 мкМ соединения 22. Супернатант собирали через 6 дней ПИ и антиген вирусного капсидного белка р24 определяли количественно с использованием стандартного протокола ИФА. Б) активность обратной транскриптазы (RT) (cpm), измеренную в РВМС человека, инфицированных различными устойчивыми мутантными штаммами NL4.3 (K103N, K65R и M184V) и обработанных соединением 22 или 3ТС.

Фиг. 3. Эффективность соединения 22 в ингибировании репликации вируса у гуманизированных мышей. А) Воссозданные мыши SCID (с тяжелым сочетанным иммунодефицитом) были инфицированы штаммом JRCSF HIV-1 путем внутрибрюшинной инъекции. Контрольную группу получали при помощи желудочного зонда и 5% ДМСО (n=15) и обрабатывали дважды в день 20 мг/кг соединения 22 в лабрафиле и 5% ДМСО (n=14) в течение 15 дней. Два независимых эксперимента были проведены с 5 и 10 воссозданными мышами для каждой группы. Вирусную нагрузку оценивали путем измерения вирусной РНК с использованием Amplicor HIV-1 Monitor от Roche. Б) Анализ FACS проводили при перитонеальной промывке на 15-й день после обработки для оценки отношения CD8/CD4. В) Привитых гуманизированным мышам с NSG вводили через пероральный зонд соединение 22 в дозе 20 мг или 40 мг/кг один раз в день в течение 30 дней и измеряли популяции лимфоцитов (CD45+, CD4+ и CD8+) с помощью анализа FACS. Г) Гуманизированные мыши NSG были инфицированы вирусом YU2 HIV-1 и им вводили либо через пероральный зонд соединение 22 при 40 мг/кг один раз в день в течение 30 дней, либо ВААРТ (3ТС-тенофовир-ралтегравир и AZT). В случае ВААРТ пищевые гранулы изготавливали путем смешивания по 2,5 г 3ТС, TDF и AZT каждый и 5 г RTV с 5 кг обогащенной белками витаминизированной пищи (Nafag 3432, Provimi Kliba AG, Швейцария), из который впоследствии формировали пищевые гранулы и стерилизовали гамма-облучением в 25 кГр. Вирусную нагрузку оценивали путем измерения содержания вирусной РНК с использованием Amplicor HIV-1 Monitor от Roche.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение имеет целью удовлетворить вышеупомянутые потребности.

В приведенных здесь примерах показано, что производные хинолина согласно изобретению уменьшают репликацию ВИЧ у инфицированных ВИЧ млекопитающих.

Более конкретно, здесь показано, что такие производные хинолина (i) уменьшают вирусную нагрузку ВИЧ-1 у ВИЧ-инфицированных млекопитающих, (ii) поддерживают или восстанавливают высокий уровень количества клеток CD4+ у ВИЧ-инфицированных млекопитающих.

Изобретатели далее предоставляют доказательства того, что эти производные хинолина оказывают длительное лечебное действие у пациентов и пригодны для лечения или профилактики вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния.

Используемый здесь термин «пациент» может распространяться на людей или млекопитающих, таких как кошки или собаки. Используемый здесь термин «профилактика» также включает «уменьшение вероятности возникновения» или «снижение вероятности повторения».

Не желая связывать себя какой-либо конкретной теорией, изобретатели считают, что такие производные хинолина имеют неожиданные свойства при таргетировании на скрытые вирусные резервуары, в частности скрытые резервуары ВИЧ.

Кроме того, вышеупомянутые соединения обладают большим спектром действия, но не склонны увеличивать вероятность развития устойчивых штаммов и не приводят к неблагоприятным последствиям. Крайне важно, что не было или было отменено или отсрочено восстановление вирусной нагрузки в течение по меньшей мере двух месяцев после прекращения лечения, тогда как вирусная нагрузка резко увеличилась всего через одну неделю после прекращения лечения APT. В противном случае заявители подтверждают, что производные хинолина согласно изобретению при введении ВИЧ-инфицированному пациенту способны поддерживать низкую вирусную нагрузку даже после прекращения лечения. Таким образом, вышеупомянутые соединения также могут вводиться менее часто и/или в течение более короткого периода времени, чем стандартные схемы лечения.

Вышеупомянутые соединения особенно подходят для лечения или профилактики вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния у лиц, устойчивых к лечению, особенно индивидуумов, инфицированных устойчивым штаммом ВИЧ, включая индивидуумов с устойчивыми к ВААРТ и устойчивыми к APT штаммами.

В частности, вышеупомянутые способы особенно подходят для лечения или профилактики вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния, например, у пациентов с устойчивостью к ламивудину (3ТС), устойчивостью к тенофовиру, устойчивостью к ралтегравиру и устойчивостью к азидотимидину (AZT).

Используемый здесь термин «антиретровирусный агент» или «антиретровирусная терапия», или, более конкретно, «агент против ВИЧ» или «терапия против ВИЧ» означают классическое лекарственное средство или комбинацию лекарств, вводимых для борьбы с вирусной инфекцией, особенно ВИЧ-инфекцией. Это может быть, в частности, APT (антиретровирусная терапия) или ВААРТ (высокоактивная антиретровирусная терапия).

Термины APT и ВААРТ известны в данной области техники и обычно относятся к комбинациям из двух, трех или более антиретровирусных препаратов. Такие антиретровирусные препараты включают:

(I) ингибиторы обратной транскриптазы нуклеозидов/нуклеотидов, также называемые нуклеозидными аналогами, такими как абакавир, эмтрицитабин и тенофовир;

(II) ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (ННИОТ), такие как эфавиренц, этравирин и невирапин;

(III) ингибиторы протеазы (ИП), такие как атазанавир, дарунавир и ритонавир;

(IV) ингибиторы входа, такие как энфувиртид и маравирок;

(V) ингибиторы интегразы, такие как долутегравир и ралтегравир.

Другие примеры антиретровирусных агентов включают в себя, не ограничиваясь указанными: зидовудин, ламивудин, эмтрицитабин, диданозин, ставудин, абакавир, зальцитабин, тенофивир, рацивир, амдоксовир, априцитабин, эльвуцитабин, эфавиренц, невирапин, этравирин, делавирдин, рилпивирин, тенофовир, фосальвудин, ампренавир, типранавир, индинавир, саквинавир, фосампренавир, ритонавир, дарунавир, атазанавир, нельфинавир, лопинавир, ралтегравир, эльвитегравир, долутегравир, энфувиртид, маравирок, викривирок и их комбинации.

Используемый здесь термин «лечение против ВИЧ» или «антиретровирусное лечение» включает, в частности:

- действие агента против ВИЧ по снижению вирусной нагрузки в течение определенного периода времени, но не обязательно демонстрирующее продолжительное снижение указанной вирусной нагрузки после прекращения указанной терапии;

- действие агента против ВИЧ по увеличению уровня количества клеток CD4+ у ВИЧ-инфицированных пациентов, но не обязательно показывающее продолжительное увеличение или стабилизацию указанного количества клеток после прекращения указанного лечения.

Вышеупомянутые соединения особенно подходят для лечения или профилактики вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния, особенно ВИЧ-инфекции или состояния, связанного с ВИЧ.

Кроме того, вышеупомянутые соединения особенно подходят для лечения латентной вирусной инфекции, особенно ВИЧ-инфекции у пациента.

Кроме того, вышеупомянутые соединения особенно подходят для искоренения вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния у пациента, в частности ВИЧ-инфекции или состояния, связанного с ВИЧ, включая искоренение ВИЧ и/или для применения в качестве лекарственного средства для лечения ВИЧ и связанных с ВИЧ состояний.

Иначе говоря, эти результаты позволили изобретателям ориентироваться на новые категории вирусных инфекций и пациентов, включая ВИЧ-инфицированных пациентов, которые ранее плохо лечились с помощью доступных в настоящее время процедур, особенно пациентов, инфицированных устойчивыми к лекарственным средствам штаммами, и/или штаммами, которые потеряли чувствительность к таким методам лечения.

Производные хинолина согласно изобретению полезны для лечения или профилактики всех вирусов и связанных с вирусом состояний и, более конкретно, для лечения или профилактики ретровирусов, латентных вирусов и связанных с ними состояний.

В частности, было обнаружено, что in vivo одно из производных хинолина формулы (I), как определено ниже, способно значительно снизить вирусную нагрузку у ВИЧ-инфицированных мышей после ежедневного перорального введения через желудочный зонд, но, что более важно, указанное соединение было способно поддерживать сниженную вирусную нагрузку по сравнению с контрольными или получавшими ВААРТ мышами до 50 дней после окончания лечения (см. Фиг. 4).

Эти неожиданные результаты позволили изобретателям разработать дозы и схемы, подходящие для достижения такого продолжительного уменьшения вирусной нагрузки и применения в лечении инфицированных вирусом пациентов, в частности ВИЧ-инфицированных пациентов, в том числе пациентов, для которых показано снижение эффективности предшествующего антиретровирусного лечения и соответствующих терапевтических методов.

Согласно первому варианту осуществления изобретение относится к производному хинолина формулы (I), как определено здесь ниже, или любой из его фармацевтически приемлемых солей и метаболитов, пригодных для применения в лечении или профилактике вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния у пациента, в частности ВИЧ-инфекции или связанного с ВИЧ состояния, при котором сохраняется низкая или неопределяемая вирусная нагрузка; и/или количество клеток CD4+ стабильно или увеличивается; после прекращения лечения.

Согласно указанному первому варианту осуществления изобретение относится к производному хинолина формулы (I), как определено здесь ниже, или любой из его фармацевтически приемлемых солей и метаболитов для применения в лечении или профилактике вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния у пациента, в частности ВИЧ-инфекции или связанного с ВИЧ состояния, при котором сохраняется низкая или неопределяемая вирусная нагрузка; и/или количество клеток CD4+ стабильно или увеличивается; после прекращения лечения.

Согласно первому варианту осуществления изобретение относится к производному хинолина формулы (I), как определено здесь далее, или любой из его фармацевтически приемлемых солей и метаболитов для лечения или профилактики вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния у пациента, в частности, ВИЧ-инфекции или состояния, связанного с ВИЧ, а затем прекращения лечения, когда: вирусная нагрузка низкая или необнаруживаемая; и/или уровень количества клеток CD4+ сохраняется или восстанавливается.

Тем не менее согласно первому варианту осуществления изобретение относится к производному хинолина формулы (I), как определено здесь далее, или любой из его фармацевтически приемлемых солей и метаболитов для лечения или профилактики вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния у пациента, в частности ВИЧ-инфекции или состояния, связанного с ВИЧ, и затем прекращения указанного лечения, когда вирусная нагрузка не обнаруживается в плазме крови указанного пациента.

Согласно второму варианту осуществления изобретение относится к производному хинолина формулы (I), как определено здесь ниже, или любой из его фармацевтически приемлемых солей и метаболитов для применения в лечении или профилактике вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния у пациента, в частности с ВИЧ-инфекцией или состоянием, связанным с ВИЧ, для которого была показана неэффективность предшествующего антиретровирусного лечения или снижение эффективности предшествующего антивирусной или антиретровирусной лечения.

Согласно третьему варианту осуществления изобретение относится к производному хинолина формулы (I), как определено здесь ниже, или любой из его фармацевтически приемлемых солей и метаболитов для применения в лечении или профилактике вирусной инфекции или связанных с вирусом состояний у пациента, в частности ВИЧ-инфекции или связанного с ВИЧ состояния, в случае, если пациент заражен устойчивым к лекарственным средствам штаммом.

Вирусы

Примеры вирусов, которые рассматриваются в настоящем изобретении, включают в себя, но не ограничиваются указанными, вирусы с оболочкой и без оболочки, которые включают ДНК-содержащие вирусы, РНК-содержащие вирусы и ретровирусы, которые включают вирусы с двухцепочечной ДНК, вирусы с одноцепочечной ДНК, вирусы с двухцепочечной РНК, вирусы с одноцепочечной (+) РНК, вирусы с одноцепочечной (-) РНК, вирусы с одноцепочечной РНК-зависимой ДНК-полимеразой и вирусы с двуцепочечной ДНК-зависимой ДНК-полимеразой, которые включают онковирусы, лентивирусы и спумавирусы.

Таким образом, онковирусы называются так потому, что они могут быть связаны с раковыми заболеваниями и злокачественными инфекциями. Можно упомянуть, например, лейкемогенные вирусы (такие как вирус птичьего лейкоза (ALV), вирус мышиного лейкоза (MULV), также называемый вирусом Молони, вирус кошачьей лейкемии (FELV), вирусы лейкемии человека (HTLV), такие как HTLV1 и HTLV2, вирус обезьяньей лейкемии или STLV, вирус бычьей лейкемии или BLV, онковирусы приматов типа D, онковирусы типа В, которые являются индукторами опухолей молочной железы, или онковирусы, которые вызывают быстротекущий рак (например, вирус саркомы Рауса или RSV).

Спумавирусы проявляют достаточно низкую специфичность для данного типа клеток или данного вида, и они иногда связаны с явлением иммунодепрессии; как, например, в случае вируса пенистости обезьян (или SFV).

Таким образом, лентивирусы, такие как ВИЧ, названы так потому, что они отвечают за медленно прогрессирующие патологические состояния, которые очень часто включают явления иммунодепрессии, в том числе СПИД.

Известно, что вирусы и, в частности, ретровирусы, такие как ВИЧ, HTLV-I и HTLV-II, полагаются на регуляцию сплайсинга и сплайсинг РНК для распространения и расселения внутри клеток и тканей инфицированного человека. Другие вирусы, представляющие интерес, являются вирусами, патогенными для человека, включая, но не ограничиваясь указанными, вирусы семейства HSV (включая 1, 2, 6), CMV, VZV, HBV, HCV, вирус гепатита Е, вирусы папилломы, RSV, риновирусы, вирусы гриппа, аденовирусы, вирус герпеса человека 4-го типа, вирус Эболы, Нипах и другие арбовирусы, вирусы денге, чикунгунья, западного Нила, вирус долины Рифта, вирус японского энцефалита, другие коронавирусы SRAS, парвовирус, энтеровирусы.

Другие вирусы, представляющие интерес, являются вирусами, патогенными для животных, включая, но не ограничиваясь ими, грипп, FLV, пестивирус, хантавирус и лиссавирус.

В частности, вирусы и связанные с вирусом состояния, которые рассматриваются, включают вирусы, у которых репликация вируса требует сплайсинга РНК и/или экспорта вирусной РНК из ядра в цитоплазму.

Примеры вирусов включают латентные вирусы и/или ретровирусы и/или вирусы, которые связаны с хроническими вирусными инфекциями.

Вирусы, которые более конкретно рассматриваются, представляют собой РНК-содержащие вирусы и ретровирусы, включая лентивирусы и предпочтительно ВИЧ. Соответственно, связанные с вирусом состояния, которые более подробно рассматриваются, связаны с РНК-содержащим вирусом или ретровирусом, предпочтительно с ВИЧ.

ВИЧ может включать ВИЧ-1, ВИЧ-2 и все его подтипы, которые включают штаммы ВИЧ-I, относящиеся к подтипу ВИЧ-IВ, подтипу ВИЧ-IС и рекомбинантам ВИЧ-I. Примеры включают штаммы ВИЧ-I, выбранные из Ad8, AdaM, изолята В, изолята С, CRF01, CRF02 и CRF06.

Типичные устойчивые штаммы более подробно описаны у Pinar lyodogan et al., ("Current Perspectives on HIV-1 Antiretroviral Drug Resistance", Viruses 2014, 6, 4095-4139; doi 10.3390/4095).

Преимущественно вирусы могут включать штаммы ВИЧ, у которых развилась устойчивость к текущим методам лечения.

Согласно предпочтительному варианту осуществления, связанным с вирусом состоянием является СПИД.

Примеры вирусов, которые рассматриваются в настоящем изобретении, включают в себя без ограничений вирусы с оболочкой и без оболочки, которые включают ДНК-содержащие вирусы, РНК-содержащие вирусы и ретровирусы, которые включают вирусы с двухцепочечной ДНК, вирусы с одноцепочечной ДНК, вирусы с двухцепочечной РНК, вирусы с одноцепочечной (+) РНК, вирусы с одноцепочечной (-) РНК, вирусы с одноцепочечной РНК-зависимой ДНК-полимеразой и вирусы с двуцепочечной ДНК-зависимой ДНК-полимеразой.

Примеры вирусов включают в себя латентные вирусы и/или ретровирусы.

Согласно предпочтительным и иллюстративным вариантам осуществления вирус представляет собой ВИЧ, который включает ВИЧ-1 и ВИЧ-2, а связанное с вирусом состояние представляет собой СПИД.

Соединение формулы (I)

Производные хинолина предпочтительно выбирают из соединений, описанных в следующих патентных заявках: WO 2010/143169, WO 2012080953, ЕР 14306164 и ЕР 14306166.

Такие соединения могут быть получены в соответствии с синтетическими путями, описанными в указанных патентных заявках.

Производное хинолина формулы (I) в соответствии с настоящим изобретением представляет собой соединение формулы (I):

где:

Z представляет собой N или С,

обозначает ароматическое кольцо, где V представляет собой С или N, и когда V представляет собой N, V находится в орто-, мета- или пара-положении относительно z, то есть образует соответственно пиридазиновую, пиримидиновую или пиразиновую группу,

R независимо представляют собой атом водорода, атом галогена или группу, выбранную из группы, включающей -CN группу, гидроксильную группу, -СООR₁ группу, C₁-С₃ фторалкильную группу, С₁-С₃ фторалкоксигруппу, С₃-С₆ циклоалкильную группу, -NO₂ группу, -NR₁R₂ группу, С₁-С₄ алкоксигруппу, феноксигруппу, -NR₁-SO₂-NR₁R₂ группу, -NR₁-SO₂-R₁ группу, -NR₁-C(=O)-R₁, группу -NR₁C(=O)-NR₁R₂, - -SO₂-NR₁R₂ группу, -SO₃H группу, -O-SO₂-OR₃ группу, -O-P(=O)-(OR₃)(OR₄) группу, -O-CH₂-COOR₃ и С₁-С₃ алкильную группу, причем указанный алкил необязательно монозамещен гидроксильной группой,

Q представляет собой N или О, при условии, что R'' отсутствует, когда Q представляет собой О,

R₁ и R₂ независимо представляют собой атом водорода или C₁-C₃ алкильную группу,

R₃ и R₄ независимо представляют собой атом водорода, Li⁺, Na⁺, K⁺, N⁺(Ra)₄ или бензильную группу,

n равно 1, 2 или 3,

n' равно 1, 2 или 3,

R' независимо представляет собой атом водорода или группу, выбранную из С₁-С₃ алкильной группы, атома галогена, гидроксильной группы, -COOR₁ группы, -NO₂ группы, -NR₁R₂ группы, морфолинильной или морфолиновой группы, N-метилпиперазинильную группы, C₁-C₃ фторалкильной группы, С₁-С₄ алкоксигруппы и -CN группы, а также может быть группой, выбранной из:

А представляет собой ковалентную связь, атом кислорода или NH,

В представляет собой ковалентную связь или NH,

m равно 1, 2, 3, 4 или 5,

р равно 1, 2 или 3,

Ra и Rb независимо представляют собой атом водорода, С₁-С₅ алкильную группу или С₃-С₆ циклоалкильную группу,

Ra и Rb могут дополнительно образовывать вместе с атомом азота, к которому они присоединены, насыщенный 5- или 6-членный гетероцикл, необязательно содержащий дополнительный гетероатом, выбранный из N, О и S, причем указанный гетероцикл необязательно замещен одним или несколькими Ra, при условии, что когда R' представляет собой группу (IIа) или (IIIa), n' может быть 2 или 3, только если другие R' группы отличаются от указанной группы (IIа) или (IIIa),

R'' представляет собой атом водорода, С₁-С₄ алкильную группу или представляет собой группу (IIа), как определено выше,

или любая его фармацевтически приемлемую соль.

Настоящее изобретение также направлено на реализацию активных метаболитов указанных выше соединений формулы (I), в частности метаболитов человека, например, его N-глюкуронидных метаболитов. В частности, применение N-глюкуронида соединения 22 или одной из его фармацевтически приемлемых солей также включено в рамки заявленного объекта изобретения. Указанный метаболит N-глюкуронида имеет следующую формулу

Здесь показано, что эти метаболиты демонстрируют противовирусную активность и, более конкретно, активность против ВИЧ. Их можно вводить и давать в качестве действующих активных веществ. N-глюкуронид, как более конкретно описанный выше, может быть получен в соответствии с синтетическим путем, описанным в патентной заявке ЕР 15305274.

Согласно предпочтительному варианту осуществления Q представляет собой N.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления n равно 1 или 2.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления n' равно 1 или 2.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления R'' представляет собой атом водорода, С₁-С₄ алкильную группу или группу,

, где m равно 2 или 3, и представляет собой О, СН₂ или N-CH₃.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления R независимо представляет собой атом водорода, метильную группу, метоксигруппу, трифторметильную группу, атом галогена и более конкретно атом фтора или хлора, трифторметоксигруппу и аминогруппу.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления R' независимо представляет собой атом водорода, атом галогена и более конкретно атом фтора или хлора, аминогруппу, метильную группу или группу

,

где А представляет собой О или NH, m равно 2 или 3, и X₁ представляет собой О, СН₂ или N-CH₃, при условии, что, когда R' является такой группой, n' равно 1 или 2, а когда n' равно 2, группа R' отличается от указанной группы.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R', альтернативно, независимо представляют собой атом водорода, атом галогена и, более конкретно, атом фтора или хлора, метильную группу или группу,

, где А представляет собой О или NH, m равно 2 и X₁ представляет собой О, СН₂ или N-CH₃, при условии, что, когда R' представляет собой такую группу, n' равно 1 или 2 и когда n' равно 2, другая R' группа отличается от указанной группы.

Разумеется, все предшествующие и последующие конкретные варианты осуществления могут быть объединены вместе и образуют часть изобретения.

Соединения формулы (I) включают соединения формулы (Ia), (Ib), (Ic), (Id) и (Ie), как определено ниже.

В соответствии с конкретным вариантом осуществления производное хинолина формулы (I) может представлять собой соединение формулы (Ia)

где R, R', R'', n и n' являются такими, как определено выше.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления n равно 1 или 2.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления n' равно 1 или 2.

В соответствии с одним аспектом указанного предпочтительного варианта осуществления R независимо представляют собой атом водорода, атом галогена или группу, выбранную из гидроксильной группы, С₁-С₃ фторалкильной группы, С₁-С₃ фторалкоксигруппы, группы -NR₁R₂, С₁-С₄ алкоксигруппы и C₁-C₃ алкильной группы.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R' независимо представляет собой атом водорода, атом галогена или группу, выбранную из С₁-С₃ алкильной группы, гидроксигруппы, группы -NR₁R₂ или группы

,

где А представляет собой О или NH, m равно 2 или 3, и X₁ представляет собой О, СН₂ или N-СН₃, при условии, что когда R' является такой группой, n' равно 1 Или 2, а когда n' равно 2, другая группа R' отличается от указанной группы.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R'' представляет собой атом водорода, С₁-С₄ алкильную группу или группу , где m равно 2 или 3, и X₁ представляет собой О, СН₂ или N-СН₃ и предпочтительно R'' представляет собой атом водорода или метильную группу.

Согласно конкретному варианту осуществления производное хинолина формулы (I) может представлять собой соединение формулы (Ib)

где R, R', R'', n и n' являются такими, как определено выше.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления n равно 1 или 2.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления n' равно 1, 2 или 3.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R независимо представляют собой атом водорода, атом галогена или группу, выбранную из гидроксильной группы, С₁-С₃ фторалкильной группы, С₁-С₃ фторалкоксигруппы, группы -NR₁R₂, С₁-С₄ алкоксигруппы и С₁-С₃ алкильной группы.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R' независимо представляет собой атом водорода, атом галогена или группу, выбранную из С₁-С₃ алкильной группы, гидроксигруппы, группы -NR₁R₂ или группы , где А представляет собой О или NH, m равно 2 или 3, и Х₁ представляет собой О, СН₂ или N-СН₃, при условии, что когда R' является такой группой, n' равно 1 или 2, а когда n' равно 2, с остальными R' отличается от указанной группы.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R', альтернативно, независимо представляют собой атом водорода, атом галогена или группу, выбранную из С₁-С₃ алкильной группы, гидроксильной группы или - NR₁R₂ группы.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R'' представляет собой атом водорода, С₁-С₄ алкильную группу или группу , где m равно 2 или 3 и X₁ представляет собой О, СН₂ или N-СН₃ и предпочтительно R'' представляет собой атом водорода или метильную группу.

Согласно конкретному варианту осуществления производное хинолина формулы (I) может представлять собой соединение формулы (Ic)

где R, R', R'', n и n' являются такими, как определено выше.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления n равно 1.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления n' равно 1.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R независимо представляют собой атом водорода, атом галогена или группу, выбранную из гидроксильной группы, С₁-С₃ фторалкильной группы, С₁-С₃ фторалкоксигруппы, группы -NR₁R₂, С₁-С₄ алкоксигруппы и С₁-С₃ алкильной группы.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R, альтернативно, независимо представляют собой атом водорода или атом галогена.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R' независимо представляет собой атом водорода, атом галогена или группу, выбранную из С₁-С₃ алкильной группы, гидроксильной группы, группы -NR₁R₂ или группы

, где А представляет собой О или NH, m равно 2 или 3, и X₁ представляет собой О, СН₂ или N-СН₃, при условии, что, когда R' является такой группой, n' равно 1 или 2, а когда n' равно 2, другая группа R' отличается от указанной группы.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R', альтернативно, независимо представляют собой атом водорода или атом галогена.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R'' представляет собой атом водорода, С₁-С₄ алкильную группу или группу , где m равно 2 или 3 и X₁ представляет собой О, СН₂ или N-СН₃ и предпочтительно R'' представляет собой атом водорода или метильную группу.

Согласно конкретному варианту осуществления производное хинолина формулы (I) может представлять собой соединение формулы (Id)

где R, R', n и n' являются такими, как определено выше.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления n равно 1.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления n' равно 1.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R независимо представляют собой атом водорода, атом галогена или группу, выбранную из гидроксильной группы, С₁-С₃ фторалкильной группы, С₁-С₃ фторалкоксигруппы, группы -NR₁R₂, С₁-С₄ алкоксигруппы и C₁-C₃ алкильной группы.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R, альтернативно, независимо представляет собой атом водорода, C₁-С₃ фторалкильную группу, С₁-С₃ фторалкоксигруппу или атом галогена.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R' независимо представляет собой атом водорода, атом галогена или группу, выбранную из C₁-C₃ алкильной группы, гидроксигруппы, группы - NR₁R₂ или группы , где А представляет собой О или NH, m равно 2 или 3, и Х₁ представляет собой О, СН₂ или N-СН₃, при условии, что когда R' является такой группой, n' равно 1 или 2, а когда n' равно 2, другая группа R' отличается от указанной группы.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R', альтернативно, независимо представляет собой атом водорода или атом галогена.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R'' представляет собой атом водорода, С₁-С₄ алкильную группу или группу, , где m равно 2 или 3, и X₁ представляет собой О, СН₂ или N-СН₃ и предпочтительно R'' представляет собой атом водорода или метильную группу.

Согласно конкретному варианту осуществления производное хинолина формулы (I) может представлять собой соединение формулы (Ie)

где R, R', n и n' являются такими, как определено выше.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления n равно 1.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления n' равно 1.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R независимо представляют собой атом водорода, атом галогена или группу, выбранную из гидроксильной группы, С₁-С₃ фторалкильной группы, C₁-С₃ фторалкоксигруппы, группы -NR₁R₂, С₁-С₄ алкоксигруппы и С₁-С₃ алкильной группы.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R, альтернативно, независимо представляют собой атом водорода, С₁-С₃ фторалкильную группу, С₁-С₃ фторалкоксигруппу или атом галогена.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R' независимо представляет собой атом водорода, атом галогена или группу, выбранную из С₁-С₃ алкильной группы, гидроксигруппы, группы -NR₁R₂ или группы , где А представляет собой О или NH, m равно 2 или 3, и X₁ представляет собой О, СН₂ или N-CH₃, при условии, что когда R' является такой группой, n' равно 1 или 2, а когда n' равно 2, другая группа R' отличается от указанной группы.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R', альтернативно, независимо представляют собой атом водорода или атом галогена.

Согласно одному аспекту указанного предпочтительного варианта осуществления R'' представляет собой атом водорода, С₁-С₄ алкильную группу или группу , где m равно 2 или 3, и X₁ представляет собой О, СН₂ или N-СН₃ и предпочтительно R'' представляет собой атом водорода или метильную группу.

Согласно одному иллюстративному варианту осуществления производное хинолина может быть выбрано из (с числом, которое можно найти в таблице А ниже):

- (1) 8-хлор-3-метил-N-2-(4-(трифторметил)пиридин-2-ил)хинолин-2,5-диамин

- (2) 8-хлор-N-2-(4-(трифторметил)пиридин-2-ил)хинолин-2,5-диамин

- (3) 8-хлор-5-(2-морфолиноэтокси)-N-(4-(трифторметил)пиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (4) 8-хлор-N4-(3-(пиперидин-1-ил)пропил)-N-2-(4-(трифторметил)пиридин-2-ил)хинолин-2,4-диамин

- (5) 8-хлор-6-(2-морфолиноэтокси)-N-(4-(трифторметил)пиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (6) 8-хлор-N-метил-N-(4-(трифторметил)пиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (7) 8-хлор-N-(4-(трифторметил)пиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (8) 4,8-дихлор-N-(4-(трифторметил)пиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (9) 8-хлор-N-(3-морфолинопропил)-N-(4-(трифторметил)пиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (10) 8-хлор-5-(2-(пиперидин-1-ил)этокси)-N-(4-(трифторметил)пиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (11) (8-хлорхинолин-2-ил)-(4-метил)пиридин-2-ил)-амин

- (12) 8-хлор-N-(5-фторпиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (13) N-(3-метоксипиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (14) N-(6-(трифторметил)пиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (15) 6-хлор-N-(5-фторпиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (16) N-(3-фторпиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (17) 8-хлор-N-(6-(трифторметил)пиридин-2-ил)хинолин-2-амин

- (18) 8-хлор-N-(3-хлор-4-метоксифенил)хинолин-2-амин

- (19) 8-хлор-N-(4-(метокси)фенил)хинолин-2-амин

- (20) 3-Метил-N-(4-(трифторметокси)фенил)хинолин-2-амин

- (21) 8-хлор-N-(3-(пиперидин-1-ил)пропил)-N-(4-(трифторметокси)фенил)хинолин-2-амин

- (22) 8-хлор-N-(4-(трифторметокси)фенил)хинолин-2-амин

- (23) 4,8-дихлор-N-(4-(трифторметокси)фенил)хинолин-2-амин

- (24) 8-хлор-N-метил-N-(4-(трифторметокси)фенил)хинолин-2-амин

- (25) 8-хлор-N-(2-морфолиноэтил)-N-(4-(трифторметокси)фенил)хинолин-2-амин

- (26) 8-хлор-N-(пиразин-2-ил)хинолин-2-амин

- (27) 8-хлор-2-((4-(трифторметил)пиридин-2-ил)окси)хинолин

- (28) 4-(2-((8-Хлор-2-((4-(трифторметил)пиридин-2-ил)окси)хинолин-6-ил)окси)этил)морфолин

- (29) 8-хлор-2-(4-(трифторметокси)фенокси)хинолин

- (30) 4-(2-((8-хлор-2-(4-(трифторметокси)фенокси)хинолин-5-ил)окси)этил)морфолин

Для целей настоящего изобретения производное хинолина формулы (I) включает любое из соединений формул (Ia), (Ib), (Ic), (Id) и (Ie), а также их комбинации. Соединения формулы (I) включают соединения (1)-(30), как определено в таблице А, и их комбинации.

Соединения согласно изобретению могут существовать в форме свободных оснований или солей аддукта с фармацевтически приемлемыми кислотами.

Подходящие физиологически приемлемые кислые соли аддуктов соединений формулы (I) включают гидробромид, тартрат, цитрат, трифторацетат, аскорбат, гидрохлорид, тартрат, трифлат, малеат, мезилат, формиат, ацетат и фумарат.

Соединения формулы (I) и их соли могут образовывать сольваты или гидраты, и изобретение включает все такие сольваты и гидраты.

Термины «гидраты» и «сольваты» просто означают, что соединения (I) в соответствии с изобретением могут быть в форме гидрата или сольвата, то есть объединены или связаны с одной или более молекулами воды или растворителя. Это только химическая характеристика таких соединений, которые могут применяться для всех органических соединений этого типа.

Соединения формулы (I) могут содержать один или несколько асимметричных атомов углерода. Таким образом, они могут существовать в форме энантиомеров или диастереоизомеров. Эти энантиомеры, диастереоизомеры и их смеси, включая рацемические смеси, включены в объем настоящего изобретения.

В контексте настоящего изобретения термины:

- «галоген» означает хлор, фтор, бром или йод и, в частности, обоз означает начают хлор, фтор или бром,

- «С₁-С₅ алкил» используемый здесь, соответственно относится к С₁-С₅ нормальному, вторичному или третичному насыщенному углеводороду. Примерами являются, но не ограничиваются указанными, метил, этил, 1-пропил, 2-пропил, бутил, пентил,

- «С₃-С₆ циклоалкил» используемый здесь, соответственно относится к циклическому насыщенному углеводороду. Примерами являются, но не ограничиваются указанными, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил,

- «С₁-С₄ алкокси» используемый здесь, соответственно относится к O-С₁-С₄ алкильному фрагменту, где алкил имеет значения, указанные выше. Примерами являются, но не ограничиваются указанными, метокси, этокси, 1-пропокси, 2-пропокси, бутокси,

- «фторалкильная группа» и «фторалкоксигруппа» относится, соответственно, к алкильной группе и алкоксигруппе, как указано выше, причем указанные группы замещены по меньшей мере одним атомом фтора. Примерами являются перфторалкильные группы, такие как трифторметил или перфторпропил,

- «насыщенный 5- или 6-членный гетероцикл», используемый здесь, соответственно относится к насыщенному циклу, содержащему по меньшей мере один гетероатом. Примерами являются, но не ограничиваются указанными, морфолин, пиперазин, тиоморфолин, пиперидин и пирролидин.

Химические структуры некоторых соединений формулы (I) согласно изобретению проиллюстрированы в таблице А

Лечение устойчивых к лекарственным средствам пациентов и/или пациентов, инфицированных устойчивыми штаммами

Согласно одному аспекту изобретения настоящее изобретение относится к производному хинолина формулы (I), как описано выше, для применения в лечении или профилактике вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния у пациентов, в частности инфицированных ВИЧ, для которых было показано снижение эффективности предшествующего лечения.

Используемый здесь термин «предшествующее или предшествующее лечение» означает лечение против ВИЧ, которому пациент следовал в течение любого времени.

Последствия неэффективности или снижения эффективности лечения ВИЧ-инфекции или связанного с ВИЧ состояния у пациента в целом обычно состоят из:

- увеличения вирусной нагрузки ВИЧ; и/или

- снижения уровня количества клеток CD4+;

- усиления или появление клинических признаков, которые обычно связаны со СПИДом.

Используемый здесь термин «снижение предшествующей эффективности лечения было показано» может указывать на то, что устойчивые штаммы вируса появляются во время указанного предшествующего лечения, причем с такими штаммами не борется агент против ВИЧ.

Эффективность предшествующего лечения у пациента снижается, не ограничиваясь указанным, например, потому что:

- пациент инфицирован штаммом вируса, в частности штаммом ВИЧ, в отношении которого считается, что репликация и/или инфекционность были стабилизированы или даже уменьшены, но он больше не реагирует на лечение, которое включает лечение APT и ВААРТ; и/или

- пациент инфицирован устойчивым к лекарствам штаммом.

В частности, определение включает в себя ранее пролеченных пациентов, у которых вирусная нагрузка ВИЧ и/или уровень количества клеток CD4+ оставались стабильными и/или низкими, устанавливая тем самым контрольное значение, и которые после лечения или в настоящее время испытали по меньшей мере одно из следующих явлений:

- увеличение вирусной нагрузки ВИЧ; и/или

- снижение уровня количества лимфоцитов CD4+;

где вирусная нагрузка ВИЧ и/или уровень количества клеток CD4+ установлены предпочтительно в образце плазмы.

В таких случаях утверждение о неэффективности или снижении эффективности упомянутого предшествующего лечения может быть оценено путем измерения вирусной нагрузки, которая увеличилась выше обнаруживаемого уровня, в частности в течение нескольких последовательных недель, например, в течение по меньшей мере одной или двух недель, в частности, по меньшей мере, 3 недели или 4 недели лечения агентом против ВИЧ, причем вирусная нагрузка является такой, как определено здесь далее.

Альтернативно, заявление о неэффективности или снижении эффективности вышеуказанного лечения может быть оценено путем измерения количества клеток CD4+ в плазме крови, которое снова уменьшилось ниже 500/мм³, в частности в течение нескольких последовательных недель, например, по меньшей мере, одной или двух недель, в частности, по меньшей мере, 3 недель или 4 недель лечения агентом против ВИЧ, количество лимфоцитов CD4+ клеток определено более подробно здесь.

Соответственно, утверждение о неэффективности или снижении эффективности указанного предшествующего лечения может быть оценено путем определения уменьшения количества клеток CD4+ ниже физиологического количества CD4+ клеток.

Для сравнения, восстановленное количество клеток CD4+ может соответствовать физиологическому (или «нормальному») количеству CD4+ клеток, которое обычно равно или превосходит 500 CD4+ клеток/мм³ плазмы, которое обычно варьирует между 500 и 1500 CD4+ клетками/мм³ плазмы, хотя для некоторых индивидуумов она может быть ниже.

Альтернативно, восстановленное количество клеток CD4+ может соответствовать увеличению количества клеток CD4+ по сравнению с количеством клеток CD4+ у указанного пациента до указанного лечения.

Соответственно, низкое количество клеток CD4+ включает в себя количество клеток CD4+ менее 500/мм³ в плазме крови, которое включает в себя количество менее 450; 350; 300; 250; 200; 150 и 100/мм³ в плазме крови.

Согласно одному варианту осуществления пациент инфицирован штаммом, устойчивым к лекарственным средствам. Возникновение устойчивого к лекарственным средствам штамма у пациента может быть следствием:

- отбора штаммов на устойчивость к лекарственному средству у указанного пациента после предшествующего лечения, как описано выше; и/или

- первичного инфецирования пациента с устойчивым к лекарственному средству штаммом.

Из-за широкой эффективности производных хинолина согласно изобретению теперь можно предлагать новые стратегии лечения, даже для первично инфицированных пациентов, у которых в противном случае остаются неизлечимые штаммы.

Используемый здесь термин «устойчивость к лекарственным средствам от ВИЧ» относится к способности ВИЧ мутировать и воспроизводить себя в присутствии антиретровирусных лекарственных средств.

Для справки, «устойчивый к лекарственным средствам штамм ВИЧ» может быть определен путем измерения активности обратной транскриптазы (РТ) в РВМС человека, инфицированных тестируемым штаммом, и затем обработки соединением или комбинацией соединения, в отношении которого подозревается устойчивость, как определено в Примерах 1 и 2.

Соответственно, пациент не обязательно ранее лечился антивирусной терапией, включая антиретровирусную терапию или даже терапию против ВИЧ, отличной от указанного производного хинолина.

Соответственно, изобретение также относится к производному хинолина формулы (I), как определено выше, или любому из его метаболитов для применения в лечении или профилактике ВИЧ-инфекции или связанного с ВИЧ состояния у пациента, где: низкая или необнаруживаемая вирусная нагрузка сохраняется; и/или количество клеток CD4+ стабильно или увеличивается; после окончания лечения, причем пациент ранее не лечился антиретровирусной терапией.

Соответственно, изобретение также относится к производному хинолина формулы (I), как определено выше, или любому из его метаболитов для применения в лечении или профилактике ВИЧ-инфекции или связанного с ВИЧ состояния у пациента, при этом пациент инфицирован устойчивым к лекарственным средствам вирусным штаммом и, в частности, штаммом ВИЧ, устойчивым к лекарственным средствам, причем пациент ранее не лечился антиретровирусной терапией.

Примеры устойчивых к лекарственным средствам штаммов ВИЧ выбирают из: мутантного штамма NL4.3, включая K103N (устойчивый к эфавиренцу), K65R (устойчивый к тенофовиру и 3ТС) и мутантного штамма M184V (устойчивый к 3ТС), штаммов ВИЧ-1 В и выбранных из Ad8 и AdaM; и клинических изолятов, выбранных из CRF01, CRF02 и CRF06.

В частности, штамм вируса может быть штаммом, устойчивым к лекарственному средству или лечению, включающему введение лекарственного средства, выбранного из терапии APT и/или ВААРТ и/или

(I) нуклеозидные/нуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы (НИОТ), также называемые нуклеозидными аналогами, такими как абакавир, эмтрицитабин и тенофовир;

(II) ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (ННИОТ), такие как эфавиренц, этравирин и невирапин;

(III) ингибиторы протеазы (ИП), такие как атазанавир, дарунавир и ритонавир;

(IV) ингибиторы входа, такие как энфувиртид и маравирок;

(V) ингибиторы интегразы, такие как долутегравир и ралтегравир; и их комбинации.

Соответственно, устойчивый к лекарственным средствам штамм ВИЧ охватывает устойчивые к НИОТ, ННИОТ, ИП, ингибиторам входа и ингибиторам интегразы штаммы ВИЧ.

Устойчивые штаммы известны в области техники и включают в себя не ограничивающим образом штаммы, несущие мутацию устойчивости, как описано в базе данных Международного общества по борьбе с вирусными заболеваниями (IAS-USA) и базе данных лекарственных средств от ВИЧ/СПИДа в Стенфорде.

Типичные устойчивые штаммы ВИЧ включают штаммы, несущие мутацию устойчивости, выбранные из:

- М41; K65; D67; K70; L74; Y115; М184 (включая М184 V/I); L210; Т215; K219; как основные мутации устойчивости к НИОТ;

- М41; А62; D67; Т69; K70; V75; F77; F116; Q151; L210; Т215; K219; как мутации с множественной устойчивостью к НИОТ;

- V90; А98; L100; K101; K103; V106; V108; Е138; V179; Y181; Y188; G190; Н221; Р225; F227; М230; как основные мутации устойчивости ННИОТ;

- L10; V11; G16; K20; L24; D30; V32; L33; Е34; М36; K43; М46; I47; G48; I50; F53; I54; Q58; D60; I62; L63; I64; Н69; А71; G73; L74; L76; V77; V82; N83; I84; I85; N88; L89; L90; I93 как основные мутации устойчивости к ингибитору протеазы;

- Т66; L74; Е92; Т97; Е138; G140, Y143; S147; Q148; N155 как основные мутации устойчивости к ингибиторам интегразы;

- G36; I37; V38; Q39; Q40; N42; N43 как основные мутации устойчивости к ингибитору входа; и их комбинации.

Следует отметить, что конкретные подкатегории мутантных/устойчивых штаммов, включая точечные мутации, такие как замены одного нуклеотида на другой, известны в данной области техники и также рассматриваются в изобретении.

Примеры лекарственных средств, для которых были найдены устойчивые к лекарственным средствам штаммы ВИЧ, включают: зидовудин, ламивудин, эмтрицитабин, диданозин, ставудин, абакавир, залцитабин, тенофивир, рацивир, амдоксовир, априцитабин, эльвуцитабин, эфавиренц, невирапин, этравирин, делавирдин, рилпивирин, тенофовир, фосальвудин, ампренавир, типранавир, индинавир, саквинавир, фосампренавир, ритонавир, дарунавир, атазанавир, нелфинавир, лопинавир, ралтегравир, эльвитегравир, долутегравир, энфувиртид, маравирок, викривирок и их комбинации.

В частности, штамм ВИЧ, который подвергается лечению, может быть устойчивым к ламивудину (3ТС), тенофовиру, ралтегравиру, зидовудину (AZT), невирапину (NVP), эфавиренцу (EFV) и их комбинациям.

В качестве изобретения рассматриваются и применение, и способы.

Изобретение также относится к применению и способам лечения или профилактики вирусной инфекции, в частности ВИЧ-инфекции или связанного с ВИЧ состояния у пациента, при этом сохраняется низкая или неопределяемая вирусная нагрузка; и/или количество клеток CD4+ стабильно или увеличивается; после прекращения лечения.

Изобретение также относится к применению и способам лечения или профилактики вирусной инфекции, в частности ВИЧ-инфекции или состояния, связанного с ВИЧ, у пациента, у которого было отмечено снижение эффективности предшествующей антиретровирусной терапии.

Изобретение также относится к применению и способам лечения или профилактики вирусной инфекции, в частности ВИЧ-инфекции или связанного с ВИЧ состояния у пациента, при этом пациент инфицирован устойчивым к лекарственным средствам штаммом ВИЧ.

Изобретение также относится к применению и способам, определенным выше, для получения композиций для лечения или профилактики вирусной инфекции, в частности ВИЧ-инфекции или связанного с ВИЧ состояния у указанных пациентов.

Низкая вирусная нагрузка и поддержание или восстановление количества клеток CD4+ после прекращения лечения

Вирусная нагрузка является показателем тяжести вирусной инфекции. Вирусная нагрузка может применяться для мониторинга вирусной инфекции, контроля лечения, определения эффективности лечения и прогнозирования развития заболевания, вызванного инфекцией. Измерение вирусной нагрузки имеет особое значение для лечения, профилактики и контроля вирусных инфекций и связанных с вирусом состояний.

В рамках настоящего изобретения «поддержание низкой вирусной нагрузки после окончания лечения» включает в себя поддержание вирусной нагрузки на уровне менее обнаружимого или альтернативно замедление увеличения вирусной нагрузки по меньшей мере на две недели по сравнению с APT и/или терапией ВААРТ

Используемый здесь термин «вирусная нагрузка» также относится к «вирусному титру», и его можно определить прямо или косвенно. Для справки, вирусная нагрузка обычно относится к:

- количеству копий вирусной РНК или ДНК на мл образца плазмы;

- количеству вирусных частиц на мл образца плазмы; и/или

- активности вирусного белка в образце плазмы.

Используемый здесь термин «ВИЧ-вирусная нагрузка» также относится к «титру ВИЧ-инфекции», и его можно определить прямо или косвенно. Для справки, вирусная нагрузка обычно относится к:

- количеству копий РНК ВИЧ на мл образца плазмы;

- количеству частиц ВИЧ на мл образца плазмы; и/или

- активности белка, связанного с ВИЧ, в образце плазмы, который может, например, включать определение активности обратной транскриптазы (RT) в указанном образце плазмы.

Для справки, способы определения вирусной нагрузки ВИЧ в образце включают:

- определение количества копий РНК ВИЧ на мл образца;

- определение количества частиц ВИЧ на мл образца; и/или

- определение активности ВИЧ-ассоциированного белка в образце.

Другими словами, вирусная нагрузка остается предпочтительно на неопределяемом уровне по меньшей мере через две недели после окончания лечения по сравнению с APT или терапией ВААРТ, которая включает по меньшей мере три, четыре или пять недель после окончания лечения.

Тест на вирусную нагрузку ВИЧ используется в основном для мониторинга ВИЧ-инфекции с течением времени. Обычно это количественное измерение нуклеиновой кислоты (РНК) ВИЧ, которая выявляет, сколько копий вируса присутствует в крови.

Предпочтительно и в том смысле, в каком используется здесь, «вирусная нагрузка ВИЧ» относится к числу копий РНК ВИЧ на мл плазмы крови. Обычно она выражается в копиях РНК ВИЧ на мл плазмы крови в соответствии с известными способами, которые включают тесты на основе нуклеиновой кислоты, такие как полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (RT-ПЦР), анализ разветвленной ДНК (bДНК) или амплификация, основанная на последовательности нуклеиновой кислоты (NASBA).

В общем, тест на вирусную нагрузку ВИЧ заказывают, когда человеку впервые ставят диагноз. Результаты теста функционируют как базовое измерение, которое показывает, насколько активно воспроизводится вирус. Затем тест на вирусную нагрузку ВИЧ выполняют со временем и сравнивают с указанным базовым измерением или с эталонным значением, чтобы оценить относительное изменение вирусной нагрузки ВИЧ.

Соответственно, обычные методы определения вирусной нагрузки ВИЧ включают:

(I) предоставление образца цельной крови, полученного от пациента;

(II) удаление клеток из образца путем центрифугирования для обеспечения плазмы;

(III) определение количества копий РНК ВИЧ на миллилитр плазмы, например, методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (RT-ПЦР), анализа разветвленной ДНК (bДНК) или амплификации, основанной на последовательности нуклеиновой кислоты (NASBA),

(IV) необязательное сравнение результата, полученного на стадии (III), с эталонным значением и/или измерением базовой линии.

Если у субъекта имеется высокая вирусная нагрузка ВИЧ (например, по меньшей мере 1000 копий/мл плазмы), это может указывать на неудачное лечение, то есть на то, что вирус реплицируется, и заболевание может прогрессировать быстрее. Если вирусная нагрузка ВИЧ низкая (например, ниже 500 копий/мл плазмы), это указывает на то, что схема противовирусного лечения эффективна, т.е. вирус не может активно воспроизводиться, и болезнь может прогрессировать медленнее или даже быть вылечена.

Низкая вирусная нагрузка обычно составляет менее 500 копий/мл плазмы; что включает от 20 до 500 копий/мл плазмы, или от 40 до 500 копий/мл плазмы, в зависимости от типа и чувствительности используемого теста. Этот результат указывает на то, что ВИЧ не воспроизводится активно и что риск прогрессирования заболевания низкий.

Низкая вирусная нагрузка может состоять из вирусной нагрузки ниже 500 копий/мл и включает уровни ниже 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 50, 40, 30, 20, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 и 1 копий/мл плазмы.

Неопределяемая для обычных методов вирусная нагрузка обычно ниже 40 копий/мл плазмы, и включает 20 копий/мл плазмы, в частности, при измерении методом и/или наборами, выбранными из: COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HIV-1 тест и COBAS® AMPLICOR HIV-1 MONITOR тест, продаваемые Roche Molecular Diagnostic или NucliSENS EasyQ®HIV-1, продаваемый Biomerieux Diagnostics.

Однако неопределяемая вирусная нагрузка у пациента с диагностированной ВИЧ-инфекцией не означает, что пациент вылечен; это означает только то, что уровень РНК ВИЧ в настоящее время ниже порога, необходимого для обнаружения. Более того, неопределяемая вирусная нагрузка не обязательно исключает наличие ВИЧ в скрытых резервуарах.

Изменения в вирусной нагрузке, как правило, более важны во время мониторинга ВИЧ, чем получение одного результата теста. Возрастающая вирусная нагрузка указывает либо на то, что инфекция ухудшается, либо на то, что у вируса развилась устойчивость к лекарственным средствам, которые применяются в лечении, и они больше не эффективны. Снижение вирусной нагрузки указывает на улучшение, эффективность лечения и ослабление ВИЧ-инфекции.

Более конкретно, в соответствии с этим аспектом изобретение относится к дозам и схемам приема производного хинолина формулы (I) при лечении или профилактике вирусных инфекций или связанных с вирусом состояний у пациентов, в частности ВИЧ-инфекции, причем вирусная нагрузка после прекращения лечения поддерживается на низком уровне.

Это означает, что производное хинолина формулы (I) и, более конкретно, соединение 22 или метаболит N-глюкуронида, как определено выше, имеет удивительно продолжительный терапевтический эффект.

Изобретение, кроме того, относится к способу лечения или профилактики вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния у пациента, включая ВИЧ-инфекцию, состоящему во введении пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества производного хинолина формулы (I) в виде, описанном выше, где указанный способ позволяет поддерживать низкую вирусную нагрузку после окончания лечения.

Согласно некоторым вариантам осуществления изобретение также относится к способу лечения вирусной инфекции или связанного с вирусом состояния у пациента, включая ВИЧ-инфекцию, состоящему из:

(I) введения пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества производного хинолина формулы (I), таким образом производится лечение пациента;

(II) прекращения лечения;

(III) необязательного измерения вирусной нагрузки и/или количества клеток CD4+ у указанного пациента после прекращения лечения; где предпочтительно:

- сохраняется низкая или неопределяемая вирусная нагрузка; и/или

- количество клеток CD4+ стабильно или увеличивается; после окончания лечения;

(IV) необязательного введения указанному пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества производного хинолина формулы (I) снова, если вирусная нагрузка не является низкой или неопределяемой и/или количество клеток CD4+ уменьшается.

Предпочтительно лечение прекращается, когда: вирусная нагрузка низкая или неопределяемая; и/или уровень количества клеток CD4+ сохраняется или восстанавливается.

Для справки и, как было описано выше, низкая вирусная нагрузка обычно составляет менее 500 копий/мл плазмы, и неопределяемая вирусная нагрузка обычно составляет менее 40 копий/мл.

Для справки и, как было описано выше, восстановленное количество клеток CD4+ может соответствовать физиологическому (или «нормальному») количеству CD4+ клеток, которое обычно равно или превосходит 500 CD4+ клеток/мм³ плазмы и обычно варьирует между 500 и 1500 CD4+ клеток/мм³ плазмы, хотя для некоторых индивидуумов оно может быть менее.

Дозы и схемы приема

Изобретение также относится к способу снижения вирусной нагрузки вируса ВИЧ и/или увеличению количества клеток CD4+, где вирус вызывает хроническую вирусную инфекцию и устойчив к противовирусному лекарственному средству, причем способ включает стадию введения хозяину эффективного количества производного хинолина формулы (I), как определено выше, в частности на разных частотах, в дозах от 25 до 500 мг, в частности от 25 до 200 мг или даже от 25 до 300 мг и, например, от 25 до 150 мг.

Согласно одному варианту осуществления частота лечения может составлять один раз в день, один раз в три дня, один раз в неделю, один раз каждые 2 недели или один раз в месяц.

Согласно конкретному варианту осуществления лечение является непрерывным или прерывистым.

«Непрерывное лечение» означает длительное лечение, которое может быть реализовано с различными частотами приема лекарств, такими как один раз в три дня или раз в неделю или раз в две недели или раз в месяц.

Период лечения, т.е. время, когда лечение не является непрерывным, может варьировать от 2 недель до 8 недель, что включает 2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8 недель.

Согласно одному варианту осуществления производное хинолина формулы (I) или любые его фармацевтически приемлемые соли и метаболиты вводят в дозе от 25 до 500 мг, в частности, от 25 до 300 мг, например, от 25 до 200 мг и, в частности, от 25 до 150 мг. Дозы в пределах от 25 до 500 мг включают дозы около 25, 50, 75, 100 и 150 мг.

Указанные дозы могут быть адаптированы в зависимости от того, является ли лечение непрерывным или прерывистым.

Все комбинации доз, частот приема и периодов лечения охватываются в пределах объема настоящего изобретения.

Согласно конкретному варианту осуществления производное хинолина формулы (I) в соответствии с настоящим изобретением и, более конкретно, соединение 22, можно вводить при различных дозировках и схемах приема и, в частности, один раз в день при дозах от 25 до 150 мг или каждые 3 дня при дозах от 25 до 150 мг в виде непрерывного лечения или в течение периода лечения.

Период лечения может варьировать от 2 недель до 8 недель, в частности от 2 до 5 недель.

Производное хинолина можно вводить каждый день, один раз в три дня, раз в неделю, раз в две недели или один раз в месяц.

Несколько примеров доз и схем приема приведены ниже.

Более конкретно, изобретение относится к дозировке и схеме приема, в которой производное хинолина формулы (I) в соответствии с настоящим изобретением и, в частности, соединение 22, вводят по 25 мг каждые три дня в течение периода лечения или в виде непрерывного лечения.

Более конкретно, изобретение относится к дозировке и схеме приема, в которой производное хинолина формулы (I) согласно настоящему изобретению и, в частности, соединение 22, вводят по 25 мг один раз в день в течение периода лечения или в виде непрерывного лечения.

Более конкретно, изобретение относится к дозировке и схеме приема, в которой производное хинолина формулы (I) в соответствии с настоящим изобретением и, более конкретно, соединение 22, вводят по 50 мг каждые три дня в течение периода лечения или в виде непрерывного лечения.

Более конкретно, изобретение относится к дозировке и схеме приема, в которой производное хинолина формулы (I) в соответствии с настоящим изобретением и, более конкретно, соединение 22, вводят по 50 мг один раз в день в течение периода лечения или в виде непрерывного лечения.

Более конкретно, изобретение относится к дозировке и схеме приема, в которой производное хинолина формулы (I) в соответствии с настоящим изобретением и, в частности, соединение 22, вводят при 75 мг каждые три дня в течение периода лечения или в виде непрерывного лечения.

Более конкретно, изобретение относится к дозировке и схеме приема, в которой производное хинолина формулы (I) в соответствии с настоящим изобретением и, более конкретно, соединение 22, вводят при 75 мг один раз в день в течение периода лечения или в виде непрерывного лечения.

Более конкретно, изобретение относится к дозировке и схеме приема, в которой производное хинолина формулы (I) в соответствии с настоящим изобретением и, в частности, соединение 22, вводят по 100 мг каждые три дня в течение периода лечения или в виде непрерывного лечения.

Более конкретно, изобретение относится к дозировке и схеме приема, в которой производное хинолина формулы (I) в соответствии с настоящим изобретением и, в частности, соединение 22, вводят по 100 мг один раз в день в течение периода лечения или в виде непрерывного лечения.

Более конкретно, изобретение относится к дозировке и схеме приема, в которой производное хинолина формулы (I) в соответствии с настоящим изобретением и, в частности, соединение 22, вводят по 150 мг каждые три дня в течение периода лечения или в виде непрерывного лечения.

Более конкретно, изобретение относится к дозировке и схеме приема, в которой производное хинолина формулы (I) согласно настоящему изобретению и, более конкретно, соединение 22, вводят по 150 мг один раз в день в течение периода лечения или в виде непрерывного лечения.

Поэтому результаты испытаний, проведенных на соединениях, описанных в настоящем изобретении, показывают, что производные хинолина формулы (I), как определено выше, могут быть применены для лечения пациентов, инфицированных ВИЧ, для которых было показано снижение эффективности предшествующего лечения терапией против ВИЧ.

Результаты также показывают, что производные хинолина формулы (I), как определено выше, могут быть полезны для обеспечения продолжительной низкой или неопределяемой вирусной нагрузки и/или поддержания или увеличения количества CD4+ клеток после прекращения лечения.

Результаты также показывают, что производные хинолина формулы (I), как определено выше, могут быть пригодны для длительного лечения из-за отсутствия индуцированных штаммов ВИЧ у пролеченных пациентов.

Таким образом, соединение в соответствии с настоящим изобретением может быть реализовано в фармацевтической композиции, которая может содержать эффективное количество указанного соединения и один или более фармацевтических эксципиентов.

Вышеупомянутые эксципиенты выбирают в соответствии с лекарственной формой и желаемым способом введения.

В этом контексте они могут присутствовать в любой фармацевтической форме, пригодной для энтерального или парентерального введения, в сочетании с соответствующими эксципиентами, например, в форме обычных таблеток или таблеток, покрытых оболочкой, твердого желатина, капсул с мягкой оболочкой и других капсул, суппозиториев, пригодных для питья суспензий, сиропов или инъекционных растворов или суспензий.

Может использоваться любой способ введения. Например, соединение формулы (I) можно вводить пероральным, парентеральным, внутривенным, трансдермальным, внутримышечным, ректальным, подъязычным, через слизистые, назальным или другими способами. Кроме того, соединение формулы (I) можно вводить в форме фармацевтической композиции и/или стандартной лекарственной формы.

В частности, фармацевтические композиции согласно изобретению могут вводиться перорально и/или парентерально.

Согласно одному иллюстративному варианту осуществления фармацевтические композиции согласно изобретению могут вводиться перорально.

Подходящие лекарственные формы включают, но не ограничиваются указанными, капсулы, таблетки (включая таблетки быстрого растворения и с замедленным высвобождением), порошок, сиропы, пероральные суспензии и растворы для парентерального введения и, более конкретно, капсулы.

Фармацевтическая композиция может также содержать другое лекарственное средство для лечения ВИЧ, хорошо известное специалисту в данной области, в сочетании с соединением в соответствии с настоящим изобретением.

Преимущественно соединение формулы (I) или любые его фармацевтически приемлемые соли и его метаболиты можно вводить в комбинации с одним или несколькими антиретровирусными соединениями, включая APT и ВААРТ, такими как препараты, выбранные из зидовудина, ламивудина, эмтрицитабина, диданозина, ставудина, абакавира, залцитабина, тенофивира, рацивира, амдоксовира, априцитабина, эльвуцитабина, эфавиренца, невирапина, этравирина, делавирдина, рилпивирина, тенофовира, фосальвудина, ампренавира, типранавира, индинавира, саквинавира, фосампренавира, ритонавира, дарунавира, атазанавира, нельфинавира, лопинавира, ралтегравира, эльвитегравира, долутегравира, энфувиртида, маравирока, викривирока и их комбинаций.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Способность соединения 22 и его N-глюкуронидного метаболита ингибировать продукцию ВИЧ-1 в клетках, инфицированных РВМС- и макрофагами

1. Материал и способы

А. Клеточная культура и инфекция

Лейкоцитарную пленку от ВИЧ-отрицательных индивидуумов получали из местного пункта взятия крови в Цюрихе, Швейцария (http://www.blutspendezurich.ch/) и Центра переливания крови, г. Монпелье. Мононуклеарные клетки периферической крови человека (РВМС) выделяли центрифугированием в градиенте Ficoll (Axis-Shield РоС AS). Затем клетки культивировали при 37°С, 5% СO₂ до плотности 1×10⁶ клеток/мл в среде RPMI Glutamax (Life Technologies Ref. 61870-010), дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой (FCS) (Thermo Fischer Ref SV30160. 03), 1000 ед/мл IL2 (Peprotech Ref 200-02) и 5 мкг/мл ФГА (фитогемоагглютинин) (Roche Ref 1249738) для активации. Через три дня клетки объединяли и ресуспендировали до плотности 1×10⁶ клеток/мл в среде RPMI Glutamax, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой (FCS) 1000 U/мл IL-2 для инфекции. Изучение ВИЧ-1 инфекции проводили на 10 мкг штамма ВИЧ-инфекции Ada-M R5 на мл клеток в течение 4 часов. Затем клетки центрифугировали и ресуспендировали до плотности 1×10^{6 клеток/мл в среде, дополненной разбавленным диметилсульфоксидом (ДМСО) солюбилизированным лекарственным средством (Sigma Ref D4818) в соответствии с конечной концентрацией 0,05% ДМСО. Клетки обрабатывали в течение 6 дней с частичным изменением среды на 3-й день. Титрование супернатанта клеточной культуры р24 ВИЧ проводили с помощью ИФА с помощью набора Ingen Innotest (Ingen Ref 80564) в соответствии с инструкциями производителя.}

Для получения макрофагов, полученных из моноцитов (МДМ), моноциты выделяли с применением микрогранул CD14 (№ по каталогу 130-050-201, Miltenyi) и культивировали в среде X-VIVO10 (Lonza), дополненной гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором (ГМКСФ) 1000 ед/мл и макрофагальным колониестимулирующим фактором 100 нг/мл в течение 6 дней. Моноциты высевали в количестве клеток 50000 клеток на лунку в 96-луночном планшете. Через 6 дней среду заменяли на X-VIVO10 без цитокинов. Через 2 дня макрофаги обрабатывали соединением 22 и/или его N-глюкуронидным метаболитом ночью и на следующий день заражали вирусом Yu-2 в течение 6 часов, промывали фосфатно-солевым буфером и культивировали в среде, содержащей эти соединения в течение 12 дней. Супернатант для р24 ИФА собирали 2 раза в неделю.

В. Контроль уровней антигена р24

Клетки обрабатывали 0,01 мкМ до 30 мкМ, а уровни антигена р24 контролировали в супернатанте культуры в течение 12-дневного периода. Титрование супернатанта клеточной культуры р24 ВИЧ проводили с помощью ИФА с набором Ingen Innotest (Ingen Ref 80564) в соответствии с инструкциями производителя.

2. Результаты

Первое функциональное исследование было основано на применении недавно выделенных мононуклеарных клеток периферической крови человека (РВМС) от здоровых доноров. Эти РВМС были инфицированы лабораторным штаммом ВИЧ Ada-MR5.

На Фиг. 1А показано зависимое от дозы ингибирование репликации ВИЧ-1 в стимулированных РВМС от 7 разных доноров. Интересно, что обработка соединением 22 не изменяла различные популяции лимфоцитов, присутствующих в РВМС.

Чтобы обобщить влияние соединения 22 на репликацию ВИЧ-1 в других первичных клетках, тот же протокол повторяли с применением инфицированных макрофагов, которые действуют как резервуары вируса. Клетки обрабатывали от 0,01 мкМ до 30 мкМ, а уровни антигена р24 контролировали в супернатанте культуры в течение 12-дневного периода (Фиг. 1Б).

Влияние N-глюкуронидного метаболита на ингибирование р24 и репликацию ВИЧ на макрофагах, инфицированных вирусом Yu-2, также было показано для концентраций 1,5 мкМ, 10 мкМ и 30 мкМ. Интересно, что соединение 22 и его N-глюкуронидный метаболит эффективно блокируют репликацию вируса и в зависимости от дозы достигает уровней ингибирования до 90% в первичных макрофагах при 0,1 мкМ. Однако жизнеспособность клеток не снижалась при обработке соединения 22 (данные не показаны).

Эти результаты свидетельствуют о том, что соединения согласно изобретению обладают низкой токсичностью, но остаются пригодными для ингибирования репликации ВИЧ-1 в РВМС и макрофагах.

Поскольку предыдущие эксперименты проводились с первичными человеческими клетками, инфицированными штаммами макрофаг-тропного (R5) (Ada-MR5 и YU2), мы перешли на систему in vitro, которая может быть более актуальной для клинической ситуации, поскольку она связана с заражением первичных клеток изолятами ВИЧ-1 от пациентов. Как показано на Фиг. 2А, соединение 22 обладает сильным ингибирующим действием для всех тестируемых подтипов ВИЧ-1, включая подтипы В, С и рекомбинантные вирусы. В частности, соединение 22 очень эффективно ингибирует репликацию вирусных штаммов, несущих мутации, которые придают устойчивость различным терапевтическим агентам in vitro (Фиг. 2Б), причем не было обнаружено устойчивых мутаций после обработки соединением 22 в течение по меньшей мере 24 недель, как свидетельствует дальнейшее:

для проверки появления и/или отбора мутаций, связанных с обработкой соединением 22, мы применили метод глубокого секвенирования для высокочувствительного обнаружения низкочастотных вирусных вариантов по всему геному ВИЧ-1. Вирусы, полученные из обработанных и необработанных инфицированных первичных макрофагов от 4 разных доноров, были секвенированы и риды, не согласующиеся с геномом человека, были выровнены с последовательностью YU2 с использованием программы gsnap, как подробно описано у Wu et al. (Fast and SNP-tolerant detection of complex variants and splicing in short reads. Bioinformatics 26, 873-881 (2010)). Большинство мутаций с низкой и высокой частотой одинаково присутствовали в обработанных и необработанных образцах, демонстрируя, что соединение 22 не выбирает конкретные мутации.

Чтобы убедиться, что амплификация вирусов из обработанных образцов не будет мутировать при амплификации в РВМС, они были секвенированы после амплификации с давлением лекарственного средства или без него.

Опять же, никаких новых мутаций не было обнаружено, кроме тех, которые существовали до лечения в исходных образцах. Мы пришли к выводу, что соединение 22 вряд ли будет определять специфические вирусные мутации. Кроме того, соединение 22 также очень эффективно ингибирует репликацию вирусных штаммов, несущих мутации, которые придают устойчивость различным терапевтическим агентам in vitro, и не было никаких индуцирующих устойчивость мутаций, которые были бы обнаружены после обработки соединением 22 в течение по меньшей мере 24 недель (Таблица 1).

Устойчивость к соединению 22 тестировали на РВМС человека и сравнивали с текущим лечением. Не было выявлено мутаций, вызывающих устойчивость, после обработки соединением 22 в течение по меньшей мере 24 недель. Различные классы противовирусных агентов могут влиять на жизненный цикл ВИЧ-1 различными способами. Генетическая гетерогенность характерна для этого вируса, что в значительной степени способствует его способности генерировать мутации, которые преодолевают эффективность лекарственной терапии. Отбор устойчивых к лекарственным средствам мутантов in vitro может быть легко осуществлен путем поддержания вируса в состоянии субоптимального роста, регулируемого медленным увеличением количества применяемого давления лечения лекарственными средствами. Этот метод имитирует последствия лечения лекарственными средствамиу пациентов. Следовательно, таким образом, новые соединения могут быть оценены для их профиля отбора, чтобы оценить вероятность появления устойчивости к лекарственным препаратам ВИЧ-1 в будущих клинических испытаниях. Кроме того, комбинации лекарственных средств можно исследовать таким же образом.

Эти результаты свидетельствуют о том, что соединение 22 не выбирает специфические для ВИЧ мутации и не является генотоксичным.

Пример 2. Эффективность соединения 22 для ингибирования репликации вируса у гуманизированных мышей

1. Материал и методы

А. Поколение моделей гуманизированных мышей

Мышей SCID воссоздавали свежим PBL (лимфоцит периферической крови) человека в течение двух недель, а скорости воссоздания оценивали с помощью титрования IgG человека в соответствии с Denton et al. (Humanized mouse models of HIV infection. AIDS Rev 13, 135-148 (2011)) and Berges et al. (The utility of the new generation of humanized mice to study HIV-1 infection: transmission, prevention, pathogenesis, and treatment. Retrovirology 8, 65 (2011)).

Воссозданных мышей SCID инфицировали штаммом ВИЧ-1 JRCSF путем внутрибрюшинной инъекции. Контрольная группа, полученная с помощью желудочного зонда и 5% ДМСО (n=15), и группе, подвергаемой лечению, вводили два раза в день 20 мг/кг соединения 22 в лабрафиле и 5% ДМСО (n=14) в течение 15 дней.

Мышей NOD.scid.IL2R -/- (NSG) выращивали и поддерживали в отдельных вентилируемых клетках и кормили автоклавированными продуктами питания и водой. Мышей с иммунной системой человека (NSG-HIS) получали, как описано у Nischang et al. (Humanized mice recapitulate key features of HIV-1 infection: a novel concept using long-acting anti-retroviral drugs for treating HIV-1. PLoS ONE 7, e38853 (2012).

Кратко, новорожденные (менее 5 дней) мыши NSG получали сублетальное (1Gy) общее облучение тела источником Cs, а затем получали 2×10⁵ трансдуцированных или нетрансдуцированных CD34+ HSC человека с использованием 50 мкл шприца Гамильтона через внутрипеченочный (ih) путь. Все манипуляции с мышами NSG-HIS проводились под ламинарным потоком. Вещества вводили мышам через зонд ежедневно с помощью иглы из нержавеющей стали (Straight 22 Gauge, 1,4 дюйма в длину). Соединение 22 растворяли в ДМСО (Sigma) и затем разбавляли до 5% или менее в соответствии с дозой, требуемой в подходящем носителе (Labrafil М 1944 CS, COOPER INDUSTRIE, Place Lucien Auvert 77020 MELUN CEDEX 20). Мыши не получали более 150 мкл объема в день. Мышей контролировали три раза в неделю по симптомам или признакам неблагоприятных реакций, согласно стандартным данным.

B. Стоковый образец вируса ВИЧ и инфицирование мышей

Стоковый образец вируса JR-CSF амплифицировали в РВМС, вирус собирали через 12-15 дней после инфицирования, фильтровали (0,45 мкм), концентрировали центрифугированием на сахарозной подушке и замораживали при - 80°С. Стоковые образцы вируса YU-2 были получены с помощью полиэтиленимин (РЕI)-опосредованной трансфекции (Polysciences) клеток 293Т плазмидой pYU-2 (R5-тропная), которая была предоставлена в рамках программы исследования СПИДа и референтных реагентов национального института здравоохранения. Через 48 часов после трансфекции вирус собирали, фильтровали (0,45 мкм) и замораживали при -80°С. Вирусные титры определяли, как описано у McDougal et al. (Immunoassay for the detection and quantitation of infectious human retrovirus, lymphadenopathy-associated virus (LAV). J. Immunol. Methods 76, 171-183(1985)).

Кратко, TCID50 (инфекционная доза 50% культуры тканей) определяли путем инфицирования мононуклеарных клеток периферической крови человека (РВМС) CD8+ от трех доноров, которые стимулировались добавлением IL-2, РНА и гранул анти-CD3 (Dynal 11131D, Life Technologies). Затем стоковые образцы вируса доводили до 1×10⁶ ТСID50/мл, аликвотировали и замораживали при - -80°С перед применением. Мышей инфицировали внутрибрюшинно (i.p.) JR-CSF, 1×10³ TCID50 на мышь и ВИЧ YU-2, 1×10⁶ TCID50 на мышь. Уровни РНК ВИЧ в плазме измеряли с помощью ПЦР с обратной транскрипцией (Amplicor HIV-1 Test или AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test, Roche) в разное время после инфицирования.

C. Проточная цитометрия

Клеточные суспензии были помечены античеловеческими моноклональными антителами (mAb), таргетированными на следующие маркеры клеточной поверхности: CD45-FITC, CD3-PE, CD4-Pe Су7, CD8-BV421 и CD19-APC (все от Biolegend). Промывку и разведение реагентов проводили с помощью FACS-буфера (PBS, содержащего 2% фетальной бычьей сыворотки и 0,05% азида натрия (NaN₃). Все процедуры проводили на проточном цитометре Cyan ADP (Beckman Coulter). Данные анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo (Ashland, OR). Продукт распада клеток и мертвые клетки были исключены по их характеристикам рассеяния света.

2. Результаты

Гуманизированные мыши, воссозданные с помощью лимфоидных клеток человека, обеспечивают быстрые, надежные, воспроизводимые экспериментальные системы для тестирования эффективности соединения 22 in vivo. В начальной установке мышей SCID воссоздавали с помощью РВМС, а затем инфицировали штаммом ВИЧ-1 JR-CSF. Мышам через пероральный зонд вводили соединение 22 в дозе 20 мг/кг два раза в день в течение 15 дней. Измерения вирусной РНК показали, что пероральное введение соединения 22 способно значительно снизить вирусную нагрузку в течение 15 дней лечения (Фиг. 3А). Анализ FACS образцов крови показал, что лечение соединением 22 предотвращает уменьшение количества CD4+ клеток после инфицирования воссозданных мышей и, таким образом, восстанавливает соотношение CD8+/CD4+ по сравнению с неинфицированными мышами (Фиг. 3Б).

Для тестирования длительного влияния соединения 22 на иммунную систему и репликацию вируса у инфицированных гуманизированных мышей новорожденным мышам NOG трансплантировали CD34+ гемопоэтические клетки-предшественники, выделенные из пуповинной крови (см. Nischang et al., Humanized mice recapitulate key features of HIV-1 infection: a novel concept using long-acting anti-retroviral drugs for treating HIV-1. PLoS ONE 7, e38853; 2012). Ранее была продемонстрирована ценность этой модели гуманизированных мышей для изучения антивирусной активности новых соединений, таргетировнных на скрытые резервуары ВИЧ. Лечение гуманизированных мышей NOG в течение одного месяца 20 мг/кг или 40 мг/кг соединения 22 не изменяет значения приживления CD45+ клеток или соотношение CD8+/CD4+ по сравнению с контрольными без лечения (Фиг. 3Б). В этом исследовании гуманизированных мышей NOG инфицировали вирусом YU2 ВИЧ-1 и ежедневно вводили в течение 30 дней 40 мг/кг соединения 22 или ВААРТ (3ТС-Тенофовир-Ралтегравир и AZT) и вирусные нагрузки измеряли, как и раньше. Соединение 22 уменьшало вирусную нагрузку в течение 30 дней лечения, но, что более важно, вирусная нагрузка оставалась низкой в течение по меньшей мере 50 дней после окончания лечения (Фиг. 3В). Напротив, возвращение к уровням, сравнимым с первоначальной инфекцией, наблюдали в группе ВААРТ (Фиг. 3Г).

Таким образом, эти результаты показывают, что соединение 22 является первым надежным агентом против ВИЧ, способным стабильно подавлять вирусную нагрузку после прекращения лечения.

Пример 3: Соединение 22 увеличивает уровни сплайсированной РНК ВИЧ

1. Материал и способы

А. Количественная оценка сплайсинга вирусной и невирусной РНК

Количественная оценка сплайсинга вирусной РНК достигается с использованием протоколов, подробно описанных у Bakkour et al. (Small-molecule inhibition of HIV pre-mRNA splicing as a novel antiretroviral therapy to overcome drug resistance. PLoS Pathog. 3, 1530-1539 (2007).

Количественное определение сплайсинга невирусной РНК достигается с использованием протоколов, подробно описанных у Klinck et al. (Multiple alternative splicing markers for ovarian cancer. Cancer Res. 68, 657-663 (2008)) и Venables et al. (Cancer-associated regulation of alternative splicing. Nat. Struct. Mol. Biol. 16, 670-676 (2009)).

Другие протоколы описаны выше.

2. Результаты

Чтобы проверить, что соединение 22 не оказывает существенного влияния на события сплайсинга эндогенных генов, что может потенциально привести к некоторым неблагоприятным эффектам, влияние соединения 22 было протестировано с помощью ПЦР-анализа с обратной транскриптазой глобального альтернативного сплайсинга на 382 альтернативных событиях сплайсинга. Эти 382 альтернативных события сплайсинга (ASE) представляют собой высокопроизводительный случайный снимок глобальных изменений альтернативного сплайсинга. Мы провели высокопроизводительный ПЦР-анализ этих (по существу случайных) 382 ASE на нескольких образцах РВМС либо из необработанных (клеток), либо обрабатанных ДМСО, соединением 22 или контрольным противовирусным препаратом (дарунавир). Анализ данных позволил провести более строгие проверки качества; ASE рассматривались только в том случае, если более 75% продуктов находились в ожидаемой подвижности (то есть, если реакция была чистой), и если общая ожидаемая концентрация ПЦР была выше 20 нМ (то есть, если реакция была сильной), что привело к 264 оставшимся ASE.

Профили сплайсинга из 12 образцов РВМС от одного и того же донора показывают, что очень мало различий в профилях сплайсинга, обработанных лекарственным средством образцов РВМС, поскольку они образуют один из трех отдельных полюсов со стволовыми клетками и полученными из них фибробластами. В соответствии с этим необработанные клетки и обработанные соединением 22 клетки, процент значений сплайсинга для этих 264 ASE имел соотношение R=0,89, тогда как стволовые клетки и полученные фибробласты имели соотношение только при R=0,59 (данные не показаны). В совокупности эти данные показывают, что соединение 22 не оказывает глобального влияния на сплайсинг пре-мРНК.

Для проверки, влияет ли соединение 22 на сплайсинг РНК ВИЧ в инфицированных клетках, захват последовательности на основе массива выполняли с использованием специализированных зондов библиотеки, таргетированных на последовательности ВИЧ, чтобы избавиться от клеточной РНК. Зонды использовали для захвата кДНК, полученной из инфицированных обработанных и необработанных РВМС. После двойного захвата библиотеки были подготовлены и секвенированы с использованием 454 пиросеквенирования (в соответствии с руководством способа GS junior). Средний размер прочтений около 400 нп позволил однозначно собрать вирусный геном из необработанного образца (через 3 и 6 дней после заражения), используя риды, которые не выравнивались с геномом человека (hg19). Все данные секвенирования анализировали с использованием gsnap, как описано в Wu et al. (Fast and SNP-tolerant detection of complex variants and splicing in short reads. Bioinformatics 26, 873-881 (2010)).

Через 3 дня после инфицирования был получен больший охват вирусного генома для необработанного ДМСО образца (32 289 рида) по сравнению с обработанным соединением 22 образцом (4149 рида). Поразительно, что через 3 дня после инфицирования 17,4% ридов из обработанного образца соответствовали точкам сплайсинга, против 0,93% в необработанном образце. В то время как количество ридов из обработанных и необработанных образцов было сходным через 6 дней после инфицирования (20 585 и 27 984 соответственно), фракция, соответствующая точкам сплайсинга, была снова больше у обработанного (13,3%) по сравнению с необработанным образцом (1,93 %).

Исходя из этих результатов, можно сделать вывод о том, что соединение 22 способствует сплайсингу РНК ВИЧ в инфицированных РВМС, тем самым ставя под угрозу последующий синтез полноразмерной пре-мРНК ВИЧ-1 и сборку инфекционных частиц.